Procedura oznaczania grup krwi systemem ABO polega na identyfikacji antygenów A i B w erytrocytach przy użyciu przeciwciał wzorcowych oraz zastosowaniu aglutynin w osoczu lub surowicy badanej krwi z erytrocytami wzorcowymi. Technika ta została opracowana na początku XX wieku i nadal jest aktywnie stosowana w medycynie. Oznaczanie antygenów A i B odbywa się dzięki cyklonom anty-A i anty-B.

Podstawowe koncepcje

U dawców oznacza się zawsze nie tylko antygeny w erytrocytach, ale także aglutyniny w surowicy (osoczu) przy użyciu standardowych erytrocytów. Jako biomateriał wykorzystuje się krew żylną. Przed badaniem należy zrezygnować z tłustych potraw na dzień przed badaniem i nie palić pół godziny przed badaniem. Grupy krwi określa się dwukrotnie: najpierw na oddziale medycznym, gdzie przygotowywany jest materiał, a następnie potwierdzane badaniami w laboratorium.

Podstawowym badaniem stosowanym w transfuzjologii jest oznaczanie grup krwi metodą ABO. Ponadto niektóre zwierzęta, na przykład szympansy, goryle i bonobo, mają podobny układ grup krwi.

Historia odkrycia

W nauce panuje powszechnie przyjęta opinia, że ​​metodę oznaczania grup krwi za pomocą systemu ABO po raz pierwszy zidentyfikował austriacki naukowiec Karl Landsteiner w 1900 roku. Następnie opisał w swojej pracy trzy rodzaje antygenów. Za to trzydzieści lat później otrzymał Nagrodę Nobla w dziedzinie medycyny i fizjologii. Z uwagi na fakt, że wcześniej nie było ścisłych powiązań między naukowcami, później ustalono, że czeski serolog Jan Jansky, niezależnie od badań K. Landsteinera, jako pierwszy opisał cztery grupy krwi człowieka, jednak jego badania nie znane szerokiemu gronu odbiorców. Obecnie w Rosji i republikach byłego ZSRR stosowana jest klasyfikacja opracowana przez J. Jansky'ego. W USA W. L. Moss stworzył podobne dzieło w 1910 roku.

Metoda oznaczania grup krwi według systemu ABO z wykorzystaniem zolikonów

Grupę krwi należy oznaczyć w pomieszczeniu o dobrym oświetleniu, utrzymując temperaturę w przedziale od 15 do 25 stopni Celsjusza, gdyż odchylenia od tej normy mogą mieć wpływ na wyniki badania. Na tabliczce lub tabliczce zapisane są inicjały i nazwisko pacjenta. Od lewej do prawej lub w okręgu stosuje się standardowe oznaczenia grup (O(I), A(II), B(III)). Odpowiednie serum umieszcza się pod nimi kropla po kropli za pomocą oddzielnych pipet dla każdego rodzaju. Następnie dodaje się do nich krew pacjenta. Materiał do badania pobiera się z płatka ucha lub palca. Wymaga tego technika oznaczania grupy krwi za pomocą systemu ABO.

Legalne jest również używanie czerwonych krwinek znajdujących się w probówce po utworzeniu się skrzepu. Konieczne jest, aby ilość surowicy była dziesięciokrotnie większa niż ilość dodanej krwi. Następnie krople miesza się ze szklanymi prętami (oddzielnie dla każdego). Przez pięć minut delikatnie potrząsając płytką, obserwuj pojawienie się reakcji hemaglutynacji. Objawia się to pojawieniem się małych czerwonych grudek, które następnie łączą się w większe. Serum w tym momencie niemal całkowicie traci swój kolor.

Aby wyeliminować fałszywą hemaglutynację prostych zrostów czerwonych krwinek, należy po trzech minutach dodać jedną kroplę soli fizjologicznej i sprawdzić, czy aglutynacja się utrzymuje. Jeśli tak, to jest to prawda. To wszystko, oznaczanie grup krwi według systemu ABO zostało zakończone.

Interpretacja wyników

W rezultacie można zaobserwować cztery reakcje:

• aglutynacja nie występuje z żadną surowicą - grupa pierwsza O(I);
• reakcja wystąpiła w przypadku surowic I(ab) i III(a) – druga grupa A(II);
• aglutynacja zachodzi z surowicami I(ab) i II(b) - trzecia grupa B(III);
• jeśli reakcja zachodzi z trzema surowicami, należy przeprowadzić dodatkową procedurę z odczynnikami grupy AB (IV), które są standardowe; jeśli w takiej kropli nie ma aglutynacji, możemy przyjąć, że jest to 4. grupa krwi AB (IV).

Metoda ekspresowa dla współczynnika Rh

Metoda oznaczania grup krwi przy pomocy systemu ABO polega na jednoczesnym oznaczaniu czynnika Rh (Rh).

Powierzchnia płytki jest wstępnie zwilżona i na niej napisane są „surowica kontrolna” i „surowica przeciw rezusowi”. Następnie pod napisy umieszcza się jedną lub dwie krople potrzebnych odczynników i dodaje do nich analizowany materiał. Można do tego celu wykorzystać także krew z palca (w ilości odpowiadającej objętości surowicy) lub czerwone krwinki pozostające na dnie probówki po pojawieniu się skrzepu (połowa objętości surowicy). Wybór materiału nie ma wpływu na efekt końcowy. Następnie krew i surowicę miesza się suchą pałką szklaną, po czym reakcję odczekuje się przez pięć minut. Aby wyeliminować fałszywe odczyty, po trzech-czterech minutach dodaje się izotoniczny roztwór chlorku sodu (zaledwie kilka kropli). Oznaczanie grupy krwi według układów ABO i Rh przeprowadza się bardzo często.

