Допълнителни методи за анализ на кръвта определяне на хематокрита на ретикулоцитите. Как да броим ретикулоцитите. Причини за намаляване на броя на ретикулоцитите, лечение

… определянето на броя на ретикулоцитите е важен показател за функцията на костния мозък.

Ретикулоцити- това са млади форми на еритроцити, образувани от нормобласти след загуба на ядрото им (безядрени, незрели еритроцити), узряването на които настъпва в рамките на 24-48 часа след навлизане в периферната кръв от костния мозък и отразява регенеративната способност на костния мозък (т.е. активност на еритропоетичния костен мозък).

МОРФОЛОГИЯ И КЛИНИЧНО ЗНАЧЕНИЕ НА РЕТИКУЛОЦИТИТЕ

Ретикулоцитите обикновено са по-големи от зрелите еритроцити. Цитоплазмата на ретикулоцитите съдържа базофилна мрежа (ретикулум) под формата на малки зърна, отделни нишки, гломерули и др., Която е агрегирана рибозома и митохондрии.

Според степента на зрялост се разграничават 5 вида ретикулоцити:
(1) ретикулоцити, които имат ядро ​​(еритронормобласти) и тяхната грануларност е разположена под формата на плътно венче около ядрото;
(2) ретикулоцити, имащи гранулирано-мрежесто вещество под формата на топка или бучка;
(3) ретикулоцити, имащи грануларност под формата на гъста мрежа;
(4) ретикулоцити, имащи гранулирано-мрежесто вещество под формата на отделни нишки;
(5) ретикулоцити, съдържащи отделни гранули.

Помня: обикновено, според Г. А. Алексеев, почти 80% от ретикулоцитите принадлежат към групи IV - V.

Обикновено периферната кръв съдържа 0,2 - 1% ретикулоцити ("%" - съдържанието на ретикулоцити от общия брой еритроцити). Този индикатор отразява възможността за навлизане на ретикулоцити в периферната кръв и по-нататъшното им превръщане в зрели еритроцити (узряване), като вариант на нормата, вече в периферната кръв (в рамките на няколко часа). ( ! ) При нормална еритропоеза повечето червени кръвни клетки преминават през ретикулоцитния стадий в костния мозък.

Отбелязва се увеличение на техните ретикулоцити в периферната кръв (ретикулоцитоза).:
с хемолитична анемия (броят на ретикулоцитите може да достигне до 60% или повече (особено нараства по време на хемолитични кризи);
с остра загуба на кръв (3-5 дни след загубата на кръв настъпва ретикулоцитна криза), включително повишаване на ретикулоцитите, което позволява да се подозира латентно кървене (например при пациенти с пептична язва на стомашно-чревния тракт, коремен тиф) ;
с малария;
с полицитемия;
при лечение на желязодефицитна анемия с желязо (няколко дни (3-10) след началото на антианемичното лечение на пернициозна анемия);
с остра липса на кислород;
с туморни метастази в костния мозък.

Трябва да се помниче в случай на повишено разрушаване на еритроцитите, делът на ретикулоцитите може да надвиши 50% поради изкуствено увеличаване на броя на ретикулоцитите (както беше отбелязано по-рано, делът на ретикулоцитите се изчислява в% от всички еритроцити). В такива случаи за оценка на тежестта на анемията се използва "ретикуларен индекс", който се изчислява по формулата: (% ретикулоцити x хематокрит) / 45 x 1,85, където 45 е нормален хематокрит, 1,85 е броят на необходимите дни за навлизане на нови ретикулоцити в кръвта. Ако индекс< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, тогава има увеличение на образуването на червени кръвни клетки.

Истинска ретикулоцитоза: увеличаване на броя на ретикулоцитите в периферната кръв с едновременно увеличаване на броя на ретикулоцитите в костния мозък.

Фалшива ретикулоцитоза: липсата на повишен брой ретикулоцити в костния мозък с увеличаване на броя им в периферната кръв (което показва увеличаване на измиването на ретикулоцити от костния мозък в периферната кръв).

Факторът, водещ до повишаване на стойността на% съдържание на ретикулоцити, може да бъде приемането на следните лекарства: кортикотропин, антималарийни лекарства, антипиретици, фуразолидон (при малки деца), леводопа.

Помня: ретикулоцитоза, без съответна еритронормобластна реакция на костния мозък, се наблюдава, когато определени части от него са раздразнени от ракови метастази или възпалителни огнища.

Наблюдава се намаляване на броя или липса на ретикулоцити (ретикулоцитопения).:
с регенеративни апластични и хипопластични анемии;
с анемия, причинена от дефицит на желязо, витамин В12, фолиева киселина (микроцитарно-хипохромна и мегалобластна анемия);
с таласемия;
със сидеробластна анемия;
с ракови метастази в костите;
с лъчева болест и лъчева терапия;
при лечение с цитостатици;
с автоимунни заболявания на хемопоетичната система;
с бъбречно заболяване;
с алкохолизъм;
с рецидив на анемия на Адисън-Бирмер;
с микседем.

Фактори, изкривяващи резултата от лабораторно изследване на% съдържание на ретикулоцити:
грешен избор на антикоагулант или недостатъчно смесване на кръвта с антикоагулант;
продължително притискане на ръката с турникет;
приемане на сулфонамиди (възможни са както подценени, така и надценени резултати);
кръвопреливане малко преди изследването;
хемолиза на кръвна проба.

Показания за назначаване на анализ за ретикулоцити:
оценка на активността на еритропоезата при състояния, придружени от хемолиза или загуба на кръв;
оценка на способността на костния мозък да се регенерира след цитотоксична терапия и трансплантация на костен мозък;
оценка на възстановяването на синтеза на еритропоетин след бъбречна трансплантация;
допинг контрол при спортисти (прием на еритропоетин);
диагностика на неефективна хемопоеза или намалено производство на червени кръвни клетки;
диференциална диагноза на анемия;
откриване на нарушена регенеративна способност на костния мозък при дефицит на желязо, витамини B12, B6, фолат, мед и проследяване на подходяща терапия;
оценка на отговора към терапия с еритропоетин, еритросупресори.

МЕТОДИ ЗА ИЗЧИСЛЯВАНЕ НА БРОЯ НА РЕТИКУЛОЦИТИТЕ

(1) Преброяване на броя на ретикулоцитите в намазка след оцветяването им със специални багрила.

Този метод е най-използваният в практиката поради факта, че е прост, сравнително евтин и не изисква специално скъпо оборудване, поради което може да се използва във всяка клинико-диагностична лаборатория.

Принципът на метода се основава на откриването на гранулирана мрежеста субстанция на ретикулоцити по време на суправитално оцветяване с алкални багрила (наситен разтвор на брилянтно крезил синьо в абсолютен алкохол / разтвор на лазур I / разтвор на лазур II) с по-нататъшното им преброяване в кръвта намазка. Оцветяването на ретикулоцитите се извършва върху стъкло или в епруветка.

Преброяването се извършва с помощта на микроскоп: петна, приготвени по един от горните методи, се микроскопират с потапяща леща; в намазка, ретикулоцитите и еритроцитите са оцветени в жълтеникаво-зеленикаво, гранулираната нишковидна субстанция в ретикулоцитите е синя (когато е оцветена с лазурно II и брилянтно крезилово синьо) или синкаво-виолетово (когато е оцветена с лазурно I).

(2) Преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия.

Този метод е прост и отнема малко време, по-точен от конвенционалния метод, тъй като флуоресцентната микроскопия разкрива най-малките зърна от мрежесто-нишковидното вещество, но е възможно само с луминисцентен микроскоп и специални багрила и следователно е достъпен само за няколко лаборатории.

Принципът на преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия се основава на използването на способността на веществото на ретикулоцитите да флуоресцират след третиране на кръвта с акридиново оранжево. Кръвта се смесва с акридин оранжево в епруветка или миксер в съотношение 1 част кръв и 10 части багрило (сместа може да се съхранява не повече от 5 часа). Сместа се разбърква в продължение на 2 минути, капка от сместа се нанася върху предметно стъкло и се покрива с покривно стъкло. В този случай течността не трябва да излиза извън покривното стъкло.

Микроскопски с помощта на светлинен филтър ZhS-17. В препарата еритроцитите имат тъмнозелен контур и не флуоресцират, докато при ретикулоцитите грануларно-мрежестата субстанция свети ярко червено, което улеснява преброяването на ретикулоцитите. В кръв, стабилизирана с хепарин или натриев цитрат, не се наблюдава ретикулоцитна флуоресценция.

(3) Автоматично броене на ретикулоцити с хематологичен анализатор.

В съвременните хематологични анализатори технологията за преброяване на кръвните клетки се основава на кондуктометричния метод, предложен от H. Wallace и Joseph R. Culter през 1947 г. Принципът на метода е да преброи броя и да определи естеството на импулсите, които възникват, когато клетката преминава през отвор с малък диаметър (апертура), от двете страни на който има два изолирани един от друг електрода. Всяко преминаване на клетка през отвора е придружено от появата на електрически импулс, който се записва от електронен сензор. Разделянето на клетките по категории (еритроцити, левкоцити, тромбоцити, седимент) се извършва от устройството въз основа на анализа на амплитудата на получените импулси.За да се определи концентрацията на клетките, е достатъчно да се премине определен обем от проби през канала и пребройте броя на импулсите, които са генерирани.

Трябва да се отбележи, че в допълнение към класическия параметър на ретикулоцитите - относителното (%) съдържание на ретикулоцити (RET%, процент на ретикулоцити), определено с помощта на методи 1 и 2 на лабораторната диагностика, поради появата на високотехнологични хематологични анализатори (метод 3), стана възможно да се получат (например с помощта на патентовано флуоресцентно багрило за анализатора Sysmex-XT-2000i) допълнителни информативни параметри на ретикулоцитите:
ретикулоцити с ниско съдържание на РНК, най-зрялата (LFR%, ретикулоцитни фракции с ниска флуоресценция, ретикулоцитна фракция с ниска флуоресценция);
ретикулоцити със средно съдържание на РНК(MFR%, ретикулоцитни фракции със средна флуоресценция) - фракция на ретикулоцити със средна флуоресценция);
ретикулоцити с високо съдържание на РНК(HFR%, high fluorescence reticulocyte fractions) - ретикулоцитна фракция с висока флуоресценция);
незряла фракция от ретикулоцити(IRF%, фракция на незрели ретикулоцити).

Диференциацията на ретикулоцитите, основана на степента на зрялост и съответно съдържанието на нуклеинови киселини, е отражение на хемопоетичната активност на костния мозък.

