Серологични кръвни тестове за диагностика на сифилис. Реакция на завързване на комплимент или RSK. Дешифриране на резултатите за сифилис: плюсове, кръстове и кредити

Трепонемни тестове за сифилис. Общо описание.

За надеждно диагностициране на сифилис и идентифициране на антисифилитични антитела в тялото на пациента (в кръвния серум или цереброспиналната течност) се използват специални лабораторни изследователски технологии - така наречените серологични методи.

При провеждане на диагностични тестове за сифилис се използват различни серологични реакции: аглутинация, утаяване, имунофлуоресценция, фиксиране на комплемента, ензимен имуноанализ и др. Всички тези серологични реакции се основават на взаимодействието на антигени и антитела.

Наричат ​​се специфични серологични тестове трепонематъй като тези тестове използват treponema pallidum или нейните антигени, тоест антигени от трепонемален произход. Целта на трепонемните тестове е да се идентифицират специфични антитела към антигенните структури на причинителя на сифилис, т.е. антитела, насочени специално срещу самите бактерии T. Pallidum, а не срещу телесни тъкани, увредени от трепонема. Специфични антитрепонемни антитела от клас IgM могат да бъдат открити още в края на втората седмица на заболяването.

7. Фалшиви положителни и фалшиво отрицателни резултати

Положителният PB тест за сифилис при хора, които нямат заболяването, се нарича фалшиво положителен. Честотата на фалшивите положителни резултати при здрави индивиди е 0,2-0,25%. Ако процентът на неспецифичните фалшиво положителни резултати от RV при здрави хора е много нисък, тогава при някои заболявания той може да бъде висок.

Всички неспецифични резултати от серологични реакции могат да бъдат разделени на следните основни групи:

1. Заболявания, причинени от наличието на общи антигени в подобни патогени (спирохети): рецидивираща треска, фрамбезия, бежел, пинта, орална трепонема, лептоспира.

2. Положителни реакции, дължащи се на промени в липидния метаболизъм и промени в серумните глобулини. Те включват положителни резултати при бременни жени с подагра, нарушения на липидния състав в резултат на отравяне с олово, фосфор, след прием на натриев салицилат, дигиталис и др. Тези реакции трябва да включват и положителни реакции при някои инфекциозни заболявания (тиф, малария, пневмония, проказа, ендокардит, колагеноза, инфаркт на миокарда, мозъчно сътресение, рак, цироза на черния дроб и др.)

3. Технически грешки в поведението. Неправилен избордози на комплемента, неспазване на условията и сроковете за съхранение на реагенти, изключване от реакцията на контролни проби от кръвен серум, използване на замърсени епруветки и инструменти.

8. Модификация на реакцията на Васерман

Има модификации на реакцията на Васерман в качествена и количествена версия, на студено, с цереброспинална течност.

Модификация на RV на студеноизглеждаше по-чувствителен. Характеристика на метода за настройка на реакцията на Васерман в студа са трифазните температурни режими, при които протича свързването на комплемента. Тази реакция се поставя и с кардиолипин и трепонемален антиген.

В допълнение към качествената оценка на РАО, съществува метод за нейното количествена настройкас различни разреждания на кръвен серум (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титърът на реагин се определя от максималното разреждане, което все още дава рязко положителен резултат (4+). Количествената формулировка на RV е важна при диагностицирането на някои форми на сифилис и при проследяване на ефективността на терапията.

9. Обхват

В Русия RSKt е част от комплекса от стандартни серологични тестове за сифилис (SSR).

Използва се реакцията на Васерман с трепонема и кардиолипинов антиген (RSKt).

• диагностика на всички форми на сифилис,
• контрол върху ефективността на лечението,
• прегледи на лица, имали сексуален контакт с болен от сифилис,
• прегледи на лица с клинично и анамнестично съмнение за сифилис
• при профилактични прегледи за сифилис на пациенти в психиатрични и неврологични болници, донори и бременни жени, включително лица, насочени за изкуствено прекъсване на бременността.

В момента, със заповед на Министерството на здравеопазването на Руската федерация, се препоръчва RSKT да се замени с по-чувствителни трепонемни методи (ELISA или RPHA).

В чужбина реакцията на Васерман с трепонемален антиген не се използва в клиничната лабораторна практика от дълго време и не е включена в списъка на стандартните тестове, препоръчани от Световната здравна организация.

Комплекс от класически серологични реакции (CSR)

DAC- Това реакционен комплексизползва се за серодиагностика на сифилис като стандартен метод. Този комплекс от реакции включва реакцията на Васерман с кардиолипинов антиген (екстракт от сърцето на бик, обогатен с лецитин и холестерол) и трепонемален антиген (суспензия от апатогенни културни бледи трепонеми, третирани с ултразвук), както и реакция на микропреципитация (RMP). ) с плазма или инактивиран серум, който се поставя с кардиолипинов антиген

CSR стават положителни в средата на първичния период (разделянето му на серонегативни и серопозитивни се определя точно от CSR), във вторичния период CSR са положителни при 98-100% от пациентите, а в третичния период - само при 60-70%. %. Тоест, с увеличаване на продължителността на заболяването позитивността на КСО постепенно намалява.

Предимства на KSR:

1) Евтина, простота и бързина на настройка. Това е особено вярно за реакцията на микропреципитация: RMP в момента е основният метод за скрининг (скрининг);

2) Нетрепонемните тестове са удобни за използване за проследяване на лечението на сифилис.

Недостатъци на CSR:

1) Субективност на оценката на резултатите от реакциите ("на око");

2) Ниска чувствителност при късни форми на сифилис;

3) Липса на специфичност в сравнение с по-модерните тестове. Когато се извършват, често се отбелязват фалшиво положителни реакции (LPR).

LPR може да се дължи на кръстосана реактивност между бледата спирохета и други микроби, нарушения на липидния и протеиновия метаболизъм, нестабилност на клетъчната мембрана и образуване на автоантитела. LPR се отбелязват при остри (малария, инфекциозна мононуклеоза и др.) И хронични (туберкулоза, проказа, хепатит, борелиоза и др.) Инфекции, инфаркт на миокарда, цироза на черния дроб, колагенози (особено при SLE), онкопатология, ваксинация, употреба на наркотици, злоупотреба с алкохол и мазни храни. Фалшиво положителен може да бъде CSR през последните седмици от бременността, след раждането и при някои жени по време на менструация. Фалшиво-отрицателните резултати от CSR могат да бъдат свързани с HIV инфекция.

RIT, RIBT - Реакция на имобилизация на бледа трепонема

Тест за имобилизация на Treponema pallidum (TPI; Treponema pallidum immobilization test, TPI) е класически метод, който служи за откриване на специфични трепонемни антитела. RIBT реакцията използва като антиген патогенна трепонема pallidum T. pallidum (щам Nichols), отглеждана в заешки тестиси. RIBT се основава на загубата на подвижност на живи бледи трепонеми след излагане на антитела от кръвния серум и комплемента на пациента. Резултатите се оценяват чрез микроскопия в тъмно поле. Въпреки факта, че тестът RIBT е въведен в клиничната практика като специфичен тест за сифилис, той е трудоемък, технически сложен, отнема време и е скъп за използване.

1. История на метода RIBT

Тестът за имобилизация на Treponema pallidum (TPRT) всъщност е първият специфичен тест за диагностика на сифилис. Тази реакция е представена през 1949 г. от американските изследователи Нелсън и Майер (R. W. Nelson и M. M. Mayer) и обсъдена подробно в научни статии през следващите десетилетия. И преди са правени неуспешни опити за използване на живи трепонеми в тестове. Поради факта, че Нелсън успя да създаде среда, в която трепонемите остават жизнеспособни до 8 дни, изследванията му бяха увенчани с успех.

2. Принцип на метода RIBT

Методът се основава на феномена на загуба на подвижност от бледи трепонеми в присъствието на имобилизиращи антитрепонемни антитела на изследвания кръвен серум и комплемент при анаеробни условия. Антигенът е жива патогенна бледа трепонема, получена от зайци, изкуствено заразени със сифилис.

3. Настройка на теста RIBT

В реакцията участват тест серумът, комплементът и антигенът. Кръвният серум на субекта се добавя към живи трепонеми, получени от тъкани на заешки тестиси след изкуствено заразяване. При наличие на анти-трепонемни антитела-иммобилизини в серума, бледите трепонеми спират да се движат (имобилизират). Имобилизин антителата са късни антитрепонемни антитела.

Реакцията се извършва с топлинно инактивирани серуми или с проби от серуми, изсушени върху восъчна хартия (сухи капки). Инактивирането на серума чрез нагряване се извършва в продължение на 30 минути при температура 56°C. Преди вземане на кръв пациентът не трябва да приема лекарства, особено пеницилинови препарати. Приемът на лекарства се отменя за срока им възможно забавянев организма.

Като антиген се използват бактерии от щама Nichols, получени от 7-10-дневен сифилитичен орхит на заек (възпаление на тестисите). Периодът от момента на задаване на реакцията до регистриране на нейните резултати продължава 18-20 часа, следователно е необходима среда за оцеляване, за да се поддържа жизнеспособността и добрата подвижност на микроорганизмите.

RIBT използва добавка от морско свинче. За да се получи комплемент, трябва да се вземе кръв при стерилни условия от няколко морски свинчета.

В случай на бактериално замърсяване, комплементът се изхвърля. Не може да се използва в реакцията на имобилизация на бледо трепонема запазен комплемент, т.к. той е токсичен за микроорганизмите.

При реакцията на имобилизация се използва излишък от комплемент. Количеството му до голяма степен зависи от средата за оцеляване на бледа трепонема.

РИБТ се поставя в стерилни кутии, предварително облъчени с бактерицидна кварцова лампа за 45-60 минути. Всеки кръвен серум се изследва в две епруветки: опитенИ контрол. И в двете епруветки се добавят тест серум и антиген в необходимите количества. Активният комплемент се излива в епруветката и същото количество инактивиран кръвен серум от морско свинче се излива в контролната епруветка. След пълнене, съдържанието на тубите се смесва чрез леко разклащане.

RIBT протича при анаеробни условия. Епруветките със съставките се поставят в микроаеростат, от който атмосферният въздух се изсмуква с вакуумна помпа и се впръсква газова смес от цилиндър (95 части азот и 5 части азот). въглероден двуокис). Микроанаеростатът с епруветки се поставя в термостат (35°С) за 18-20 часа.

Оценката на резултатите от RIBT се извършва след изваждане на епруветките от термостата и микроанаеростата (т.е. след 18-20 часа опит). С пастьорова пипета капка от съдържанието на епруветката се нанася върху предметно стъкло, което се покрива с покривно стъкло и се изследва в тъмното поле на микроскоп (обектив 40, окуляр 10Х). Изследват се няколко зрителни полета в различни части на препарата, като се брои броят на подвижните и неподвижните бледи трепонеми във всяка. Броенето започва с лекарството от контролата, а след това от епруветката.

При установяване на реакцията се използват 5 контролни изследвания: с очевидно положителни и отрицателни кръвни серуми, с активен и инактивиран комплемент и среда за оцеляване на бледа трепонема. Контролният отрицателен кръвен серум се използва, за да се прецени степента на подвижност на бледа трепонема в този експеримент. Контролен положителен кръвен серум - за оценка на степента на имобилизираща активност при условията на този експеримент. Проучването на активния и инактивиран комплемент и околната среда се извършва, за да се определи техният ефект върху мобилността на бледа трепонема.

При липса на комплемент в експеримента имобилизиращите антитела не показват правилно своята активност и трепонемите остават подвижни. Следователно, след експеримента, се извършва определяне на остатъчния комплемент, за да се прецени дали мобилността на бледите трепонеми в епруветките се дължи на липсата на комплемент. За това се използва хемолитична система - смес от суспензия от еритроцити на овен и разреден хемолитичен серум, съхранявани в термостат.

Остатъчният комплемент се определя чрез добавяне на хемолитичната система в необходимия обем към всяка епруветка. Епруветките се поставят в термостат при 37° за 45 минути. В експерименталните епруветки трябва да настъпи хемолиза на еритроцитите, в контролните епруветки трябва да има забавяне на хемолизата. Липсата на хемолиза в епруветките показва недостатъчно количество комплемент, в тези случаи изследването трябва да се повтори. Повторното изследване на кръвния серум не се извършва само ако се отбележи 100% имобилизация на бледи трепонеми.

4. Отчитане на резултатите от РИБТ

Имобилизираните трепонеми се преброяват под микроскоп с помощта на микроскопия в тъмно поле. От изследователя се изисква да има умение да оцени движението на трепонемите. Той трябва да обърне внимание на интензивността на движенията, направени от бледа трепонема. При тази бактерия не винаги е възможно да се наблюдават вълнообразни контракции и флексионни движения, понякога само ротационни. Трябва също така да можете да разграничите активните движения на трепонемите от движението с поток от течност.

За да се оценят резултатите от реакцията, се изчислява процентът на имобилизация на бледи трепонеми, т.е. съотношението на подвижните и неподвижните трепонеми в експеримента (с активен комплемент) и контрола (с неактивен комплемент) по формулата:

X \u003d (M - C) × 100 / M

където М е броят на подвижните трепонеми в контролата; C - броят на подвижните трепонеми в експеримента; X - % обездвижване. При практическата работа процентът на обездвижване се определя по предварително съставена таблица по горната формула.

Реакцията на обездвижване на бледа трепонема се оценява като

• положителенпо време на обездвижване 51 - 100% трепонем,
• слабо положителен: 31 - 50% неподвижни трепонеми,
• съмнително: 21 - 30% неподвижни трепонеми,
• отрицателен: 0 - 20% неподвижни трепонеми.

Реакцията на обездвижване на бледа трепонема става положителна в края на първичния - началото на вторичния период на сифилис (от 7-8-та седмица от момента на инфекцията и повече). В същото време RIBT е малко полезен за диагностициране на ранните стадии на сифилис, тъй като антителата, които имобилизират бледа трепонема и се определят в реакцията, се появяват само 3-6 седмици след инфекцията. Антителата-иммобилизини принадлежат към класа на имуноглобулините IgG. Те се появяват в кръвта по-късно от реагините (антикардиолипиновите антитела), по-късно от флуоресцеиновите антитела (откриват се RIF и ELISA) и преципитините (откриват се RMP).

В бъдеще RIBT остава положителен. Има висока чувствителност на реакцията при късните форми на сифилис. При вторичен, късен сифилис, невросифилис, вроден сифилис, положителен резултат от RIBT се регистрира в 95-100% от случаите. С третичен сифилис, със специфични лезии вътрешни органи, нервна система, когато RV често е отрицателен, RIBT дава положителни резултати в 98 - 100% от случаите.

RIBT отдавна е признат за най-специфичния тест за сифилис. Според литературата специфичността на RIBT е 99%, чувствителността варира от 79 до 94%. Според TsNIKVI чувствителността на RIBT (общо за всички етапи на сифилис) е 87,7%.

7. Обхват на метода

Обхватът на RIBT постепенно се стеснява поради продължителността на настройката, високата цена и трудоемкостта. RIBT е доста сложен и скъп анализ, който изисква висококвалифициран персонал и наличие на вивариум. Поради тази причина приложението този методе намалял значително през последните години. В САЩ този тест в момента се използва само в изследователски лаборатории.

Въз основа на сложността и високата цена на RIF и RIBT има смисъл да се използват за диагностика на късни и латентни форми на сифилис. РИБТ запазва позицията си на "реакционен арбитър" в диференциалната диагноза на ранните латентни форми на сифилис и фалшиво положителни резултати. Тази реакция може да бъде полезна при диагностициране на невросифилис и когато други серологични тестове са противоречиви.

RIBT става положителен много по-късно от RIF и RV. Поради това не се използва за диагностициране на инфекциозни форми на сифилис.

RIBT, подобно на RIF, е много бавно отрицателен в процеса на антисифилитична терапия. В резултат на това не е подходящ за проследяване на напредъка на антисифилитичната терапия.