Jeśli nastąpi aglutynacja czerwonych krwinek w kropli surowicy, oznacza to dodatnią krew Rh. Według statystyk Rh+ występuje u 85% światowej populacji. Jego brak pozwala mówić o przynależności Rh-ujemnej. Jeśli w surowicy kontrolnej pojawi się aglutynacja, oznacza to, że stała się ona niezdatna do użytku. Niestety algorytm wyznaczania grupy krwi za pomocą systemu ABO nie zawsze działa idealnie.

Jakie błędy można popełnić stosując tę ​​technikę?

Niedokładności w ustaleniu, czy krew należy do określonej grupy, wynikają z następujących powodów:

• Techniczny.
• Specyficzność biologiczna badanej krwi.
• Niższość standardowych surowic i erytrocytów.

Błędy techniczne

Możliwe błędy przy określaniu grupy krwi ABO metodą krzyżową:

Błędy specyficzności biologicznej

Błędy związane ze specyfiką biologiczną analizowanej krwi dzielą się na dwa rodzaje.

• W zależności od właściwości czerwonych krwinek.
• Błędy spowodowane właściwościami biologicznymi serum.

Przyjrzyjmy się każdemu typowi bardziej szczegółowo.

W zależności od właściwości czerwonych krwinek

• Późna aglutynacja, którą można wytłumaczyć „słabymi” formami czerwonych krwinek i antygenów. Aby uniknąć błędów, konieczne jest określenie grupy krwi dawców i biorców za pomocą standardowych czerwonych krwinek. Aglutynogen A2 należy identyfikować powtarzając badanie z innymi rodzajami odczynników i innymi naczyniami szklanymi, wydłużając czas rejestracji reakcji.
• „Panaaglutynacja” („autoaglutynacja”) to zdolność krwi do wykazywania tej samej reakcji o niespecyficznym charakterze ze wszystkimi surowicami, łącznie z własną. Po pięciu minutach nasilenie takiej aglutynacji słabnie, chociaż powinno wzrosnąć. Podobne przypadki obserwuje się u chorych na raka, u pacjentów z oparzeniami itp. Jako kontrolę należy ocenić przejaw aglutynacji analizowanych czerwonych krwinek w standardowej surowicy czwartej grupy i roztworze soli fizjologicznej. W przypadku „panaglutynacji” grupę krwi określa się w wyniku potrójnego przemywania czerwonych krwinek. Jeżeli nie daje to pożądanego rezultatu, warto ponownie pobrać próbkę krwi do ogrzanej przed zabiegiem probówki i umieścić próbkę w pojemniku termicznym, aby pomóc utrzymać temperaturę 37 stopni Celsjusza lub wyższą. Następnie należy zabrać go do laboratorium, gdzie utrzymuje się powyższą temperaturę i stosuje się ogrzany roztwór soli, płytkę i odczynniki.

• Czasami czerwone krwinki analizowanej krwi układają się jak „kolumny monet” i można je pomylić z aglutynianami. Jeśli dodasz dwie krople roztworu izotonicznego i delikatnie potrząśniesz płytką, czerwone krwinki przesuną się na właściwe miejsce.
• Aglutynacja niepełna lub mieszana, występująca u pacjentów z grupy drugiej, trzeciej i czwartej w wyniku przeszczepienia szpiku kostnego lub w pierwszych trzech miesiącach po przetoczeniu krwi 0(I).

Ze względu na właściwości biologiczne serum

Błędy związane z użyciem wadliwych standardowych czerwonych krwinek i surowic

Słabe surowice, których data ważności minęła lub których miano jest mniejsze niż 1:32, są zdolne do wytwarzania słabej i późnej aglutynacji. Stosowanie takich odczynników jest niedopuszczalne.

Stosowanie nienadających się do użytku standardowych erytrocytów lub surowic, przygotowanych w niesterylnych warunkach i niewystarczająco zakonserwowanych, prowadzi do pojawienia się aglutynacji „bakteryjnej”, która ma charakter niespecyficzny.

Istnieje wiele popularnych założeń na temat grup krwi ABO, które pojawiły się zaraz po ich odkryciu w różnych kulturach świata. Na przykład w latach 30. ubiegłego wieku w Japonii i niektórych innych krajach zyskała popularność teoria łącząca grupę krwi z tym lub innym typem osobowości. Podobne teorie są nadal popularne.

Istnieje również opinia, że ​​osoba z grupą A jest podatna na ciężkiego kaca, O wiąże się z dobrymi zębami, a grupa A2 wiąże się z najwyższym poziomem IQ. Ale takie twierdzenia nie zostały udowodnione naukowo.

Przeprowadziliśmy badania oznaczania grup krwi według systemu ABO z wykorzystaniem surowic wzorcowych.