Метод (анализатор Sysmex-XT-2000i). В поточната клетка клетките пресичат лъча на полупроводников лазер, докато лъчът се разпръсква под големи и малки ъгли и флуоресцентното багрило се възбужда. Това дава възможност да се определят различните етапи на зрялост на ретикулоцитите чрез съдържанието на РНК в клетките и интензивността на тяхната луминесценция. Автоматичното броене на ретикулоцити е много точно (преброяват се повече от 30 000 червени кръвни клетки) и възпроизводимо (коефициентът на вариация е около 6%). Тази технология осигурява точен брой на ретикулоцитите дори при изключително ниски концентрации.

За провеждане на тези изследвания е необходимо следното оборудване на работното място:

1. Предметни очила.
2. Шлифовано стъкло.
3. Мокра камера.
4. Смесители за бели и червени кръвни клетки.
5. Очила с луна.
6. Микроскоп.
7. Брилянтно крезил синьо.
8. Абсолютен етилов алкохол.
9. Метилов алкохол или смес от Никифоров (равни части етилов 96 ° алкохол и етер).
10. Реактив на Guyem или 3% физиологичен разтвор.
11. Имерсионно масло.
12. Комплект инструменти за убождане на пръсти.

В зависимост от структурата на зърнесто-мрежестото вещество се разграничават пет вида ретикулоцити: прахообразни, във формата на венче, непълно мрежести, напълно мрежести и топчести (виж фиг.).

Вземането на кръв за преброяване на ретикулоцитите в нея се извършва според указанията на лекаря. За да се преброи броят на ретикулоцитите, те се оцветяват. За тази цел използвайте:

1. Методът на интравитално (суправитално) оцветяване на ретикулоцити.
2. Методът за едновременно суправитално оцветяване на тромбоцити и ретикулоцити според Алексеев.

Нека разгледаме тези методи по-подробно.

Интравитално (суправитално) оцветяване на ретикулоцити

Този метод изисква следните реактиви:

1. Абсолютен етилов алкохол: калциниран безводен (бял) меден сулфат се поставя в сух съд със стъклена тапа и се налива 1/4 абсолютен алкохол. Съдържанието се разклаща. Абсолютният алкохол (алкохол, който не съдържа вода) може да се получи чрез дехидратиране на алкохол с меден сулфат, предварително калциниран. Дехидратацията спира, когато медният сулфат престане да става син.
2. Наситен разтвор на брилянтно-крезилово синьо в абсолютен алкохол: 1 g брилянтно-крезилово синьо се добавя към 80 ml абсолютен алкохол.
3. Азур И.

Оцветяване на живо и техника за броене на ретикулоцити

Предметните стъкла са предварително покрити с наситен разтвор на диамантено-крезил синьо. Прясна капка кръв се разнася върху предметно стъкло с боя, както при подготовката на кръвна натривка. Препаратът веднага се поставя за 6-8 минути във влажна камера, след което се суши на въздух и се микроскопира (окуляр 7Х, обектив 90Х с повдигнат кондензатор). Ретикулоцитите се броят точно по същия начин, както при ограничителя на зрителното поле. Ретикулоцитите, оцветени с брилянтно-крезилово синьо, са бледозелени със синя или синя мрежа (вижте фиг.).

Вместо брилянтно-крезилово синьо за оцветяване на ретикулоцити може да се използва лазур I боя (1 g лазур I на 40 ml абсолютен алкохол, престоява 2 дни на стайна температура) по рецепта на Магина.

Едновременно суправитално оцветяване на тромбоцити и ретикулоцити според Алексеев

За този метод се използва боята на Алексеев. В колба с вместимост 100 ml се налива 1 g боя Azure II и се добавя приготвен в отделна колба реактив със състав: 5 g натриев цитрат, 4 g натриев хлорид и 45 ml дестилирана вода. Съдържанието на колбата се нагрява бавно върху азбестова решетка при непрекъснато разбъркване, без да се довежда до кипене. Охладете, филтрирайте. Филтратът се използва като работен разтвор на боята.

Техника за едновременно оцветяване и броене на тромбоцити и ретикулоцити

Боята на Алексеев се изтегля в миксера за левкоцити до марката 1,0, върхът се избърсва от боята и се поставя на масата. Направете по-дълбока от обикновено инжекция в пръста. Изтегля се кръв до 4/5 от обема на разширената част на миксера, като се следи да не попаднат въздушни мехурчета в нея. Кръвта бързо се издухва от капилярната част на миксера върху памучен тампон, а останалото съдържание в отвора на предметното стъкло. От кладенеца течността отново се изтегля в миксера. Повтаряйки тази манипулация два или три пъти, кръвта се смесва с реагента. След последното въвеждане на течността в миксера, тя се оставя в хоризонтално положение за 15-30 минути за оцветяване на ретикулоцитите и тромбоцитите. След това миксера се разклаща за минута и се пускат 1-2 капки. От следващите капки се приготвят тънки петна. Препаратите се изсушават на въздух, фиксират се с метилов алкохол и се оцветяват с боята на Романовски при разреждане 1-2 капки на 1 ml вода за 35-45 минути. Боята се отмива с вода, а петната се подсушават и микроскопират. В намазка, оцветена според Алексеев, ретикулоцитите са розови със синя мрежа (виж фиг.), А тромбоцитите са синкаво-лилави.

Ретикулоцитите и тромбоцитите се броят едновременно за 1000 еритроцита по същия начин, както е описано в темата "Тромбоцити". Резултатите за ретикулоцитите се изразяват в ppm; тромбоцитите се изчисляват на 1 mm3 кръв (броят на еритроцитите, преброени при даден пациент, се взема предвид при изчислението).

В кръвта на здрави индивиди има 5-10% ретикулоцити.

Отзивите, публикувани на този сайт, са лични мнения на хората, които са ги написали. Не се самолекувайте!

Ретикулоцити (клинично значение и лабораторна диагностика)

(1) ретикулоцити, които имат ядро ​​(еритронормобласти) и тяхната грануларност е разположена под формата на плътно венче около ядрото;

(2) ретикулоцити, имащи гранулирано-мрежесто вещество под формата на топка или бучка;

(3) ретикулоцити, имащи грануларност под формата на гъста мрежа;

(4) ретикулоцити, имащи гранулирано-мрежесто вещество под формата на отделни нишки;

(5) ретикулоцити, съдържащи отделни гранули.

При хемолитична анемия (броят на ретикулоцитите може да достигне до 60% или повече (особено нараства по време на хемолитични кризи);

В случай на остра загуба на кръв (за 3-5 дни след загубата на кръв настъпва ретикулоцитна криза), включително повишаване на ретикулоцитите, това позволява да се подозира латентно кървене (например при пациенти с пептична язва на стомашно-чревния тракт, Коремен тиф);

При лечение на желязодефицитна анемия с желязо (няколко дни (3-10) след началото на антианемичното лечение на пернициозна анемия);

С остра липса на кислород;

С метастази на тумори в костния мозък.

анормална форма на хемоглобина;

С регенеративни апластични и хипопластични анемии;

При анемия, причинена от липса на желязо, витамин В12, фолиева киселина (микроцитарно-хипохромна и мегалобластна анемия);

Със сидеробластна анемия;

С ракови метастази в костите;

С лъчева болест и лъчева терапия;

При лечение с цитостатици;

С автоимунни заболявания на хемопоетичната система;

С бъбречно заболяване;

С рецидив на анемия на Адисън-Бирмер;

Грешен избор на антикоагулант или недостатъчно смесване на кръвта с антикоагулант;

Продължително стискане на ръката с турникет;

Приемане на сулфонамиди (възможни са както подценени, така и надценени резултати);

Кръвопреливане малко преди изследването;

Хемолиза на кръвна проба.

Оценка на активността на еритропоезата при състояния, придружени от хемолиза или загуба на кръв;

Оценка на способността на костния мозък за регенерация след цитотоксична терапия и трансплантация на костен мозък;

Оценка на възстановяването на синтеза на еритропоетин след бъбречна трансплантация;

Допинг контрол при спортисти (прием на еритропоетин);

Диагностика на неефективна хемопоеза или намалено производство на червени кръвни клетки;

Диференциална диагноза на анемия;

Откриване на нарушение на регенеративната способност на костния мозък с дефицит на желязо, витамини В12, В6, фолат, мед и проследяване на подходяща терапия;

Оценка на отговора към терапия с еритропоетин, еритросупресори.

Ретикулоцити с ниско съдържание на РНК, най-зрели (LFR%, ретикулоцитни фракции с ниска флуоресценция, фракция на ретикулоцити с ниска флуоресценция);

Ретикулоцити със средно съдържание на РНК (MFR%, ретикулоцитни фракции със средна флуоресценция) - фракция от ретикулоцити със средна флуоресценция);

Ретикулоцити с високо съдържание на РНК (HFR%, ретикулоцитни фракции с висока флуоресценция) - фракция от ретикулоцити с висока флуоресценция);

Фракция на незрели ретикулоцити (IRF%, фракция на незрели ретикулоцити).

Преброяване на ретикулоцитите в намазка след оцветяването им със специални багрила

Преброяването на ретикулоцитите в цитонамазка след оцветяването им със специални багрила на практика е най-използваният метод за преброяване на броя на ретикулоцитите. Това се дължи на факта, че методът е прост, сравнително евтин и не изисква специално скъпо оборудване, поради което може да се използва във всяка клинична диагностична лаборатория.

Принцип на метода

Идентифициране на гранулираната мрежеста субстанция на ретикулоцитите със суправитално оцветяване с алкални багрила с по-нататъшното им преброяване в кръвна натривка.

Реактиви

Можете да използвате една от следните бои:

1. Наситен разтвор на брилянтно крезилово синьо в абсолютен алкохол (за приготвяне на абсолютен алкохол е необходимо да се издържи 96% етанол в няколко промени на калциниран прах от меден сулфат). За 100 ml абсолютен алкохол се вземат 1,2 g боя.
2. Разтвор на Azure I: Azur I - 1 g, амониев оксалат - 0,4 g, натриев хлорид - 0,8 g, етилов алкохол 96% - 10 ml, дестилирана вода - 90 ml. Разтворът на боята в затворена бутилка се поставя за 2-3 дни в термостат при 37 ° C и периодично се разклаща енергично. След това се охлажда до стайна температура и се филтрува през филтърна хартия. Разтворът се съхранява в тъмен стъклен съд. Ако се появи утайка, боята трябва да се филтрира отново.
3. Разтвор на Azure II: Azur II - 1 g, натриев цитрат - 5 g, натриев хлорид - 0,4 g, дестилирана вода - 45 ml. Разтворът се оставя в термостат при 37°С в продължение на 2 дни, като се разбърква от време на време. За да се ускори разтварянето, боята може да се загрее на слаб огън за 15-20 минути, без да се довежда до кипене. Охлажда се до стайна температура и се филтрира. Съхранявайте в тъмен стъклен съд.

Специално оборудване

Напредък на дефиницията

Оцветяването на ретикулоцитите се извършва върху стъкло или в епруветка.

