Diagnostyka laboratoryjna HIV. Metody diagnostyki laboratoryjnej wirusa HIV. Co to jest retrowirus

W wysokospecjalistycznym laboratorium wykonywane są:

A) oznaczenie przeciwciał, antygenów i kompleksów immunologicznych krążących we krwi; hodowanie wirusa, identyfikacja jego materiału genomowego i enzymów;

B) ocena funkcji komórkowej części układu odpornościowego. Główną rolę odgrywają serologiczne metody diagnostyczne, mające na celu oznaczenie przeciwciał, a także antygenów patogenów we krwi i innych płynach biologicznych organizmu.

Badanie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV przeprowadza się w celu:

A) bezpieczeństwo transfuzji i przeszczepów krwi;

B) nadzór, badania w celu monitorowania częstości występowania zakażenia wirusem HIV i badania dynamiki jego występowania w określonej populacji;

C) diagnostyka zakażenia wirusem HIV, czyli dobrowolne badanie surowicy krwi osób praktycznie zdrowych lub pacjentów z różnymi objawami klinicznymi podobnymi do zakażenia wirusem HIV lub AIDS.

System diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV zbudowany jest na zasadzie trójstopniowej. Pierwszym etapem są badania przesiewowe, polegające na wykonaniu podstawowych badań krwi na obecność przeciwciał przeciwko białkom wirusa HIV. Drugi etap ma charakter referencyjny – pozwala, przy zastosowaniu specjalnych technik metodologicznych, wyjaśnić (potwierdzić) pierwotnie pozytywny wynik uzyskany na etapie screeningu. Trzeci etap to etap ekspercki, mający na celu ostateczną weryfikację obecności i swoistości markerów zakażenia wirusem HIV zidentyfikowanych na wcześniejszych etapach diagnostyki laboratoryjnej. Konieczność kilkuetapowej diagnostyki laboratoryjnej wynika przede wszystkim ze względów ekonomicznych.

W praktyce stosuje się kilka testów, które pozwalają na identyfikację osób zakażonych wirusem HIV z wystarczającym stopniem wiarygodności:

Test ELISA (enzyme-linked immunosorbent test) do wykrywania pierwszego poziomu charakteryzuje się wysoką czułością, choć mniejszą swoistością niż poniższe:

Test immunologiczny (Western-blot), bardzo specyficzny i najczęściej stosowany test różnicujący HIV-1 i HIV-2;

Test na antygenem p25, skuteczny w początkowych stadiach infekcji;

Reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR).

W przypadku masowych badań przesiewowych próbek krwi zaleca się badanie mieszanin surowic pochodzących z grupy osób, dobranych w taki sposób, aby końcowe rozcieńczenie każdej próbki nie przekraczało 1:100. Jeżeli mieszanina surowic daje wynik dodatni, badana jest każda surowica w mieszaninie dodatniej. Metoda ta nie prowadzi do utraty czułości zarówno w teście ELISA, jak i immunoblocie, ale obniża koszty pracy i koszt badania wstępnego o 60-80%.

Metody immunologiczne

1. liczba pomocników T,

2. stosunek T4 i T8,

3. stan nadwrażliwości,

4. funkcja kompensacyjna układu limfocytów T.

Objawia się to nadprodukcją immunoglobulin, mają one małe powinowactwo i jeszcze większe zużycie materiału organizmu.

Wady: pojawiają się późno, w innych infekcjach mogą występować pewne wskaźniki immunologiczne.

Metody kliniczne – m.b. są podobne do innych chorób, najbardziej typowe objawy odnotowuje się w późniejszych stadiach, więc diagnostyka kliniczna jest mało skuteczna

Główna metoda – serologiczna – realizowana jest w 2 etapach:

1 – badanie przesiewowe – pobranie przeciwciał całkowitych przeciwko wszystkim białkom w teście immunologicznym. Ten etap daje 95% wyników prawdziwych i 5% wyników fałszywie pozytywnych.

2 – metoda konfirmacyjna – wszystkie próbki badane są metodą konfirmacyjną. Technika ta pozwala na wykrycie przeciwciał przeciwko białku wirusa. Wynik pozytywny ma miejsce, gdy wykryte zostaną przeciwciała przeciwko co najmniej 3 białkom wirusa, jeśli w stosunku do 1 lub 2, wynik jest wątpliwy i wymaga dodatkowego badania.

Podczas pierwotnej serodiagnostyki zakażenia wirusem HIV oznacza się przeciwciała całkowite za pomocą testów przesiewowych – ELISA i reakcji aglutynacji. Na drugim etapie (arbitrażowym) stosuje się bardziej złożony test – immunoblot, który pozwala nie tylko potwierdzić lub odrzucić wstępny wniosek, ale także dokonać tego na poziomie oznaczenia przeciwciał przeciwko poszczególnym białkom wirusa.

Interpretacja wyników badania przeciwciał przeciwko wirusowi HIV

Na wynik testu na obecność przeciwciał HIV wpływa dość duża liczba różnych czynników, a wśród nich ważny jest czas wykonania testu po ewentualnej infekcji.

W większości przypadków przeciwciała przeciwko wirusowi HIV można wykryć 6–12 tygodni po zakażeniu. Okres od przedostania się wirusa do organizmu do pojawienia się wykrywalnej ilości przeciwciał nazywany jest okresem pozytywnej serokonwersji lub okresem „okna”. Istnieją rzadkie przypadki pojawienia się przeciwciał 6 miesięcy po zakażeniu, a doniesienia o wykryciu przeciwciał dopiero po 1 roku nie mają żadnych dowodów. Obecnie w służbie diagnostycznej stosowane są metody ELISA nowej generacji, które pozwalają na wykrycie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV już po 3–4 tygodniach od zakażenia, a pewne kombinacje tych metod, tzw. strategie testowe, skracają okres „okna” do 2–2–4 tygodni. 3 tygodnie, tj. umożliwiają wykrycie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV, gdy tylko zaczną one być wytwarzane w organizmie.

Wynik ujemny oznacza, że ​​we krwi osoby badanej nie wykryto przeciwciał przeciwko wirusowi HIV. Stan ten nazywany jest seronegatywnością i zazwyczaj oznacza, że ​​dana osoba nie jest zakażona.

Ujemny wynik nie daje żadnej gwarancji na przyszłość. Stwierdza jedynie stan w momencie badania. Istnieje niewielka szansa, że ​​badanie zostało przeprowadzone w okresie okienka. Dlatego też, jeśli dana osoba była wcześniej narażona na zakażenie wirusem HIV i wynik testu był negatywny, należy ją ponownie przebadać co najmniej 6 miesięcy po zdarzeniu ryzykownym.

Wynik pozytywny oznacza, że ​​we krwi pacjenta wykryto przeciwciała przeciwko wirusowi HIV. Stan ten nazywa się seropozytywnością – osoba jest zakażona wirusem HIV. Ważne jest, aby zrozumieć, że wynik pozytywny wskazuje jedynie na zakażenie wirusem HIV, a nie na AIDS. Jednak niezwykle ważne jest, aby po uzyskaniu pozytywnego wyniku zgłosić się do lekarza w celu uzyskania porady i w razie potrzeby pomocy lekarskiej, która pozwoli na długie utrzymanie jakości życia na dobrym poziomie.

Niepewny wynik. W rzadkich przypadkach wynik testu na obecność przeciwciał HIV jest niejasny. Laboratorium nie jest w stanie określić, czy dana osoba jest seropozytywna, czy seronegatywna. W takiej sytuacji konieczna jest konsultacja z lekarzem i ponowne wykonanie badań.



Terminowe rozpoznanie zakażenia wirusem HIV staje się niezwykle ważnym środkiem, ponieważ wczesne rozpoczęcie leczenia może w dużej mierze determinować dalszy rozwój choroby i przedłużyć życie pacjenta. W ostatnich latach nastąpił znaczny postęp w rozpoznawaniu tej strasznej choroby: starsze systemy testowe są zastępowane bardziej zaawansowanymi, metody badawcze stają się coraz bardziej dostępne, a ich dokładność znacznie wzrasta.

W tym artykule porozmawiamy o nowoczesnych metodach diagnozowania zakażenia wirusem HIV, których znajomość jest przydatna do szybkiego leczenia tego problemu i utrzymania normalnej jakości życia pacjenta.