W dzisiejszych czasach medycyna osiągnęła wyżyny. Lekarze są w stanie przeprowadzać długie operacje i ratować ludzi nawet z najbardziej pozornie beznadziejnych sytuacji pod względem przeżycia. Jednak w takich przypadkach trzeba się zmierzyć z problemem konieczności transfuzji krwi. Przez długi czas nie było to możliwe ze względu na bardzo szybką śmierć pacjentów. Ale problem ten został rozwiązany poprzez odkrycie koncepcji grup krwi, a raczej wykrycie antygenów na erytrocytach i, z kolei, przeciwciał w osoczu krwi.

Na początku XX wieku australijski lekarz i naukowiec pracujący na pół etatu K. Landsteiner odkrył obecność antygenów i przeciwciał we krwi. Antygeny znajdują się na powierzchni czerwonych krwinek. Są 2 ich rodzaje. Dla uproszczenia biolodzy oznaczyli je jako A i B. Z kolei przeciwciała zawarte są w osoczu krwi i nazywane są α i β. Jeśli A jest połączone z α, a B z β, rozpocznie się proces krzepnięcia krwi. Reakcja ta nazywana jest hemaglutynacją.

Zatem z dostępnych zestawów antygenów i przeciwciał można wytworzyć 4 rodzaje krwi, które przedstawiono w poniższej tabeli:

Ważny! W zależności od rodzaju krwi dawcy przekazanej do transfuzji, krew pacjenta krzepnie lub nie. Pierwszy przypadek jest śmiertelny.

Sero za reakcję

Obecnie istnieje dość duża liczba sposobów określenia grupy krwi. Ale większość z nich jest przeznaczona do analiz w dużych laboratoriach. Jednak nawet jeśli jesteś w małej wiosce lub w miejscu, gdzie nie ma możliwości skontaktowania się z tego typu placówkami, nadal istnieje możliwość ustalenia swojej grupy krwi.

Oznaczenie grupy krwi odbywa się za pomocą czterech specjalnych surowic wzorcowych, które zostaną wykonane z krwi ludzkiej. Są dostępne w butelkach lub ampułkach o pojemności 2-5 ml i odpowiadają różnym grupom krwi:

1. 0. Posiada białą etykietę i jest przezroczysty.
2. A. Niebieska ciecz. Na butelce naniesione są dwa niebieskie paski.
3. B. Jasnoróżowy płyn. Na butelce znajdują się trzy paski tego samego koloru.
4. AB. Żółty płyn. Butelka posiada 4 paski tego samego koloru.

Ważny! W rzeczywistości odczynniki te są bezbarwne w momencie produkcji. Są specjalnie pomalowane, aby nie można było ich pomylić podczas użytkowania.

Na etykietach znajdują się także:

• miano;
• Data produkcji;
• data przydatności do spożycia;
• informacje producenta;
• numer seryjny.

Jak określa się grupę krwi?

Aby określić swoją grupę krwi, będziesz potrzebować:

• płyta płaska z 8 wgłębieniami;
• szklane pręty lub pipety - 8 sztuk;
• 2 zestawy serum z różnych serii, aby wyeliminować możliwość błędów;
• zwykła lub klepsydra.

Surowice umieszcza się w 2 rzędach na płaskiej płytce, po czym pobiera się szklane pręty. Za ich pomocą badana krew jest wprowadzana do rzędów. Miesza tymi pałeczkami, po czym talerz zaczyna się kołysać. Jeśli masz szczęście, proces można monitorować w ciągu 10-30 sekund, ale lepiej robić to do 5 minut, aby wyeliminować możliwość powolnej reakcji. Następnie uzyskane wyniki są badane i rozszyfrowywane.

Uwaga! Przede wszystkim należy zwrócić uwagę na kubki, do których wlewano surowicę II i III grupy krwi. Interesująca jest obecność małych płatków, które pojawiają się w wyniku aglutynacji – zlepiania się czerwonych krwinek.

1. Jeśli nie ma płatków ani w II, ani w III, a podczas dodatkowego sprawdzenia nic się nie skoagulowało ani w I, ani w IV, oznacza to, że jest pierwsza grupa krwi.
2. Jeśli w rezultacie krzepnięcie obserwuje się wszędzie z wyjątkiem surowicy grupy II, wówczas badana krew należy do drugiej grupy.
3. Jeżeli we wszystkich próbkach z wyjątkiem surowicy grupy III obserwuje się krzepnięcie, oznacza to, że badana krew należy do grupy o tej samej nazwie.
4. Jeżeli krzepnięcie występowało we wszystkich próbkach z wyjątkiem surowicy grupy IV, analizowano grupę krwi o tej samej nazwie.

Ważny! Ściśle mówiąc, grupę krwi można określić, mając tylko surowice grup krwi 2 i 3. Jednak, jak można wywnioskować z istoty metody, duży wpływ ma czynnik ludzki. Z tego powodu jako dodatkową kontrolę wykorzystuje się surowice grupy krwi I i IV.

Po zabiegu używane przybory należy dobrze spłukać ciepłą wodą i wysuszyć. Można go następnie wykorzystać do dalszych badań.

Niedokładne wyniki i ich przyczyny

Czasami zdarza się, że skrzepy sklejonych ze sobą czerwonych krwinek nie są zbyt wyraźnie widoczne. Podczas badania często można dodać izotoniczny roztwór chlorku sodu. Eliminuje możliwość fałszywej aglutynacji, powodującej ponowne kruszenie się płatków, które nie powstały w procesie koagulacji.