Оцветяване на ретикулоцити върху стъкло

При оцветяване на ретикулоцити върху стъкло, добре измито и обезмаслено предметно стъкло се нагрява върху пламък на горелка. Капка от едно от изброените по-горе багрила се нанася върху стъклото със стъклена пръчица и се приготвя намазка от боя със смляно стъкло. Стъклен граф се използва за маркиране на страната на стъклото, върху която се нанася петно ​​от боя. В тази форма стъклото може да се подготви за бъдеща употреба и да се съхранява на сухо и тъмно място. Преди анализа се подготвя влажна камера. Обикновено за тази цел те използват петриево блюдо с ролки от навлажнена памучна вата или филтърна хартия, поставени по краищата. Капка кръв се нанася върху петно ​​от боя, от него се приготвя тънко петно ​​и веднага се поставя във влажна камера за 3-10 минути. След това петната се изсушават на въздух.

Оцветяване на ретикулоцити in vitro

Оцветяването на ретикулоцитите in vitro се различава при използване на различни багрила.

Метод 1 - оцветяване на ретикулоцити in vitro с брилянтно крезил синьо.

Преди употреба пригответе работен разтвор на брилянтно крезил синьо в епруветка на базата на капка 1% разтвор на калиев оксалат 4 капки разтвор на брилянтно крезил синьо. Към боята се добавят 0,04 ml кръв (две пипети до марката 0,02). Сместа се разбърква старателно, но внимателно и се оставя за 30 минути. След това разбъркайте отново и пригответе тънки намазки.

Метод 2 - оцветяване на ретикулоцити in vitro с Azure II.

Поставете 0,05 ml разтвор на багрило Azure II и 0,2 ml кръв в епруветка. Сместа се разбърква старателно и се оставя за 20 - 30 минути. Разбъркайте отново и пригответе тънки намазки.

Метод 3 - оцветяване на ретикулоцити in vitro с Azure I.

Поставете 0,3 - 0,5 ml разтвор на лазурен I боя и 5 - 6 капки кръв с пипета от апарата на Панченков в епруветка. Епруветката се затваря с гумена запушалка, сместа се разбърква старателно, но внимателно и се оставя за 1-1,5 часа (ретикулоцитите се оцветяват по-добре при експозиция от 1,5-3 часа). Смесете и подгответе тънки щрихи.

В момента в търговската мрежа се предлагат готови багрила за ретикулоцити. Оцветяването на ретикулоцитите с тяхна помощ се извършва съгласно приложените инструкции.

Брой на ретикулоцитите.

Натривки, приготвени по един от горните методи, се микроскопират с потапяща леща. В намазката ретикулоцитите и еритроцитите са оцветени в жълтеникаво-зеленикаво, гранулираната нишковидна субстанция в ретикулоцитите е синя (когато е оцветена с лазурно II и брилянтно крезилово синьо) или синкаво-виолетово (когато е оцветена с лазурно I).

Снимки на ретикулоцити:

Намерете зрителни полета, където еритроцитите са разположени отделно. В тези зрителни полета е необходимо да се преброят най-малко 1000 еритроцита и сред тях да се отбележи броят на еритроцитите, съдържащи гранулирано-нишковидно вещество. По-голяма точност се получава при преброяване на 2000 - 3000 еритроцита.

Поради факта, че в зрителното поле се намира голям брой еритроцити, което затруднява броенето, се налага ограничаване (намаляване) на зрителното поле. За да направите това, можете да използвате или специален окуляр, в който можете да намалите зрителното поле до необходимия размер, или да използвате специален „прозорец“ (от хартия се изрязва кръг с диаметър, малко по-малък от окуляра, в центъра на кръга се изрязва малък ромб и полученият прозорец се вкарва в окуляра).

Броят на преброените ретикулоцити се изразява на 100 (в проценти) или на 1000 (в ppm) еритроцити.

Пример:При преброяване на 1000 еритроцита в цитонамазка се установи, че 15 от 1000 еритроцита имат гранулирана мрежеста субстанция в една или друга степен, т.е. те са ретикулоцити. Следователно броят на ретикулоцитите в този случай е 1,5% или 15‰.

Литература:

• Наръчник "Лабораторни методи на изследване в клиниката" под редакцията на Меншиков V.V. - Москва, "Медицина", 1987 г.
• Любина А. Я., Иличева Л. П. и съавтори - "Клинични лабораторни изследвания" - Москва, "Медицина", 1984 г.

Преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия

Методът за преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия е прост и изисква малко време, по-точен от конвенционалния метод, тъй като флуоресцентната микроскопия разкрива най-малките зърна от мрежесто-нишковидното вещество.

Ретикулоцити

Ретикулоцитите са млади червени кръвни клетки, образувани след загубата на ядра от нормобластите. Характерна особеност на ретикулоцитите е наличието в тяхната цитоплазма на зърнесто-нишковидно вещество (ретикулум), представляващо агрегирани рибозоми и митохондрии.

Патологични включвания в еритроцитите

Телцата на Джоли (телца на Хауъл-Джоли) са малки кръгли виолетово-червени включвания с размер µm, срещащи се по 1 (рядко 2-3) в един еритроцит. Те са остатъци от ядрото след отстраняването на неговите ВЕИ. Те се откриват с интензивна хемолиза и "претоварване" на RES, след спленектомия, с мегалобластна анемия.

Цитохимично изследване на липиди

Цитохимичното изследване на липидите се основава на използването на багрила, които се разтварят в мазнини (Судан III, Судан IV, черен Судан и др.). За идентифициране на неутрална мазнина се използва Судан III, който оцветява мазнината в оранжево. Липоидите се откриват по-добре със суданово черно (черно оцветяване).

Анализ на урината според Нечипоренко

Методът на Нечипоренко в домашната лабораторна диагностика е най-разпространеният метод за количествено определяне на формирани елементи в урината. Този метод е най-простият, достъпен за всяка лаборатория и удобен в амбулаторната практика, а също така има редица предимства пред други известни количествени методи за изследване на утайката на урината. По метода на Нечипоренко се определя броят на образуваните елементи (еритроцити, левкоцити и цилиндри) в 1 ml урина.

©18 Лабораторна диагностика

Ретикулоцит - какво е това в кръвния тест? Нормални показатели и обозначение

Ретикулоцитът е предшественик на еритроцит, т.е. еритроцит в млада форма. В кръвта на здрав човек тяхното съдържание е 0,2-1,2%. Това съотношение отразява съдържанието на ретикулоцити в кръвта спрямо еритроцитите. Узряват за 4-5 дни.

Основни понятия

Характерна особеност на младите форми на еритроцитите е, че в цитоплазмата има гранулирано-нишковидно вещество, което представлява агрегирана рибозома и митохондрии. Това вещество може да бъде открито с помощта на специален метод за оцветяване на кръвни натривки. Това оцветяване на ретикулоцитите се нарича суправитално, т.е. произвежда се без предварително фиксиране на клетките.

Групи ретикулоцити

Общо експертите разграничават пет основни групи ретикулоцити. Те се различават по ретикуларния ретикулум. Плътността и възрастта му са обратно пропорционални: колкото по-дебела е мрежата, толкова по-млади са те. Нека да разберем кой е най-младият ретикулоцит.

Това е клетка, която има мрежа под формата на дебела топка. Тези клетки принадлежат към първата група. Ретикулоцитите от по-зряла форма изглеждат като вещество, което има ясно различима мрежа. В четвърта и пета група е представена от отделни нишки и зърна. Най-често кръвта на здрави хора съдържа ретикулоцити от последните групи, тоест по-зрели. По правило те съставляват около 80% от останалите. С повишена регенерация, която е характерна за някои патологии, броят на ретикулоцитите от първите три групи се увеличава. Тези патологии включват:

Ретикулоцитна криза, придружаваща В12 дефицитна анемия.

Функции, които изпълняват ретикулоцитите

Ретикулоцитът също е еритроцит. Характеризира се със същата функция като еритроцитите. Тоест, клетките също пренасят кислородни молекули към различни тъкани и органи, но ефективността на този процес е много по-ниска, отколкото когато кислородът се пренася от зрели еритроцити. Ретикулоцитите могат да адсорбират молекули желязо, съдържащи се в хемоглобина. Това е възможно поради рецептори, чувствителни към трансферин. Защо се прави броене на ретикулоцити? Повече за това по-късно.

Механизъм за вземане на кръвни проби

За определяне на този показател като част от общ анализ се взема кръвна проба. Ако има нужда да се определи нивото на ретикулоцитите, тогава лекарят, предписал анализа, посочва в посоката необходимостта от допълнително преброяване.

Този анализ не се нуждае от специална подготовка, но традиционно се приема на празен стомах сутрин. В същото време, ако има нужда, тогава може да бъде предадено по всяко време на деня. Кръвта за анализ трябва да се вземе от пръста, нейното изследване се извършва в лабораторията, в хематологичния отдел.

Преброяването на броя на ретикулоцитите се извършва в суправитално оцветено намазка. Използва се микроскопичният метод, тоест техният брой просто се преброява чрез поставяне на кръвна проба под микроскоп. Към днешна дата има хардуерен метод за броене. Използва се от модерни лаборатории.

Означението на ретикулоцитите в кръвен тест е RET.

Провеждане на анализ

Има няколко метода за провеждане на такова изследване:

• Стъклото се измива, изсушава и нагрява със специална горелка. След това върху него се нанася една от трите багрила, след което се добавя капка кръв, след което се прави тънко намазка. Стъклото се поставя в петриево блюдо или друга камера за определено време, след което се изсушава на чист въздух.
• Ако се използва епруветка, тогава в нея се поставя оцветяващо вещество и се добавя капка кръв. Сместа трябва да се разбърка. Време за изчакване - от 20 минути до 3 часа, в зависимост от това какъв реактив се използва. След това отново смесете течността, която е в епруветката, от нея се вземат петна.

Трудно е да се каже кой метод определя по-точни резултати. И двамата са добри по свой начин, но лекарят може да намери за необходимо да извърши анализа по определен начин, тогава той трябва да го насочи в посоката.

Индикатори

При изчисляване на нивото на ретикулоцитите половите разлики в нормата имат значение едва след 12 години. До тази възраст нормата при деца от двата пола е една и съща. Около една година момичетата започват менструация, която е редовна. В резултат на месечната загуба на кръв се разширява обхватът на колебанията в еритроидните клетки.

1. При новородени нормата е в диапазона от 0,15 до 1,5%.

2. При деца на две седмици - от 0,45 до 2,0%.

3. При деца на възраст от един до два месеца - от 0,25 до 0,95%.

4. При деца на шест месеца - от 0,2 до 1,0%.

5. При деца от две до шест години - от 0,25 до 0,75%.

6. При деца на възраст от шест до дванадесет години - от 0,25 до 1,3%.

7. При мъже на възраст над дванадесет години - от 0,25 до 1,7%.

8. При жени над дванадесет години - от 0,12 до 2,1%.