Metody diagnostyki HIV

W Rosji przeprowadzana jest standardowa procedura diagnozowania zakażenia wirusem HIV, która obejmuje dwa poziomy:

• System testowy ELISA (analiza przesiewowa);
• immunoblot (IB).

Do diagnozy można również zastosować inne metody:

• szybkie testy.

Systemy testów ELISA

Na pierwszym etapie diagnozy do wykrycia zakażenia wirusem HIV wykorzystuje się test przesiewowy (ELISA), który opiera się na powstałych w laboratoriach białkach wirusa HIV, które wychwytują specyficzne przeciwciała wytwarzane w organizmie w odpowiedzi na zakażenie. Po ich interakcji z odczynnikami (enzymami) układu testowego zmienia się kolor wskaźnika. Następnie te zmiany barwy poddawane są obróbce przy użyciu specjalnego sprzętu, który determinuje wynik przeprowadzonej analizy.

Takie testy ELISA mogą dać wyniki w ciągu kilku tygodni po wprowadzeniu zakażenia wirusem HIV. Test ten nie określa obecności wirusa, ale wykrywa wytwarzanie przeciwko niemu przeciwciał. Czasami w organizmie człowieka wytwarzanie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV rozpoczyna się już po 2 tygodniach od zakażenia, jednak u większości osób powstają one później, po 3-6 tygodniach.

Istnieją cztery generacje testów ELISA o różnej czułości. W ostatnich latach coraz częściej stosuje się systemy testowe trzeciej i czwartej generacji, które opierają się na syntetycznych peptydach lub białkach rekombinowanych i charakteryzują się większą swoistością i dokładnością. Można ich używać do diagnozowania zakażenia wirusem HIV, monitorowania częstości występowania wirusa HIV i zapewnienia bezpieczeństwa podczas badania oddanej krwi. Dokładność systemów testów ELISA III i IV generacji wynosi 93-99% (testy produkowane w Europie Zachodniej są bardziej czułe – 99%).

Do wykonania testu ELISA pobiera się z żyły pacjenta 5 ml krwi. Pomiędzy ostatnim posiłkiem a analizą musi upłynąć co najmniej 8 godzin (zwykle wykonuje się ją rano na czczo). Zaleca się wykonanie takiego badania nie wcześniej niż 3 tygodnie od podejrzenia zakażenia (np. po stosunku płciowym bez zabezpieczenia z nowym partnerem seksualnym).

Wyniki testu ELISA uzyskuje się w ciągu 2-10 dni:

• wynik negatywny: wskazuje na brak zakażenia wirusem HIV i nie wymaga konsultacji ze specjalistą;
• wynik fałszywie ujemny: można zaobserwować we wczesnych stadiach infekcji (do 3 tygodni), w późniejszych stadiach AIDS z ciężką supresją układu odpornościowego i niewłaściwym przygotowaniem krwi;
• wynik fałszywie dodatni: można zaobserwować w niektórych chorobach oraz w przypadku nieprawidłowego przygotowania krwi;
• wynik pozytywny: wskazuje na zakażenie wirusem HIV, wymaga przeprowadzenia IB i skontaktowania się pacjenta ze specjalistą w ośrodku AIDS.

Dlaczego test ELISA może dawać fałszywie dodatnie wyniki?

Fałszywie dodatnie wyniki testu ELISA na HIV mogą wystąpić w wyniku nieprawidłowego przetwarzania krwi lub u pacjentów z następującymi schorzeniami i chorobami:

• szpiczak mnogi;
• choroby zakaźne wywołane wirusem Epsteina-Barra;
• stan po;
• choroby autoimmunologiczne;
• na tle ciąży;
• stan po szczepieniu.

Z powodów opisanych powyżej we krwi mogą znajdować się nieswoiste przeciwciała reagujące krzyżowo, których wytwarzanie nie zostało spowodowane zakażeniem wirusem HIV.

W ostatnich latach częstotliwość wyników fałszywie dodatnich znacznie spadła ze względu na stosowanie systemów testowych III i IV generacji, które zawierają bardziej czułe peptydy i białka rekombinowane (są syntetyzowane metodą inżynierii genetycznej in vitro). Po wprowadzeniu takich testów ELISA częstotliwość wyników fałszywie pozytywnych znacznie spadła i wynosi około 0,02-0,5%.

Wynik fałszywie dodatni nie oznacza, że ​​dana osoba jest zakażona wirusem HIV. W takich przypadkach WHO zaleca wykonanie kolejnego testu ELISA (koniecznie IV generacji).

Krew pacjenta przesyłana jest do laboratorium referencyjnego lub arbitrażowego z oznaczeniem „powtórz” i badana systemem testowym ELISA IV generacji. Jeżeli wynik nowej analizy jest negatywny, wówczas pierwszy wynik uważa się za błędny (fałszywie dodatni) i nie przeprowadza się IS. Jeśli wynik drugiego testu będzie pozytywny lub wątpliwy, pacjent musi po 4-6 tygodniach przejść IB, aby potwierdzić lub wykluczyć zakażenie wirusem HIV.

Immunoblotting

Ostateczną diagnozę zakażenia wirusem HIV można postawić dopiero po uzyskaniu dodatniego wyniku immunoblottingu (IB). Do jego przeprowadzenia wykorzystuje się pasek nitrocelulozowy, na który nanoszone są białka wirusowe.

Pobieranie krwi w kierunku IB pobiera się z żyły. Następnie poddawany jest specjalnej obróbce, a białka zawarte w jego surowicy zostają rozdzielone w specjalnym żelu według ich ładunku i masy cząsteczkowej (manipulacja odbywa się za pomocą specjalnego sprzętu pod wpływem pola elektrycznego). Na żel surowicy krwi nakłada się pasek nitrocelulozowy i w specjalnej komorze przeprowadza się bloting („blotting”). Pasek jest przetwarzany i jeśli użyte materiały zawierają przeciwciała przeciwko wirusowi HIV, wiążą się one z prążkami antygenowymi na IB i pojawiają się w postaci linii.

IB uważa się za pozytywne, jeśli:

• według amerykańskich kryteriów CDC - na pasku znajdują się dwie lub trzy linie gp41, p24, gp120/gp160;
• zgodnie z amerykańskimi kryteriami FDA pasek ma dwie linie p24, p31 i linię gp41 lub gp120/gp160.

W 99,9% przypadków dodatni wynik IB wskazuje na zakażenie wirusem HIV.

Jeśli nie ma linii, IB jest ujemne.

Identyfikując linie z gr160, gr120 i gr41, IB jest wątpliwe. Wynik ten może wystąpić, gdy:

• choroby onkologiczne;
• ciąża;
• częste transfuzje krwi.

W takich przypadkach zaleca się powtórzenie badania z użyciem zestawu innej firmy. Jeżeli po dodatkowym IB wynik pozostaje wątpliwy, konieczna jest obserwacja przez pół roku (IB przeprowadza się co 3 miesiące).

Reakcja łańcuchowa polimerazy

Test PCR może wykryć RNA wirusa. Jego czułość jest dość wysoka i pozwala wykryć zakażenie wirusem HIV w ciągu 10 dni od zakażenia. W niektórych przypadkach PCR może dać wyniki fałszywie dodatnie, ponieważ jego wysoka czułość może również reagować na przeciwciała przeciwko innym infekcjom.

Ta technika diagnostyczna jest kosztowna i wymaga specjalnego sprzętu oraz wysoko wykwalifikowanych specjalistów. Powody te nie pozwalają na przeprowadzanie masowych badań populacji.

PCR stosuje się w następujących przypadkach:

• do wykrywania wirusa HIV u noworodków urodzonych przez matki zakażone wirusem HIV;
• w celu wykrycia wirusa HIV w „okresie okna” lub w przypadku wątpliwego IB;
• kontrolować stężenie wirusa HIV we krwi;
• do badania krwi dawców.

Sam test PCR nie pozwala na rozpoznanie wirusa HIV, ale jest przeprowadzany jako dodatkowa metoda diagnostyczna w celu rozwiązania kontrowersyjnych sytuacji.