Ważny! Jeżeli wynik analizy nie jest zbyt wyraźnie widoczny, należy ją powtórzyć i zbadać pod mikroskopem drobną aglutynację.

W przypadku jasno zidentyfikowanego wyniku można od razu dokładnie określić pacjentowi jego grupę krwi. W przeciwnym razie powinieneś zwrócić się do innych metod analizy.

Nie powinniśmy zapominać o możliwości wystąpienia błędów, które zwykle występują z następujących powodów:

• użycie przeterminowanej lub słabej serwatki;
• użycie zbyt dużej ilości krwi testowej w stosunku do objętości surowicy;
• reakcja trwa znacznie dłużej niż wymagają tego przepisy;
• temperatura otoczenia nie odpowiada normalnej, co powoduje aglutynację na zimno czerwonych krwinek.

Dodatkowo warto zwrócić uwagę, że w trakcie suszenia na brzegach mieszaniny surowicy i krwi testowej mogą tworzyć się ziarniste obszary, które nie mogą służyć jako wskaźniki reakcji.

Wykorzystanie wyniku w praktyce

Jak już wspomniano, oznaczenie grupy krwi przeprowadza się w celu wykluczenia śmierci podczas transfuzji krwi. Idealnie byłoby, gdyby pacjent otrzymujący krew – biorca – otrzymał transfuzję krwi tego samego rodzaju co jego własna. Jednak nie zawsze tak jest. Choćby dlatego, że przeważająca liczba osób z pierwszą grupą krwi wynosi 50%. Jednocześnie są dawcami uniwersalnymi, gdyż brakuje im aglutynogenów stymulujących proces krzepnięcia krwi.

Uwaga! Jeśli chodzi o pacjentów z grupą krwi IV, można ich nazwać biorcami uniwersalnymi, ponieważ ich organizm jest w stanie przyjąć krew dowolnej grupy. Jednocześnie ich krew nie może zostać przelana przedstawicielom innej grupy.

Aby zilustrować zgodność dawców i biorców, przedstawiamy tabelę:

Numer grupy	Dla jakich grup staje się dawcą?	Dla jakich grup staje się odbiorcą?
I	I, II, III, IV	I
II	II, IV	ja, II
III	III, IV	Ja, III
IV	IV	I, II, III, IV

We współczesnym świecie znajomość grupy krwi jest niezwykle istotna. Z punktu widzenia lekarzy od tego będzie zależeć przeżywalność pacjentów. Z punktu widzenia zwykłego człowieka jest to szansa na uratowanie życia w sytuacji awaryjnej. W związku z tym znajomość grupy krwi i, jeśli to możliwe, umieszczenie jej w paszporcie lub innych dokumentach nie będzie zbyteczne, ponieważ w każdej chwili może pojawić się ryzyko dla zdrowia i życia.

Wideo - Oznaczanie grupy krwi

Wideo - Określanie grupy krwi i współczynnika Rh

Grupy krwi AB0

Grupy krwi układu AB0 odkrył w 1900 roku K. Landsteiner, który mieszając czerwone krwinki niektórych osób z surowicą krwi innych osób odkrył, że przy niektórych kombinacjach krew krzepnie, tworząc płatki (reakcja aglutynacji). , ale w przypadku innych tak nie jest. Na podstawie tych badań Landsteiner podzielił krew wszystkich ludzi na trzy grupy: A, B i C. W 1907 roku odkryto kolejną grupę krwi.

Stwierdzono, że reakcja aglutynacji zachodzi, gdy antygeny jednej grupy krwi (nazywane są aglutynogenami), które znajdują się w czerwonych krwinkach - erytrocytach, sklejają się z przeciwciałami innej grupy (nazywa się je aglutyninami) znajdującymi się w osoczu - płynna część krwi. Podział krwi według układu AB0 na cztery grupy opiera się na fakcie, że krew może zawierać lub nie antygeny (aglutynogeny) A i B oraz przeciwciała (aglutyniny) α (alfa lub anty-A) i β (beta lub anty-B).

Pierwsza grupa krwi - 0 (I)

Grupa I - nie zawiera aglutynogenów (antygenów), ale zawiera aglutyniny (przeciwciała) α i β. Jest oznaczony jako 0 (I). Ponieważ grupa ta nie zawiera cząstek obcych (antygenów), można ją przetoczyć każdemu człowiekowi. Osoba z tą grupą krwi jest dawcą uniwersalnym.

Druga grupa krwi A β (II)

Grupa II zawiera aglutynogen (antygen) A i aglutyninę β (przeciwciała przeciwko aglutynogenowi B). Dlatego można go przetaczać tylko do tych grup, które nie zawierają antygenu B - są to grupy I i II.

Trzecia grupa krwi Bα (III)

Grupa III obejmuje aglutynogen (antygen) B i aglutyninę α (przeciwciała przeciwko aglutynogenowi A). Dlatego można go przetaczać tylko do tych grup, które nie zawierają antygenu A - są to grupy I i III.

Czwarta grupa krwi AB0 (IV)

Grupa krwi IV zawiera aglutynogeny (antygeny) A i B, ale zawiera aglutyniny (przeciwciała). Dlatego można go przetaczać tylko osobom, które mają tę samą, czwartą grupę krwi. Ponieważ jednak we krwi takich osób nie ma przeciwciał, które mogłyby skleić się z przeciwciałami wprowadzonymi z zewnątrz, można je przetoczyć krwią dowolnej grupy. Uniwersalnymi biorcami są osoby z grupą krwi IV.