Какво означава ситуацията, когато ретикулоцитите са повишени?

Увеличаване на броя на ретикулоцитите в кръвта

При анемия с различна етимология определянето на броя на ретикулоцитите играе специална роля. Ако съдържанието им в кръвта е повишено, тогава тази патология се нарича ретикулоцитоза. Ако увеличението е придружено от повишаване на нивото на хемоглобина, това показва, че костният мозък има добра регенеративна способност. Това може да се случи, ако са налице следните фактори:

Хемолитична анемия с различна етимология. Това са редица заболявания, които се характеризират с разрушаване на червените кръвни клетки. Това явление се нарича хемолиза. В този случай съдържанието на ретикулоцити в кръвта може да достигне 60%. Ако възникне хемолитична криза, тази цифра може да се влоши.

Отравяне с хемотоксин, причиняващо хемолиза. Хемотоксините включват отровата на усойница и някои лекарства, които се използват за лечение на еритремия. Маларийните токсини също могат да причинят хемолиза.

Терапия с леводопа при болест на Паркинсон.

Дългосрочна употреба на определени противовъзпалителни и антипиретични лекарства.

Терапия с лекарството "Еритропоетин" анемични заболявания.

Метастази в костен мозък.

Период на възстановяване след лъчева или химическа терапия.

Ретикулоцитозата може да бъде фалшива и истинска.

Защо да правите тест за ретикулоцити? Този въпрос често се задава.

Фалшива и истинска ретикулоцитоза

Истинската ретикулоцитоза се характеризира с увеличаване на броя на младите ретикулоцити в кръвта, което е придружено от увеличаване на техния брой в костния мозък.

Фалшивата ретикулоцитоза се характеризира с увеличаване на броя на ретикулоцитите изключително в периферната кръв, докато в костния мозък тяхното ниво остава нормално или леко намалено.

Намалени ставки

Процесът на намаляване на броя на ретикулоцитите се наблюдава при инхибиране на еритропоезата. Възниква в резултат на следните фактори:

Дългосрочна употреба на сулфонамиди.

Прием на определени лекарства, като хлорамфеникол или карбамазепин.

Хронични инфекциозни заболявания.

Някои тежки бъбречни заболявания, засягащи еритропоезата.

Микседем или друга дисфункция на щитовидната жлеза.

Тумори в костния мозък.

Разгледахме какво е ретикулоцит. Това е млада червена кръвна клетка в човешката кръв.

Причините за увеличаване на ретикулоцитите, как да се определи функционалността на хемопоетичната система?

Понякога, когато се предписва клиничен преглед, общият кръвен тест може отделно да показва RTC или RET - съкращения, които показват съдържанието на ретикулоцити. Те са безядрени клетки, които предхождат еритроцитите (червените кръвни клетки) по време на тяхното образуване. Ретикулоцитите в кръвния тест, техният брой и съотношението с еритроцитите отразяват състоянието и репродуктивната функция на костния мозък, както и цялата хемопоетична система.

Медицинско свидетелство

Можете да определите подробно какво представляват ретикулоцитите така: те са кръгли или звездовидни клетки, които се образуват в костния мозък и се трансформират в червени кръвни клетки под въздействието на гликопротеиновия хормон еритропоетин.

Цветът на ретикулоцитите обикновено е розов със син оттенък. Тяхната отличителна черта от по-късната форма е наличието в структурата на остатъчна РНК, митохондрии и други органели, които изглеждат като гранулирани и нишковидни образувания, чиято загуба показва трансформацията в зряла клетка.

Функционалните задължения на ретикулоцитите съвпадат с еритроцитите - да пренасят кислород, но с много по-малка ефективност поради ниското съдържание на хемоглобин в тях. Те са концентрирани главно в червения костен мозък, плоските и тръбестите кости и само зрелите червени клетки навлизат в кръвния поток. Но малка част от незрели ретикулоцити също се допуска в периферния кръвен поток, което показва активирането на процеса на производство на еритроцити (еритропоеза).

Процесът на образуване на кръв

Еритропоезата започва с трансформацията на еритробласт, клетка, съдържаща ядро, но без хемоглобин, в пронормбласт. Освен това в еритроидната серия се образува базофилен еритробласт, който вече има предпоставки за хемоглобинизация.

Тъй като наследствените еритроцити натрупват веществото, задържащо кислорода (хемоглобин), клетката преминава през етапите на полихроматофилен и след това оксифилен нормобласт. През този период ядрото все още е запазено, чиято инволюция води до образуването на директно млад еритроцит - ретикулоцит, който вече има способността да задържа и транспортира кислород и въглероден диоксид.

Младите червени кръвни клетки остават на мястото на тяхното образуване до 40 часа, след което малка част от тях под въздействието на еритропоетина навлизат в кръвоносните съдове, където се движат свободно в продължение на 1,5-2 дни. През това време клетката губи ретикулума (остатъчни нишковидни образувания) и се превръща в еритроцит.

Етапи на развитие на ретикулоцитите

В кръвта ретикулоцитите преминават през пет етапа на съзряване, докато ретикулумът се развива:

1. нулев етап - когато базофилното вещество (мрежесто вътреклетъчно вещество) има формата на ядро, т.е. натрупването на грануларност изглежда като вид венче;
2. първият етап - базофилното вещество (BS) придобива мрежеста структура под формата на топка;
3. вторият етап - гранулираната мрежа е равномерно разпределена върху клетката;
4. третият етап - BV изглежда като отделни нишки;
5. четвърти етап – BV се разпределя под формата на малки зърна по периферията на клетката.

В здраво тяло ретикулоцитите в кръвния поток трябва да се срещат само в етапи III и IV на узряване (80 процента), а 0 - II - в единични копия. Но прекомерната смърт на червените кръвни клетки или кислородното гладуване стимулират повишеното производство на еритропоетин от бъбреците, което води до освобождаване на незрели клетки от всички етапи и дори нормобласти в съдовете.

Кръвен тест за ретикулоцити

Броят на ретикулоцитите в кръвна натривка не е задължителен за хематологично изследване, но е част от общата клинична оценка. Само когато възникнат определени подозрения, лекарят прави специално обозначение в анализа.

Причини за изследването

Причините за изследване на количеството RTC в кръвта са да се провери работата на костния мозък и бъбреците при производството на кръвни клетки и еритропоетин в такива случаи:

• със съмнение за анемия от различен произход;
• ако е необходимо, контрол на лекарствената терапия за дефицит на желязо, витамин В12 и фолиева киселина;
• за наблюдение при прием на еритропоетин-съдържащи лекарства, еритросупресори;
• с тежко външно кървене или подозрение за вътрешно;
• поради необходимостта от приемане на лекарства, които неутрализират токсините в резултат на ухапвания от отровни насекоми или змии;
• за контролиране на производството на червени кръвни клетки по време на трансплантация на костен мозък или бъбрек;
• за дефиницията на рак.

Последната точка е свързана с особеностите на метастазите на някои ракови тумори в кръвотворните органи.

Метод на откриване

Ако ядрото се загуби, само киселинни багрила могат да се прилагат върху кръвните клетки. Чрез оцветяване в кръвна натривка се показват елементи от еритроидната серия, които след това се откриват с помощта на светлинна микроскопия. За да се изолират ретикулоцитите от общата маса на еритроцитите, е необходимо да се използват специални препарати, които променят цвета на гранулираната структура на клетките.

Самият процес на откриване се състои в смесване на кръвна плазма с брилянтно крезил синьо или акридиново оранжево багрило in vitro (ин витро) или върху стъкло в пропорции: 1 част кръв към 10 части от веществото.

Методите върху стъкло и ин витро са коренно различни. В първия случай смесени кръвни натривки с багрило се потапят във влажна среда за 10 минути, след което се изсушават и клетките се преброяват под микроскоп. При втория вариант съставът, смесен в епруветката, се оставя до 3 часа, след което се смесва повторно, намазва се и се брои.

Когато звездните клетки на ретикулоцитите станат видими и се определи степента на тяхната зрялост (според структурата на оцветения BV), може да се получи информация за състоянието на костния мозък.

Допустими показатели

Нормалното ниво на ретикулоцитите съответства на процеса на кръвообразуване в здраво тяло. За организиране на данните се използва специална таблица, в която нормалните граници са степенувани по възраст и пол на дадено лице.

Нормата на ретикулоцитите в кръвта при деца

Нормата на ретикулоцитите при деца варира в зависимост от конкретния период на образуване на хемопоетичната система. Така че при новородени до 14 дни приемливата норма е от 0,15 до 1,5 процента по отношение на червените кръвни клетки. Нормалните стойности за бебета до два месеца са от 0,45 до 2,1 процента, а до шест месеца - 0,25 - 0,9 процента. При дете от шест месеца до една година стойности от 0,2 до 1% се считат за здрави и се стабилизират до шестгодишна възраст. Освен това диапазонът се стеснява: от 7 до 12 години той варира от 0,2 до 1,3 процента.

Ретикулоцити в кръвта при възрастни

По-нататъшното допустимо съдържание на ретикулоцити в кръвта зависи повече от пола на детето, отколкото от възрастта, и съответства на показателите за възрастни. Това се дължи на началото на менструалния цикъл при момичетата, което предполага месечна загуба на кръв и съответно увеличаване на производството на кръвни клетки през този период. Нормативни показатели:

• приемливото ниво на млади червени кръвни клетки в кръвта на жени и млади момичета на възраст от 13 години ще бъде от 0,12 до 2,05 процента (съответно от 1,2 до 20 ppm);
• броят на ретикулоцитите при мъжете обикновено варира от 0,24 до 1,7 процента от общата еритроидна маса.

И така, при възрастен се установява постоянен диапазон от допустима концентрация на млади кръвни клетки, които съдържат гранулирано мрежесто вещество. В същото време повишените рекулоцити или ретикулоцитната криза показват определени нарушения във функционирането на хемопоетичната система.

Увеличаване на ретикулоцитите

Повишените ретикулоцити (или по друг начин ретикулоцитоза) могат да бъдат както положителни, така и отрицателни за субекта. Повишен брой незрели кръвни клетки се наблюдава в случаи на:

• С положителни резултати от терапията с желязосъдържащи препарати, витамин В12 и фолиева киселина, които обикновено настъпват след седмица.
• При попълване на обема на кръвта след значителна загуба на кръв.
• С положителни резултати при лечение на онкологични заболявания чрез противоракови лекарства или лъчетерапия.

важно! Ретикулоцитозата се наблюдава при недостиг на кислород на значителна височина над морското равнище.

Отрицателните стойности на ретикулоцитозата включват:

• Последици от заболявания като коремен тиф, които провокират вътрешно кървене.
• Ретикулоцитите се увеличават при интоксикация с химически отрови или чужди агенти.
• Фалшивата ретикулоцитоза показва наличието на незрели клетки в кръвта при липса на такива в костния мозък, което показва възпалителни процеси или метастази в органа.
• Ретикулоцитоза се наблюдава при малария, хемолитична анемия или таласемия.