Metody ekspresowe

Jedną z innowacji w diagnostyce HIV są szybkie testy, których wyniki można ocenić w ciągu 10-15 minut. Najbardziej efektywne i dokładne wyniki uzyskuje się stosując testy immunochromatograficzne oparte na zasadzie przepływu kapilarnego. Są to specjalne paski, na które nanosi się krew lub inne płyny testowe (ślina, mocz). Jeżeli obecne są przeciwciała przeciwko wirusowi HIV, po 10-15 minutach na teście pojawia się kolorowy pasek kontrolny – wynik pozytywny. Jeśli wynik będzie negatywny, pojawi się tylko pasek kontrolny.

Podobnie jak w przypadku testów ELISA, wyniki szybkich testów należy potwierdzić analizą IB. Dopiero po tym można postawić diagnozę zakażenia wirusem HIV.

Dostępne są zestawy do szybkich testów domowych. Test OraSure Technologies1 (USA) jest zatwierdzony przez FDA, jest dostępny bez recepty i może być stosowany do wykrywania wirusa HIV. Po badaniu, jeśli wynik jest pozytywny, zaleca się pacjentowi poddanie się badaniu w specjalistycznym ośrodku w celu potwierdzenia diagnozy.

Inne testy do użytku domowego nie zostały jeszcze zatwierdzone przez FDA, a ich wyniki mogą być bardzo wątpliwe.

Pomimo tego, że szybkie testy mają gorszą dokładność niż testy ELISA IV generacji, są one powszechnie stosowane w dodatkowych badaniach populacji.

Testy na wykrycie zakażenia wirusem HIV można wykonać w dowolnej przychodni, centralnym szpitalu powiatowym lub specjalistycznych ośrodkach AIDS. Na terytorium Rosji przeprowadzane są one w sposób całkowicie poufny lub anonimowy. Każdy pacjent może liczyć na konsultację lekarską lub psychologiczną przed lub po badaniu. Za badania na obecność wirusa HIV zapłacisz jedynie w komercyjnych placówkach medycznych, natomiast w publicznych przychodniach i szpitalach są one wykonywane bezpłatnie.

Przeczytaj, w jaki sposób można zarazić się wirusem HIV i jakie mity krążą na temat możliwości zarażenia się.

Obecnie nowe technologie diagnostyczne pozwalają na identyfikację przyczyn etiologicznych i patogenetycznych wielu chorób i radykalnie wpływają na wyniki leczenia. Być może najbardziej imponujące wyniki wprowadzenia tych technologii do praktyki klinicznej osiągnięto w dziedzinie immunologii i diagnostyki chorób zakaźnych.

Systemy testowe oparte na immunoenzymatycznych testach immunoenzymatycznych i chemiluminescencyjnych mogą wykrywać przeciwciała różnych klas, co znacznie zwiększa zawartość informacyjną metod klinicznych i analitycznych o czułości i swoistości w diagnostyce chorób zakaźnych. Należy podkreślić, że największy postęp w diagnostyce zakażeń wiąże się z wprowadzeniem do praktyki laboratoryjnej metody reakcji łańcuchowej polimerazy, która uznawana jest za „złoty standard” w diagnostyce i ocenie skuteczności leczenia szeregu chorób zakaźnych. choroby.

Do badań można wykorzystać różne materiały biologiczne: surowicę, osocze krwi, zeskrobiny, biopsję, płyn opłucnowy lub mózgowo-rdzeniowy (CSF). Przede wszystkim metody laboratoryjnej diagnostyki infekcji mają na celu identyfikację chorób, takich jak wirusowe zapalenie wątroby typu B, C, D, zakażenie wirusem cytomegalii, infekcje przenoszone drogą płciową (rzeżączka, chlamydia, mykoplazma, ureaplazma), gruźlica, zakażenie wirusem HIV itp.

Zakażenie wirusem HIV jest chorobą wywoływaną przez ludzki wirus niedoboru odporności (HIV), który długo utrzymuje się w limfocytach, makrofagach i komórkach tkanki nerwowej, powodując rozwój powoli postępującego uszkodzenia układu odpornościowego i nerwowego organizmu, objawiającego się przez wtórne infekcje, nowotwory, podostre zapalenie mózgu i inne zmiany patologiczne.

Czynniki wywołujące infekcję - ludzkie wirusy niedoboru odporności typu 1 i 2 (HIV-1, HIV-2) - należą do rodziny retrowirusów, podrodziny wolnych wirusów. Wiriony to kuliste cząstki o średnicy 100-140 nm. Cząstka wirusa ma zewnętrzną otoczkę fosfolipidową, która zawiera glikoproteiny (białka strukturalne) o określonej masie cząsteczkowej mierzonej w kilodaltonach. W HIV-1 są to gpl60, gpl20, gp41. Wewnętrzna otoczka wirusa pokrywająca rdzeń jest również reprezentowana przez białka o znanej masie cząsteczkowej - p17, p24, p55 (HIV-2 zawiera gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

Genom wirusa HIV zawiera RNA i enzym odwrotną transkryptazę (rewertazę). Aby genom retrowirusa połączył się z genomem komórki gospodarza, DNA jest najpierw syntetyzowane na matrycy wirusowego RNA przy użyciu odwrotnej azy. Następnie prowirusowy DNA integruje się z genomem komórki gospodarza. HIV charakteryzuje się wyraźną zmiennością antygenową, znacznie przewyższającą zmienność wirusa grypy.

W organizmie człowieka głównym celem wirusa HIV są limfocyty T, które niosą na swojej powierzchni największą liczbę receptorów CD4. Po przedostaniu się wirusa HIV do komórki za pomocą odwrotnej azy, wirus syntetyzuje DNA na podstawie próbki RNA, które integruje się z aparatem genetycznym komórki gospodarza (limfocyty CD4) i pozostaje tam przez całe życie w postaci prowirusa. Oprócz pomocniczych limfocytów T, makrofagi, limfocyty B, komórki neuroglejowe, błona śluzowa jelit i niektóre inne komórki są dotknięte. Przyczyną spadku liczby limfocytów T (komórek CD4) jest nie tylko bezpośrednie działanie cytopatyczne wirusa, ale także ich fuzja z niezakażonymi komórkami. Wraz z uszkodzeniem limfocytów T u pacjentów zakażonych wirusem HIV dochodzi do poliklonalnej aktywacji limfocytów B ze wzrostem syntezy immunoglobulin wszystkich klas, zwłaszcza IgG i IgA, a następnie wyczerpaniem tej części układu odpornościowego. Rozregulowanie procesów immunologicznych objawia się także wzrostem poziomu α-interferonu, β2-mikroglobuliny i spadkiem poziomu IL-2. W wyniku dysfunkcji układu odpornościowego, zwłaszcza gdy liczba limfocytów T (CD4) spada do 400 komórek w 1 μl krwi lub mniej, powstają warunki do niekontrolowanej replikacji wirusa HIV ze znacznym wzrostem liczby wirionów w różnych środowiska ciała. W wyniku uszkodzenia wielu części układu odpornościowego osoba zakażona wirusem HIV staje się bezbronna wobec patogenów różnych infekcji.

Na tle rosnącej immunosupresji rozwijają się ciężkie, postępujące choroby, które nie występują u osoby z prawidłowo funkcjonującym układem odpornościowym. Są to choroby, które Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) określiła jako choroby wskazujące na AIDS lub choroby definiujące AIDS.

Choroby definiujące AIDS

Pierwsza grupa - choroby związane wyłącznie z ciężkim niedoborem odporności (poziom CD4<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Druga grupa to choroby, które mogą rozwijać się zarówno na tle ciężkiego niedoboru odporności, jak iw niektórych przypadkach bez niego.

Dlatego w takich przypadkach konieczne jest laboratoryjne potwierdzenie diagnozy.