Grupy krwi według systemu ABO

Metoda oznaczania grup krwi

Grupę krwi według systemu ABO określa się za pomocą reakcji aglutynacji. Obecnie istnieją trzy sposoby oznaczania grup krwi za pomocą systemu ABO:

Według standardowych surowic izohemaglutynujących;

Stosowanie przeciwciał monoklonalnych (koliklony anty-A i anty-B).

Oznaczanie grup krwi przy użyciu standardowych surowic izohemaglutynujących

Istota metody polega na wykryciu antygenów grupy A i B w badanej krwi przy użyciu standardowych surowic. Do tych celów wykorzystuje się reakcję aglutynacji. Badanie należy wykonać w pomieszczeniu dobrze oświetlonym o temperaturze 15-25°C.

Do wykonania badania potrzebne są: - Standardowe surowice izohemaglutynujące z grupy O (I), A (II), B (III) i AB (IV) z dwóch różnych serii. Z krwi dawcy w specjalnych laboratoriach przygotowywane są surowice do oznaczania grup krwi. Serum przechowujemy w lodówce w temperaturze 4 – 8°C. Termin ważności serum podany jest na etykiecie. Na etykiecie wskazane jest także miano (maksymalne rozcieńczenie surowicy, przy którym może nastąpić reakcja aglutynacji), które nie może być mniejsze niż 1:32 (dla surowicy B (III) - nie mniejsze niż 1:16/32). Serwatka powinna być przezroczysta, bez śladów zgnilizny. Dla wygody standardowe serum zabarwiono na określony kolor: O (I) - bezbarwny (szary), A (II) - niebieski, B (III) - czerwony, AB (IV) - jasnożółty. Kolory te towarzyszą wszystkim etykietom produktów krwiopochodnych, które mają przynależność grupową (krew, czerwone krwinki, osocze itp.).

Talerze z białej porcelany, emalii lub inne o zwilżalnej powierzchni, oznaczone według grup krwi.

Izotoniczny roztwór chlorku sodu.

Igły, pipety, pręciki szklane (szkiełka).

Technika reakcji.

1. Pod odpowiednimi oznaczeniami grupy krwi na płytkę (płytkę) nanosi się surowicę grup I, II, III w objętości 0,1 ml (jedna duża kropla o średnicy około 1 cm). Aby uniknąć błędów, stosuje się dwie serie surowic, gdyż jedna z serii może mieć niską aktywność i nie dawać wyraźnej aglutynacji. W ten sposób otrzymuje się 6 kropli, tworząc dwa rzędy po trzy krople w następującej kolejności od lewej do prawej: 0 (I), A (II), B (III).

2. Krew do badań pobiera się z palca lub żyły. Za pomocą suchego szklanego pręta nanosi się kolejno 6 kropli krwi testowej, wielkości mniej więcej 0,01 ml główki szpilki (mała kropla), na płytkę w 6 punktach, każdą obok kropli standardowej surowicy. Ponadto ilość surowicy powinna być 10 razy większa niż ilość badanej krwi. Następnie dokładnie je miesza się za pomocą szklanych prętów o zaokrąglonych krawędziach.

Możliwa jest również prostsza technika: na płytkę nanosi się jedną dużą kroplę krwi, następnie pobiera się ją narożnikiem szklanego szkiełka i przenosi się każdą kroplę surowicy, dokładnie mieszając ją z ostatnią. W takim przypadku krew pobiera się każdorazowo czystym rogiem szklanki, uważając, aby krople się nie pomieszały.

3. Po wymieszaniu kropli okresowo potrząsaj płytką. Aglutynacja rozpoczyna się w ciągu pierwszych 10-30 sekund. Jednak obserwację należy prowadzić przez co najmniej 5 minut, ponieważ możliwa jest późniejsza aglutynacja, na przykład z czerwonymi krwinkami grupy A 2 (II).

4. Do kropli, w których nastąpiła reakcja, dodać jedną kroplę izotonicznego roztworu chlorku sodu, po czym ocenić wyniki reakcji.

Reakcja aglutynacji może być dodatnia lub ujemna

Jeżeli reakcja jest pozytywna, w ciągu pierwszych 10-30 sekund w mieszaninie obserwuje się drobne czerwone ziarenka (aglutynaty), składające się z sklejonych czerwonych krwinek, widoczne gołym okiem. Małe ziarna stopniowo łączą się w większe ziarna lub nawet płatki o nieregularnym kształcie. W przypadku reakcji negatywnej kropla pozostaje jednolicie zabarwiona na czerwono.

Wyniki reakcji dwóch serii kropli z surowicą tej samej grupy muszą się pokrywać.

O przynależności badanej krwi do odpowiedniej grupy decyduje obecność lub brak aglutynacji podczas reakcji z odpowiednią surowicą.

Jeżeli wszystkie surowice dały reakcję dodatnią, to badana krew zawiera oba aglutynogeny – A i B. Jednak w takich przypadkach, aby wykluczyć nieswoistą reakcję aglutynacji, należy wykonać dodatkowe badanie kontrolne krwi testowej z surowicą wzorcową grupy AB (IV).

Oznaczanie grup krwi za pomocą przeciwciał monoklonalnych

Do określenia grup krwi tą metodą stosuje się przeciwciała monoklonalne, które uzyskuje się stosując biotechnologię hybrydom.