Повишеното съдържание на незрели кръвни клетки в кръвта (ретикулоцитоза) е изпълнено с нейното удебеляване, което впоследствие може да доведе до тромбоза, инфаркт или инсулт.

Ретикулоцити в кръвта по време на бременност

При бременни жени общият обем на кръвта се увеличава поради плазмата, следователно се наблюдава нейното разреждане и намаляване на нивото на червените кръвни клетки. Поради факта, че в кръвта няма достатъчно хемоглобин, се развива анемия, която активира процеса на еритропоеза. Поради това при бременни жени се определя висок процент ретикулоцити. Клиниката на това явление отговаря на нормата с физиологичната адаптация на тялото към раждането на дете.

Ретикулоцитите са понижени

Ретикулоцитопенията (когато нивото на ретикулоцитите е намалено) често показва увреждане на бъбреците и / или костния мозък. Фактори, които намаляват съдържанието на млади еритроцити са:

• Анемия, причинена от липса на фолиева киселина, витамин В12 или желязо, което води до разрушаване на червените кръвни клетки.
• Бъбречни заболявания, но те могат леко да понижат нивото на ретикулоцитите.
• Злоупотребата с алкохол, която ще покаже намаляване на RTC поради инхибиране на бъбречните функции, потискане на костния мозък и директно унищожаване на клетките в резултат на интоксикация.

важно! Злокачествените тумори също могат да понижат нивото на ретикулоцитите в кръвта. Зависи от областта на костния мозък, където ракът е метастазирал.

Сам по себе си индикаторът за съдържанието на ретикулоцити в кръвта не е диагноза. При значително отклонение от допустимия диапазон, той определя общата посока за диагностика.

Откриване на гранулираната мрежеста субстанция на ретикулоцитите при оцветяване с брилянтно-крезилово синьо без предварително фиксиране.

Реактиви:

1% разтвор на брилянтно-крезилово синьо: 50 mg багрило се разтварят в 5 ml физиологичен разтвор и се добавят 20 mg натриев цитрат (разтворът се съхранява в тъмен стъклен съд, годен е за няколко дни).

Методология:

Поставете 2 капки от 1% разтвор на брилянтно крезил синьо багрило и 1 капка кръв върху предметно стъкло с кладенче. Внимателно се разбърква със стъклена пръчица и сместа се поставя във влажна камера (блюдо на Петри, в което около краищата се поставят леко навлажнена марля или памучни ролки) за 30 минути при стайна температура. След това се правят намазки и се изсушават.

Брой на ретикулоцитите:

В намазките еритроцитите са оцветени в жълтеникаво-зелено, а гранулираната мрежеста субстанция в ретикулоцитите е синя и лилава.

Натривките се микроскопират с потапяща леща. Ретикулоцитите се броят на 1000 еритроцита (по-голяма точност се получава при преброяване на 2000-3000 еритроцита).

Увеличаване на броя на ретикулоцитите се наблюдава при:

стимулиране на еритропоезата (загуба на кръв, хемолиза, ретикулоцитна криза с успешно лечение на В12 дефицитна анемия, остра липса на кислород).

Намаляване на броя на ретикулоцитите се наблюдава при:

инхибиране на еритропоезата (апластична и хипопластична анемия, нелекувана В12 дефицитна анемия, ракови метастази в костите),

бъбречни заболявания, ендокринни заболявания.

Отбелязва се увеличение на техните ретикулоцити в периферната кръв (ретикулоцитоза): с хемолитична анемия (броят на ретикулоцитите може да достигне до 60% или повече (особено нараства по време на хемолитични кризи); с остра загуба на кръв (възниква ретикулоцитна криза 3- 5 дни след загуба на кръв), включително увеличаването на ретикулоцитите позволява да се подозира скрито кървене (например при пациенти с пептична язва на стомашно-чревния тракт, коремен тиф); с малария; с полицитемия; при лечение на желязо желязодефицитна анемия (няколко дни (3 - 10) след началото на антианемичното лечение на пернициозна анемия); с остър недостиг на кислород; с туморни метастази в костния мозък. Трябва да се помни, че в случай на повишено разрушаване на еритроцитите, делът на ретикулоцитите може да надхвърли 50% поради изкуствено увеличаване на броя на ретикулоцитите (както беше отбелязано по-рано, делът на ретикулоцитите се изчислява в% от всички еритроцити. В такива случаи, за да се оцени тежестта на анемията, „ретикуларният“ използва се индекс”, който се изчислява по формулата: (% ретикулоцити х хематокрит) / 45 х 1,85, където 45 е нормален хематокрит, 1,85 е броят дни, необходими за пристигането на нови ретикулоцити в кръвта. Ако индекс

МЕТОДИ ЗА ИЗЧИСЛЯВАНЕ НА БРОЯ НА РЕТИКУЛОЦИТИТЕ

(1) Преброяване на броя на ретикулоцитите в цитонамазка след оцветяването им със специални багрила. Този метод е най-използваният в практиката поради факта, че е прост, сравнително евтин и не изисква специално скъпо оборудване, поради което може да се използва във всяка клинико-диагностична лаборатория. Принципът на метода се основава на откриването на гранулирана мрежеста субстанция на ретикулоцити по време на суправитално оцветяване с алкални багрила (наситен разтвор на брилянтно крезил синьо в абсолютен алкохол / разтвор на лазур I / разтвор на лазур II) с по-нататъшното им преброяване в кръвта намазка. Оцветяването на ретикулоцитите се извършва върху стъкло или в епруветка. Преброяването се извършва с помощта на микроскоп: петна, приготвени по един от горните методи, се микроскопират с потапяща леща; в намазка, ретикулоцитите и еритроцитите са оцветени в жълтеникаво-зеленикаво, гранулираната нишковидна субстанция в ретикулоцитите е синя (когато е оцветена с лазурно II и брилянтно крезилово синьо) или синкаво-виолетово (когато е оцветена с лазурно I). (2) Преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия. Този метод е прост и отнема малко време, по-точен от конвенционалния метод, тъй като флуоресцентната микроскопия разкрива най-малките зърна от мрежесто-нишковидното вещество, но е възможно само с луминисцентен микроскоп и специални багрила и следователно е достъпен само за няколко лаборатории. Принципът на преброяване на броя на ретикулоцитите с помощта на флуоресцентна микроскопия се основава на използването на способността на веществото на ретикулоцитите да флуоресцират след третиране на кръвта с акридиново оранжево. Кръвта се смесва с акридин оранжево в епруветка или миксер в съотношение 1 част кръв и 10 части багрило (сместа може да се съхранява не повече от 5 часа). Сместа се разбърква в продължение на 2 минути, капка от сместа се нанася върху предметно стъкло и се покрива с покривно стъкло. В този случай течността не трябва да излиза извън покривното стъкло. Микроскопски с помощта на светлинен филтър ZhS-17. В препарата еритроцитите имат тъмнозелен контур и не флуоресцират, докато при ретикулоцитите грануларно-мрежестата субстанция свети ярко червено, което улеснява преброяването на ретикулоцитите. В кръв, стабилизирана с хепарин или натриев цитрат, не се наблюдава ретикулоцитна флуоресценция. (3) Автоматично броене на ретикулоцити с хематологичен анализатор. В съвременните хематологични анализатори технологията за преброяване на кръвните клетки се основава на кондуктометричния метод, предложен от Х. Уолъс и Джоузеф Р. Култър през 1947 г. Принципът на метода е да се преброи броят и да се определи естеството на импулсите, които възникват, когато клетката премине през отвор с малък диаметър (апертура), от двете страни на който има два електрода изолирани един от друг. Всяко преминаване на клетка през отвора е придружено от появата на електрически импулс, който се записва от електронен сензор. Разделянето на клетките по категории (еритроцити, левкоцити, тромбоцити, седимент) се извършва от устройството въз основа на анализа на амплитудата на получените импулси.За да се определи концентрацията на клетките, е достатъчно да се премине определен обем от проби през канала и пребройте броя на импулсите, които са генерирани. Трябва да се отбележи, че в допълнение към класическия параметър на ретикулоцитите - относителното (%) съдържание на ретикулоцити (RET%, процент на ретикулоцити), определено с помощта на методи 1 и 2 на лабораторната диагностика, поради появата на високотехнологични хематологични анализатори (метод 3), стана възможно да се получат (например с помощта на патентовано флуоресцентно багрило за анализатора Sysmex-XT-2000i) допълнителни информативни параметри на ретикулоцитите: ретикулоцити с ниско съдържание на РНК, най-зрелите (LFR%, ретикулоцитни фракции с ниска флуоресценция , ретикулоцитна фракция с ниска флуоресценция); ретикулоцити със средно съдържание на РНК (MFR%, ретикулоцитни фракции със средна флуоресценция) - фракция от ретикулоцити със средна флуоресценция); ретикулоцити с високо съдържание на РНК (HFR%, ретикулоцитни фракции с висока флуоресценция) - фракция от ретикулоцити с висока флуоресценция); фракция на незрели ретикулоцити (IRF%, фракция на незрели ретикулоцити). Диференциацията на ретикулоцитите, основана на степента на зрялост и съответно съдържанието на нуклеинови киселини, е отражение на хемопоетичната активност на костния мозък. Метод (анализатор Sysmex-XT-2000i). В поточната клетка клетките пресичат лъча на полупроводников лазер, докато лъчът се разпръсква под големи и малки ъгли и флуоресцентното багрило се възбужда. Това дава възможност да се определят различните етапи на зрялост на ретикулоцитите чрез съдържанието на РНК в клетките и интензивността на тяхната луминесценция. Автоматичното броене на ретикулоцити е много точно (преброяват се повече от 30 000 червени кръвни клетки) и възпроизводимо (коефициентът на вариация е около 6%). Тази технология осигурява точен брой на ретикулоцитите дори при изключително ниски концентрации.

Ретикулоцитопения и ретикулоцитоза, причини за развитие, диагностична стойност на тяхното откриване.

studfiles.net

Ретикулоцити (reticulocytus)

Ретикулоцитите са млади червени кръвни клетки, които се образуват след загубата на ядра от нормобластите.

Характерна особеност на ретикулоцитите е наличието на гранулирана мрежеста субстанция, която се появява със суправитално оцветяване, т.е. без предварително фиксиране на клетките.

Електронномикроскопски показа, че гранулираните мрежести структури са остатъци от ендоплазмения ретикулум, рибозоми и митохондрии, съдържащи РНК. В ретикулоцитите синтезът на протеин (глобин), хем, пурини, пиримидинови нуклеотиди, фосфатиди, липиди се извършва в малка степен, но РНК не се синтезира в тях. В рамките на 2 дни ретикулоцитът остава в кръвния поток, след което, тъй като РНК намалява, той се превръща в зрял еритроцит.