Pierwsza grupa:

• kandydoza przełyku, tchawicy, oskrzeli;
• kryptokokoza pozapłucna;
• kryptosporydioza z biegunką trwającą dłużej niż 1 miesiąc;
• zmiany cytomegalowirusowe różnych narządów innych niż wątroba, śledziona i węzły chłonne u pacjenta powyżej 1 miesiąca życia;
• zakażenie wywołane wirusem opryszczki pospolitej, objawiające się owrzodzeniami skóry i błon śluzowych utrzymującymi się dłużej niż 1 miesiąc, a także zapaleniem oskrzeli, zapaleniem płuc lub zapaleniem przełyku o dowolnym czasie trwania, występujące u pacjenta powyżej 1 miesiąca życia;
• uogólniony mięsak Kaposiego u pacjentów poniżej 60. roku życia;
• chłoniak mózgu (pierwotny) u pacjentów w wieku poniżej 60 lat;
• limfocytowe śródmiąższowe zapalenie płuc i/lub dysplazja limfatyczna płuc u dzieci poniżej 12. roku życia;
• rozsiane zakażenie wywołane przez atypowe prątki (kompleks prątków M. aviumintra Cellulare) o lokalizacji pozapłucnej lub lokalizacji (oprócz płuc) w skórze, węzłach chłonnych szyjnych, węzłach chłonnych korzeni płuc;
• zapalenie płuc wywołane przez Pneumocystis;
• postępująca wieloogniskowa leukoencefalopatia;
• toksoplazmozę mózgową u pacjentów powyżej 1 miesiąca życia.

Druga grupa:

• zakażenia bakteryjne, mieszane lub nawracające, u dzieci do 13. roku życia (więcej niż dwa przypadki w ciągu 2 lat obserwacji): posocznica, zapalenie płuc, zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych, uszkodzenia kości lub stawów, ropnie wywołane przez Haemophilus influenzae, paciorkowce;
• rozsiana kokcydioidomykoza (lokalizacja pozapłucna);
• Encefalopatia HIV (otępienie wywołane wirusem HIV, otępienie spowodowane AIDS);
• histoplazmoza z biegunką utrzymującą się dłużej niż 1 miesiąc;
• izosporoza z biegunką utrzymującą się dłużej niż 1 miesiąc;
• Mięsak Kaposiego w każdym wieku;
• chłoniak mózgu (pierwotny) u osób w każdym wieku;
• inne chłoniaki z komórek B (z wyjątkiem choroby Hodgkina) lub chłoniaki o nieznanym immunofenotypie: chłoniaki drobnokomórkowe (takie jak chłoniak Burkitta itp.); mięsaki immunoblastyczne (immunoblastyczne, wielkokomórkowe, rozlane histiocytarne, rozlane niezróżnicowane chłoniaki);
• rozsiana mykobakterioza (nie gruźlica) z uszkodzeniem skóry, węzłów chłonnych szyjnych lub wnękowych oprócz płuc;
• gruźlica pozapłucna (zajmująca narządy wewnętrzne inne niż płuca);
• Posocznica Salmonella, nawracająca;
• Dystrofia HIV (wychudzenie, nagła utrata masy ciała).

Tabela 1 (patrz link źródłowy powyżej) zawiera listę chorób definiujących AIDS i ich czynników etiologicznych.

Istnieje wiele klasyfikacji AIDS.

Zgodnie z nową klasyfikacją zaproponowaną przez Centrum Kontroli Chorób w USA (Tabela 2 – link do źródła powyżej) rozpoznanie AIDS ustala się u osób, u których liczba limfocytów CD4 jest mniejsza niż 200/μl, nawet w brak chorób wskazujących na AIDS.

Kategoria B obejmuje różne zespoły, z których najważniejsze to naczyniakowatość bakteryjna, kandydoza jamy ustnej i gardła, nawracająca kandydoza sromu i pochwy, trudna w leczeniu, dysplazja szyjki macicy, rak szyjki macicy, idiopatyczna plamica małopłytkowa, listerioza, neuropatia obwodowa.

Przeciwciała przeciwko HIV-1 i HIV-2 we krwi

W surowicy krwi zwykle nie ma przeciwciał przeciwko HIV-1 i HIV-2.

Oznaczenie przeciwciał przeciwko wirusowi HIV jest główną metodą diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV. Metoda opiera się na teście immunoenzymatycznym (ELISA) – czułość przekracza 99,5%, swoistość przekracza 99,8%. Przeciwciała przeciwko wirusowi HIV pojawiają się u 90-95% zakażonych osób w ciągu 1 miesiąca od zakażenia, u 5-9% - po 6 miesiącach, u 0,5-1% - w późniejszym terminie. Na etapie AIDS liczba przeciwciał może się zmniejszyć, aż do całkowitego zaniku.

Wynik badania wyraża się jakościowo: pozytywny lub negatywny.

Ujemny wynik testu wskazuje na brak przeciwciał przeciwko HIV-1 i HIV-2 w surowicy krwi. Laboratorium wydaje wynik negatywny natychmiast, gdy jest gotowy. W przypadku uzyskania wyniku pozytywnego - wykrycia przeciwciał przeciwko wirusowi HIV - w celu uniknięcia fałszywie dodatnich wyników w laboratorium, analizę powtarza się jeszcze 2 razy.

Immunoblotting na obecność przeciwciał przeciwko białkom wirusa HIV w surowicy krwi

W surowicy krwi zwykle nie ma przeciwciał przeciwko białkom wirusa HIV.

Metoda ELISA służąca do oznaczania przeciwciał przeciwko wirusowi HIV jest metodą przesiewową. W przypadku uzyskania wyniku pozytywnego, w celu potwierdzenia jego specyficzności, stosuje się metodę immunoblottingu – Western-blot – przeciwstrącanie w żelu przeciwciał w surowicy krwi pacjenta z różnymi białkami wirusowymi, poddawanych rozdziałowi wagowemu metodą elektroforezy i nakładanym na nitrocelulozę. Określa się przeciwciała przeciwko białkom wirusowym gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 itd.

Zgodnie z zaleceniami Rosyjskiego Centrum Zapobiegania i Kontroli AIDS wykrycie przeciwciał przeciwko jednej z glikoprotein gp41, gpl20, gpl60 należy uznać za wynik pozytywny. W przypadku wykrycia przeciwciał przeciwko innym białkom wirusa wynik uważa się za wątpliwy, takiego pacjenta należy zbadać dwukrotnie - po 3 i 6 miesiącach.

Brak przeciwciał przeciwko określonym białkom wirusa HIV oznacza, że ​​metoda testu immunologicznego enzymatycznego dała wynik fałszywie dodatni. Jednocześnie w praktyce, oceniając wyniki metody immunoblottingu, należy postępować zgodnie z instrukcją dostarczoną przez firmę do stosowanego „Zestawu immunoblottingowego”.

Metodę immunoblottingu stosuje się w diagnostyce laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV.

Antygen p24 w surowicy krwi

Antygen p24 jest zwykle nieobecny w surowicy krwi.

Antygen p24 jest białkiem ściennym nukleotydu HIV. Etap pierwotnych objawów po zakażeniu wirusem HIV jest konsekwencją rozpoczęcia procesu replikacji. Antygen p24 pojawia się we krwi 2 tygodnie po zakażeniu i można go wykryć za pomocą testu ELISA w ciągu 2 do 8 tygodni. Po 2 miesiącach od momentu zakażenia antygen p24 znika z krwi. Następnie w przebiegu klinicznym zakażenia wirusem HIV obserwuje się drugi wzrost poziomu białka p24 we krwi. Spada podczas powstawania AIDS. Istniejące systemy testów ELISA do wykrywania antygenu p24 wykorzystywane są do wczesnego wykrywania wirusa HIV u dawców krwi i dzieci, prognozowania przebiegu AIDS oraz monitorowania terapii chorych na AIDS. Test ELISA charakteryzuje się dużą czułością analityczną, co pozwala na wykrycie antygenu p24 HIV-1 w surowicy krwi w stężeniu 5-10 pkg/ml, a HIV-2 - poniżej 0,5 ng/ml oraz swoistością. Należy jednak zaznaczyć, że poziom antygenu p24 we krwi podlega indywidualnym zmianom, co oznacza, że ​​za pomocą tego testu we wczesnym okresie po zakażeniu można wykryć jedynie u 20–30% pacjentów (Rose N.R. i wsp., 1997).

Przeciwciała przeciwko antygenowi p24 klasy IgM i IgG pojawiają się we krwi od 2. tygodnia, osiągają maksimum w ciągu 2-4 tygodni i utrzymują się na tym poziomie przez różny czas: Przeciwciała klasy IgM – przez kilka miesięcy, zanikają w ciągu roku po infekcja, a przeciwciała IgG mogą utrzymywać się przez lata.