Hybrydoma jest hybrydą komórkową utworzoną w wyniku fuzji komórki szpiku kostnego (szpiczaka) z limfocytem odpornościowym, który syntetyzuje specyficzne przeciwciała monoklonalne. Hybrydoma ma zdolność nieograniczonego wzrostu, jest charakterystyczna dla komórki nowotworowej i ma wrodzoną zdolność limfocytów do syntezy przeciwciał.

Opracowano standardowe odczynniki: przeciwciała monoklonalne (mAb): koloklony anty-A i anty-B, stosowane do oznaczania aglutynogenów erytrocytów. Zoliclony to liofilizowany proszek o barwie czerwonej (anty-A) i niebieskiej (anty-B), który bezpośrednio przed próbką rozcieńcza się izotonicznym roztworem chlorku sodu.

Technika.

Zolikony anty-A i anty-B nanosi się na białą tabletkę, jedną dużą kroplą (0,1 ml) pod odpowiednimi napisami: anty-A lub anty-B. Jedną małą kroplę krwi testowej należy nałożyć obok kropli przeciwciał. Po wymieszaniu składników obserwować reakcję aglutynacji przez 2-3 minuty. Ocena wyników jest bardzo prosta.

Określeniu grupy krwi mogą towarzyszyć błędy, które prowadzą do błędnej interpretacji wyników. Można wyróżnić trzy główne grupy błędów: błędy związane z niską jakością odczynników; błędy techniczne; błędy związane z cechami Schemat oceny wyników oznaczania grup krwi przy użyciu przeciwciał monoklonalnych (koloklonów anty-A i anty-B) badanej krwi. Dwóch pierwszych można uniknąć ściśle przestrzegając opisanych powyżej wymagań dotyczących surowicy, warunków reakcji itp. Trzecia grupa związana jest ze zjawiskiem nieswoistej panaglutynacji (zjawisko Thomsena), którego istotą jest to, że surowica w temperaturze pokojowej aglutynuje z wszystkie czerwone krwinki, nawet z własnymi (autoaglutynacja), a erytrocyty jednocześnie dają aglutynację ze wszystkimi surowicami, nawet z surowicą grupy AB. Podobne zjawisko opisano w przypadku szeregu chorób: chorób krwi, powiększenia śledziony, marskości wątroby, chorób zakaźnych itp. Opisano także panaglutynację i autoaglutynację u osób zdrowych.

Zjawisko panaglutynacji i autoaglutynacji obserwuje się tylko w temperaturze pokojowej. Jeśli określenie przynależności do grupy zostanie przeprowadzone w temperaturze 37°C, znikają.

Należy bezwzględnie pamiętać, że we wszystkich przypadkach niejasnych lub wątpliwych wyników należy ponownie oznaczyć grupę krwi przy użyciu surowic standardowych z innych serii, a także w sposób przekrojowy.

Liczne badania wykazały, że krew może zawierać różne białka (aglutynogeny i aglutyniny), których kombinacja (obecność lub brak) tworzy cztery grupy krwi.
Każdej grupie przypisany jest symbol: 0 ( I), A (II), W (III),AB(IV).
Ustalono, że można przetaczać wyłącznie krew tego samego rodzaju. W wyjątkowych przypadkach, gdy nie ma krwi tej samej grupy, a przetoczenie jest niezbędne, dopuszcza się przetoczenie krwi innej grupy.W tych warunkach krew wynosi 0 ( I) można przetoczyć pacjentom z dowolną grupą krwi oraz pacjentom z krwią AB(IV) grupy, można przetoczyć krew dawcy dowolnej grupy.

Dlatego przed przystąpieniem do transfuzji krwi należy dokładnie określić grupę krwi pacjenta oraz rodzaj krwi, która będzie przetaczana.

Oznaczanie grupy krwi.

Do określenia grupy krwi wykorzystuje się standardowe surowice grupy 0 ( I), A (II), W (III), które są specjalnie przygotowywane w laboratoriach stacji transfuzji krwi.
Liczby umieszcza się na białej płytce w odległości 3-4 cm od lewej do prawej. I, II, III, oznaczające standardowe serum. Kropla standardowego serum 0( I) grupy nanosi się pipetą na sektor płytki oznaczony numerem I; następnie nałóż kroplę serum drugą pipetą A (II) grupy według numerów II; biorą też serwatkę W (III) grupa i trzecia pipeta - stosowana pod numerem III.

Następnie osobę badaną nakłuwa się w palec i za pomocą szklanego pręta wypływającą krew przenosi się do umieszczonej na płytce kropli surowicy i miesza do uzyskania jednolitej barwy. Do każdej surowicy krwi przenosi się nowy sztyft. Po 5 minutach od momentu barwienia (według zegara!) grupę krwi określa się na podstawie zmiany mieszaniny. W surowicy, w której zachodzi aglutynacja (sklejanie się czerwonych krwinek), pojawiają się wyraźnie widoczne czerwone ziarna i grudki; w surowicy, gdzie nie następuje aglutynacja, kropla krwi pozostanie jednorodna, jednolicie zabarwiona na różowo.