В натривки, оцветени с конвенционални хематологични методи, сивкаво-розовите ретикулоцити са полихроматофилни, т.е. боядисани с различни багрила.

В момента се използва унифициран метод за преброяване на броя на ретикулоцитите след оцветяването им.

• брилянтно крезил синьо,
• Azur I или
• Azur II директно върху стъкло или в епруветка.

1. Принципът на метода

Идентифициране на гранулираната мрежеста субстанция на еритроцитите при оцветяване с алкални бои с по-нататъшното им преброяване в кръвна натривка.

2. Реактиви:

а) наситен разтвор на брилянтно крезилово синьо в абсолютен алкохол (за приготвяне на абсолютен алкохол 96% етанол трябва да се съхранява в няколко смени на калциниран меден сулфат на прах): 1,2 g боя на 100 ml алкохол;

б) разтвор на лазур I: лазур I - 1 g, амониев оксалат - 0,4 g, натриев хлорид - 0,8 g, етилов алкохол 96% - 10 ml, дестилирана вода - 90 ml. Разтворът на боята в затворен флакон се поставя за 2-3 дни в термостат при 37 °C и периодично се разклаща енергично. След това се охлажда до стайна температура и се филтрува през филтърна хартия. Разтворът се съхранява в тъмен стъклен съд. Ако се появи утайка, боята трябва да се филтрира отново;

в) Azur II разтвор: Azur II - 1 g, натриев цитрат - 5 g, натриев хлорид - 0,4 g, дестилирана вода - 45 ml. Разтворът се оставя в термостат при 37 °C в продължение на 2 дни, като се разбърква от време на време. За да се ускори разтварянето, боята може да се загрее на слаб огън за 15-20 минути, без да кипи. Охлажда се до стайна температура и се филтрира. Съхранявайте в тъмен стъклен съд.

3. Оцветяване

Оцветяване върху стъкло:

• добре измито и обезмаслено предметно стъкло се нагрява върху пламък на горелка. Със стъклена пръчка върху стъклото се нанася капка от едно от багрилата и се приготвя намазка от боя с полирано стъкло. Маркирайте страната на стъклото, върху която е нанесено петното от боята със стъклен стилус. В тази форма стъклото може да се подготви за бъдеща употреба и да се съхранява на сухо и тъмно място;
• върху така приготвените стъкла се нанася капка кръв, прави се тънка намазка и веднага стъклото се поставя във влажна камера. За да направите това, използвайте петриево блюдо с капак, в което по краищата се поставят леко навлажнени марля или памучни ролки;
• намазките се държат във влажна камера за 3-5 минути и след това се изсушават на въздух. Гранулираната мрежеста субстанция на ретикулоцитите става лилаво-синя, ясно се откроява на зеленикаво-синкавия фон на еритроцитите.

Оцветяване ин витро:

• метод 1: преди употреба пригответе работен разтвор на брилянтно крезилово синьо в епруветка на капка 1% разтвор на калиев оксалат 4 капки разтвор на багрило 1. Добавете 40 µl кръв към багрилото (две пипети до марката 0,02). Разбъркайте старателно, но внимателно и оставете за 30 минути. Смесете и подгответе тънки щрихи;
• метод 2: 0,05 ml разтвор на боя 3 и 0,2 ml кръв се поставят в епруветка. Сместа се разбърква старателно и се оставя за 20-30 минути. Смесете и подгответе тънки щрихи;
• метод 3: поставете 0,3-0,5 ml разтвор на багрило 2 и 5-6 капки кръв в епруветка с пипета от апарата на Панченков. Епруветката се затваря с гумена запушалка, сместа се разбърква старателно, но внимателно и се оставя за 1–1½ часа (ретикулоцитите се оцветяват по-добре, когато са изложени за 1½ часа–3 часа). Смесете и подгответе тънки щрихи.

4. Брой на ретикулоцитите

В петна еритроцитите са оцветени в жълтеникаво-зеленикаво, гранулирано нишковидно вещество - синьо или синкаво-виолетово.

• Натривки, приготвени по един от горните методи, се микроскопират с потапяща леща;
• необходимо е да се преброят най-малко 1000 еритроцита и да се отбележи сред тях броя на еритроцитите, съдържащи гранулирано-нишковидно вещество. При еднакви тънки намазки, в които еритроцитите са подредени в един ред, се избира такова зрително поле, в което има например 50 еритроцита, след което се изчисляват 20 такива зрителни полета;
• на практика за по-голяма точност се използва специален окуляр, в който зрителното поле може да се намали до необходимия размер. При липса на готов окуляр, той може лесно да се подготви, като се развие окулярът ×7, постави лист хартия с изрязан квадрат в него и се завие. Броят на преброените ретикулоцити се изразява на 1000 или на 100 еритроцита.

КОЕФИЦИЕНТ: 0,5–1,2% (30–70 × 109/l)

Увеличаване на броя на ретикулоцитите се наблюдава при:

• загуба на кръв (особено остра);
• хемолитична анемия, особено по време на криза (до 20-30%);
• на фона на лечение на мегалобластна анемия с витамин В12 (ретикулоцитна криза - увеличаване на броя на ретикулоцитите на 4-8-ия ден от лечението).

Намаляването на броя на ретикулоцитите е характерно за:

• апластични и хипопластични анемии;
• нелекувана мегалобластна анемия;
• лъчева болест;
• приемане на цитотоксични лекарства.

Христос жив ли е? Възкръснал ли е Христос от мъртвите? Изследователите изучават фактите

диагноз.ru

Ретикулоцитите в норма и броят им се брои

Ретикулоцитите, чиято норма варира поради много фактори, са неоформени форми на червени кръвни клетки и могат да бъдат намерени в костния мозък и периферната кръв. По правило ретикулоцитите в кръвта узряват за три до пет дни и след това тези клетки се превръщат във вече зрели червени кръвни клетки. Освен това броят на неоформените еритроцити при новородените е значително по-голям, отколкото при възрастните.

Откриване на ретикулоцити:

При идентифициране на ретикулоцити, чиято норма се определя с помощта на специална таблица, е необходимо да се вземат предвид техните различия от зрелите еритроцити. Това разнообразие от кръвни клетки или съдържа цяло ядро, или неговите останки се наблюдават като част от гранулирано нишковидно вещество. За да се определи броят на такива клетки, е необходимо да се изследва цветът на кръвната натривка в лабораторията. За това се използва разтвор на син диамант, който се нанася върху обезмаслено и предварително измито стъкло и едва след това се прави намазка.

Когато се открият ретикулоцити, чиято норма е различна, веднага след намазката, използваното стъкло трябва да се постави в петриево блюдо - специална влажна камера, след това да се държи пет минути, да се изсуши напълно на чист въздух и след това да се подложи на микроскоп. Освен това веществото от грануларно-нишковиден тип вътре в ретикулоцита обикновено се оцветява във виолетово-син оттенък, а фонът на еритроцитите се откроява поради синкаво-зелен оттенък.

Ако се използва методът на Гел-Майер, оцветяването на незрелите кръвни клетки може да се види много по-добре, но това изисква епруветка на Видал. В този съд няколко капки кръв се смесват с брилянтен разтвор и натриев хлорид, след това епруветката се затваря с капак и самото намазване се извършва в рамките на един час.

Брой на ретикулоцитите:

Когато изчислявате броя на незрелите кръвни клетки, трябва да вземете 1000 червени кръвни клетки като основа и след това да вземете предвид ретикулоцитите, чиято скорост обикновено варира на ниво от 0,2% -1,2% от броя на възрастните червени кръвни клетки. Средно при повечето хора броят на незрелите червени кръвни клетки обикновено е 0,7% от общия брой на напълно зрелите кръвни клетки. Ако броят на ретикулоцитите надвишава максимално допустимата норма с 10% или повече, човек развива ретикулоцитоза - заболяване, придружено от редовно остро кървене и хемолитична анемия.

При преброяване на ретикулоцитите (нормата при децата обикновено е висока), струва си да се следи техният брой да не надвишава граничните стойности, типични за възрастни. Стандартите също зависят от пола, тъй като при жените 2,07% незрели еритроцити все още се считат за приемлив параметър, а при мъжете тази цифра не трябва да надвишава 1,92%.

В случаите, когато нивото на ретикулоцитите е значително повишено, това показва наличието на такива нарушения в организма като малария и таласемия, полицитемия и хипоксия, анемия, всички видове хемолитични синдроми, но такива показатели са възможни и при лечение с цианокобаламин. Ако нивото на незрелите еритроцити се понижи, човек може да получи апластична и хипопластична анемия, всички видове бъбречни заболявания и микседем, както и разпространението на туморни метастази в костите.

За да се диагностицира тежестта на анемията, е необходимо да се изчисли "ретикулоцитният индекс", който се изчислява като съотношението на процента на ретикулоцитите и нормалните стойности на хематокрита, умножени по броя на дните, необходими на незрелите клетки да навлязат в периферната кръв. Ако полученият индекс не надвишава две, индикаторът показва хипопролиферативен компонент на анемията, а ако надвишава две, показва вероятността от повишено образуване на червени кръвни клетки.

fb.ru

Изследване на кръвта. Анализ на кръвта

Определяне на концентрацията на хемоглобина

Сред методите за определяне на хемоглобина най-широко се използват методи, базирани на колориметрия, т.е., определяне на интензитета на цвета, има запечатани стъклени епруветки с цветен стандарт (солен хематин в глицерин) 0,1% разтвор на солна киселина е първо се излива в централната епруветка до знака, съответстващ на 2 или 3 g%, след което внимателно се добавя (точно!) 0,02 ml кръв, взета от пръста със специална пипета, прикрепена към хемометър. Повърхностният слой киселина се измива с пипета и след смесване на кръвта и киселината със стъклена пръчка се оставя за 5 минути, за да се образува хематин хидрохлорид. След това чрез добавяне на дестилирана вода и непрекъснато разбъркване с клечка цветът на течността в централната тръба отговаря напълно на стандартите. Концентрацията на хемоглобина съответства на нивото на разтвора върху долния менискус. Концентрацията на хемоглобин може да бъде изразена или в g% хемоглобин, или в конвенционални единици. За 100 единици се приемат 16,67 g хемоглобин.

Концентрацията на хемоглобин в кръвта при жените е от 11,7 до 15,8 g ° / o или от 117 до 158 g / l, при мъжете - от 13,3 до 18 g% или от 133 до 180 g / l.