Фалшиво-положителните резултати (FPR) при RIBT са редки и се наблюдават главно при редица трепонематози (фрамбезия, пинта, бежел), които не се срещат в Русия, както и при проказа, саркоидоза, SLE, туберкулоза, цироза на черния дроб. черен дроб и някои други. редки заболяваниянесифилитичен характер. С възрастта на пациентите се увеличава броят на фалшиво положителните резултати от RIBT.

RIBT може да се окаже фалшиво положителен, ако тестовият серум съдържа трепонемицидни вещества (например пеницилини, тетрациклини, еритромицин), които причиняват неспецифично обездвижване на бледа трепонема.Това може да се дължи на това, че пациентът приема трепонемоцидни антибиотици, следователно изследването не е се извършва при лица, които са получавали антибиотици през последния месец. Кръвта за RIBT може да се изследва не по-рано от 2 седмици след края на антибиотиците и други антисифилитични лекарства.

9. Модификации на реакцията на обездвижване на бледи трепонеми

В допълнение към микроанаеростатичната техника има меланжна настройка на RIBT по N.M. Овчинников. Анаеробните условия по време на формулирането на реакцията се създават чрез поставяне на реакционната смес в меланжер (миксер за левкоцити), двата края на който са затворени с гумен пръстен. Техниката на реакцията на меланж позволява да се използва вакуумна помпа, цилиндър със смес от азот и въглероден диоксид и микроанаеростат. При сравнително изследване върху голям клиничен материал са получени резултати, които не отстъпват на класическата анаеростатична техника.

10. Характеристики, предимства и недостатъци на РИБТ

РИБТ е технически сложен и скъп диагностичен метод. Технологията изисква значителни средства за поддръжка на зайци и тестване. Този отнемащ време тест в момента се използва главно за научни цели. В повечето чужди страни почти 40 години RIBT практически се използва не за диагностични цели, а само в изследователска работа.

Недостатъци на реакцията:

• RIBT изисква работа с жива патогенна treponema pallidum от щама Nichols, която остава инфекциозна за хората въпреки адаптирането към зайци
• реакцията е сложна, отнема време и е скъпа
• необходим е вивариум
• за настройка на реакцията, записване на резултатите и поддържане на вивариума е необходим висококвалифициран персонал
• субективност на оценката на резултатите
• липса на автоматизация
• няма начин да се стандартизира този серологичен метод.
• реакцията не е приложима на фона на продължаваща антисифилитична терапия
• невъзможност за използване за контролиране на лечението. RIBT при пациенти със сифилис може да остане положителен в продължение на много години (и дори за цял живот), въпреки полученото пълно лечение.
• реакцията може да даде фалшиво положителни резултати при пациенти със злокачествени тумори, диабет, проказа, автоимунни заболявания, пневмония, тежка сърдечно-съдова патология.

Предимствата на RIBT са:

1) Достатъчно висока чувствителност;

2) Висока специфичност.

RIF (имунофлуоресцентна реакция)

Имунофлуоресцентната реакция (RIF) е експресен диагностичен метод за откриване на микробни антигени или откриване на антитела. Тестовете, базирани на откриването на флуоресцентен сигнал, се считат за един от най-добрите тестовеза сифилис.

1. История на метода

Флуоресцентно трепонемно антитяло (FTA) е разработено за първи път през 1957 г. от Deacon и др. (Deacon, Falcone и Harris).

2. Принципът на метода

Методът RIF се основава на факта, че тъканните антигени или микроби, третирани с имунни серуми с антитела, маркирани с флуорохроми, могат да светят в UV лъчите на флуоресцентен микроскоп. Бактериите в намазка, третирани с такъв луминесцентен серум, светят по периферията на клетката под формата на зелена граница

Като антиген в RIF се използва суспензия от живи патогенни бледи трепонеми от щам Nichols от заешки орхит, който се изсушава върху предметно стъкло и се фиксира с ацетон. Кръвният серум на пациента се добавя към бледите трепонеми, изсушени и фиксирани с ацетон към стъклото.

След промиване препаратът се третира със серум, съдържащ антитела срещу човешки имуноглобулини, белязани с флуоресцеин. Още веднъж препаратът се промива и се гледа под флуоресцентен микроскоп. Ако тестовият серум съдържа анти-трепонемни флуоресцеинови антитела, ще се забележи жълто-зелен блясък на трепонемите.

3. Методът за провеждане на изследване по метода RIF

Антигенът, фиксиран върху предметното стъкло (патогенна treponema pallidum), се обработва от тестовия серум. След промиване препаратът се третира с флуоресцентен античовешки имуноглобулинов серум, белязан с флуорохром. В този случай полученият флуоресцентен комплекс (античовешки глобулин + флуоресцеин тиоизоцианат) се свързва с човешкия глобулин на повърхността на бледа трепонема, осигурявайки блясък на бледа трепонема под флуоресцентен микроскоп.

За откриване на комплекси антиген-антитяло се използва луминесцентен серум, представляващ антивидови (античовешки) имуноглобулини, конюгирани с FITC. Наличието на антитела срещу трепонема в серума се определя от блясъка на трепонема при изследване под флуоресцентен микроскоп. Тестът се провежда в качествен и полуколичествен вариант.

4. Отчитане на резултатите

Визуализацията на резултатите от RIF се извършва с помощта на флуоресцентен микроскоп. Резултатите се оценяват по степента на луминесценция на трепонемите в препарата. При наличие на антитела се вижда блясък на трепонема, но ако в серума няма антитрепонемни антитела, тогава трепонемите не се виждат. Степента на луминесценция на изсушена бледа трепонема, фиксирана към стъклото, е посочена в „плюси“ (от „–“ до „++++“). Отрицателен резултат - без блясък или фоново ниво - 1+.

5. В какви периоди на заболяването е по-добре да се използва

Имунофлуоресцентната реакция (RIF) е доста чувствителна на всички етапи на инфекцията, от края на инкубационния период до късния сифилис. Първичният период на сифилис в класическия курс започва 3-4 седмици след заразяването. RIF става положителен в първите дни на първичния период или дори в края на инкубационния период, от 3-та седмица след инфекцията. Резултатите от RIF остават положителни във всички периоди, включително в късните форми.

RIF става положителен малко по-рано от RW. Според някои доклади положителният RIF се среща при 80% от пациентите с първичен серонегативен сифилис. Във вторичния период RIF е положителен в почти 100% от случаите. Винаги е положителен латентен сифилиси дава 95 - 100% положителни резултати при късни форми на заболяването и вроден сифилис.

6. Чувствителност и специфичност

Имунофлуоресцентната реакция (RIF) е група от методи с висока чувствителност и специфичност. RIF е чувствителен на всички етапи на инфекцията, от инкубационния период до късния сифилис. Според СЗО чувствителността на RIF при първичен сифилис е 70-100%, при вторичен и късен сифилис - 96-100%, специфичност - 94-100%. Според TsNIKVI чувствителността на RIF при всички форми на сифилис е 99,1%.

Специфичността на RIF може да се увеличи чрез предварителна обработка на тестовия серум със сорбент - ултразвуков трепонен антиген, който свързва групови антитела (RIF-abs).

7. Обхват на метода

RIF се прилага:

• като потвърждаваща реакция при ранен, латентен сифилис
• за ретроспективна диагностика
• за разграничаване на латентни форми на сифилис и фалшиво положителни резултати от изследвания на сифилис.
• като потвърждаващ тест за невросифилис.

RIF се използва широко като потвърдителен тест, но не е предназначен за рутинна употреба или скрининг, тъй като е технически труден за настройка. За извършване на RIF е необходимо да имате вивариум или да закупите суспензия от патогенни бледи трепонеми, което ограничава възможността за реакция. През последните години обаче на вътрешния пазар започнаха да се появяват тестови системи, позволяващи провеждането на реакцията при липса на вивариум и собствен лабораторен щам на патогенна трепонема палидум.

8. Източници и причини за сценични грешки, фалшиви положителни и фалшиви отрицателни резултати

LPR при определяне на RIF са редки (с колагенози, борелиоза).

RIF все още се счита за един от най-добрите тестове за сифилис, "златният стандарт" на серодиагностиката. RIF в сравнение с RIBT е по-лесен за настройка,

Въпреки високата диагностична стойност, необходимостта от използване на жив T. pallidum, високата цена и продължителността на изследването възпрепятстват широкото въвеждане на RIF в ежедневната практика. Настройката на реакцията е трудоемка. Освен това оценката на резултатите от RIF е субективна.

Предимства на RIFи RIBT са:

1) Висока чувствителност (особено за RIF);

2) Висока специфичност (особено за RIBT).

Недостатъци на RIFи RIBT:

1) Техническа сложност, висока цена на методите.

2) Субективна оценка на резултатите, липса на автоматизация;

3) RIF и RIBT при пациенти със сифилис могат да останат положителни в продължение на много години (и дори за цял живот), въпреки полученото пълно лечение. Следователно тези реакции не могат да се използват за контролиране на лечението.

10. Модификации на метода

На практика за серодиагностика на сифилис се използват и са използвани няколко модификации на реакцията на имунофлуоресценция:

• RIF-абс- най-чувствителният метод за серодиагностика на сифилис, той става положителен по-рано от други реакции (от 3-та седмица от инфекцията);
• РИФ-200(серумът на пациента се разрежда 200 пъти при представяне) е много специфичен метод за серодиагностика на сифилис.
• РИФ-10(10 пъти разреждане на тестовия серум) - по-чувствителен метод от RIF-200.
• РИФ-цизвършва се с алкохол.
• RIF-abs-IgM- ранно откриване на антитрепонемни антитела от клас IgM.

1. Най-разпространената модификация RIF-абс- реакция на имунофлуоресценция с абсорбция. Преди да се постави реакцията, серумът на субекта се изчерпва със смес от непатогенни трепонеми, за да се изключат кръстосани реакции. Груповите антитела се отстраняват от изследвания серум с помощта на културни трепонеми, унищожени чрез ултразвук, което значително повишава специфичността на реакцията. Тъй като тестовият серум се използва в разреждане 1:5, RIF-abs е силно чувствителен.

Основните показания за употребата на RIF-abs в клинична практикаса:

• диагностика на латентни и късни форми на сифилис,
• откриване на фалшиво положителни резултати от CSR и RMP, особено при бременни и соматични пациенти със съмнение за сифилис,
• за установяване на ретроспективна диагноза на заболяването.

RIF-abs не е много информативен при оценката на резултатите от лечението: при 85% от пациентите, които са получили адекватна антисифилитична терапия, положителните резултати от RIF продължават в продължение на много години.

Тази реакция се нарича "златен стандарт" за серодиагностика на сифилис. Използва се за арбитражни дела, но за надежден резултат е необходима прясна концентрирана суспензия от T. pallidum щам Nichols от 7-дневен орхит при заек, който не трябва да се замразява.

2. В СССР е инсталиран в две версии - РИФ-10И РИФ-200, т.е. с разреждане на тестовия серум 10 и 200 пъти. RIF-200 - тест серумът се разрежда 200 пъти, за да се намали броят на фалшивите положителни резултати. Това осигурява висока специфичност на реакцията, но нейната чувствителност леко намалява. RIF-10 е по-чувствителен, но по-често дава неспецифични положителни резултати от RIF-200, който се характеризира с висока специфичност. RIF-10 е по-чувствителен, RIF-200 и RIF-abs са по-специфични.

Чувствителността на RIF-200 и RIF-abs се оценява на 84–99%, а специфичността е 97–99%.

3. РИФ-цизвършва се с алкохол. Реакцията се настройва с помощта на цяла цереброспинална течност за идентифициране на специфични лезии на ЦНС.

4. Реакция RIF-abs-IgMпредложен за откриване на ранни антитрепонемни антитела от клас IgM. Тази реакция може да се използва за диагностициране на вроден сифилис, ранни форми на сифилис и за разграничаване на случаите на повторна инфекция и серорецидив.

Известни са две модификации на тази реакция:

– FTA-ABS-IgM, базиран на използването на анти-IgM конюгат (белязани с флуоресцеин антитела срещу човешки IgM) във втората фаза на реакцията вместо анти-човешки флуоресцентен глобулин;

- руската версия на RIF-abs-IgM, характеризираща се с това, че към тествания кръвен серум се добавя сорбент, който премахва IgG антителата, а RIF-abs се поставя с останалите IgM антитела.

Основни показаниякъм формулировката на RIF-abs-IgM са:

- серодиагностика на вроден сифилис при липса на манифестни прояви на вроден сифилис върху кожата и лигавиците на детето;

- диференциална диагноза на реинфекция и клинико-серологичен или серологичен рецидив на сифилис, при който RIF-abs-IgM ще бъде отрицателен, а RIF-abs - положителен;

- оценка на ефективността на терапията за ранно придобит или вроден сифилис: след адекватно лечение RIF-abs-IgM става отрицателен през следващите 3-6 месеца.

Тази реакция може да се използва за откриване на вроден сифилис. Известно е, че големи IgM молекули не могат да преминат през здрава плацента. Следователно антителата от клас М срещу treponema pallidum могат да се появят в тялото на детето или поради нарушение на бариерната функция на плацентата, или те се произвеждат от тялото на дете със сифилис. Антителата от клас IgM се появяват в кръвта на пациент със сифилис още през първите седмици от заболяването и антителата клас IgGсе появяват по-късно. Отделното определяне на антитела от двата класа е изключително полезно при диагностицирането на вроден сифилис при деца, тъй като наличието на антитела от клас IgM при дете през първия месец от живота ще покаже, че те се образуват от тялото на дете със сифилис, докато откриването само на IgG антитела ще покаже майчиния произход на последните.

Изявление на реакцията 19S(IgM)-RIF-absвключва предварително отделяне чрез гел филтрация на по-големи 19S IgM молекули от

фракции от по-малки 7S IgG молекули. Допълнително изследване на RIF-abs реакцията на кръвен серум, съдържащ само 19S IgM фракция,

елиминира всичко възможни източницигрешки. Но техниката за настройка на тази реакция е сложна и отнема много време, изисква специално оборудване и обучение на специалисти.

Реакция на имунна адхезия (RIP, TPIA - Treponema pallida immunoadherence).

Тази реакция се основава на използването на феномен, описан от Rieckenberg през 1912 г. RIP се основава на факта, че вирулентните тъканни трепонеми, сенсибилизирани от серума на пациент със сифилис, се придържат към повърхността на еритроцитите в присъствието на комплемент и еритроцити и по време на центрофугиране се отвеждат с тях в утайката, изчезвайки от супернатантата.

За провеждане на реакцията се използват следните съставки: тест серум, антиген, комплемент, донорни еритроцити, изотоничен разтвор на натриев хлорид. Като антиген се използва суспензия от бледа трепонема от щам Nichols.

Най-широко по отношение на серодиагностиката на сифилис, този тест е изследван от местни и чуждестранни автори през 50-60-те години. Данните за стойността на RIP като диагностичен тест са противоречиви. Реакцията изисква максимална точност, тъй като при неточно изливане на съставките, с излишък или дефицит на тестовия материал в препарата се получават ненадеждни резултати.

В Русия обширни изследвания са проведени от L.V. Sazonova, който получи подобни резултати при RIP и RIT, използвайки прясно приготвена суспензия от патогенни бледи трепонеми от щама Nichols. Въпреки това, използването на антиген, нагрят или консервиран с фенол, рязко изкривява резултатите от реакцията и прави антигена нестабилен. Препоръчвам даден тестза замяна на RIT L.V. Сазонова го смяташе за невъзможно.

ЛИЧЕН ЛЕКАР. Авдеева, използвайки други температурни и времеви режими при получаването на антигена, получи различни резултати при изследването на RIP. Според нея чувствителността на тази реакция е по-висока от чувствителността на KCP и RIT, но малко по-ниска от RIF, а специфичността на RIP, RIT и RIF е близка.