W zależności od grupy krwi badanej osoby, w niektórych próbkach nastąpi aglutynacja. Jeśli podmiot ma 0 ( I) grupa krwi, wówczas czerwone krwinki nie będą się sklejać z żadną surowicą.
Jeśli temat ma A (II) grupę krwi, wówczas aglutynacja nie nastąpi tylko z surowicą danej grupy A (II), i jeśli temat ma B (III) grupie, wówczas nie nastąpi aglutynacja z surowicą B (III). Aglutynację obserwuje się w przypadku wszystkich surowic, jeżeli badana jest krew AB(IV) grupy.

Czynnik Rh.

Czasami nawet przy transfuzji krwi tej samej grupy obserwuje się ciężkie reakcje. Badania wykazały, że około 15% ludzi nie ma we krwi specjalnego białka, tzw. czynnika Rh.

Jeśli tym osobom poda się wielokrotną transfuzję krwi zawierającej ten czynnik, nastąpi poważne powikłanie zwane konfliktem Rh i rozwinie się wstrząs. Dlatego obecnie wszyscy pacjenci mają obowiązek określenia współczynnika Rh, ponieważ biorcy z ujemnym czynnikiem Rh można przetoczyć wyłącznie krew Rh-ujemną.

Przyspieszona metoda określania stanu Rh.Nałóż 5 kropli surowicy anty-Rh z tej samej grupy co biorca na szklaną szalkę Petriego. Do surowicy dodaje się kroplę krwi pacjenta i dokładnie miesza. Szałkę Petriego umieszcza się w łaźni wodnej o temperaturze 42-45°C. Wyniki reakcji ocenia się po 10 minutach. Jeśli nastąpi aglutynacja krwi, wówczas pacjent ma krew Rh dodatnią (Rh+); jeśli nie ma aglutynacji, wówczas badana krew jest Rh-ujemna (Rh-).
Opracowano szereg innych metod oznaczania współczynnika Rh, w szczególności z wykorzystaniem uniwersalnego odczynnika anty-Rhesus D.

Obowiązkowe jest określenie grupy krwi i statusu Rh wszystkich pacjentów w szpitalu. Wyniki badania należy umieścić w paszporcie pacjenta.

We współczesnej medycynie grupa krwi charakteryzuje zespół antygenów znajdujących się na powierzchni czerwonych krwinek, które decydują o ich swoistości. Istnieje ogromna liczba takich antygenów (zwykle stosuje się tabelę grup krwi z różnymi antygenami), ale oznaczanie grup krwi odbywa się wszędzie przy użyciu klasyfikacji według współczynnika Rh i systemu AB0.

Określenie grupy jest obowiązkową procedurą podczas przygotowań do jakiejkolwiek operacji. Taka analiza jest konieczna także przy rozpoczynaniu służby w określonych kontyngentach, m.in. w wojsku, pracownikach organów spraw wewnętrznych i organów ścigania. Wydarzenie to przeprowadzane jest ze względu na zwiększone ryzyko wystąpienia stanu zagrożenia życia w celu skrócenia czasu potrzebnego na udzielenie pomocy w postaci przetoczenia krwi.

Skład krwi różnych grup krwi

Istotą układu AB0 jest obecność struktur antygenowych na czerwonych krwinkach. W osoczu nie ma odpowiednich typowych przeciwciał (gamma globulin). Dlatego do badania krwi można zastosować reakcję „antygen + przeciwciało”.

Czerwone krwinki sklejają się, gdy spotykają się antygen i przeciwciało. Reakcja ta nazywana jest hemaglutynacją. Podczas oznaczania reakcja ma postać małych płatków. Badanie polega na uzyskaniu obrazów aglutynacji z surowicami.

Antygeny czerwonych krwinek „A” wiążą się odpowiednio z przeciwciałami „ά”, a także „B” z „β”.

Ze względu na skład wyróżnia się następujące grupy krwi:

• I (0) – ά, β – powierzchnia erytrocytów w ogóle nie zawiera antygenów;
• II (A) – β – na powierzchni znajduje się antygen A i przeciwciało β;
• III (B) – ά – powierzchnia zawiera B z przeciwciałem typu ά;
• IV (AB) – 00 – powierzchnia zawiera oba antygeny, ale nie posiada przeciwciał.

Płód ma już antygeny w stanie embrionalnym, a aglutyniny (przeciwciała) pojawiają się w pierwszym miesiącu życia.

Metody oznaczania

Metoda standardowa

Technik jest wiele, ale w badaniach laboratoryjnych zwykle wykorzystuje się standardowe surowice.

Do określenia typów antygenów AB0 stosuje się standardową metodę surowiczą. W składzie standardowej surowicy izohemaglutynującej znajduje się zestaw przeciwciał skierowanych przeciwko cząsteczkom czerwonych krwinek. W obecności antygenu podatnego na działanie przeciwciał tworzy się kompleks antygen-przeciwciało, który uruchamia kaskadę reakcji immunologicznych.

W wyniku tej reakcji dochodzi do aglutynacji czerwonych krwinek; na podstawie charakteru zachodzącej aglutynacji można określić, czy próbka należy do którejkolwiek grupy.

Do przygotowania standardowej surowicy wykorzystuje się krew dawcy i określony układ – poprzez izolację osocza, w tym przeciwciał, i jego późniejsze rozcieńczenie. Rozcieńczanie przeprowadza się za pomocą izotonicznego roztworu chlorku sodu.