Algorytm rozpoznawania zakażenia wirusem HIV zależy od fazy choroby i charakteryzuje się zmianami dynamiki wykrywania przeciwciał różnych klas (ryc. 1, 2 – link do źródła powyżej).

Wynik badania wyraża się jakościowo - pozytywny lub negatywny. Ujemny wynik testu wskazuje na brak przeciwciał przeciwko HIV-1 i HIV-2 oraz antygenowi p24 w surowicy krwi.

Laboratorium wydaje wynik negatywny natychmiast, gdy jest gotowy. W przypadku uzyskania wyniku pozytywnego – wykrycia przeciwciał przeciwko antygenowi HIV-1 i HIV-2 i/lub p24 – w celu uniknięcia fałszywie dodatnich wyników w laboratorium, analizę powtarza się jeszcze 2 razy.

Niezależnie od wyniku badania, próbka krwi pacjenta oraz wyniki 3 badań laboratorium przesyłane są przez laboratorium do regionalnego ośrodka ds. AIDS w celu potwierdzenia wyniku dodatniego lub weryfikacji wyniku nieokreślonego. W takich przypadkach ostateczną odpowiedź na temat tego badania wydaje regionalne centrum ds. AIDS.

Wykrywanie wirusa HIV metodą reakcji łańcuchowej polimerazy (jakościowe)

Wykrywanie wirusa HIV metodą reakcji łańcuchowej polimerazy – PCR (jakościowa) przeprowadza się w celu:

• rozstrzyganie wątpliwych wyników immunoblottingu;
• do wczesnej diagnostyki zakażenia wirusem HIV;
• monitorowanie skuteczności leczenia przeciwwirusowego;
• określenie stadium AIDS (przejście infekcji w chorobę).

Podczas pierwotnego zakażenia wirusem HIV metodą PCR można wykryć RNA wirusa HIV we krwi 10–14 dni po zakażeniu.

Wynik badania wyraża się jakościowo: pozytywny lub negatywny. Ujemny wynik testu wskazuje na brak RNA wirusa HIV we krwi.

Wynik pozytywny – wykrycie RNA wirusa HIV – wskazuje, że pacjent jest zakażony.

Wykrywanie wirusa HIV metodą reakcji łańcuchowej polimerazy (ilościowo)

Zwykle we krwi nie ma wirusa HIV.

Bezpośrednie oznaczenie ilościowe RNA HIV za pomocą PCR umożliwia dokładniejsze przewidywanie tempa rozwoju AIDS u osób zakażonych wirusem HIV niż oznaczanie liczby komórek CD4, a tym samym dokładniejszą ocenę ich przeżycia. Wysoki poziom cząstek wirusa zwykle koreluje z poważnym upośledzeniem odporności i niską liczbą komórek CD4. Niski poziom cząstek wirusowych generalnie koreluje z lepszym stanem odporności i wyższą liczbą komórek CD4. Zawartość wirusowego RNA we krwi pozwala przewidzieć przejście choroby do stadium klinicznego. Kiedy zawartość RNA-1 wirusa HIV wynosi >74 100 kopii/ml, u prawie wszystkich pacjentów rozwija się obraz kliniczny AIDS (Senior D., Holden E., 1996).

Prawdopodobieństwo zachorowania na AIDS jest 10,8 razy większe u osób, u których poziom wirusa HIV-1 we krwi przekracza 10 000 kopii/ml, niż u osób, u których poziom wirusa HIV-1 we krwi jest wyższy.<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Grupa amerykańskich ekspertów opracowała wskazania do leczenia pacjentów zakażonych wirusem HIV. Leczenie jest wskazane u pacjentów z małą liczbą komórek CD4 we krwi<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20 000 kopii/ml (PCR). Efekty terapii przeciwretrowirusowej u osób zakażonych wirusem HIV ocenia się poprzez obniżenie poziomu HIV RNA w surowicy.

Przy skutecznym leczeniu poziom wiremii powinien w ciągu pierwszych 8 tygodni zmniejszyć się 10-krotnie i znajdować się poniżej granicy czułości metody (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Dlatego dzisiaj wprowadzono i zastosowano w praktyce klinicznej wiele metod badawczych do diagnozowania zakażenia wirusem HIV, podobnie jak w przypadku wszystkich innych infekcji wirusowych. Wśród nich wiodącą rolę odgrywają badania serologiczne. Główne metody diagnozowania infekcji HIV przedstawiono w Tabeli 3 (patrz link źródłowy powyżej), gdzie podzielono je na cztery poziomy w zależności od znaczenia każdej metody w wykrywaniu wirusów:

• A - test służy zwykle do potwierdzenia diagnozy;
• B - test jest przydatny w określonych okolicznościach do diagnozowania niektórych form infekcji;
• C - test jest rzadko stosowany do celów diagnostycznych, ale ma duże znaczenie w badaniach epidemiologicznych;
• Test D nie jest powszechnie używany przez laboratoria do celów diagnostycznych.

Ponieważ w diagnostyce infekcji wirusowych, oprócz wyboru optymalnej metody analizy, równie ważna jest prawidłowa identyfikacja i pobranie biomateriału do badań, w Tabeli 4 (patrz link do źródła powyżej) przedstawiono zalecenia dotyczące wyboru optymalnego biomateriału do badań Zakażenie wirusem HIV.

W celu monitorowania osób zakażonych wirusem HIV należy skorzystać z możliwości kompleksowego badania stanu odporności - ilościowego i funkcjonalnego określenia wszystkich jej powiązań: odporności humoralnej, komórkowej i ogólnie odporności nieswoistej.

We współczesnych warunkach laboratoryjnych wieloetapowa zasada oceny stanu odporności obejmuje określenie subpopulacji limfocytów i immunoglobulin krwi. Oceniając wskaźniki, należy wziąć pod uwagę, że zakażenie wirusem HIV charakteryzuje się zmniejszeniem stosunku limfocytów T CD4/CD8 do mniej niż 1. Wskaźnik CD4/CD8 wynoszący 1,5–2,5 wskazuje na stan normergiczny, powyżej 2,5 wskazuje nadpobudliwość, mniejsza niż 1,0 - wskazuje na niedobór odporności. Również stosunek CD4/CD8 może być mniejszy niż 1 w ciężkich przypadkach procesu zapalnego.

Stosunek ten ma fundamentalne znaczenie przy ocenie układu odpornościowego u chorych na AIDS, gdyż wirus HIV selektywnie infekuje i niszczy limfocyty CD4, w wyniku czego stosunek CD4/CD8 spada do wartości znacznie mniejszych od 1.

Ocena stanu immunologicznego opiera się także na wykryciu ogólnych lub „poważnych” defektów komórkowego i humoralnego układu odpornościowego: hipergammaglobulinemii (zwiększone stężenie IgA, IgM, IgG) lub hipogammaglobulinemii w fazie terminalnej; zwiększone stężenie krążących kompleksów immunologicznych; zmniejszona produkcja cytokin; osłabienie odpowiedzi limfocytów na antygeny i mitogeny.

Naruszenie stosunku populacji w ogólnej puli limfocytów B jest charakterystyczne dla niewydolności odporności humoralnej. Zmiany te nie są jednak specyficzne dla zakażenia wirusem HIV i mogą wystąpić w przypadku innych chorób. Dokonując kompleksowej oceny szeregu innych parametrów laboratoryjnych, należy wziąć pod uwagę, że zakażenie wirusem HIV charakteryzuje się także: anemią, limfo- i leukopenią, trombocytopenią, podwyższonym poziomem β2-mikroglobuliny i białka C-reaktywnego oraz zwiększoną aktywnością aminotransferaz. aktywność w surowicy krwi.

Zespół nabytego niedoboru odporności jest od ponad czterdziestu lat jednym z kluczowych problemów współczesnego społeczeństwa. Dlatego diagnostyka HIV przyciąga obecnie wiele uwagi i zasobów. W końcu im szybciej wykryty zostanie wirus niszczący układ odpornościowy organizmu, tym większe są szanse na uniknięcie śmierci.

Istota problemu

Pod skrótem HIV kryje się definicja – jedna z najniebezpieczniejszych spośród obecnie istniejących. Pod jego wpływem wszystkie właściwości ochronne organizmu zostają głęboko stłumione. To z kolei prowadzi do występowania różnych nowotworów złośliwych i wtórnych infekcji.