Въпреки това, липсата на производствено освобождаване на антигена за RIP не позволи по-широко проучване на този тест и въвеждането му в практиката.

RPHA реакция на пасивна хемаглутинация

Реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA)е общ серологичен тест, който е здраво вкоренен в лабораторната практика. има доста високо ниво на ефективност в изследването.

1. История на метода RPHA

За първи път G.Blumental и W.Bachman (1932) съобщават за използването на RPGA за диагностика на сифилис. През 1965 г. е предложена индиректна или пасивна реакция на хемаглутинация за диагностика на сифилис. Модификацията на реакцията с помощта на различни антигени е докладвана от Т. Ратлев през 1965 - 1967 г. Микромодификацията на RPGA е предложена от Sokh R.M. и съавтори през 1969г. Първата търговска тестова система е разработена от японски учени Tomisava et. ал. през 1969г

2. Принцип на метода RPGA

От приготвена хомогенна суспензия от "заредени" с антигени еритроцити, при добавяне на тест серум, съдържащ антитела, се утаява утайка под формата на люспи. Получената утайка се състои от "слепени" от антитела еритроцити и се нарича "хемаглутинирам". Суспензия от еритроцити се приготвя предварително и се доставя като част от диагностичните тест системи.

Процесът на слепване на червени кръвни клетки, на повърхността на които има антигени, се нарича "хемаглутинация". Свързването става под действието на специфични антитела (аглутинини). Реакцията се нарича "пасивен", защото собствените антигени на еритроцитите не реагират, а самите еритроцити изпълняват изключително спомагателна индикаторна функция.

Реакцията на пасивна (индиректна) хемаглутинация е вид реакция на аглутинация, при която за носители на антигени се използват еритроцити (от гръцки háima - кръв), а не други частици. IN общ случай, при реакцията на аглутинация под действието на антитела се слепват и се утаяват микроби или други клетки - не непременно еритроцити, а например латексови частици, бактерии или други корпускулярни частици, носещи антиген.

В реакцията на пасивна хемаглутинация за диагностика на сифилис като антиген се използват еритроцити от овен или птица, покрити с антигени на бледа трепонема. Когато се добави серум, съдържащ специфични антитела, еритроцитите се слепват (аглутинация).

Реакцията на RPHA се нарича имунологични методи, т.к. основава се на специфичното взаимодействие на антигена на патогенната treponema pallidum с антитяло. В съответствие с "решетковата теория" аглутинацията е резултат от "кръстосано свързване" на повърхностни антигенни молекули с молекули на антитела (имуноглобулини).

3. Изявление на реакцията на пасивна хемаглутинация

RPHA се поставя в пластмасови таблетки или в епруветки с разреждания на кръвния серум на пациента, към който е добавен еритроцитен диагностикум.

Процесът на свързване на антигена с еритроцитите се нарича сенсибилизация, а полученият по този начин изкуствен корпускуларен антиген се нарича сенсибилизирани еритроцити. Еритроцитна диагностикаеритроцитите, сенсибилизирани с антиген, се наричат.

За приготвяне на диагностикума се използват еритроцити от овен или птица (обикновено пиле), третирани първо с формалин и след това с танин, които се сенсибилизират с ултразвуков антиген на патогенна трепонема палидум (щам Nichols) или рекомбинантни протеини на трепонема палидум (TpN15, TpN17, TpN47). Могат да се използват и овчи еритроцити, сенсибилизирани с ултразвуков антиген на култивирана treponema pallidum.

Само серум (не използвайте плазма). Хемолизирани и мътни проби не са подходящи. Несенсибилизираните еритроцити служат като отрицателна контрола (за да се изключи наличието на антиеритроцитни антитела). Във всяка серия от продукции използвайте положителни и отрицателни контроли.

В ямките (клетките) на имунологичната таблетка се въвеждат проби от изследвания кръвен серум и тестови еритроцити. Ако кръвният серум на пациента съдържа специфични анти-трепонемни антитела, тогава, когато тестовият серум се добави към ямката с антигена, се образуват комплекси антиген-антитяло, които се свързват с повърхността на носителите (еритроцити). Визуално това се проявява чрез залепване на червени кръвни клетки, т.е. хемаглутинация, която се вижда с просто око. Имунните комплекси "антитяло-антиген-еритроцит", които постепенно се спускат под въздействието на гравитацията, се разпределят по цялата повърхност на дъното на кладенеца и образуват характерна картина на "обърнат чадър".

В зависимост от количеството антитела, съдържащи се в тестовата проба, изображението на „обърнат чадър” варира от максимално, заемащо цялата повърхност на дъното на ямката, до малка зона в централната, най-ниска част от нея (с просветление в центъра и образуването на по-интензивен пръстен от утаени еритроцити по периферията).

Имунни комплекси не се образуват, ако в пробата няма специфични антитела или когато към реакцията се добавят контролни (интактни) еритроцити. В същото време еритроцитите постепенно се събират в най-ниската точка на дъното на кладенеца, образувайки фигура под формата на компактно петно ​​или "копче", понякога с леко просветление в центъра.

Ако човешкият кръвен серум съдържа антиеритроцитни антитела, тогава "чадърът" ще се образува във всеки случай - както в реакция с тестовите еритроцити, така и с контролните еритроцити. В този случай се препоръчват други медицински технологии за откриване на специфични антитрепонемни антитела.

Възможен е феноменът на прозон (невъзможност за реакция поради излишък от антитела), който се елиминира чрез разреждане на серума.

4. Отчитане на резултатите от реакцията на пасивна хемаглутинация

Резултатите от RPGA се вземат предвид визуално след 60-120 минути при настройка на микрометода и след 2-4 часа или на следващия ден при настройка на макроварианта. При използване на по-големи (ядрени) птичи еритроцити се получава по-ясна картина, а резултатите се записват на по-ранна дата.

Възможно е да се определи титърът (висок титър TPHA ≥ 1:2 560).

Резултатите от изследването се оценяват по системата 4+ (от "-" до "++++") според размера на образувания филм. Когато настъпи аглутинация, еритроцитите се намират на повърхността на ямката под формата на "чадър", а при отрицателен резултат еритроцитите свободно се плъзгат надолу и се натрупват на дъното в центъра на ямката под формата на "копче". ".

Общоприетата оценка на резултатите от RPGA:

4+ - положителен RPHA. Аглутинираните еритроцити под формата на "чадър" равномерно покриват цялата повърхност на дупката;

3+ - положителен RPHA. Еритроцитите покриват цялата повърхност на дупката, но някои от тях се "плъзгат" към центъра. В същото време по периферията на депозита се образува забележим пръстен;

2+ - слабо положителен RPHA. Еритроцитите образуват филм върху малка площ от долната част на кладенеца, образувайки плътен пръстен от еритроцитна утайка със забележимо просветление в центъра;

1+ - неопределен RPHA, еритроцитите образуват рохкава утайка на дъното на ямката с размити ръбове и лек лумен в центъра;

(–) - отрицателен RPHA, всички еритроцити лежат на дъното на ямката под формата на компактна утайка ("копчета" или пръстени) срещу чист заобикалящ фон (без заобикаляща гранулирана утайка).

В чуждестранната практика резултатите от RPGA също се оценяват като реактивни (при образуване на аглутинат), слабо реактивни (ако образуванията са незначителни) и нереактивни (ако не се наблюдава аглутинация).

Отчитането на резултатите от реакцията може да се извърши автоматично с помощта на специални анализатори. В допълнение към качествените изследвания, всички тестови системи предоставят количествен анализс определяне на титъра.

5. В какви периоди на заболяването е по-добре да се използва RPHA

RPHA става положителен в средата на първичния период (7-8 седмици от момента на инфекцията, 3-4 седмици след появата на твърд шанкър) и остава положителен години след лечението.

При много високо ниво на антитела срещу трепонема в изследвания серум (което е най-характерно за вторичния сифилис) е възможен фалшиво-отрицателен резултат от TPHA (така нареченият феномен на "прозона").

Специфични аглутининови антитела се откриват в кръвта на хора, които са имали сифилис от дълго време, така че RPGA не може да се препоръча за диференциална диагноза на повторна инфекция или за определяне на тежестта на инфекциозния процес.

RPGA не се използва за контрол на лечението, т.к. може да остане положителен много години след възстановяване. В същото време може да се използва като допълнителен (към RMP или RPR) метод за проследяване на ефективността на лечението, като се изследва динамиката на намаляване на титрите на антителата. Предпоставка за това е използването на същата тест система RPGA, както при първия (преди лечението) преглед на пациента, както и изследването в същата лаборатория.

6. Чувствителност и специфичност на RPHA

RPHA се счита за силно чувствителен и специфичен тест. Тази реакция е ценен диагностичен тест при всички форми на сифилис, но е особено чувствителен при напредналите форми на заболяването. Чувствителността на RPHA варира в зависимост от стадия на заболяването. При първичен сифилис чувствителността на RPHA е 76% (и по-висока), при вторичен сифилис - до 100%. С латентен ранен - ​​97%, с късен сифилис - 94%, със специфичност 98-100%. По-ниската чувствителност при пресните форми на заболяването се дължи на по-късното образуване на аглутинини.

Според държавната институция "ЦНИКВИ Росздрав", чувствителността на RPHA при диагностицирането на различни форми на сифилис е 99,4%. Повечето изследователи отбелязват 98-99% специфичност на RPHA.

По чувствителност и специфичност RPHA не отстъпва, а при късни форми и вроден сифилис дори превъзхожда RIF и RIBT.

7. Обхват на приложение на метода RPGA

TPHA може да се използва както като скринингов, така и като потвърдителен тест; може да се използва в полуколичествен вариант с изчисляване на титъра на антитялото. Разработени са количествен метод за настройка на RPHA, микрометод, както и автоматизирана реакция на микрохемаглутинация.

8. Характеристики, предимства и недостатъци на RPGA

Според литературата RPGA постоянно заема водеща позиция в клиничната практика в повечето страни по света. TPHA е най-широко използваният тест в клиники за ППИ в чужбина.

Техниката RPGA е лесна за изпълнение, не изисква специално оборудване: за настройката е необходима само хемаглутинационна плоча. Проучването не отнема много време; реакцията е силно чувствителна и специфична. Апробацията на метода в клиничната практика показа, че той е изключително прост, евтин и чувствителен. Подобно на ELISA, RPHA е лесен за изпълнение, не изисква висококвалифициран персонал и специално оборудване и е възможно автоматизирането му.

Предимства на RPGA теста:

• лесен за настройка и интерпретация,
• не изисква специално оборудване,
• време за получаване на резултата - 45 минути,
• подходящ за масов скрининг (необходими са само 25 µl серум при разреждане 1:20),
• висока степен на стандартизация,
• наличието на вътрешен контрол,
• дълъг срок на годност
• приемлива цена
• възможността за автоматизиране на счетоводството.

Трябва да се отбележат и недостатъците на RPGA:

• възможността за неспецифични реакции в присъствието на антиеритроцитни антитела,
• липса на корелация на титъра и стадия на сифилис,
• по-късна положителна реакция в ранните стадии на сифилис,
• възможността за фалшиви положителни реакции при хора, които са приемали алкохол, наркомани,
• чувствителност към вибрации и температура в лабораторията.

Предимствата на RPGA в сравнение с RIBT и RIF са:

• използване на индустриални тестови системи,
• възможност за автоматизиране на реакцията,
• няма нужда да работите с жива бледа трепонема,
• премахва нуждата от вивариум.

9. Източници и причини за грешки при настройката на RPHA, фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати

Реакцията на пасивна хемаглутинация е сравнително просто изследване; при извършването му е необходимо да се спазват всички препоръки на производителите на диагностикума и правилата за работа в клинико-диагностичната лаборатория. Допуснатите грешки могат да доведат до появата и регистриране както на фалшиво-отрицателни, така и на фалшиво-положителни резултати от реакцията. Фалшивите положителни резултати от RPGA могат да се дължат на влиянието на човешкия фактор и биологичните фактори.

Могат да се получат фалшиви положителни резултати

• при изследване на кръвни серуми на пациенти с невенерически трепонематози,
• поради ревматоиден фактор
• поради антитела, реагиращи кръстосано с трепонемния антиген, които се образуват по време на различни системни или индуцирани от лекарства и индуцирани от лекарства метаболитни нарушения,
• поради ненормални нива на имуноглобулини;
• при новородени - поради образуването в тялото на плода или детето на IgM антитела срещу IgG на майката, което усложнява тълкуването на резултатите и диагностицирането на вроден сифилис.

Грешки, причинени от влиянието на фактора на човешкото участие върху изследването:

• замърсени микроплаки
• неправилно пипетиране
• вибрации в лабораторията
• температурата на въздуха в лабораторията е извън температурния диапазон: 18–25 градуса

Най-типичните технически грешки при настройката на RPGA, водещи до ненадеждни резултати, включват:

• неточно разреждане на съставките,
• нарушение температурен режим,
• нарушаване на времето на инкубация на реагентите,
• нарушаване на условията за прилагане на реагенти към таблета,
• несъответствие на рН на разтворите с необходимите,
• замърсяване на лабораторна стъклария.

Следните технически точки също могат да бъдат източник на грешки при настройване на RPGA:

• изключване от формулирането на реакцията на контролни кръвни серуми;
• неравномерна концентрация на еритроцити в диагностикума поради недостатъчно смесване преди употреба;
• нарушаване на условията за съхранение на диагностикума и контролните еритроцити; използване на комплекти с изтекъл срок на годност;
• използването на замърсени епруветки, накрайници за пипети, пипети, имунологични плаки, разтвори при поставяне на реакции;
• неточности в първоначалното разреждане на проба от кръвен серум;
• недостатъчна задълбоченост при извършване на последователни двойни разреждания;
• неспазване на температурния режим и времето за инкубация;
• наличието на външни вибрации и разклащане на имунологичната плака по време на инкубацията;
• нарушение на метода за настройка на RPGA, изразяващо се в отказ от провеждане на изследване с контролни еритроцити.

Използването на кръвна плазма, съдържаща антикоагуланти, способни да причинят неспецифична еритроцитна аглутинация (RPHA), може да доведе до резултати, които не могат да бъдат интерпретирани.

Броят на фалшиво положителни и фалшиво отрицателни резултати е по-малък, отколкото при други серологични тестове. LPR в условията на RPHA са редки и възможни при трепонематози (фрамбезия, бежел, пинта). Също така са регистрирани фалшиви положителни резултати (общо по-малко от 1%) при наркозависими, при пациенти инфекциозна мононуклеоза, борелиоза, проказа, с колагенози, цироза на черния дроб, лимфосаркома, както и при бременни жени.

Фалшиво-отрицателните резултати от реакцията може да се дължат на конкуренция между IgM и IgG антитела. Фалшиво отрицателни резултати са възможни и при HIV-инфектирани пациенти.

10. Модификации на метода RPHA

Има микро и макро модификации на настройката на RPGA, като първата се използва по-често поради икономичността, скоростта на настройка и отчитането на резултатите.

В допълнение, автоматичен диагностичен комплексанализ на изображения, което направи възможно извършването на количествена автоматична оценка на резултатите и премахване на субективизма при интерпретацията на получените данни. Софтуерно-хардуерният комплекс разпознава изображението, обработва данните и дава отговор в относителни единици.

Четците и автоматичните анализатори също се използват за автоматизиране на записа на резултатите от RPGA.

TPPA (Treponema pallidum particle agglutination) - тест за аглутинация на изкуствени частици за откриване на антитела срещу Treponema pallidum

Кратко описание на TPPA теста

Понастоящем за диагностициране на сифилис се използва и модификация на метода на пасивна хемаглутинация - TPRA (аглутинация на частици Treponema pallidum), при която антигенът на бледа трепонема се фиксира върху желатинови частици. Тъй като изкуствените полимерни частици нямат свои собствени антигени, които определят биологичната активност, тогава комплектите за серодиагностика на сифилис, базирани на тях, имат основание да се считат за по-напреднали. Използването на биологично инертни изкуствени частици минимизира неспецифичната аглутинация, която обикновено се наблюдава при други носители.