Вземане на кръв за преброяване на формираните елементи

За преброяване на формираните елементи кръвта се разрежда в смесители (мелангери) или епруветки, което напоследък се използва по-широко.За преброяване на червените кръвни клетки кръвта се разрежда 200 пъти с 3% разтвор на натриев хлорид; ако използваме хемометърна пипета за вземане на кръв, чийто обем е 0,02 ml, тогава трябва да вземем 4 ml разтвор на натриев хлорид.За да се преброят левкоцитите, кръвта се разрежда 20 пъти, следователно 0,02 ml кръв и 0,38 ml 3% се вземат оцветен метиленово син разтвор на оцетна киселина, който е необходим, за да предизвика разрушаване на червените кръвни клетки.Вземането на кръв трябва да се извършва с голяма точност, тъй като при такива малки обеми, навлизането на въздушно мехурче или остатък от кръв върху извън пипетата води до увеличаване на грешката на определяне Преди да напълните камерата, е необходимо да избършете полираното стъкло в камерата, така че да се появят ирисцентни пръстени Преди да напълните камерата, разредената кръв се смесва добре, тъй като клетките утаяват се по стените на епруветката или ампулите на миксера, след което капка кръв се поставя под шлифованото полирано стъкло на камерата и се оставя за 1 мин. в покой, за да се утаят клетките.

Преброяването на образуваните елементи се извършва при ниско увеличение на микроскопа (обектив 8Х, окуляр 15Х или 10Х) в затъмнено зрително поле.

Еритроцитите се броят в 5 големи квадрата (16x5 = 80 малки квадрата), разположени в различни части на камерата, можете да вземете квадрати, разположени диагонално.Броят се еритроцитите, които лежат вътре в квадрата и тези, които са в горната и лявата му страна; еритроцитите, разположени от долната и дясната страна, не се броят, тъй като те вече принадлежат към други квадрати.

След като преброят броя на еритроцитите (А) в 5 големи квадрата, те намират средноаритметичния брой на еритроцитите в един малък квадрат А / 80, т.е. в 1/4000 μl. Следователно, за да намерим броя на червените кръвни клетки в 1 µl, трябва да умножим броя, получен от деленето, по 4000 и по 200 (разреждане).

Така получаваме следната формула:

X=A*4000*200/80,

където X е броят на еритроцитите в 1 µl, а A е броят на еритроцитите в 5 големи квадрата.Ако преброим еритроцитите в 5 големи квадрата и разредим кръвта 200 пъти, тогава общият фактор за числото A ще бъде 10 000.

Нормалното съдържание на червени кръвни клетки в кръвта на жените е 4-5 * 106, мъжете - 4,5-5,5 * 106.

Левкоцитите се преброяват в 100 големи квадрата, не разделени на малки, което отговаря на 1600 малки. По този начин броят на левкоцитите, намерени в 100 квадрата, се разделя на 1600, умножава се по 4000 и 20 (разреждане). В този случай, за да се получи резултатът, е достатъчно да се умножи броят на преброените левкоцити по 50. Нормалното съдържание на левкоцити в кръвта е 5 * 103 - 8 * 103 в 1 μl.

Цветен индикатор на кръвта. Цветният показател на кръвта е число, което показва средното насищане на хемоглобина на отделен еритроцит от дадена кръв в сравнение с насищането на отделен еритроцит от нормална кръв.За нормалното съдържание на хемоглобин се приемат 100 единици, а нормалният брой на еритроцитите са 5 000 000. Стойността на цветния индекс на здрави хора варира от 0,9 до 1,1 Изследване на периферна кръвна намазка. В кръвните натривки се изследва морфологията на еритроцитите и се взема предвид левкоцитната формула, тоест процентното съотношение между различните видове левкоцити.За да бъде изследването успешно, трябва да се извърши подготовката, фиксирането и оцветяването на кръвните натривки. За да подготвите цитонамазка, повърхността на чисто, обезмаслено стъкло на разстояние 0,5 cm от ръба на предметното стъкло, те докосват капка кръв на мястото на пункцията на пръста и след това полирано покривно стъкло се поставя под ъгъл от 45 ° спрямо предметното стъкло и първото се довежда до капката кръв, така че да се разпространи по задния ръб на покривното стъкло и движението на белите дробове, без рязък натиск, прави намазка. Намазката трябва да завършва върху предметното стъкло с „метлица“. Намазката се изсушава на въздух, когато изсъхне, добрата, тънка намазка има жълт цвят.

С прост, заострен молив в средата на намазката се вписват името на пациента и датата на изследването, след което петната се фиксират в метилов алкохол за най-малко 5 минути и се оцветяват по метода на Романовски-Гимза.

Боята се състои от смес от киселинни (еозин) и основни (Azur II) багрила. Този метод на оцветяване прави възможно диференцирането на клетките. Първата стъпка при работа с цитонамазка е да се оцени морфологията на червените кръвни клетки. За да направите това, изберете тънко място, където клетките лежат отделно, а не под формата на колони с монети. Нормалните еритроцити са безядрени, розови клетки, закръглени, приблизително със същия диаметър - 7,5 микрона, еритроцитите имат формата на двойновдлъбнат диск, следователно в намазката имат просветление в центъра и по-интензивно оцветена периферия.

(модул direct4)

Приготвяне на гъста капка

За изследване на кръвта за Plasmodium malaria се прави дебела капка. Кръвта се взема по обичайния начин от пулпата на пръста. Капка кръв, излизаща от мястото на инжектиране, се докосва с повърхността на предметно стъкло. 2-3 капки нанесени отделно се намазват с ъгълчето на друго стъкло. Сухото петно ​​се излива (без фиксиране) с боята на Романовски за 30-40 минути, след което оцветената капка се изплаква внимателно с вода и препаратът се изсушава в изправено положение.

Примерни данни за анализ

Повишен брой еритроцити и хемоглобин в кръвта може да бъде при заболяване на червените кръвни клетки - еритремия, тогава броят на еритроцитите достига до 9-106 или повече, а броят на червените кръвни клетки се увеличава в резултат на заболявания на други органи и системи (с декомпенсирана дифузна пневмосклероза, емфизем, някои видове вродени сърдечни дефекти, съдова склероза на системата на белодробната артерия, десен сърдечен дефект, циркулаторна недостатъчност III степен и др.). Този симптом се нарича еритроцитоза.

Морфологично променени еритроцити се появяват при хиперхромна (мегалобластна) анемия. В същото време в кръвта се откриват големи еритроцити с високо съдържание на хемоглобин (макроцити), ембрионални еритроцити (мегалобласти), които обикновено не се намират в периферната кръв. Морфологията на еритроцитите също се променя при хипохромна анемия: появяват се малки еритроцити (микроцити), променени по форма (пойкилоцити) и еритроцити с ниско съдържание на хемоглобин (хипохромни еритроцити).

Броят на левкоцитите

При изчисляване на левкоцитната формула е необходимо да се определят структурните характеристики на цитоплазмата и клетъчните ядра. Принадлежността на клетката към една или друга група се определя въз основа на съвкупността от всички признаци на цитоплазмата и ядрото.При изчисляване на формулата трябва да се придържате към същия метод за движение на стъклото под микроскоп. Най-често методът на микроскопията се използва на 4 места от намазката. Известно е, че левкоцитите са разпределени неравномерно в намазката: по краищата има по-малко лимфоцити, отколкото в средата, а в края на намазката има повече моноцити, отколкото в началото. Ето защо, когато изчислявате левкоцитната формула, най-добре е да се движите по прекъсната линия, като преброите всички срещнати клетки.Преброяването на 200 клетки е практически минимум за рутинни клинични изследвания.Левкоцитите на периферната кръв, в зависимост от наличието или отсъствието на грануларност в цитоплазма, се делят на гранулоцити (неутрофилни, еозинофилни, базофилни) и агранулоцити (моноцити и лимфоцити).

Неутрофили. Размерът на клетката е 10-12 микрона. Цитоплазмата на клетките е бледорозова на цвят с фина, обилна, лилава зърнистост. Обикновено в кръвта се откриват прободни (2-4%) и сегментирани (60-65%) неутрофили.

Еозинофили. Клетките са със същия размер като неутрофилите, понякога малко по-големи, цитоплазмата е изпълнена с големи жълтеникаво-червени гранули, ядрото обикновено има два сегмента със същия размер. Еозинофилите са нормални 2-4%.Базофили. Това е най-малкият гранулоцит по размер. Ядрото е неправилно, многоделно, заема почти цялата клетка, бледорозовата цитоплазма съдържа големи тъмновиолетови гранули. Базофилните гранули се разтварят във вода и понякога, в резултат на измиване при оцветяване на препарата, на мястото на гранулите остават безцветни клетки. Нормално базофилите са 0,1%.Лимфоцити. Размерът на клетката варира от 7 до 10 µm. Ядрото е компактно, закръглено или бобовидно. Цитоплазмата на клетките е бледо синя със зона на просветление около ядрото (перинуклеарна), понякога в цитоплазмата има отделни азурофилни зърна с червено-виолетов цвят. В периферната кръв 20-35% от лимфоцитите са нормални Моноцити. Размерът на клетката варира от 12 до 20 µm. Ядрото често е подковообразно, понякога с неправилна форма. Цитоплазмата е по-обширна от тази на лимфоцитите, пепеляво-синя на цвят с фина, нежна, червеникава зърнистост.Моноцитите са нормални 6-8%.

Повишеното съдържание на левкоцити в кръвта се нарича левкоцитоза, а намаленото съдържание се нарича левкопения.

Оцветяване и броене на ретикулоцити

Ретикулоцитите са млади червени кръвни клетки с тънка синя ретина или зърнистост в цитоплазмата. Тези клетки характеризират активността на червената хематопоеза.За откриване на броя на ретикулоцитите се използва методът на суправитално (доживотно) оцветяване. Върху предметни стъкла в абсолютен алкохол се правят петна от брилянтно крезил синя боя, след което се прави петно ​​от кръв върху стъклописа по обичайния начин и се поставя във влажна камера за 3-5 минути, след което се изсушава и се микроскопира с потапящ обектив. Обикновено се откриват 8-10 ретикулоцити на 1000 еритроцита, техният брой обикновено се изразява като процент (0,8-1%) или в ppm (8-10% o) по отношение на еритроцитите Ретикулоцитите са клетки, които характеризират повишено производство на еритроцити в костния мозък.

Те се появяват в голям процент в периферната кръв с хипохромна анемия ("злокачествена анемия"), с хемолитична анемия и други заболявания. По време на обостряне на хиперхромна анемия се наблюдава намалено съдържание на ретикулоцити и пълното им изчезване в периферната кръв.

За да се предотврати агрегацията (слепването) на тромбоцитите, се прави кожна пункция чрез капка 14% разтвор на магнезиев сулфат, нанесен върху пръста. Кръвта се смесва с магнезий и се приготвят тънки петна върху предметни стъкла, които след това се фиксират и оцветяват по Романовски в продължение на 2 часа.Определя се броят на тромбоцитите на 1000 еритроцита и като се знае броят на еритроцитите в 1 μl, броят броят на тромбоцитите в 1 μl кръв се преброява. Нормалните тромбоцити съдържат от 250 000 до 400 000.