Zakażenie wirusem HIV może postępować na różne sposoby. Czasami choroba niszczy osobę w ciągu 3-4 lat, ale w niektórych przypadkach może trwać dłużej niż 20 lat. Warto wiedzieć, że wirus ten jest niestabilny i szybko umiera, jeśli znajdzie się poza organizmem żywiciela.

HIV może być przenoszony sztucznie, poprzez kontakt z krwią i poprzez mechanizm biokontaktu.

Jeśli doszło do jednorazowego kontaktu z nosicielem wirusa, ryzyko infekcji będzie niskie, ale przy stałej interakcji znacznie wzrasta. Rozpoznanie zakażenia wirusem HIV to coś, czego nie należy lekceważyć, zwłaszcza przy zmianie partnerów seksualnych

Warto zwrócić uwagę na pozajelitową drogę zakażenia. Może wystąpić podczas przetaczania skażonej krwi, iniekcji igłami zanieczyszczonymi krwią osób zakażonych wirusem HIV, a także podczas niesterylnych zabiegów medycznych (tatuaże, piercing, zabiegi stomatologiczne z użyciem niewłaściwie leczonych narzędzi) .

Jednocześnie warto wiedzieć, że nie trzeba bać się kontaktu i domowego przenoszenia wirusa. Ale faktem pozostaje: dana osoba jest bardzo podatna na zakażenie wirusem HIV. A jeśli osoba w wieku powyżej 35 lat zostanie zarażona, rozwój AIDS następuje znacznie szybciej niż u osób, które nie przekroczyły jeszcze trzydziestego roku życia.

Główne objawy

Oczywiście najlepszym sposobem na zidentyfikowanie problemu lub jego braku jest zdiagnozowanie wirusa HIV. Ale z jakich powodów osoba prowadząca zdrowy tryb życia może udać się na kontrolę pod kątem infekcji? Oczywiście taką inicjatywę trzeba w jakiś sposób uzasadnić. Dlatego warto wiedzieć, jakie objawy mogą świadczyć o procesach destrukcyjnych, tłumiących układ odpornościowy.

Jest mało prawdopodobne, że możliwe będzie zidentyfikowanie etapu inkubacji wirusa bez badania krwi, ponieważ organizm w tym czasie nie reaguje jeszcze w żaden sposób na wrogie elementy.

Drugi etap (pierwotne objawy) może również pozostać niezauważony bez pomocy lekarza. Ale czasami następuje aktywna replikacja wirusa i organizm zaczyna na to reagować - odnotowuje się gorączkę, różne polimorficzne wysypki, zespół liniowy i zapalenie gardła. W drugim etapie można dodać choroby wtórne, takie jak opryszczka, infekcje grzybicze, zapalenie płuc itp.

Trzeci charakteryzuje się stopniowym wzrostem niedoboru odporności. W związku z tym, że ogniwa układu ochronnego obumierają, zwiększa się dynamika ich produkcji, co pozwala zrekompensować znaczne straty. Na tym etapie może dojść do stanu zapalnego kilku węzłów chłonnych należących do różnych układów. Ale nie obserwuje się silnych bolesnych wrażeń. Okres utajony trwa średnio od 6 do 7 lat, ale może trwać do 20 lat.

Na czwartym etapie chorób wtórnych pojawiają się współistniejące infekcje grzybicze, bakteryjne pierwotniaki, pochodzenia wirusowego, a także nowotwory. Wszystko to dzieje się na tle ciężkiego niedoboru odporności.

Metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV

Mówiąc o głębokim tłumieniu mechanizmów obronnych organizmu w wyniku narażenia na wirusa, warto zauważyć, że przyszłość pacjenta w tym przypadku zależy bezpośrednio od terminowej i trafnej diagnozy.

W tym celu współczesna medycyna wykorzystuje różne systemy badawcze, które opierają się na badaniach krwi immunochemiluminescencyjnych i immunoenzymatycznych. Techniki te umożliwiają określenie obecności przeciwciał należących do różnych klas. Wynik ten pozwala znacząco zwiększyć zawartość informacyjną metod o analitycznej, klinicznej specyficzności i czułości w pracy z chorobami zakaźnymi.

Interesujący jest również fakt, że to metoda reakcji łańcuchowej polimerazy umożliwiła przeniesienie diagnostyki HIV na zupełnie nowy poziom. Do badań nadają się różne materiały biologiczne: osocze krwi, biopsja, skrobanie, surowica, płyn mózgowo-rdzeniowy lub opłucnowy.

Jeśli mówimy o metodach badań laboratoryjnych, to skupiają się one przede wszystkim na identyfikacji kilku kluczowych chorób. Mówimy o zakażeniu wirusem HIV, gruźlicą, wszystkimi infekcjami przenoszonymi drogą płciową i wirusowym zapaleniem wątroby.

Do identyfikacji wirusa niedoboru odporności wykorzystuje się także molekularne testy genetyczne i serologiczne. W pierwszym przypadku oznacza się RNA wirusa i DNA prowirusa, w drugim przypadku analizuje się przeciwciała przeciwko HIV i wykrywa antygen P24.

W klinikach stosujących, że tak powiem, klasyczne metody diagnostyczne, stosuje się głównie standardowy protokół badań serologicznych.

Wczesna diagnostyka HIV

Tego typu ustalenie faktu zakażenia jest konieczne, aby jak najwcześniej rozpoznać zagrożenie uszkodzeniem układu odpornościowego. To, po pierwsze, pozwala uniknąć rozprzestrzeniania się infekcji, a po drugie, wpływa na chorobę w początkowej fazie.

Jeśli weźmiemy pod uwagę przykład Rosji, w armii i marynarce wojennej Federacji Rosyjskiej wprowadzono kliniczną klasyfikację zakażenia wirusem HIV. Przyniosło to pozytywne rezultaty: proces wczesnej diagnozy klinicznej stał się znacznie łatwiejszy.

Typowe objawy wskazujące na możliwe uszkodzenie układu odpornościowego to ból głowy, nocne poty i niemotywowane zmęczenie. Możliwe jest również wystąpienie gorączki, której towarzyszą objawy zapalenia migdałków. Oznacza to, że temperatura wzrasta do 38 stopni lub więcej, a jednocześnie powiększają się migdałki i pojawia się ból podczas połykania. Dopełnieniem tego wszystkiego jest szybka utrata wagi. Co więcej, objawy te są często złożone.

W niektórych przypadkach zakażenie wirusem HIV we wczesnych stadiach może objawiać się różnymi zmianami w stanie skóry. Mówimy tu o plamach, różyczkach, krostach, czyraczności itp. Wczesna diagnostyka wirusa HIV obejmuje również pracę z objawami, takimi jak uogólnione lub ograniczone powiększenie obwodowych węzłów chłonnych.

Jeśli jednocześnie następuje wzrost kilku węzłów chłonnych, trwający trzy miesiące lub dłużej, w różnych grupach, z wyjątkiem okolicy pachwiny, istnieją podstawy, aby podejrzewać wirusa ludzkiego układu odpornościowego.

Mówiąc o diagnozie w późniejszym okresie, należy zwrócić uwagę na objawy wtórnego niedoboru odporności, który często występuje pod przykrywką różnych objawów klinicznych. Mówimy o następujących przejawach:

• niemotywowana uogólniona limfadenopatia obwodowa;
• bóle stawów o nieznanej etiologii, które mają falisty przebieg;
• ARVI (ARI), zmiany zapalne płuc i dróg oddechowych, które dają o sobie znać dość często;
• gorączki niewiadomego pochodzenia i długotrwała gorączka o niskim stopniu nasilenia;
• ogólne zatrucie, które objawia się niemotywowaną słabością, zmęczeniem, letargiem itp.

Diagnostyka HIV w późnym stadium obejmuje badanie w kierunku takiej choroby jak mięsak Kaposiego, który objawia się pojawieniem się licznych nowotworów, często w górnej części ciała u młodych ludzi, po których następuje dynamiczny rozwój i przerzuty.

Reakcja łańcuchowa polimerazy

Rozważając różne metody diagnozowania zakażenia wirusem HIV, warto zwrócić na to szczególną uwagę. Należy od razu zauważyć, że to badanie krwi może mieć na celu określenie cech ilościowych i jakościowych.