TPPA се използва за серологична диагностикаантитела към различни видове и подвидове патогенни трепонеми. Този тест може да се използва за откриване на антитела срещу причинителите на сифилис, пинта, бежел и фрамбезия.

Процедурата на изследване е много проста и не изисква специално оборудване - използват се стандартни "U"-образни микроплаки. Тестът се основава на аглутинация на желатинови частици, сенсибилизирани с антигени на T. pallidum, антитела, открити в кръвния серум на пациента.

TPPA е потвърждаващ трепонемален тест, който може да се използва удобно както за малък брой проби, така и за масов скрининг. TPPA се използва в чужбина като потвърдителен тест и за замяна на микрохемаглутинационния тест MHA-TP (микрохемаглутинационен анализ за антитела срещу T. pallidum).

Чувствителността на TPPA теста е между 85% и 100%, а специфичността е между 98% и 100%. Чувствителността на TPPA за първичен сифилис е 88%, за вторичен и късен латентен сифилис 98%-100%.

Ако TPPA се използва за диагностициране на сифилис, антителата срещу други видове трепонема (като T. pallidum endemicum, pertenue или carateum) могат да причинят фалшиво положителни резултати. Има няколко метода за отстраняване на тези антитела от серумни проби преди започване на теста.

Принцип на TPPA теста

TPPA е пасивен метод за аглутинация на желатинови частици в човешки серум или плазма. Серумът, съдържащ антитела срещу патогенна трепонема, реагира с желатинови частици, сенсибилизирани с антигена на бледа трепонема от щама Nichols, подложен на ултразвук. В резултат на реакцията се образува гладък филм от аглутинирани желатинови частици в ямката на микротитърната плака.

Ако няма антитела, частиците се утаяват на дъното на ямката на плаката, образувайки компактен "бутон" от неаглутинирани частици. Контролните ямки с несенсибилизирани желатинови частици също трябва да показват такъв компактен "бутон" за всеки серум, т.е. без аглутинация.

Приложение на TPPA теста

TPRA е универсален тест, който може да се използва еднакво успешно както при задължителен превантивен преглед на групи от населението за сифилис (скрининг), така и в специализирани дерматовенерологични институции. Предимството на TPPA теста е неговата висока чувствителност, която не отстъпва на класически тестове, които доскоро бяха „златен стандарт“ за серодиагностика на сифилис. Други предимства на теста включват високата възпроизводимост, както и простотата и скоростта на настройка на реакцията.

TPPA тестът се използва за потвърждаване на положителни резултати от нетрепонемни скринингови тестове за сифилис, като VDRL теста, и за оценка на пациенти, които имат отрицателни нетрепонемни тестове, но имат признаци или симптоми, предполагащи късен сифилис. Не се препоръчва използването на TPPA като единствен скринингов тест за сифилис.

В допълнение, тестът за аглутинация TPPA може да се използва за изследване на проби от цереброспинална течност при диагностицирането на невросифилис. В този случай, както и при други серологични изследвания, интерпретацията на резултатите трябва да се извършва със задължителна комбинация с други показатели и симптоми на заболяването.

Резултати от TPPA тест

Резултатът се оценява по системата на "плюсовете" - от (-) до (2+). Резултатите от теста се виждат с невъоръжено око и се интерпретират, както следва:

Степен на аглутинация	Резултат от теста	Интерпретация
Аглутинираните частици равномерно покриват дъното на блюдото	2+	Положителен
Значителен голям пръстен с неравни външни ръбове и периферна аглутинация	1+	Положителен
Частиците образуват компактен пръстен с празнина в центъра и гладка гладка външни граници	±	слабо положителен
Частиците образуват компактен пръстен в центъра на ямката с лека празнина в центъра и гладка външна граница.	–	Отрицателна
Частиците образуват "копче" в центъра на отвора с гладка външна граница	–	Отрицателна

Резултатите се записват, за да се определи съответствието с описанието по-горе. Пробите, показващи неопределен резултат (±), трябва да бъдат тествани повторно. В случай, че дадена проба покаже неопределен резултат при няколко TPPA теста, се препоръчва да се проведе изследване с други методи.

Резултатите от анализа не трябва да се разглеждат изолирано. Например, в ранен стадий на инфекция, броят на антителата е все още твърде малък, в резултат на което TPPA и много други методи не са чувствителни. Ето защо, ако има съмнение за сифилис, дори ако резултатите от теста са отрицателни, пробите трябва да се изследват отново. За поставяне на диагнозата е необходимо да се вземат предвид клиничните симптоми, които пациентът има, клиничната история и други данни.

Както при теста TPHA, феноменът на прозона и фалшиво отрицателен резултат могат да се наблюдават при TPPA, ако серумната проба съдържа твърде висок титър на антитела.

ELISA - ELISA

Ензимният имуноанализ (ELISA; Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ, ELISA) е един от многото методи за серологична диагностика на инфекциозни заболявания. Ензимният имуноанализ (ELISA) в серодиагностиката на сифилис е тест за антитела от класове M, G и A (IgM, IgG, IgA) срещу антигени на бледа трепонема. Възможно е провеждането на ELISA с цереброспинална течност.

Въвеждането на практика на ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) вместо реакцията на Васерман и други кардиолипинови тестове значително подобри качеството на лабораторната диагностика на сифилис. Съществено предимство на този метод е възможността за автоматизиране на изследователския процес, което намалява влиянието на човешкия фактор.

1. История на метода ELISA

Основните принципи на ензимен имуноанализ върху повърхността на твърдофазов носител са разработени от E. Engvar et al. (1971), B.Van Weeman и A.Schuurs (1971). Разработеният от тях ензимен имуноанализ е предложен за първи път за диагностика на сифилис през 1975 г. от J. Veldkamp и A. Visser, които оценяват потенциала на този автоматизиран тест. ELISA започва широко да се използва при диагностицирането на сифилис през 80-те години на миналия век, когато диагностичните тестове са разработени и сертифицирани и методите за изследване са стандартизирани. В СССР техниката на ELISA за диагностика на сифилис е разработена от V.N.Bednova, A.V.Babiy и A.V.Kotrovsky (1982, 1983).

2. Принцип на метода ELISA

Ензимно-свързаният имуносорбентен анализ (ELISA) според механизма на реакцията е близък до RIF (откриват се същите антитела). Реакцията на ензимен имуноанализ се класифицира като имунологична реакция, основана на високоспецифичното взаимодействие на антигените на treponema pallidum с антителата на пациент със сифилис.

В сифилидологичната практика се използва предимно индиректен вариант на ELISA. Принципът на най-често използвания вариант на индиректна реакция е следният. На повърхността на ямките на полистиролова плака се фиксират имунни комплекси, които се образуват по време на взаимодействието на антитела на пациент със сифилис с антигени на бледа трепонема. След това те се откриват в цветна реакция, като се използват специфични конюгати и подходящи субстратно-хромогенни добавки.

Процедурата за извършване на теста е следната: серумът на пациента се поставя върху твърдофазов носител с прикрепен към него антиген. При наличие на антитела в него на повърхността на носителя се образува комплекс антиген-антитяло. За да се "проявят" резултатите от реакцията, се използват анти-видови антитела срещу човешки Ig, конюгирани с ензимни маркери. В случай на положителна реакция, ензимът, прикрепен към комплекса антиген-антитяло, разлага добавения към системата субстрат, което води до развитие на цветно оцветяване с различна интензивност.

В реакцията определянето на комплекса от AG и AT, адсорбиран върху твърдата фаза, се извършва с помощта на антиглобулинови антитела, белязани с ензима, според цветната реакция на ензима със субстрата.

В реакцията определянето на комплекса от антигени и антитела, адсорбирани върху твърдата фаза, се извършва с помощта на ензимно белязани антиглобулинови антитела.

ELISA дава възможност за откриване на серумен Ig от различни класове. На пазара има системи, които ви позволяват да определяте отделно IgM и IgG и общите антитела.

Специфичните антигени, използвани за ELISA, могат да имат различен произход:

ултрагласен- получени са в резултат на унищожаването на бактериалната клетка T.pallidum чрез ултразвук или друг метод;

рекомбинантен- те се получават чрез технологии на генното инженерство чрез въвеждане в генома на бактериална клетка (напр. коли E.Coli) генът, отговорен за синтеза на определен антиген на T.pallidum, последван от растеж на бактериалната маса на произвеждащия микроорганизъм, унищожаване на тези клетки, изолиране и пречистване на антигена;

пептид- получени в резултат на последователен химичен синтез на антигенни епитопи на протеини на T. pallidum.

Тялото е способно да образува антитела към почти всяка част от молекулата на антигена. При нормален имунен отговор това обикновено не се случва. Един или повече имуногенни пептиди, изолирани от протеинов антиген, имат специална антигенност и повечето антитела се образуват специално за тях. Те развиват най-интензивен имунен отговор. Най-информативните в ELISA показаха имунодоминантни региони на протеини от бледа трепонема с молекулно тегло 15 kD, 17 kD и 47 kD. Като антиген се използва екстракт от детергент или ултразвук от патогенни трепонеми от щама Nichols.

3. Методът за провеждане на изследване по метода

Принципът на метода е да се идентифицира специфичен комплекс антиген-антитяло, адсорбиран върху твърдата фаза (повърхността на ямките на пластмасова плака) с антиглобулинови антитела, белязани с ензим (пероксидаза), като се използва цветна реакция със субстрат, който е количествено спектрофотометрично.

Антигените, използвани за сенсибилизиране на ямките на полистиреновата плака, могат да бъдат:

• лизат- получени в резултат на унищожаването на бледа трепонема чрез ултразвук;
• пептид- получени в резултат на химичен синтез на фрагменти от протеини на бледа трепонема и притежаващи антигенна реактивност, подобна на оригиналните протеини на патогена;
• рекомбинантен- получени с помощта на методи на генно инженерство, носещи антигенни детерминанти, идентични с бледа трепонема.

В сифилидологичната практика обикновено се използва индиректен вариант на ELISA.

4. Отчитане на резултатите

В ELISA, за визуализиране на реакцията антиген-антитяло, се използва ензимна реакция (алкална фосфатаза или пероксидаза от хрян) със субстрат, който променя цвета си. Интензитетът на цвета определя положителността на реакцията (от "-" до "++++"). Резултатите от ELISA могат да бъдат оценени визуално по 4-точкова система или инструментално под формата на цифрови индикатори за оптична плътност, получени на специални четци (като Multiscan) при дължина на вълната 492 nm. защото оценката на резултатите се извършва спектрофотометрично, което изключва субективна интерпретация.

5. В какви периоди на заболяването е по-добре да се използва

Условия за положителност на ELISA - от 4-та седмица от заразяването. Резултатите от ELISA (както и RIF) стават положителни в първите дни на първичния период или в края на инкубационния период и остават положителни през всички периоди. ELISA е особено ценен при ранната диагностика на сифилис - положителни резултати за антитела могат да бъдат получени още в края на инкубационния период на заболяването (т.е. 4-6 седмици след заразяването).

6. Чувствителност и специфичност

ELISA е високочувствителен и специфичен тест, което е неговото предимство. ELISA по отношение на механизма на реакцията, чувствителността и специфичността е близо до RIF, т.к. едни и същи антитела участват и в двете реакции. Повечето изследователи отбелязват висока специфичност и чувствителност на всички етапи на заболяването. Чувствителността на различните варианти на ELISA, според Г. А. Дмитриев, достига 98–100%, а специфичността е 96–100%. Според TsNIKVI чувствителността на ELISA за сифилис е 99,1% (Заповед № 87 M3 на Руската федерация).

Вариантът на твърдофазния ELISA (ензимно-свързан имуносорбентен анализ, ELISA) е един от най-чувствителните серологични тестове, позволяващ откриване на 0,0005 µg/ml антитела и 0,000005 µg/ml антигени.

7. Обхват на метода

Методът се препоръчва да се използва при изследване на бременни жени, контактни лица, донори и представители на рискови групи. ELISA може да се използва както като скринингов, така и като потвърждаващ тест. За сравнително кратко време от своята история ELISA еволюира от показателен тест в потвърждаващ. При диагностицирането на сифилис тестът се използва и като потвърждаващ тест за проби, показващи положителни резултати, като се използват различни нетрепонемни тестове и TPHA.

Методът ELISA може да се използва количествено с изчисляване на индекса на положителност или реактивност, което ви позволява да оцените нивото на антитела в пробата.

Понастоящем в Русия използването на ензимен имуноанализ за диагностика на сифилис се регулира от Заповед на Министерството на здравеопазването на Руската федерация № 87 от 26 март 2001 г. „За подобряване на серологичната диагностика на сифилис“ (Приложение №. 1 „Настройване на скринингови и диагностични тестове за сифилис“). В заповедта се предвижда замяна на RSK в комплекса от серореакции (SSR) с ELISA и RPHA.

8. Източници и причини за сценични грешки, фалшиви положителни и фалшиви отрицателни резултати

Ензимният имуноанализ е сложно многоетапно изследване, при което е необходимо стриктно да се спазват всички препоръки на производителите на диагностични комплекти, правилата за настройка и конфигуриране на оборудването, използвано в изследването.

Следните точки могат да бъдат източник на грешки при настройване на ELISA:

Изследване на реакцията на хиперлипидемичен, хемолизиран кръвен серум или проби с признаци на бактериален растеж;

Не практикувайте двойно или повече замразяване на проба от биологичен материал; ако е необходимо, повторно изследване, използвайте серум от двойна епруветка;

Нарушаване на условията за съхранение на имуносорбента и промивния разтвор; използване на тестови комплекти с изтекъл срок на годност;

Прилагане на реакционни компоненти от други диагностични комплекти;

Нарушаване на времето на етапите на реакцията;

Изсушаване на ямките на имунологичната плака по време на етапите на реакцията;

Повторно използване на пластмасови съдове (пластмасови тави) за приготвяне на смес от хромоген и субстрат;

Неспазване на честотата на метрологичния контрол на параметрите на работа на използваните уреди (шайба и спектрофотометър);

Използването на замърсена лабораторна стъклария при провеждане на реакции: колби, мерителни цилиндри, епруветки, пипети, накрайници за пипети;

Недостатъчна задълбоченост при извършване на разреждания на проби от биологичен материал;

Грешки при въвеждане на проба от биологичен материал в съответната ямка на таблета;

Грешки при прехвърляне на резултатите от изследването в регистъра за регистрация, протокола от изследването или формуляра за отговори.

Внимателното изпълнение на препоръките на инструкциите за използване на комплекти за диагностични тестове, редовна проверка на точността на дозаторите за пипети и автоматичните устройства, използването на вътрешни положителни и отрицателни контроли позволяват получаване на високо възпроизводими резултати от ELISA.

9. Характеристики, предимства и недостатъци

ELISA се отнася до модерни, обещаващи методи за серодиагностика на сифилис поради своята простота, възпроизводимост и достъпност. Откриването на антитела чрез ELISA е идеален диагностичен метод, подходящ за едновременно изследване на голям брой проби. Благодарение на своите предимства, той придоби популярност във всички страни.

Технологията на изследването ELISA осигурява спазване на всички препоръки на производителите на търговски комплекти за диагностични тестове и задълбочеността на изследователската процедура. За провеждане на изследвания в ELISA е необходимо да се закупи допълнително специално оборудване. Техниката на настройка отнема повече време в сравнение с RMP, RPR и RPGA.

Наличието на автоматизация на няколко етапа или на целия процес като цяло ви позволява едновременно да изследвате голям брой проби от биологичен материал с висока степен на стандартизация на изследването, минимизирайки субективния елемент при оценката на резултатите, възможност за съхраняване на фиксирани протоколи от изследване, което прави възможно архивирането на данните от изследването и повторното им препращане за ретроспективен анализ.