Hodowla odbywa się w następujący sposób:

Samo badanie przeprowadza się w następujący sposób:

1. Kroplę każdego serum (o łącznej objętości około 0,1 mililitra) umieszcza się na specjalnej tabletce w miejscu, w którym znajduje się odpowiedni znacznik (używa się 2 próbek, jedna z nich jest kontrolna, druga przeznaczona jest do badań) .
2. Następnie obok każdej kropli surowicy umieszcza się próbkę badawczą o objętości 0,01 mililitra, po czym miesza się ją oddzielnie z każdą diagnostyką.

Zasady dekodowania wyników

Po pięciu minutach możesz ocenić wyniki badania. W dużych kroplach surowicy następuje klarowanie, w niektórych obserwuje się reakcję aglutynacji (powstają małe płatki), w innych - nie.

Wideo: Oznaczanie grupy krwi i czynnika Rh

Oto możliwe opcje:

• Jeżeli w obu próbkach nie ma reakcji aglutynacji z surowicami II i III (+ kontrola 1 i IV) - oznaczenie grupy pierwszej;
• Jeżeli koagulację obserwuje się we wszystkich próbkach z wyjątkiem II, określić drugą;
• W przypadku braku reakcji aglutynacji tylko w próbce z grupy III – oznaczenie III;
• Jeżeli we wszystkich próbkach, łącznie z kontrolą IV, obserwuje się koagulację, należy oznaczyć IV.

Kiedy surowice są ułożone we właściwej kolejności i oznakowane na płytce, nawigacja jest łatwa: grupa odpowiada miejscom bez aglutynacji.

W niektórych przypadkach wiązanie nie jest wyraźnie widoczne. Następnie należy powtórzyć analizę, pod mikroskopem obserwuje się drobną aglutynację.

Metoda reakcji krzyżowych

Istotą tej techniki jest oznaczanie aglutynogenów przy użyciu standardowych surowic lub koleklonów z równoległym oznaczaniem aglutynin przy użyciu standardowych erytrocytów.

Technika analizy przekrojowej praktycznie nie różni się od badania z użyciem surowicy, istnieją jednak pewne dodatki.

Konieczne jest dodanie kropli standardowych czerwonych krwinek do płytki pod surowicami. Następnie z probówki z krwią pacjenta, która przeszła przez wirówkę, za pomocą pipety pobiera się osocze, w którym umieszcza się standardowe czerwone krwinki, które znajdują się na dnie - dodawane do standardowej surowicy.

Podobnie jak w technice standardowej, wyniki badania ocenia się kilka minut po rozpoczęciu reakcji. W przypadku reakcji aglutynacji można mówić o obecności aglutynin AB0, w przypadku reakcji plazmowej można mówić o aglutynogenach.

Wyniki badań krwi przy użyciu standardowych czerwonych krwinek i surowicy:

Aglutynacja;

– nie ma aglutynacji;

- reakcja nie jest przeprowadzana.

Metoda krzyżowa stała się powszechna ze względu na to, że zapobiega błędom diagnostycznym powstającym przy stosowaniu standardowych technik.

Oznaczanie grupy krwi za pomocą zolikonów

Zoliklony to syntetyczne substytuty surowicy zawierające sztuczne substytuty aglutynin typu ά i β. Nazywa się je erytrotestami „Tsoliklon anty-A” (w kolorze różowym), a także „anty-B” (w kolorze niebieskim). Obserwuje się oczekiwaną aglutynację pomiędzy aglutyninami koleklonów i czerwonymi krwinkami.

Technika ta nie wymaga dwóch serii, jest bardziej niezawodna i dokładna. Przeprowadzenie badania i ocena jego wyników przebiega analogicznie jak w metodzie standardowej.

Grupę IV (AB) koniecznie potwierdza się przez aglutynację z kolokonem anty-AB, a także brak adhezji czerwonych krwinek w izotonicznym roztworze chlorku sodu.

Metoda ekspresowa z wykorzystaniem zestawu „Karta grupy Erythrotest”.

Chociaż ogólnie przyjęte metody określania, czy krew należy do określonej grupy, są powszechne, we współczesnej medycynie wprowadza się metody ekspresowe, z których najczęstszą jest „Erytrotest”.

Przy ustalaniu grupy techniką „Karta grupowa Erythrotest” wymagany jest zestaw narzędzi, w skład którego wchodzą następujące urządzenia:

• Tabliczka z pięcioma otworami do określenia grupy według przynależności Rh i systemu AB0;
• Wertykulator przeznaczony do pobierania próbki potrzebnej do badań;
• Pręty szklane do mieszania próbek;
• Czysta pipeta do zbierania roztworów.

Wszystkie wymienione narzędzia są niezbędne do bezbłędnej diagnostyki.

Zestaw do badania krwi „Erythrotest-Groupcard” umożliwia zbadanie współczynnika Rh i określenie grupy krwi w każdych warunkach, jest szczególnie skuteczny, gdy nie można zastosować ogólnie przyjętych metod.

W dołkach tabletki znajdują się tsoliklony na antygeny (są to tsoliclony anty-A, -B, -AB) i na główny antygen, który określa dziedziczenie czynnika Rh (jest to tsoliclon anty-D). Piąty otwór zawiera odczynnik kontrolny, który pozwala zapobiec ewentualnym błędom i prawidłowo określić grupę krwi.

Wideo: Oznaczanie grup krwi za pomocą zolikonów