Cel tej metody wykrywania wirusa można zdefiniować następująco:

• wczesna diagnostyka zakażenia wirusem HIV;
• wyjaśnienie obecności wątpliwych wyników w wyniku badania immunoblottingu;
• identyfikacja konkretnego stadium choroby;
• monitorowanie skuteczności leczenia mającego na celu supresję wirusa.

Jeśli mówimy o infekcji pierwotnej, należy zaznaczyć, że technika ta umożliwia oznaczenie RNA wirusa HIV we krwi pacjenta już po 14 dniach od momentu zakażenia. To bardzo dobry wynik. W takim przypadku sam wynik badania będzie miał wyraz jakościowy: albo pozytywny (wirus jest obecny), albo negatywny.

Ilościowa ekspresja PCR

Ten typ służy do określenia możliwego tempa rozwoju AIDS i przewidywania oczekiwanej długości życia pacjenta.

Ilościowe oznaczenie komórek RNA HIV we krwi pozwala zrozumieć, kiedy choroba wchodzi w fazę kliniczną.

Warto zwrócić uwagę na fakt, że laboratoryjne metody diagnostyki HIV dają dokładniejsze wyniki, jeśli biomateriał wymagany do analizy zostanie prawidłowo określony, a jego pobranie zostanie przeprowadzone kompetentnie.

Aby prowadzić wysokiej jakości monitorowanie osób zakażonych, konieczne jest (jeśli to możliwe) zastosowanie zintegrowanego podejścia do badania stanu odporności pacjenta. Mówimy o ilościowym i funkcjonalnym określeniu wszystkich części układu obronnego: odporności komórkowej, humoralnej i odporności nieswoistej jako takiej.

Diagnostyka laboratoryjna

Coraz częściej we współczesnych warunkach laboratoryjnych stosuje się wieloetapową metodę oceny stanu układu odpornościowego. Technika ta często polega na określeniu subpopulacji immunoglobulin i limfocytów we krwi. Oznacza to, że brany jest pod uwagę stosunek.Jeśli wynik wynosi mniej niż 1,0, istnieje powód, aby podejrzewać niedobór odporności.

Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV musi obejmować ten test, ponieważ wirus ten charakteryzuje się selektywnym uszkodzeniem limfocytów CD4, co prowadzi do zauważalnego naruszenia powyższego stosunku (mniejszego niż 1,0).

Aby ocenić stan immunologiczny, lekarze mogą przeprowadzić badanie na obecność „poważnych” lub ogólnych defektów układu odporności humoralnej i komórkowej. Mówimy o hipogammaglobulinemii lub hipergammaglobulinemii, a także zmniejszeniu produkcji cytokin, wzroście stężenia krążących kompleksów immunologicznych i osłabieniu odpowiedzi limfocytów na mitogeny i antygeny.

Warto zwrócić uwagę na fakt, że diagnostyka laboratoryjna wirusa HIV składa się z dwóch kluczowych etapów:

1. Laboratorium przesiewowe. Jeżeli uzyskano wynik pozytywny w teście ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), to powtarza się go jeszcze dwukrotnie w tym samym systemie i bez zmiany surowicy. W przypadku, gdy dwa z trzech badań pozwolą na wykrycie wpływu wirusa, surowica wysyłana jest do dalszych badań do laboratorium referencyjnego.
2. Drugi etap, obejmujący laboratoryjne metody diagnostyki zakażenia wirusem HIV, polega na określeniu stanu układu odpornościowego. Wykonuje się je we wspomnianym laboratorium referencyjnym. Tutaj surowica dodatnia jest ponownie badana w teście ELISA, ale przy użyciu innego systemu testowego, który różni się od poprzedniego składem antygenów, przeciwciał czy formatem samych testów. W przypadku uzyskania wyniku negatywnego przeprowadza się powtórne badanie w trzecim systemie testowym. Jeżeli ostatecznie nie wykryto wpływu wirusa, rejestruje się brak zakażenia wirusem HIV. Ale jeśli wynik jest pozytywny, surowicę bada się metodą liniową lub immunoblot.

Ostatecznie taki algorytm prowadzi do wyników pozytywnych, neutralnych lub negatywnych.

Każdy obywatel powinien wiedzieć, że ma dostęp do diagnostyki w kierunku HIV. AIDS można wykryć w placówkach prywatnego, gminnego lub państwowego systemu opieki zdrowotnej.

Leczenie

Naturalnie identyfikacja wirusa byłaby mało przydatna w przypadku braku różnych metod wpływania na infekcję. I chociaż w tej chwili nadal nie ma szczepionki, która mogłaby całkowicie zneutralizować wirusa, właściwa diagnoza, leczenie wirusa HIV i późniejsza profilaktyka mogą znacznie poprawić stan pacjenta, przedłużając w ten sposób jego życie. Tezę tę potwierdza fakt, że średnia długość życia mężczyzn, którzy rozpoczęli leczenie HIV w odpowiednim czasie, wynosi 38 lat. Kobiety, które rozpoczynają walkę z wirusem niedoboru odporności, żyją średnio 41 lat.

Po postawieniu diagnozy leczenie HIV sprowadza się do zastosowania kilku technik. Jedną z najbardziej powszechnych jest aktywna terapia przeciwretrowirusowa, znana również jako HAART. Jeśli ten rodzaj leczenia zostanie zastosowany szybko i prawidłowo, można znacznie spowolnić rozwój AIDS lub całkowicie go zatrzymać.

Istotą HAART jest jednoczesne stosowanie kilku leków, których zadaniem jest oddziaływanie na różne mechanizmy rozwoju wirusa niedoboru odporności.

Po ustaleniu faktu zakażenia różnymi metodami diagnostyki HIV można zastosować leki o następującym działaniu:

• Immunologiczny. Układ odpornościowy zostaje ustabilizowany, wzrasta poziom limfocytów T i przywracana jest ochrona przed różnymi infekcjami.
• Kliniczny. Zapobiega się rozwojowi AIDS i wszelkim jego przejawom, wydłuża się życie pacjentów, zachowując wszystkie funkcje organizmu.
• Wirusologiczne. Replikacja wirusa jest blokowana, w wyniku czego maleje, a następnie zostaje ustalona na niskim poziomie.

Trudno przecenić znaczenie takich środków wpływania na chorobę, jak diagnostyka, leczenie i zapobieganie zakażeniu wirusem HIV. Dlatego najlepszą rzeczą, jaką można zrobić po pozytywnym wyniku testu na infekcję, jest natychmiastowe rozpoczęcie walki z chorobą. Inną metodą, która może w tym pomóc, jest leczenie wirusologiczne.

W tym przypadku mówimy o stosowaniu leków, które nie pozwalają wirusowi przyczepić się do limfocytów T i przedostać się do organizmu. Leki te nazywane są inhibitorami penetracji. Konkretnym przykładem jest Celsentry.

Do tłumienia wirusa HIV można zastosować wirusowe inhibitory proteazy. Celem tej grupy leków jest zapobieganie zakażeniu nowych limfocytów. Są to leki takie jak Viracept, Reyataz, Kaletra itp.

Trzecią grupą leków stosowanych miejscowo są inhibitory odwrotnej transkryptazy. Są potrzebne do blokowania enzymu umożliwiającego namnażanie się RNA wirusa w jądrze limfocytu. Takie metody mogą mieć znaczący wpływ na problem, jakim jest zakażenie wirusem HIV. Diagnostyka, leczenie i profilaktyka AIDS to praca wykwalifikowanych lekarzy, dlatego to oni powinni opracować algorytm stosowania leków.

Jeśli to konieczne, można również zastosować interwencje immunologiczne i kliniczne.

Zapobieganie

Światowa Organizacja Zdrowia sugeruje następujące metody zwalczania zakażenia wirusem HIV:

• Zapobieganie przenoszeniu drogą płciową. Należą do nich seks chroniony, dystrybucja prezerwatyw, leczenie chorób przenoszonych drogą płciową i programy edukacyjne.
• Dla kobiet w ciąży, u których zdiagnozowano zakażenie wirusem HIV – diagnostyka, profilaktyka przy użyciu odpowiednich środków chemicznych, a także profesjonalne poradnictwo i leczenie.
• Organizacja profilaktyki poprzez produkty krwiopochodne. W tym przypadku mówimy o przetwarzaniu antywirusowym i kontroli dawców.
• Pomoc socjalna i medyczna dla pacjentów i ich rodzin.