Предимства:

• Позволява диференцирано и общо определяне на IgM и IgG антителакъм причинителя на сифилис.
• висока чувствителност и специфичност, приближаваща се до 100%,
• възпроизводимост
• възможности за автоматизация

Предимствата на ELISA включват висока специфичност (96-100%) и чувствителност (98-100%), отбелязани от повечето изследователи.

Наличието на автоматизация на няколко етапа или на целия процес като цяло ви позволява едновременно да изследвате поток с голям брой проби от биологичен материал с висока степен на стандартизация на изследването, минимизирайки субективния елемент в оценката на резултати, възможността за съхраняване на фиксирани протоколи за изследване, които ви позволяват да архивирате данните от изследването и да ги препращате отново за ретроспективен анализ.

Значителни недостатъци на ръчните методи, включително определянето на антитела срещу антигените на T. pallidum чрез ELISA, са:

~ възможни грешки на персонала по време на изследването (недоглеждане, небрежност, нарушение на технологията);

~ невъзможността за пълна стандартизация на изследователския процес с ръчна версия на ELISA;

~ повишен риск от инфекция на персонала.

10. Модификации на метода

Наред с класическия индиректен ELISA е познат и методът. улавяне ELISA. Предложено е през 1989 г. от O. E. Ijsselmudien et al. за откриване на антитела от клас IgM срещу Tr антигени. палидум. Методът има висока специфичност и чувствителност.

Пречистените антитела към човешки имуноглобулини от клас М се сорбират върху повърхността на гнездата на таблетката и след инкубиране на тестовия серум всички IgM се свързват с носителя. Наличието сред свързаните IgM специфични за антигени Tr. pallidum се открива с помощта на Tr антигени. pallidum, конюгиран с ензим.

Този метод ви позволява да откриете антитела не само от клас IgM, но и от класове IgG, IgA. За да направите това, ямките на блюдата се сенсибилизират с афинитетно пречистени антитела от определен клас срещу човешки имуноглобулини. В този случай антителата от този клас се улавят от серума и откриването на трепонемни специфични антитела се извършва чрез комбинирането им с конюгат, който е комбинация от трепонемален антиген с ензим.

Използването на уловен ELISA намалява риска от фалшиво положителни реакции, медиирани от ревматоиден кръвен фактор, кръстосани реакции между имуноглобулини от класове M и G. При изследване на новородени, в този случай, фалшиво положителни резултати от тестове, свързани с откриване на IgM, насочени срещу майчините антитрепонемни IgG също са изключени.

Като ELISA варианти в чужбина са широко използвани ензимен имунен анализ (EIA)и система ICE Сифилис. В последния, смес от антитела срещу IgM и IgG, както и три рекомбинантни протеини T. pallidum, се адсорбират в ямките на плаката. Положителните резултати се тестват в същата тестова система в две повторения, за да се даде крайният резултат.

В Русия са разработени редица тестови системи за серодиагностика на сифилис чрез ELISA с местни реактиви. Тези системи имат висока специфичност и чувствителност.

В допълнение към горното има и други опции за ELISA, включително такива, които позволяват директно откриване на патогена в кръвта (директен ELISA), dot-ELISA с реакция върху нитроцелулозни ленти, ELISA с капилярна кръв, както и имуноблотинг, или Western Blot, с едновременно откриване на антитела към различни компоненти на патогена.

Модерна подобрена модификация на ELISA е имуноблотинг.

ICA (имунохемилуминесцентен анализ), ICL (имунохемилуминесценция)

С развитието на лабораторната диагностика в контекста на модернизацията на здравеопазването в Руската федерация автоматизацията на лабораторните изследвания навлезе в практиката на лабораториите, което дава възможност за стандартизиране на аналитичните етапи на изследването. Това подобрява качеството на диагностиката. С навлизането на автоматизацията започнаха да се прилагат нови високотехнологични методи с висока чувствителност и специфичност, като хемилуминесцентен имуноанализ (CLIA)

Хемилуминесценция - процесът на излъчване на фотони по време на прехода на електронно възбудени продукти от окислителни химична реакцияобратно към първоначалното си енергийно състояние. По време на реакцията на хемилуминесценция се освобождава значително количество енергия и квантовият добив на излъчената светлина е доста висок. От всички неизотопни методи хемилуминесценцията осигурява най-висока чувствителност. За имунометричните методи чувствителността на хемилуминесценцията е с порядъци по-висока от тази на радиоимуноанализа.

Методът на имунохемилуминесценцията (ICL) вече е намерил своето приложение в диагностиката на туморни маркери, автоимунни заболявания, диабет, сърдечни маркери, хормони ( щитовидната жлеза, надбъбречни жлези, женски и мъжки полови хормони), факелни инфекции, вирусен хепатит, вируси от херпесната група.

Въз основа на метода на имунохемилуминесценцията са разработени редица високочувствителни и специфични (98-100%) тестови системи за диагностика на сифилис, които се използват главно в чужбина.

В метода като антигени се използват рекомбинантни липопротеини, получени по методите на генното инженерство, които са пълни аналози на антигените на T.pallidum.

Въз основа на резултатите от клинично проучване, методът ICA е признат и препоръчан за използване в лабораторната диагностика на сифилис в Руската федерация като скрининг и потвърждаващ тест, ако лабораториите разполагат с подходящо оборудване. През 2012 г. ICA беше включен като скринингов и потвърдителен тест за диагностициране на сифилис в Клинични насокиотносно лечението на пациенти с полово предавани инфекции и урогенитални инфекции

По този начин използването на високотехнологична ICA, която навлезе в практиката както на световната, така и на местната лабораторна диагностика с въвеждането на автоматизация, осигурява следните предимства:

• изключване на влиянието на субективни фактори на аналитичния етап на изследването
• безопасност на персонала при извършване на изследвания на потенциално заразен биологичен материал
• увеличаване на скоростта на получаване на резултати от пациента
• стандартизация на изследванията и контрол на качеството на изследванията
• предоставяне на надеждни надеждни резултати на пациентите
• висококачествени клинични лабораторни изследвания.

По отношение на чувствителността методът ICA е сравним с метода на радиоимуноанализа, а по отношение на лекота на изпълнение, безопасност за персонала и много други параметри го превъзхожда.

Методът ICA, който има висока чувствителност и специфичност (98–100%), дава възможност да се определи количествено нивото на антителата срещу причинителя на сифилис и може да се използва за потвърждаване на сифилитична инфекция и скрининг. Ограничения за употреба: не може да се използва за наблюдение на ефективността на терапията, може да даде фалшив положителен резултат.

Имунохроматография (ICH).

Сравнително нови за използване в Руската федерация са методите за откриване на трепонема-специфични антитела, базирани на методите на имунохроматография (ICH). Както при метода ICA, като антигени се използват рекомбинантни липопротеини, получени чрез методи на генно инженерство (например: антигени Tp15, Tp17, Tp47) и биосинтетичният пептид TmpA. Изброените антигени се използват и в различни комбинации като част от имуносорбенти в ELISA и имуноблотинг.

Методът ICG ви позволява бързо да определите съдържанието на трепонема-специфични антитела към причинителя на сифилис в проби от серум и цяла кръв без използването на специално лабораторно оборудване и се използва при предоставянето на първична здравна помощ, включително епидемиологични показания.

Ограничения за употреба: не може да се използва за наблюдение на ефективността на терапията, може да даде фалшив положителен резултат.

PBT (прости бързи тестове до леглото)

Сравнително наскоро в серодиагностиката на сифилис започна да се развива посока за разработване на така наречените прости бързи тестове (PBT) или тестове на леглото на пациента (Point-of-care - ROC). Обикновените бързи тестове до леглото или имунохроматографските тестове позволяват бързо да се определи съдържанието на трепонема-специфични антитела срещу причинителя на сифилис в проби от серум и цяла кръв без използването на специално лабораторно оборудване и да се използват в първичната здравна помощ, включително епидемиологични показания. Ограничения за употреба: не може да се използва за наблюдение на ефективността на терапията, може да даде фалшив положителен резултат.

Тези тестове се основават на имунохроматографско откриване на антитела срещу трепонемни антигени на бледа трепонема и се извършват върху ленти; може да се използва като цяла кръви серум (Herring A., Ballard R. et al, 2006). Форматът на тестовете ви позволява да провеждате изследвания при липса на специално оборудване и без използване на електричество. Въпреки това, поради относително ниската чувствителност и специфичност, тези тестове все още не са намерили широко приложение в практиката.

Имуноблотинг (Western Bloting)

През последните години се появиха методи за изследване, насочени към откриване и анализ на съдържанието на антитела. за всеки антигенбледа трепонема отделно. Един такъв метод е методът на имунно блотиране (или блотиране, имуноблотинг, Western blotting), който се използва за определяне на IgG или IgM антитела към бледа трепонема. Методът на имуноблотинг е модификация на ензимен имуноанализ - вариант на ELISA.

Имуноблотингът е един от най съвременни методисеродиагностика на сифилис и се използва активно в чужбина. Получава името си („Western blotting“) като хумористичен отговор на имената на техники за откриване на ДНК („Southern blotting“) и РНК („Northern blotting“).

1. История на метода

Имуноблотинг (Western blot) се използва за определяне на IgG или IgM антитела към антигени на бледа трепонема (Herremans M. et al., 2007).

2. Класически имуноблот

Класически имуноблот(Western Blot анализ) съчетава ензимен имуноанализ и използването на електрофоретичен метод. Протеиновите антигени на причинителя на сифилис се отделят предварително чрез електрофореза и се пренасят върху носител - нитроцелулозна мембрана (лента). Този трансфер се нарича блотиране. След това този носител с разделени точки (петна) се третира с тестовия серум и антитела срещу IgG или IgM, белязани с ензими или радиоактивни вещества. Методът включва използването на естествени или рекомбинантни трепонемни протеини.

електрофорезае разделянето на заредени съединения въз основа на тяхната подвижност в електрофоретично поле. Когато в някаква среда се приложи потенциална разлика, положително заредените молекули се движат към отрицателно зареден електрод, а отрицателно заредените молекули се движат към положителен електрод.

Повечето глобуларни протеини са сглобени по такъв начин, че повечето от заредените групи, а именно хидрофилните, са разположени на повърхността на протеина, докато незаредените, хидрофобни остатъци са потопени вътре в глобулата. В електрическо поле, в съответствие със своя заряд, протеините мигрират към противоположно зареден електрод.

Електрофоретичното разделяне на протеини се извършва в синтетична гелова среда на базата на полиакриламид. За да се разделят протеините според тяхното молекулно тегло, преди електрофореза, протеиновата смес се инкубира предварително в присъствието на натриев додецилсулфат (SDS).

Подробни изследвания на чуждестранни учени Weber и Osborn (1969) показват, че след такава обработка единственият фактор, който може да повлияе на мобилността на протеините в полиакриламиден гел (PAAG), е размерът на протеина или по-скоро неговото молекулно тегло. Това направи възможно прилагането на метода на електрофореза в SDS-PAGE в присъствието на SDS за сравнително точно определяне на молекулното тегло на протеини и пептиди. В чуждестранната литература този метод се нарича SDS-PAGE (натриев додецилсулфат-полиакриламиден гел електрофореза).

Профил на реактивност при класически WB тест с естествени антигени (метод на електрофореза в полиакриламиден гел с натриев додецилсулфат). (1) - контролен положителен резултат, (2) - контролен отрицателен резултат, (3-6) - клинични проби.

При тестове за сифилис с помощта на този метод, предварително почистени и унищожени до съставни компонентибледа трепонема се подлага на електрофореза в полиакриламиден или агарозен гел. В същото време антигените, включени в състава му, се разделят по молекулно тегло.

След това, чрез вертикална електрофореза, антигените се прехвърлят върху лента от нитроцелулоза, която вече съдържа невидим спектър от антигенни ивици, характерни за бледа трепонема.

По време на анализа изследваният материал (серум, кръвна плазма на пациента и др.) се нанася върху нитроцелулозна лента (лента). Ако в пробата има специфични антитела, то в процеса на инкубация те се свързват силно с антигенните ленти, които им съответстват (комплементарни) и образуват комплекс „антиген-антитяло”.

След отстраняването на несвързаните имуноглобулини по време на измиването на лентата, следва инкубиране с конюгат - ензимно маркирани антитела срещу човешки имуноглобулини (антитела срещу човешки IgG или IgM), при което антителата, маркирани с ензима, се прикрепват към съществуващия антиген-антитяло комплекси върху повърхността на мембраната.

След отстраняване на несвързания конюгат по време на инкубацията с разтвора на субстрата, ензимът взаимодейства със субстрата, което води до цветна реакция - оцветяване на мембранните участъци (под формата на ленти), където се намират отделни антигени на бледа трепонема, антитела към които са били в тестовия серум. Интензитетът на оцветяване зависи от количеството на свързаните антитела от серума. Резултатът от реакцията се оценява визуално.

Наличието на ивици в определени области на нитроцелулозната плоча потвърждава наличието в изследвания серум на антитела срещу строго определени антигени на бледа трепонема.

Имунодетерминантите 15, 5, 17, 44,5, 47 kD, определени с помощта на този метод, имат диагностично значение при сифилис. Ig G имуноблотингът е подобен по чувствителност и специфичност на RIF с абсорбция (RIF abs). Ig M-имуноблотингът може да служи като диагностичен тест за вроден сифилис.

3. Имуноблот във формат на линеен имуноанализ

Линеен имунологичен анализ(линеен имуноанализ, LIA) ви позволява едновременно да определяте антитела срещу антигени на бледа трепонема в човешки серум или плазма. Антигените се прилагат предварително към тест ленти (ленти), които се доставят като част от търговски диагностични комплекти.

Лентите са изработени от нитроцелулозна мембрана, полиамидна мембрана с пластмасова подложка или найлонова мембрана с пластмасова подложка. По време на производството няколко отделни антигена се поставят върху тест лентата като отделни антигенни линии. В допълнение към тези антигени на сифилис, към всяка лента се прилагат още четири контролни линии: стрептавидин и контроли (3+, 1+ и ± линия на срязване).

За лентите се използват изкуствени антигени, получени чрез генно инженерство - рекомбинантни протеини или синтетични полипептидни конструкции. Това са аналози на повърхностните антигени на бледа трепонема - TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA с молекулно тегло 15, 17, 47 kDa и 44.5 (TmpA), където kDa=килоДалтони. С тяхна помощ се определят серумни антитела към различни имунодоминантни компоненти на патогена.

Инкубация тестова пробапреминава в кювета, където се поставя и индикаторната лента. Антителата срещу T. pallidum се определят чрез свързване с антигени, отпечатани върху тест лентите. Ако в пробата има T. pallidum-специфични антитела, те образуват връзки с отделни антигенни линии. Когато антителата, съдържащи се в тестовия серум, взаимодействат с дискретни антигени на T. pallidum, поставени върху тестовата лента, се образува комплекс антиген-антитяло под формата на визуално откриваеми цветни ленти.

Когато се вземат предвид резултатите от имуноблотинга, реактивността на серума към всеки от антигените се оценява отделно. Общ положителен отговор се дава, когато се получи резултат едновременно с два или три от представените антигени.

Изследователските процедури се извършват ръчно или на специален анализатор, като резултатите се интерпретират с помощта на специализиран компютърна програмаза инфекциозни заболявания.

Благодарение на високата степен на пречистване на рекомбинантните антигени и едновременното откриване на антитела към най-имуногенните детерминанти на причинителя на сифилис, методът има висока чувствителност и специфичност.

4. Отчитане на резултатите

За отчитане на интензитета на оцветяване на антигенни ивици върху ленти са разработени фотометри, чиято работа се основава на отразяване на сигнала, което елиминира субективната оценка и дава потенциална възможност за автоматизация.