Дефиниция на ESR

Скоростта на утаяване на еритроцитите се определя в кръв, смесена с натриев цитрат в съотношение 4: 1. Реакцията се задава в апарата на Панченков. Капилярът на Панченков се промива с натриев цитрат, след което цитратът се изтегля до марката 50, където стои буквата R (реагент) и се издухва в епруветка на Видалевски. Същият капиляр се използва за вземане на кръв два пъти до знака K (кръв) и смесването й с цитрат. Същият капиляр се напълва с кръв, смесена с цитрат до деление 0 и се поставя вертикално в статив за един час. Един час по-късно в милиметри се отбелязва стойността на плазмения стълб, образуван над утаените еритроцити, който е мярка за скоростта на утаяване на еритроцитите.Нормалната СУЕ при мъжете е 10 mm / h, при жените - 14 mm / h.

Скоростта на утаяване на еритроцитите се увеличава при възпалителни, остри и хронични заболявания, злокачествени тумори и други заболявания.

Тест за съвместимост с Rh фактор

В епруветка без цитрат се вземат 2-3 ml от кръвта на реципиента, след съсирването на кръвта съсирекът се огражда със стъклена пръчка и кръвта се центрофугира. Две капки серум от тази епруветка се нанасят в петриево блюдо, към него се добавя половин капка кръв на донора, смесва се и чашата се поставя във водна баня (42-45 °). След 10 минути чашата се изважда и се гледа на светло с леко поклащане. Появата на аглутинация ще покаже недопустимостта на това кръвопреливане.

Определяне на броя на ретикулоцитите- клиничен кръвен тест, при който се преброяват младите червени кръвни клетки, произведени от костния мозък. Проучването допълва общия кръвен тест. Преброяването на ретикулоцитите се извършва за диференциална диагноза на различни видове анемия, оценка на функционирането на костния мозък и далака, проследяване на състоянието на пациенти с дефицит на желязо, витамин В12 или фолиева киселина, бъбречна недостатъчност и рак. Вземането на кръв за изследване се извършва от вена или капиляри. Броят на ретикулоцитите се определя чрез метода на поточна цитометрия. Референтните стойности за мъжете са 23-70 хиляди / μl, за жените - 17-63,8 хиляди / μl. Сроковете на анализа не надвишават 1 работен ден.

Ретикулоцитите са предшественици на еритроцитите. Те се произвеждат от костния мозък по време на диференциацията и деленето на стволовите клетки. Повечето от ретикулоцитите се намират в костния мозък, вече зрелите еритроцити навлизат главно в кръвния поток. Делът на ретикулоцитите в кръвта е около 0,5-2%. При извършване на анализа се определя броят на клетките от този тип и техният процент от общия брой червени кръвни клетки. Резултатите ни позволяват да оценим производството на червени кръвни клетки в костния мозък, за да идентифицираме степента на активност на този процес.

Тялото поддържа стабилно ниво на червени кръвни клетки в кръвта. С намаляване на техния брой в резултат на хемолиза, нарушен синтез и кървене се активират компенсаторни механизми за възстановяване на нормалните концентрации. Чрез промяна на нивото и процента на ретикулоцитите може да се установи увеличаване на производството на червени кръвни клетки в костния мозък или инхибиране на този процес. Ако костният мозък функционира нормално, тогава загубата на червени кръвни клетки води до последващо увеличаване на техния брой и броя на ретикулоцитите. Намаляване на нивото на тези типове клетки възниква, когато червеният костен мозък е увреден от тумор, метастази, лъчева терапия и химиотерапия. За анализа на ретикулоцитите биоматериалът е капилярна или венозна кръв. Изследването се извършва с помощта на хематологичен анализатор чрез поточна цитометрия. Резултатите се използват в общата терапевтична практика, в хематологията, педиатрията, инфекциозните болести и хирургията.

Показания

Тестът за ретикулоцити се използва за оценка на производството на червени кръвни клетки от костния мозък. Резултатите от изследването ни позволяват да диференцираме различните видове анемия. Според нивото на ретикулоцитите се делят на хипорегенеративни и регенеративни. В първия случай параметрите на изследването са намалени, производството на червени кръвни клетки е недостатъчно и функциите на костния мозък са потиснати. Тази група включва хемолитична анемия при хронични заболявания, обща интоксикация, кахексия, дефицит на протеини, желязо, витамини. Регенеративната анемия е придружена от компенсаторно повишаване на нивото на ретикулоцитите на фона на повишено разрушаване или загуба на еритроцити. Тази група включва постхеморагични и някои хемолитични анемии. Анализът на ретикулоцитите може да се използва за определяне на тежестта на анемията, след което неговите резултати се допълват от показатели за нивото на еритроцитите, хемоглобина и индексите на еритроцитите.

Определянето на нивото на ретикулоцитите е показано при намалено ниво на червени кръвни клетки, хемоглобин, с оплаквания от честа умора, главоболие, задух, кръв в урината или изпражненията. При установена диагноза анемия се предписва анализ за оценка на ефективността на лечението. Особено често се използва за наблюдение на анемия, причинена от дефицит на желязо, витамин В12 или фолиева киселина, както и развиваща се на фона на бъбречна недостатъчност, хронични заболявания. За да се оцени функцията на костния мозък, е показан ретикулоцитен тест за повишен брой червени кръвни клетки, за да се определи причината за полицитемия.

Кръвният тест за ретикулоцити не се използва за поставяне на диагноза. Основната му цел в клиничната практика е да планира по-нататъшни диагностични процедури и да следи успеха на терапията. Броят на ретикулоцитите в кръвта е относително стабилен, следователно, с намаляване на нивото на еритроцитите и хематокрита, показателите за анализ стават изкуствено високи. Това може да се избегне чрез изчисляване на ретикулоцитния индекс - абсолютния брой на ретикулоцитите (процентът на ретикулоцитите, умножен по хематокритния индекс). Друга особеност на това изследване е, че резултатите показват скорошна активност на костния мозък, тъй като незрели червени кръвни клетки циркулират в кръвта в продължение на 2 дни.

Подготовка за анализ и събиране на материал

Препоръчително е да вземете кръв за анализ на ретикулоцити сутрин, на празен стомах. Минималният интервал между хранене и процедурата е 3-4 часа. Най-малко един ден предварително е необходимо да се изоставят интензивните физически натоварвания, консумацията на алкохол и да се избягва излагането на стресови фактори. Когато предписвате анализ, си струва да информирате лекаря за използваните лекарства, тъй като някои лекарства влияят върху нивото на ретикулоцитите в кръвта. 30 минути преди процедурата за вземане на проби трябва да спрете да пушите, да изключите физически и емоционален стрес.

Нивото на ретикулоцитите се определя в капилярна или венозна кръв. Съответно, оградата се прави от безименния пръст или от кубиталната вена. Кръвта се поставя в епруветка с антикоагулант и се изпраща в лабораторията. В момента хематологичните анализатори се използват почти навсякъде за преброяване на ретикулоцитите. Изследването се извършва чрез поточна цитометрия - клетките в поток от течност се движат през много тесен капиляр и се вземат предвид при лазерно облъчване. Срокове за извършване на анализа - 1 ден.

Нормални стойности

Резултатите от анализа за ретикулоцити показват абсолютния брой клетки на единица обем кръв и процента от общия брой еритроцити. Обикновено нивото на ретикулоцитите при жени варира от 17 * 109 до 63,8 * 109 клетки / l, при мъже - от 23 * 109 до 70 * 109 клетки / l. Делът на клетките от този тип в общия брой на еритроцитите се променя с възрастта:

• от раждането до 2 седмици - от 0,15 до 1,5%;
• от 2 седмици до 1 месец - от 0,45 до 1,4%;
• от 2 до 6 месеца - от 0,25 до 0,9%;
• от 6 месеца до 2 години - от 0,2 до 1%;
• от 2 до 6 години - от 0,2 до 0,7%;
• от 6 до 12 години - от 0,2 до 1,3%;
• от 12 до 18 години - от 0,12 до 2,05% за момичета, от 0,24 до 1,7% за момчета;
• от 18 години - от 0,59 до 2,07% за жените, от 0,67 до 1,92% за мъжете.

Физиологично повишаване на нивото на ретикулоцитите в кръвта възниква при кислороден глад, причинен от изкачване на голяма височина или спускане под вода, продължителен престой в непроветрено помещение, пушене и пиене на алкохол. В допълнение, повишаването на концентрацията на тези клетки понякога се определя при бременни жени и се счита за вариант на нормата.

Вдигам ниво

Причината за повишаване на нивото на ретикулоцитите в кръвта може да бъде кървене. Концентрацията на еритроцитите намалява, за да се възстанови, костният мозък увеличава производството на техните предшественици. При остро кървене броят на ретикулоцитите се увеличава на 3-4-ия ден, при хронично кървене той остава постоянно повишен през цялото време. При заболявания, придружени от хемолиза (разрушаване на червените кръвни клетки), броят на ретикулоцитите значително надвишава нормата, понякога отклоненията достигат 300%. Най-често срещаните патологии от тази група са наследствени дефекти на еритроцитите, тяхното автоимунно разрушаване и токсично увреждане при малария. Други причини за повишаване на нивото на ретикулоцитите могат да бъдат полицитемия, възпалителни процеси, рак на костния мозък или разпространението на метастази в него, възстановяване на функцията на костния мозък след радиация и химиотерапия. При лечението на анемия нормализирането на концентрацията на ретикулоцитите показва успеха на терапевтичните мерки.

Намаляване на нивото

Причината за намаляване на нивото на ретикулоцитите в кръвта може да бъде анемия, причинена от дефицит на желязо, витамин В12 или фолиева киселина. В такива случаи производството на кръвни клетки е намалено поради липса на "строителен материал". Друга причина за намаляване на нивото на ретикулоцитите е анемията, която се развива на фона на лезии на костния мозък или инхибиране на неговите функции. Промени от този тип се определят от алкохолна интоксикация, намалена активност на щитовидната жлеза, хронични инфекции, автоимунни патологии, бъбречни заболявания, излагане на токсични вещества, включително лекарства, радиация.

Лечение на отклонения от нормата

В клиничната практика най-често се предписва тест за ретикулоцити след пълна кръвна картина с намаляване на червените кръвни клетки и хемоглобина. Нивото на ретикулоцитите ви позволява да оцените функциите на костния мозък, синтеза на червени кръвни клетки, да определите вида на анемията и да наблюдавате ефективността на нейното лечение. Ако резултатите от изследването се отклоняват от нормалните, трябва да потърсите съвет от Вашия лекар - общопрактикуващ лекар, педиатър, хематолог, хирург. За да се предотврати влиянието на физиологичните фактори върху броя на ретикулоцитите, е необходимо да се изключат ситуации, които причиняват кислородно гладуване - изкачване на височина или спускане под вода, продължително излагане на газова или задушна стая, пушене, пиене на алкохол.