5. В какви периоди на заболяването е по-добре да се използва

Тестовете, използващи метода Western blot, могат да открият специфични антитела срещу антигените на Treponema pallidum в много ранен стадий на заболяването. Най-значими при диагностицирането на сифилис са антителата срещу антигени на бледа трепонема TpN15, TpN17, TmpA и TpN47. Тези антигени са мембранни протеини с молекулни тегла съответно 15, 17, 44,5 и 47 kDa.

Когато treponema pallidum се въведе в човешкото тяло, антисифилитичните антитела се появяват в този ред: първо се развива имунен отговор към антигени TpN17, след това към TpN47, след TpN15 и по-късно от всички TmpA. Когато се вземат предвид резултатите от теста, се оценява реактивността на серума към всеки от тях поотделно. Например, когато в линеен блот има реактивност само към TpN17 и TpN47 антигенна линия, това означава, че заболяването е в ранен стадий. Колкото повече антигенни линии стават реактивни, толкова по-нататък прогресира инфекцията. При лечението на сифилис моделът на реактивност в този тест се променя.

Определянето на IgM към протеини с молекулно тегло 15,17, 41, 47 kDa позволява да се идентифицират 29,2% от пациентите с вторичен сифилис, 12,5% с ранен латентен сифилис и 8,0% със серорезистентен. Търсенето на IgG към същите молекули се характеризира с чувствителност от 61,6% за серорезистентен и 100% за вторичен и ранен латентен сифилис.

6. Чувствителност и специфичност

Според литературните данни чувствителността и специфичността на теста са много високи - съответно 99,6-100% и 99,3-99,5%. При класическия метод това се постига чрез електрофоретично разделяне на протеини, глико- и липопротеини и максимална специфичност на откриване на имунни серуми или моноклонални антитела. При оптимални условия имуноблотингът може да открие антиген в количества под 1 ng в тестовия обем.

Чувствителността на линейния блот също е 99,6%, а специфичността е между 99,3% и 99,5%.

Според експерти имуноблотингът с рекомбинантни високоспецифични антигени е подобен по чувствителност и специфичност на RIF abs.

Според данни от чуждестранна литература и резултатите от проучване в TsNIKVI, методът на имуноблотинг има висока чувствителност (98,8-100%) и специфичност (97,1-100%) при диагностицирането на сифилис.

7. Обхват на метода

Имуноблотингът (иммуноблот) е високоспецифичен и силно чувствителен референтен метод. Високата чувствителност и специфичност позволява този метод да се счита за потвърждаващ тест за сифилис. Методът може да се използва за потвърждаване на диагнозата, както и ако други тестове за трепонема дадат съмнителни и противоречиви резултати. Western blotting може да потвърди диагнозата при пациенти с положителни или неопределени резултати от теста, включително тези, получени с помощта на TPHA или ELISA.

8. Източници и причини за сценични грешки, фалшиви положителни и фалшиви отрицателни резултати

Фалшивите положителни резултати са много редки. Фалшиво-отрицателните резултати също са доста редки и се наблюдават при пациенти с имунна недостатъчност - по-често при HIV-инфектирани хора и с ефекта на диагностичен "прозорец" поради забавяне на синтеза на антитела, както и грешки на етапа на стадиране.

Използването на съвременни тест системи налага точното спазване на всички изисквания както към материала, така и към изпълнението на реакцията. По принцип източникът на грешки е нарушение на реда и технологията на изследването (особено за класическия Western blot), неспазване на препоръките на производителите на тестови комплекти. . Грешки могат да бъдат направени и при вземането, доставката, съхранението на проби от кръвен серум, както и при извършването на тестове. В допълнение към повредените проби, други възможни причини включват използването на тестови комплекти с изтекъл срок на годност и грешки в анализа на резултатите от теста.

9. Характеристики, предимства и недостатъци

Уникалността на имуноблота се състои в неговата висока информативност и надеждност на резултатите.

Тестът не изисква високо пречистени антигени, референтни и контролни серуми. Идентифицирането на целта на антитялото се основава на молекулното тегло на протеина, с който реагират антителата от серума на пациента. В една реакция може да се открие свързването на антитела с няколко антигена, всеки от които може да бъде точно характеризиран. Поради това имуноблотингът има редица предимства пред другите методи за откриване на антитела, резултатите от които зависят от стандартизацията, чувствителността, качеството на субстрата, нестабилността или неразтворимостта на определени антигени.

Методът е лесно възпроизводим, сравнително лесен за изпълнение и интерпретиране на резултатите, дава възможност да се определи спектърът на антителата към няколко антигена на T. pallidum наведнъж и да се оцени приносът на антитела с различна специфичност към общата реакция.

Използването на високо пречистени рекомбинантни и пептидни антигени минимизира неспецифичната реактивност на серумите. Използването на метода позволява да се избегнат трудоемки и субективни методи, които са опасни за изследователя (трансплантация на щамове на G. pallidum, работа с патогенен T. pallidum при настройка на реакция). Това обуславя предпочитанието на метода на имуноблотинг пред други трепонемни тестове (RIF и особено RIBT) за диагностика на сифилис.

10. Модификации на метода

Има няколко търговски системи за тестване, базирани на този метод. Някои от тях са във формат уестърн блот, се състоят от ленти, върху които са пренесени протеиновите компоненти на T. pallidum, предварително разделени чрез електрофореза в полиакриламиден гел.

Други са във формата линеен блот, се състоят от ленти, върху които са адсорбирани рекомбинантни и синтетични полипептиди под формата на дискретни линии - аналози на повърхностни антигени на T. pallidum, TpN15, TpN17, TpN47 и TmpA.

Резултатите от Western blot са по-трудни за тълкуване, тъй като лентите показват голямо разнообразие от антитела, много от които са групово специфични. За разлика от това, интерпретацията на резултатите от линейния блот е проста; в допълнение, допълнителните контролни линии, отпечатани върху лентата, позволяват полуколичествена оценка на нивото на антитела към четирите антигена на T. pallidum.

xMAP технология

hMAR - модерна технология, което позволява извършването на мултипараметрични изследвания чрез едновременно откриване на множество аналити в една биологична проба. Като твърда фаза се използват оцветени микросфери, покрити с реагенти за улавяне (олигонуклеотиди, антитела, антигени).

Тестовата проба се добавя към разтвора, съдържащ микросферите. Аналитите, открити в пробата, се свързват към съответната микросфера, след което към разтвора се добавя детектиращ агент (откриващи антитела, флуоресцентен етикет). За откриване на аналита, който трябва да се определи, се използва система от два лазера, която позволява както качествена оценка на наличието на аналита в проба (за това се използва червен лазер, който класифицира микросферите по цвят), така и количествена оценка на съдържанието на аналита в проба (за това се използва зелен лазер).

Серологичните кръвни изследвания са изключително важни. В момента се използва комплекс от серологични реакции - обикновено те поставят класическата реакция на Васерман и две седиментни реакции. От седиментните реакции по-често се използват реакциите на Кан, Закс-Витебски и цитохолните.

Резултатите от серологичните изследвания се обозначават с плюсове, както следва: + + + + силно положителни, + + + положителни, + + и + слабо положителни; отрицателна реакция се обозначава със знак минус (-).

В допълнение към посочения комплекс от серологични реакции, през последните години реакцията на имобилизация на бледи трепонеми (тест на Нелсън-Майер), която се провежда със специфичен антиген (суспензия на бледи трепонеми), стана широко призната. Тази реакция е по-специфична от споменатия комплекс от реакции, които се провеждат с неспецифични антигени. Тестът на Nelson-Meyer е от особена стойност, когато се взема решение за спецификата на положителна реакция на Васерман и седиментни реакции при лица, които нямат симптоми на сифилис.

Серологични реакции в различни периоди на сифилис. Диагностичната стойност на серологичните реакции в различни периоди на сифилис не е еднаква. В първичния период - в рамките на 2-3 седмици след началото на първичния сифилом - серологичните реакции обикновено са отрицателни; започвайки от 3-4-та седмица, те стават положителни при някои пациенти. С наближаването на вторичния период на заболяването процентът на положителните серологични реакции се увеличава и докато се появят вторичните симптоми на сифилис, те стават положителни при почти 100% от пациентите.

В новите вторични и рецидивиращи периоди на заболяването серологичните реакции в кръвта остават положителни при почти 100% от пациентите.

В третичния период на сифилис с активни прояви на заболяването, серологичните реакции често, при около 15% от пациентите, могат да бъдат отрицателни, а при липса на активни прояви на заболяването броят негативни реакцииможе да достигне 30-40%.

Серологичните реакции като критерий за успешно лечение на сифилис. Специфичното лечение на сифилис трябва да се извършва под контрола на серологичните реакции. Обикновено при пациенти с първичен серопозитивен и вторичен пресен период серологичните реакции стават отрицателни след 1-2 месеца рационално лечение на сифилис; във вторичния рецидивиращ период те могат да станат отрицателни по едно и също време или малко по-късно. Ако в рамките на посочените срокове серологичните реакции не станат отрицателни, това показва липса на ефективност на лечението. В такива случаи е необходимо да се повиши ефективността на терапията, но не чрез увеличаване на дозировката на лекарствата, а чрез промяна на метода на лечение и добавяне на неспецифични терапевтични методи.

Силно положителни серологични реакции при липса на клинични симптоми могат да се считат за симптом на сифилис, при условие че остават силно положителни при повторно изследване и че тестът е извършен в квалифицирана серологична лаборатория.

Слабо положителни серологични реакции при липса на клинични симптоми и други находки не могат да подкрепят диагнозата сифилис; такива резултати трябва да се вземат предвид само в случаите, когато пациентът е имал сифилис в миналото и е бил подложен на подходящо лечение. Слабо положителните серологични реакции също могат да бъдат важни, ако пациентът има заболяване с неизвестна етиология. В тези случаи резултатите от серологичните реакции трябва да бъдат оценени, като се вземат предвид други анамнестични, клинични и лабораторни данни.

Неспецифични серологични реакцииможе да се наблюдава при много заболявания. Така че рязко положителен резултат често се получава при проказа и рецидивираща треска. При малария, туберкулоза, бруцелоза и много други инфекциозни заболявания, както и при пациенти със злокачествени тумори резултатите обикновено са слабо положителни или положителни (+ + +) и рядко рязко положителни (+ + + +).

Употребата на алкохолни напитки или мазни храни преди изследването може да предизвика неспецифична слабо положителна реакция. Кръвта за серологично изследване трябва да се взема на празен стомах.

При липса на серологична лаборатория се препоръчва кръвта за изследване да се изпраща по пощата в плик под формата на „суха капка“.

За да се получи суха капка, 5 ml кръв от кубиталната вена се събират в епруветка. Епруветката с кръв се оставя за 2 часа на стайна температура. Полученият кръвен съсирек се отделя от стените на епруветката с калцинирана и охладена тел, след което кръвта се поставя на хладно място до следващата сутрин. На следващия ден се събират 0,75 ml серум с градуирана пипета, която се нанася върху восъчна хартия или лента целофан. Серум върху хартия или целофан се оставя до следващия ден на стайна температура, като се предпазва от прах и мухи. След това восъчна хартия или целофан с изсушен серум се навива под формата на фармацевтичен прах, поставя се в плик и заедно с придружителна бележка се изпраща по пощата до най-близката серологична лаборатория.

Трябва да се отбележи, че методът на серологичните реакции с помощта на "суха капка" кръв е по-малко надежден от обичайния.

Серологична диагностика на сифилис

Диагнозата на сифилис се основава на клинични и лабораторни данни. Диагнозата сифилис се поставя само след лабораторно потвърждение, т.е. откриване на бледа трепонема в изхвърлянето на твърд шанкър, ерозивни папули при първичен и вторичен сифилис и данни от серологично изследване. Серологичните реакции са изключително ценен метод не само за потвърждаване на диагнозата сифилис, но и за проследяване на динамиката на протичането му под влияние на лечението и определяне на излекуването на заболяването.

Стандартните компоненти на комплекса от серологични реакции (CSR) за установяване на сифилитична инфекция в момента се допълват от трепонемни реакции: RIBT (реакция на имобилизиране на бледа трепонема), RIF (реакция на имунофлуоресценция). Реакцията на Васерман (RW, PB) се основава на феномена на фиксиране на комплемента. За формулирането му се използва кардиолипинов антиген, който е холестеролизиран алкохолен екстракт от мускулите на говеждо сърце и има сходни антигенни свойства с бледа трепонема.

Реакция на Васерман.Комплементът се свързва от комплекс (липоиден антиген и реагин на тестовия серум). За да се посочи образуваният комплекс, се използва хемолитична система (овчи еритроцити и хемолитичен серум).

В допълнение към реакцията на фиксиране на комплемента с кардиолипин и трепонемни антигени, CSR групата включва реакция върху стъкло (експресен метод). Тежестта на хемолизата в RV се обозначава с плюсове:

рязко положителен - 4 +; положителен - 3 +; слабо положителен - 2 + или 1 +; отрицателен - -.

Настройката на реакцията според количествен метод, т.е. с различни разреждания на серум (1:10; 1:20 и т.н. до 1:320). Множеството стандартни серологични реакции се обяснява с антигенната мозаичност на бледите трепонеми и следователно в кръвния серум на пациентите се появява съответно множество антитела (свързващи комплемента, аглутинини, преципитини, имобилизини, антитела, които причиняват имунна флуоресценция и др.). . Във всеки стадий на сифилис някои антитела могат да преобладават и следователно реакциите с някои антигени може вече да са положителни, а с други все още отрицателни. В допълнение, относителната специфичност на стандартните серологични тестове го прави необходимо да се избягва диагностични грешкиизползвайте не една от тях, а комплекс от реакции. CSR стават положителни в края на 3-та или в рамките на 4-та седмица след появата на твърдия шанкър. Тези реакции са рязко положителни и при значително разреждане на серума при почти всички пациенти с вторично пресни (98-99%), вторично рецидивиращи (100%), третично активни (70-80%) и третично латентни (50-60%) сифилис. Въпреки това, CSR не е строго специфичен реакционен комплекс за сифилис. Те могат да бъдат положителни при болни от проказа, туберкулоза, бруцелоза, малария, лупус еритематозус, както и при пневмония, чернодробни заболявания, онкологични заболявания, след прием на алкохол, мазни храни, по време на бременност, особено през втората й половина, както и както през първите 2 седмици след раждане. С възрастта броят на неспецифичните фалшиво положителни резултати от КСО нараства.

За разумна диагноза на сифилис, заедно с данните от CSR, клиничните данни, резултатите от изследването на бледа трепонема в манифестните прояви на първичен и вторичен сифилис се вземат предвид данни от други серологични реакции - RIBT и RIF.

РЕБРАсе основава на феномена на обездвижване на бледа трепонема от антитела като имобилизини, присъстващи в кръвния серум на пациенти със сифилис. Като антиген за RIBT се използва суспензия от бледа трепонема, получена от тъканите на заешки сифилитичен орхит. Бледите трепонеми, след добавяне на кръвния серум на пациента към тях, спират да се движат, т.е. те са обездвижени. Резултатите от реакцията се оценяват като процент: положителен RIBT се открива по време на имобилизация от 51 до 100% бледа трепонема, слабо положителен - от 31 до 50%, съмнителен - от 21 до 30% и отрицателен - от 0 до 20% . Реакцията се поставя в условия на анаеробиоза. Имобилизините се появяват в кръвния серум на пациентите по-късно от другите антитела, така че RIBT става положителен по-късно от CSR и RIF. RIBT е най-специфичната от съществуващите реакции към сифилис. Основната му цел е да разпознава фалшиви положителни резултати при настройване на CSR. Това е особено важно за пациенти, при които сифилисът е латентен без външни прояви, но с увреждане на вътрешните органи или нервната система. RIBT е от особено значение при разпознаването на фалшиво положителни резултати от CSR при бременни жени. Трябва да се помни, че неспецифичните положителни резултати от RIBT са възможни и при пациенти със саркоидоза, лупус еритематозус, туберкулоза, чернодробна цироза и др. Въпреки това, при тези заболявания RIBT е слабо положителен (от 30 до 50%) и никога не достига 100% ). При лечение с антибиотици резултатите от RIBT стават отрицателни. Следователно изследванията с помощта на RIBT се провеждат само след 7 дни, ако са приложени водоразтворими антибиотици, и 25 дни след края на лечението с антибиотици с продължителна употреба.

РИФ- по-чувствителна реакция, така че е положителна още в първичния серонегативен период на сифилис при 80% от пациентите. По отношение на специфичността RIF отстъпва на RIBT, което не позволява замяната на RIBT с него, въпреки че техниката му е много по-проста. Реакцията се предлага в няколко модификации: RIF-10, RIF-200 и RIF-abs. (абсорбиран). RIF-10 е по-чувствителен, докато RIF-200 и RIF-abs. по-точно. Принципът на реакцията е, че специфичен антиген (treponema pallidum) се комбинира с кръвен серум на пациента (антитела) и антивидов флуоресцентен серум (заешки античовешки глобулинов серум, комбиниран с флуоресцеин, вещество, което свети под ултравиолетова светлина) . При положителна реакция във флуоресцентен микроскоп може да се види жълто-зелен блясък на бледи трепонеми, тъй като те са заобиколени от флуоресцентни антитела, които се придържат към тях. Степента на луминесценция се оценява с плюсове, както при CSR. положителна реакцияПосочени са 4+, 3+ и 2.+. Когато степента на луминесценция е 1 + и няма луминесценция, реакцията се счита за отрицателна. При вторичен сифилис RIF е положителен в почти 100% от случаите. Винаги е положителен при латентен сифилис (99-100%), а при третични форми и вроден сифилис е положителен в 95-100%.

Експресен метод (микрореакция върху стъкло).При тази реакция, както при CSR, се използва кардиолипинов антиген, една капка от който се смесва с 2-3 капки кръвен серум на изследваното лице в ямките на специална стъклена плака. Реакцията протича по механизма на утаяване. Общата продължителност на реакцията е 10-40 минути. Резултатът се оценява от количеството на валежите и размера на люспите; тежестта на реакцията се обозначава с плюсове: 4 +, 3 + и т.н., както и CSR. Микрореакцията върху стъкло е по-малко специфична за пациенти със сифилис, отколкото RV, но донякъде по-добра по чувствителност. Фалшивите положителни резултати при експресния метод са по-чести, отколкото при RV. Следователно този метод е разрешен за използване само като селективна реакция за масови изследвания на населението, клиничен преглед и преглед на пациенти в клинико-диагностичните лаборатории на соматични болници. Окончателната диагноза на сифилис въз основа на този метод е забранена. Само експресният метод не може да се използва при изследване на донори, бременни жени, както и за наблюдение след лечение на пациенти със сифилис.

Други методи могат да се използват за диагностициране на сифилис: ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) с реакция на микропреципитация (RPM) или реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA) с RMP (включително чужди аналози на RMP - RPR или VDRL).

При провеждане на клиничен и серологичен контрол след специфично лечение(за определяне на ефективността на терапията) е разрешено количествено изследване на RMP (проучване на реакционния титър в динамика).

ензимен имуноанализ (ELISA,Елиза).Принципът на реакцията е да се комбинира сифилитичният антиген, адсорбиран върху повърхността на твърдофазен носител, с антигена на тествания кръвен серум и да се открие специфичен комплекс антиген-антитяло, като се използва ензимно маркиран антивидов имунен серум. Чувствителността и специфичността на ELISA са подобни на RIF.

Реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA).Макромодификацията на тази реакция се нарича TRHA, микромодификацията е MHA-TR, а автоматизираната версия е AMHA-TR.

IgM серология.През последните десетилетия динамиката на образуването на антитела в тялото на пациенти със сифилис е широко проучена преди, по време и след края на лечението. Това се дължи на факта, че при пациенти, които са напълно лекувани за сифилис, положителните резултати от специфични серологични реакции към сифилис остават дълго време, което усложнява решението по въпроса за излекуване на пациентите, както и диагностицирането на ранни вродени сифилис. Също така е трудно да се направи разлика между рецидив и повторна инфекция. При изследване на образуването на антитела в тялото на пациенти със сифилис е установено, че специфичните IgM са първите, които се произвеждат след инфекцията, които се откриват още на втората седмица след инфекцията и достигат максимална концентрация в кръвта на 6-9 седмици. След 6 месеца след края на терапията при повечето пациенти в кръвта те не се определят. На четвъртата седмица след инфекцията тялото започва да произвежда специфични IgG. Този тип имуноглобулин в най-голямо количество се определя 1-2 години след инфекцията. Трябва да се отбележи, че специфичният IgM престава да се произвежда, когато антигенът изчезне от тялото, а секрецията на IgG продължава от клонове на клетки на паметта. В допълнение, големите IgM молекули не преминават през плацентата от майката към плода и следователно по присъствието им в детето те съдят за неговата инфекция с бледа трепонема. С оглед на факта, че концентрацията на специфични IgM в кръвта естествено намалява с времето, повишаването на титъра на тези антитела може да служи като допълнителен признак за наличие на рецидив на заболяването или повторна инфекция.

Серологична диагностика на сифилис

Диагнозата на сифилис се основава на клинични и лабораторни данни. Диагнозата сифилис се поставя само след лабораторно потвърждение, т.е. откриване на бледа трепонема в изхвърлянето на твърд шанкър, ерозивни папули при първичен и вторичен сифилис и данни от серологично изследване. Серологичните реакции са изключително ценен метод не само за потвърждаване на диагнозата сифилис, но и за проследяване на динамиката на протичането му под влияние на лечението и определяне на излекуването на заболяването.

Стандартните компоненти на комплекса от серологични реакции (CSR) за установяване на сифилитична инфекция в момента се допълват от трепонемни реакции: RIBT (реакция на имобилизиране на бледа трепонема), RIF (реакция на имунофлуоресценция). Реакцията на Васерман (RW, PB) се основава на феномена на фиксиране на комплемента. За формулирането му се използва кардиолипинов антиген, който е холестеролизиран алкохолен екстракт от мускулите на говеждо сърце и има сходни антигенни свойства с бледа трепонема.

Реакция на Васерман.Комплементът се свързва от комплекс (липоиден антиген и реагин на тестовия серум). За да се посочи образуваният комплекс, се използва хемолитична система (овчи еритроцити и хемолитичен серум).

В допълнение към реакцията на фиксиране на комплемента с кардиолипин и трепонемни антигени, CSR групата включва реакция върху стъкло (експресен метод). Тежестта на хемолизата в RV се обозначава с плюсове:

рязко положителен - 4 +; положителен - 3 +; слабо положителен - 2 + или 1 +; отрицателен - -.

Важно е и формулирането на реакцията чрез количествен метод, т.е. с различни разреждания на серума (1:10; 1:20 и т.н. до 1:320). Множеството стандартни серологични реакции се обяснява с антигенната мозаичност на бледите трепонеми и следователно в кръвния серум на пациентите се появява съответно множество антитела (свързващи комплемента, аглутинини, преципитини, имобилизини, антитела, които причиняват имунна флуоресценция и др.). . Във всеки стадий на сифилис някои антитела могат да преобладават и следователно реакциите с някои антигени може вече да са положителни, а с други все още отрицателни. В допълнение, относителната специфичност на стандартните серологични реакции налага използването не на една от тях, а на комплекс от реакции, за да се избегнат диагностични грешки. CSR стават положителни в края на 3-та или в рамките на 4-та седмица след появата на твърдия шанкър. Тези реакции са рязко положителни и при значително разреждане на серума при почти всички пациенти с вторично пресни (98-99%), вторично рецидивиращи (100%), третично активни (70-80%) и третично латентни (50-60%) сифилис. Въпреки това, CSR не е строго специфичен реакционен комплекс за сифилис. Те могат да бъдат положителни при болни от проказа, туберкулоза, бруцелоза, малария, лупус еритематозус, както и при пневмония, чернодробни заболявания, онкологични заболявания, след прием на алкохол, мазни храни, по време на бременност, особено през втората й половина, както и както през първите 2 седмици след раждане. С възрастта броят на неспецифичните фалшиво положителни резултати от КСО нараства.

За разумна диагноза на сифилис, заедно с данните от CSR, клиничните данни, резултатите от изследването на бледа трепонема в манифестните прояви на първичен и вторичен сифилис се вземат предвид данни от други серологични реакции - RIBT и RIF.

РЕБРАсе основава на феномена на обездвижване на бледа трепонема от антитела като имобилизини, присъстващи в кръвния серум на пациенти със сифилис. Като антиген за RIBT се използва суспензия от бледа трепонема, получена от тъканите на заешки сифилитичен орхит. Бледите трепонеми, след добавяне на кръвния серум на пациента към тях, спират да се движат, т.е. те са обездвижени. Резултатите от реакцията се оценяват като процент: положителен RIBT се открива по време на имобилизация от 51 до 100% бледа трепонема, слабо положителен - от 31 до 50%, съмнителен - от 21 до 30% и отрицателен - от 0 до 20% . Реакцията се поставя в условия на анаеробиоза. Имобилизините се появяват в кръвния серум на пациентите по-късно от другите антитела, така че RIBT става положителен по-късно от CSR и RIF. RIBT е най-специфичната от съществуващите реакции към сифилис. Основната му цел е да разпознава фалшиви положителни резултати при настройване на CSR. Това е особено важно за пациенти, при които сифилисът е латентен без външни прояви, но с увреждане на вътрешните органи или нервната система. RIBT е от особено значение при разпознаването на фалшиво положителни резултати от CSR при бременни жени. Трябва да се помни, че неспецифичните положителни резултати от RIBT са възможни и при пациенти със саркоидоза, лупус еритематозус, туберкулоза, чернодробна цироза и др. Въпреки това, при тези заболявания RIBT е слабо положителен (от 30 до 50%) и никога не достига 100% ). При лечение с антибиотици резултатите от RIBT стават отрицателни. Следователно изследванията с помощта на RIBT се провеждат само след 7 дни, ако са приложени водоразтворими антибиотици, и 25 дни след края на лечението с антибиотици с продължителна употреба.

РИФ- по-чувствителна реакция, така че е положителна още в първичния серонегативен период на сифилис при 80% от пациентите. По отношение на специфичността RIF отстъпва на RIBT, което не позволява замяната на RIBT с него, въпреки че техниката му е много по-проста. Реакцията се предлага в няколко модификации: RIF-10, RIF-200 и RIF-abs. (абсорбиран). RIF-10 е по-чувствителен, докато RIF-200 и RIF-abs. по-точно. Принципът на реакцията е, че специфичен антиген (treponema pallidum) се комбинира с кръвен серум на пациента (антитела) и антивидов флуоресцентен серум (заешки античовешки глобулинов серум, комбиниран с флуоресцеин, вещество, което свети под ултравиолетова светлина) . При положителна реакция във флуоресцентен микроскоп може да се види жълто-зелен блясък на бледи трепонеми, тъй като те са заобиколени от флуоресцентни антитела, които се придържат към тях. Степента на луминесценция се оценява с плюсове, както при CSR. Положителната реакция се отбелязва 4 +, 3 + и 2. +. Когато степента на луминесценция е 1 + и няма луминесценция, реакцията се счита за отрицателна. При вторичен сифилис RIF е положителен в почти 100% от случаите. Винаги е положителен при латентен сифилис (99-100%), а при третични форми и вроден сифилис е положителен в 95-100%.

Експресен метод (микрореакция върху стъкло).При тази реакция, както при CSR, се използва кардиолипинов антиген, една капка от който се смесва с 2-3 капки кръвен серум на изследваното лице в ямките на специална стъклена плака. Реакцията протича по механизма на утаяване. Общата продължителност на реакцията е 10-40 минути. Резултатът се оценява от количеството на валежите и размера на люспите; тежестта на реакцията се обозначава с плюсове: 4 +, 3 + и т.н., както и CSR. Микрореакцията върху стъкло е по-малко специфична за пациенти със сифилис, отколкото RV, но донякъде по-добра по чувствителност. Фалшивите положителни резултати при експресния метод са по-чести, отколкото при RV. Следователно този метод е разрешен за използване само като селективна реакция за масови изследвания на населението, клиничен преглед и преглед на пациенти в клинико-диагностичните лаборатории на соматични болници. Окончателната диагноза на сифилис въз основа на този метод е забранена. Само експресният метод не може да се използва при изследване на донори, бременни жени, както и за наблюдение след лечение на пациенти със сифилис.

Други методи могат да се използват за диагностициране на сифилис: ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA) с реакция на микропреципитация (RPM) или реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA) с RMP (включително чужди аналози на RMP - RPR или VDRL).

При провеждане на клиничен и серологичен контрол след специфично лечение (за определяне на ефективността на терапията) е разрешено количествено изследване на RMP (проучване на реакционния титър в динамика).

ензимен имуноанализ (ELISA,Елиза).Принципът на реакцията е да се комбинира сифилитичният антиген, адсорбиран върху повърхността на твърдофазен носител, с антигена на тествания кръвен серум и да се открие специфичен комплекс антиген-антитяло, като се използва ензимно маркиран антивидов имунен серум. Чувствителността и специфичността на ELISA са подобни на RIF.

Реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA).Макромодификацията на тази реакция се нарича TRHA, микромодификацията е MHA-TR, а автоматизираната версия е AMHA-TR.

IgM серология.През последните десетилетия динамиката на образуването на антитела в тялото на пациенти със сифилис е широко проучена преди, по време и след края на лечението. Това се дължи на факта, че при пациенти, които са напълно лекувани за сифилис, положителните резултати от специфични серологични реакции към сифилис остават дълго време, което усложнява решението по въпроса за излекуване на пациентите, както и диагностицирането на ранни вродени сифилис. Също така е трудно да се направи разлика между рецидив и повторна инфекция. При изследване на образуването на антитела в тялото на пациенти със сифилис е установено, че специфичните IgM са първите, които се произвеждат след инфекцията, които се откриват още на втората седмица след инфекцията и достигат максимална концентрация в кръвта на 6-9 седмици. След 6 месеца след края на терапията при повечето пациенти в кръвта те не се определят. На четвъртата седмица след инфекцията тялото започва да произвежда специфични IgG. Този тип имуноглобулин в най-голямо количество се определя 1-2 години след инфекцията. Трябва да се отбележи, че специфичният IgM престава да се произвежда, когато антигенът изчезне от тялото, а секрецията на IgG продължава от клонове на клетки на паметта. В допълнение, големите IgM молекули не преминават през плацентата от майката към плода и следователно по присъствието им в детето те съдят за неговата инфекция с бледа трепонема. С оглед на факта, че концентрацията на специфични IgM в кръвта естествено намалява с времето, повишаването на титъра на тези антитела може да служи като допълнителен признак за наличие на рецидив на заболяването или повторна инфекция.

Колкото по-рано и по-точно се открие сифилисът, толкова по-лесно лечениеи има по-голям шанс да премине гладко за пациента.

Целта на всички лабораторни изследвания е една и съща: еднозначно и бързо да се постави диагноза. Но нито един от съвременните високотехнологични тестове за сифилис не дава резултат еднозначно и със 100% точност. Старите методи се подобряват, измислят се нови, но досега в клиничната практика лекарите винаги трябва да използват комбинация от няколко различни теста за сифилис. Лекарите не могат да разчитат на резултатите от никого.

Има толкова много разновидности на анализи за сифилис, че е невъзможно да се разберат всички съкращения в движение:

За първи път е възможно да се идентифицира болестта с помощта на лабораторна реакция през 1906 г. Това е заслуга на немския учен Август Васерман, на когото е кръстена реакцията. Оттогава е минало много време, методът е остарял и не се използва на практика, но диагнозата сифилис все още е силно свързана с анализа на RV.

Човек може да се наложи да бъде изследван за сифилис по различни причини.
Първата причина, за която се сещаме, е при съмнение за инфекция, а на практика тя не е най-честата. В този случай е важно да се разбере, че инфекцията има инкубационен период (от момента на заразяване до образуването на твърд шанкър) и първичен серонегативен период (твърд шанкър през първите три седмици) - по това време, тестовете ще са отрицателни. Ето защо, ако страховете са сериозни, тестовете се повтарят след няколко седмици.

Хората, които не подозират никаква инфекция, трябва по-често да се изследват за сифилис. Обикновено това се случва при кандидатстване за работа (анализът е включен в медицинската книжка) и по време на периодични медицински прегледи (медицински прегледи). Също така е задължително да се даде кръв за сифилис:

• донори
• жени в първите седмици от бременността - два пъти, при регистрация в предродилната клиника и в родилния дом няколко седмици преди раждането,
• пациенти преди операция или други медицински инвазивни интервенции ( FGDS, бронхоскопия и др.).

В края на статията отговорихме на най-честите въпроси на хората, които са изправени пред диагнозата сифилис. Няма време да четете подробности за методите на изследване -.

Всички видове изследвания за сифилис

Има 2 основни групи методи за изследване на сифилис: директни и индиректни.

• директен метод- това е изследване, при което самата инфекция се търси в биоматериала - отделни представители на патогена като цяло или техни части - ДНК.
• Косвени методи (серологични тестове) е тест, при който се опитват да открият антитела срещу причинителя на сифилис в кръвта. Логиката е следната: ако се открие имунен отговор, характерен за някаква инфекция, значи има самата инфекция, която е причинила този имунен отговор.

директни методи,- най-надеждният: ако бактерията е "хваната на местопрестъплението", тогава наличието на болестта се счита за доказано. Но treponema pallidum е трудно да се хване и отрицателните резултати от теста не изключват наличието на инфекция. Има смисъл тези изследвания да се провеждат само при наличие на обриви и само в ранна форма на сифилис - до две години на заболяването. Тези. чрез тези методи е невъзможно да се определи латентен сифилис или неговите късни форми, поради което в клиничната практика те се използват рядко и само за потвърждаване на други тестове.

Директните методи включват: Микроскопия в тъмно поле, Инфекция на лабораторни животни, PCR .

1. Микроскопия в тъмно поле ( TPM) - изследване на бледа трепонема под микроскоп. Материалът се взема от твърд шанкър или обрив. Методът е евтин и бърз и открива сифилис в самото начало на първичния период, когато кръвните изследвания за сифилис са още отрицателни. Но бактериите, които са в малки количества в обривите, лесно могат да не попаднат в остъргването. Плюс това, бледите трепонеми могат лесно да бъдат объркани с други обитатели. устната кухина, анален канал и др.
2. Заразяването на лабораторни животни е много скъп и трудоемък метод, използван само в изследователската практика.
3. PCR- сравнително нов метод, който те търсят ДНКинфекции. Всяка тъкан или течност, която може да съдържа бледи трепонеми, е подходяща за изследване: кръв, урина, секрети от простатата, еякулат, изстъргвания от кожни обриви, от пикочно-половия тракт, орофаринкса или конюнктивата. Анализът е много чувствителен и специфичен. Но сложно и скъпо. Задайте го в случай на съмнителни резултати от други тестове.

Непреките методи, те също са серологични реакции, са в основата на лабораторното изследване на сифилис. Именно тези методи се използват за масов скрининг на населението, за потвърждаване на диагнозата и контрол на лечението. Косвените методи за изследване са разделени на нетрепонемни и трепонемни тестове.

Нетрепонемните тестове са значително по-евтини. За тяхното прилагане не се използва самият антигенен протеин, специфичен за сифилитична трепонема, а неговият заместител, кардиолипиновият антиген. Тези тестове са силно чувствителни, но слабо специфични. Това означава, че такива тестове ще идентифицират всеки, който има сифилис и повече: здравите хора също могат да имат фалшиво положителни резултати. Използват се за масов скрининг на населението, но при положителен резултат трябва да се потвърдят с по-специфични изследвания – трепонемни. Все още нетрепонемните тестове са много полезни при оценката на ефективността на лечението: кога ефективно лечениеобемът на антителата в кръвта намалява и техният титър съответно намалява (ще говорим за тези титри малко по-подробно). Най-надеждният резултат от тези нетрепонемни тестове ще бъде по време на ранен сифилис, особено във вторичния период.

Нетрепонемните тестове включват:

• Реакция на Васерман(, тя RV, или RSK) вече е остарял и вече не се използва, но поради силната си връзка с болестта всеки тест, използван за скрининг на населението за сифилис, често се нарича такъв. Ако видите в посоката на лекаря запис „анализ RV”- не се смущавайте, в лабораторията всеки със сигурност ще разбере правилно и ще направи RPR.
• Реакция на микроутаяване (Г-Н, тя е RMP) е прост и евтин тест за сифилис. Използван преди това като основен нетрепонемален тест, но сега отстъпи място на по-удобен и обективен RPR-тест.
• Бърз тест PlasmaRegine (RPR-test) е бърз, лесен и удобен тест за масово изследване на населението и контрол на лечението. Това е основният нетрепонемален тест, използван в Русия и в чужбина.
• ДОВЕРИЕ е по-модерна версия RPR-тест. По друг начин се нарича RPR-тест с толудиново червено. В Русия се използва само в малък брой лаборатории.
• VDRL - този анализ е подобен по отношение на надеждността на резултатите RMP, и също е по-нисък RPR. В Русия не е намерил широко приложение.
• USR-тест(или негова модификация - RST-test) - по-напреднал VDRLтест обаче в Русия също се използва изключително рядко.

Трепонемни тестовеизвършва се с трепонемни антигени. Те са по-специфични и следователно по-внимателно отсяват здравите от болните. Но тяхната чувствителност е по-ниска и такива тестове могат да пропуснат болен човек, особено в ранен стадий на заболяването. Друга особеност е, че трепонемните тестове се появяват по-късно от нетрепонемните, само три до четири седмици след появата на твърд шанкър. Следователно те не могат да се използват като скрининг. Основната цел на трепонемните тестове е да потвърдят или опровергаят резултатите от нетрепонемните тестове.

Все пак резултатите от трепонемните тестове ще останат положителни няколко години след успешно лечение. Поради това те не се използват за наблюдение на ефективността на лечението и също така не разчитат на резултатите от тези тестове, освен ако не са потвърдени от нетрепонемни тестове.

Трепонемните тестове включват:

• RPGA (или неговата по-модерна модификация - TRRA, TRNA) е реакция на пасивна хемаглутинация. Основната трепонемна реакция, която в момента се използва в чужбина и в Русия. Прост и удобен тест за откриване на антитела срещу сифилис в организма.
• ELISA (анти-Tr. pallidum IgG/IgM) - ензимно-свързан имуносорбентен анализ, известен още като ELISAот английското съкращение. Този тест може да се извърши както с кардиолипинов антиген, така и с трепонема. Може да се използва както за скрининг, така и за потвърждение. По отношение на надеждността не е по-нисък RPGAи също така е препоръчителният тест за трепонема за потвърждаване на диагнозата сифилис.
• Имуноблотинг- това е по-скъпо подобрение ELISA-тест. Използва се само в случай на съмнение.
• РИФ - реакция на имунофлуоресценция. Технически труден и скъп анализ. Той е вторичен, използва се за потвърждаване на диагнозата в съмнителни случаи.
• RIBT (RIT) - реакция на обездвижване (обездвижване) на бледи трепонеми. Тази реакция е сложна, продължителна в изпълнение и труден за тълкуване на резултата. На някои места все още се използва, но постепенно избледнява на заден план, отстъпвайки място на RPGAИ ELISA.

Дешифриране на серологични тестове за сифилис:

Алгоритъм за диагностика на "сифилис"

Всяка диагноза се състои от три основни стълба на медицината: анамнеза (медицинска история), клинични прояви (симптоми) и лабораторни изследвания. Ако лекарят подозира сифилис въз основа на историята на пациента и външния преглед на тялото му, той предписва набор от тестове (или набор от серологични реакции - DAC). Задължително включва 1 нетрепонемно изследване ( RMPили RPR) и 1 тест за трепонема ( RPGAили ELISA). Ако резултатите от тези тестове се различават, се извършва допълнителен алтернативен трепонемален тест ( ELISAили RPGA). Това е най проста схема. При съмнителни показатели, в зависимост от ситуацията, лекарят предписва други диагностични методи.

Бърз тест за сифилис или как да определите сифилис у дома

Има тест за сифилис, който можете да направите сами. Може да се закупи свободно в аптеката, средна цена- 200-300 рубли. Принципът на определяне на заболяването е подобен на нетрепонемния RPR. Производителите твърдят, че имат висока точност, но в действителност тя е ниска, не повече от 70%.

Алгоритъмът на действията по време на теста прилича на тест за бременност, вместо урина се използва само кръв. На индикатора се нанася капка кръв и резултатът се появява след 10-15 минути. 1 лента - тестът е отрицателен, 2 ленти - тестът е положителен.
Не препоръчваме този диагностичен метод. Ако имате някакви съмнения за сифилис, по-добре е незабавно да се консултирате с лекар или поне с независима лаборатория. Ще бъде малко по-скъпо и по-дълго, но много по-точно.

Дешифриране на резултатите за сифилис: плюсове, кръстове и кредити.

По-нататъшната тактика на лекаря зависи от резултатите от определени тестове. Резултатите от скрининговите анализи се изразяват или с кръстове (плюсове), или в отделен запис:

4 или 3 кръста - положителен резултат, необходимо е допълнително изследване за сифилис с помощта на други диагностични методи.
2 или 1 кръст - съмнителен резултат, препоръчително е резултатът да се повтори след 10 дни.
0 кръста - отрицателен резултат, сифилис не е открит.

В случай на положителна и съмнителна реакция, допълнителни изследваниявзета кръв: разреждане от 1:2 до 1:1024 и добавяне на капка кардиолипинов антиген към всеки кръвен титър. Резултатът записва максималния титър, при който е настъпила реакцията: колкото по-голямо е разреждането, толкова повече стойносттитър, толкова по-висок е броят на бледа трепонема в кръвта. Но основната задача при определяне на титъра не е да се изчисли степента на замърсяване на кръвта, а да се контролира успехът на лечението: лечението се счита за ефективно, ако титърът спадне 4 пъти за 4 месеца. До края на лечението резултатите от нетрепонемните тестове трябва да станат отрицателни.

Най-висока чувствителност на скрининговите тестове се наблюдава във вторичния период на сифилис (100%), малко по-малко в първичния (86%) и още по-малко в третичния (73%).

Важни нюанси при диагностицирането на сифилис:

1. При провеждане на тестове са възможни фалшиви положителни резултати. Те са особено чести по време на прожекции. Ако никога не сте имали сифилис и тестовете са положителни, не трябва да се паникьосвате веднага, трябва да направите поне още един алтернативен анализ.
2. Има и фалшиви отрицателни резултати. Ако има подозрение за сифилис, тогава е по-добре да повторите анализа след няколко седмици.
3. Излекуваният сифилис остава положителен при трепонемни тестове няколко години или цял живот.

Най-честите въпроси относно тестовете за сифилис

Как да се изследвате безплатно за сифилис?

За да направите това, трябва да се свържете с клиниката по местоживеене и да посетите местния лекар, който ще даде направление за анализ. Изследването за сифилис е безплатно за всички жители RFпо полицата ЧИ.

Къде мога да се изследвам за сифилис анонимно?

Анонимни тестове могат да се вземат във всяка платена лаборатория, клиниките за грижа за кожата често предлагат тази услуга сами. Също така е възможно да се тества за сифилис у дома с помощта на бързи тестове, които се продават в аптеките. Трябва обаче да се помни, че такъв тест не дава точен резултат и ако подозирате сифилис, трябва да се консултирате с лекар.

Колко дни след полов акт мога да даря кръв за сифилис?

След 1-1,5 месеца. Ако е настъпила инфекция, тогава тестът за сифилис ще бъде положителен не по-рано от седем до десет дни след появата на твърд шанкър или 4-5 седмици след инфекцията. Този период може да е по-дълъг, така че отрицателни резултатианализът трябва да се повтори след 2 седмици.

Къде вземат кръв за сифилис?

Кръвта за сифилис се взема по-често от вена, но може да се вземе и от пръст. Зависи от вида на анализа.

Подготовка. Как да се изследваме за сифилис?

Преди да дарите кръв за сифилис, не можете да ядете четири часа - кръвта трябва да се дарява на празен стомах. Освен това, 12 часа преди анализа не можете да пиете алкохол. Това е важно, тъй като алкохолното увреждане на черния дроб може да причини фалшиво положителни тестове.

Колко време отнема средно един тест за сифилис?

Резултатите обикновено са налични на следващия ден. Бързите тестове отнемат не повече от 30 минути.

Какъв анализ се взема за сифилис и как се нарича?

И за скрининг, когато няма съмнение за заболяването RMP(реакция на микроутаяване), или RPR(бърз плазмен тест). Понякога такива скринингови тестове се наричат ​​реакция на Васерман.

Ако има реални подозрения или съмнения, те никога не се ограничават до един анализ. В същото време се извършва една от всяка група за скрининг ( RMPили RPR) и един от всяка по-специфична тестова група ( RPGAили ELISA), действат по-нататък в зависимост от резултатите и историята на пациента.

Може ли тестът за сифилис да е грешен?

Може би! Вероятността за грешка на различните методи зависи преди всичко от периода на заболяването и общото състояние на тялото.

Нетрепонемните тестове са най-чувствителни в разгара на заболяването - във вторичния период. Поради ниската си специфичност те често дават фалшиво положителни резултати. Това може да се случи поради висока температура, грип или друго инфекциозно заболяване, скорошна ваксинация, хронично заболяване и редица други причини.

Трепонемните тестове са по-чувствителни в късния период. Те също могат да дадат фалшиво положителни резултати, но само ако в тялото има патогенни бактерии, подобни на бледа трепонема, които причиняват други заболявания: невенерически трепонематози (рядко срещани в Русия) или лаймска болест (предава се чрез ухапване от кърлеж).

При всички диагностични методи са възможни фалшиво отрицателни резултати. Те зависят от имунния отговор на тялото: няма отговор - няма реакция към сифилис. Това е възможно при ХИВ-инфектирани хора, както и при имунокомпрометирани по други причини. Освен това има обратна реакция: свръхпроизводство на антитела, ефектът на „прозона“, при който има толкова много антитела, че не позволяват едно на друго да реагират с антигена. Резултатът е фалшиво отрицателен резултат.

Могат ли общите тестове да покажат сифилис?

Сифилисът не може да се определи нито чрез общ кръвен тест, нито чрез биохимичен. Общият тест на урината или обикновената вагинална цитонамазка също няма да го покажат. Всички изследвания върху сифилиса са тясно специализирани и всяко има свое име. За всеки друг анализ е невъзможно да се изчисли дали човек има сифилис или не. Но какво ще покажат другите тестове, ако човек има сифилис? Нека анализираме всеки от тях:

Пълна кръвна картина: показва основните кръвни клетки - еритроцити, левкоцити, тромбоцити. В края на първичния и в началото на вторичния период левкоцитите могат да се повишат при човек, както и да се увеличат СУЕе индикатор за възпаление. Това са много неспецифични показатели, които просто показват, че тялото се бори с бактериална инфекция. Останалата част от кръвния тест ще съответства на общото състояние на тялото.

Биохимичен кръвен тест: показва работата на черния дроб, бъбреците, сърцето, панкреаса и други органи. Ако сифилисът все още не е поразил тези органи и те работят правилно, кръвният тест ще бъде нормален.

Пълен анализ на урината: показва работата на бъбреците и ендокринната система, както и общо състояниеорганизъм. Ако няма остри или хронични заболявания на тези системи, анализът ще бъде нормален.

Вагинален секрет: установява дали има възпалителен или онкологичен процес, както и дисбактериоза. Невъзможно е да се постави сифилис върху такава намазка.