Aby mieć pewność, że diagnoza HIV nie ujawni obecności wirusa, należy przestrzegać prostych zasad bezpieczeństwa:

• jeżeli krew zakażonej osoby dostanie się na skórę, należy ją natychmiast zmyć wodą z mydłem, a następnie miejsce kontaktu spryskać alkoholem;
• jeśli uszkodzenie zostało spowodowane przez przedmiot zawierający elementy wirusa, ranę należy ucisnąć, wycisnąć krew, obszar leczyć nadtlenkiem wodoru, a krawędzie wypalić jodem;
• nigdy nie używaj strzykawek, których sterylność została naruszona;
• Podczas stosunku płciowego używaj prezerwatywy i lepiej najpierw sprawdzić partnera pod kątem infekcji.

Wyniki

Dzięki temu, że diagnoza HIV nie stoi w miejscu, tysiące ludzi ma możliwość terminowego rozpoczęcia leczenia i znacznego wydłużenia swojego życia. Najważniejsze, aby nie ignorować oczywistych objawów i nie bać się iść do lekarza.

Produkowane kilkoma różnymi metodami. Wydawać by się mogło, że nie ma nic prostszego niż wykrycie tej choroby poprzez pobranie krwi. Ale tak nie jest. Rzeczywiście w ten sposób można wykryć zakażenie wirusem HIV, jednak dalsze badania prowadzi się przy użyciu innych metod. Od nich w dużej mierze zależy, jakie leczenie zostanie przepisane pacjentowi i jakie działania zostaną podjęte później. Do najpowszechniejszych i wysoce skutecznych metod należą analiza przesiewowa i immunoblot. Każdy z nich należy rozważyć bardziej szczegółowo.

Diagnostyka AIDS: analiza przesiewowa

Na początkowym etapie diagnozowania zakażenia wirusem HIV stosuje się badanie przesiewowe lub metodę ELISA. Opracowując tę ​​metodę, w laboratorium sztucznie stworzono białka wirusa. Reagują na przeciwciała w szczególny sposób. Te ostatnie powstają w organizmie, gdy pojawiają się w nim komórki zakażone straszliwą chorobą. Diagnostyka laboratoryjna wirusa HIV w tym przypadku odbywa się przy użyciu sztucznych enzymów. Kiedy wchodzą w interakcję z przeciwciałami, zmieniają kolor. Pasek ze wskaźnikiem po dostaniu się krwi umieszcza się pod specjalnym urządzeniem, za pomocą którego można określić, czy dana osoba cierpi na tę chorobę, czy nie. Nowoczesne metody diagnozowania wirusa HIV, w tym test ELISA, pozwalają z dużą dokładnością określić fakt zakażenia lub jego brak. Jednak, jak każdy sprzęt, w aparacie do analizy przesiewowej występuje błąd. Dlatego w razie potrzeby pacjent ponownie podchodzi do badania.

Warto wiedzieć, że test ELISA jest jedną z najwcześniejszych metod określenia obecności wirusa niedoboru odporności w organizmie. Zakażenie wirusem HIV to diagnoza, którą można wykryć dopiero kilka tygodni po zakażeniu. Kiedy zakażone komórki dostają się do krwioobiegu, układ odpornościowy organizmu zaczyna aktywnie stawiać opór. Wytwarzają się przeciwciała, które po dwóch lub trzech tygodniach wykrywa się w badaniach laboratoryjnych. Wczesna diagnostyka zakażenia wirusem HIV za pomocą testu ELISA pozwala wykryć we krwi człowieka przeciwciała przeciwko wirusowi niedoboru odporności. Na tym polega główna różnica w porównaniu z innymi nowoczesnymi metodami.

Warto zaznaczyć, że u niektórych osób przeciwciała przeciwko tej chorobie zaczynają pojawiać się później. Od momentu zakażenia do rozpoczęcia tego procesu może minąć od trzech do sześciu tygodni. Z tego powodu eksperci medyczni zalecają poddanie się badaniu przesiewowemu cztery do pięciu tygodni po odbyciu stosunku płciowego bez zabezpieczenia lub z innej przyczyny podejrzenia przypadkowej infekcji.

Metody laboratoryjnej diagnostyki zakażenia wirusem HIV metodą ELISA są opracowywane od dawna. Do chwili obecnej istnieją cztery generacje testów. Najdokładniejsze i najskuteczniejsze z nich to te, które zostały opracowane ostatnio. Diagnostyka laboratoryjna zakażenia wirusem HIV i AIDS za pomocą testów ELISA trzeciej i czwartej generacji przeprowadzana jest z wykorzystaniem rekombinowanych białek i peptydów. Czułość tych testów na przeciwciała wytwarzane przez organizm wynosi 92 - 93%. Mówimy o rosyjskich metodach badawczych. Europejczycy nauczyli się przeprowadzać podobne testy z czułością na poziomie 99%.

Nowoczesne metody diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV w oparciu o test ELISA służą nie tylko wykryciu obecności choroby. Za pomocą analizy przesiewowej można monitorować rozprzestrzenianie się wirusa niedoboru odporności, a także pobrać materiał do badań przed pobraniem krwi od dawców.

ELISA to standardowa metoda diagnozowania zakażenia wirusem HIV: jak się ją wykonuje, dlaczego daje fałszywy wynik?

Diagnostyka HIV i AIDS za pomocą testu ELISA jest standardową procedurą. Krew pacjenta pobierana jest z żyły. Do analizy wystarczy pięć mililitrów materiału. Kliniczny HIV typu 2 i 1 rozpoznaje się co najmniej osiem godzin po spożyciu. Lekarze zalecają robienie tego rano na pusty żołądek. Wyniki pełnego badania będą znane za dwa lub trzy dni. Ekspresowy przegląd odbywa się w krótszym czasie. Z reguły zajmuje to tylko kilka godzin. Jednak w tym przypadku błąd wzrasta. Ekspresowa diagnoza wirusa HIV jest konieczna w nagłych przypadkach, na przykład gdy pacjent potrzebuje pilnej operacji. Taką analizę należy przeprowadzić przed nieplanowanymi interwencjami chirurgicznymi, ponieważ jeśli u pacjenta występuje wirus niedoboru odporności, lekarze przestrzegają zwiększonych środków bezpieczeństwa. Kliniczne rozpoznanie zakażenia wirusem HIV w krótkim czasie jest konieczne również w przypadkach, gdy oddana krew musi zostać szybko pobrana, aby uratować innego pacjenta.

Zdarzają się przypadki, gdy u danej osoby zdiagnozowano AIDS lub HIV, ale w rezultacie nie potwierdzono tego lub odwrotnie. Dlaczego tak się dzieje w przypadku testu ELISA? Wynik fałszywie ujemny może wynikać z nieprawidłowego przygotowania krwi do badania. Czasami przyczyną tego jest niewłaściwe wykonanie jej odbioru. Wynik fałszywie ujemny przy weryfikacji rozpoznania zakażenia wirusem HIV nie zostaje potwierdzony nawet w przypadku zbyt wczesnego pobrania materiału do badania. W końcu od zakażenia musiały minąć co najmniej trzy tygodnie. Zdarzają się przypadki, gdy wynik wykrycia wirusa niedoboru odporności jest fałszywie dodatni. Wynika to z ogólnego stanu układu odpornościowego i hormonalnego organizmu ludzkiego. W większości przypadków u pacjenta występują choroby, które są wynikiem fałszywie dodatniego wyniku. Mówimy o alkoholowym zapaleniu wątroby, w którym wątroba wytwarza specjalne enzymy, które mogą powodować nieprawidłowe rozpoznanie wirusa HIV. Ciąża i niektóre choroby autoimmunologiczne, a także szpiczak mnogi mogą również powodować fałszywie dodatni wynik. Lista ta może obejmować pacjentów dializowanych oraz osoby zaszczepione na krótko przed diagnostyką różnicową wirusa HIV.

Mówiąc o analizie przesiewowej, należy zaznaczyć, że ta metoda badawcza wymaga potwierdzenia. Lekarze, zanim na tej podstawie postawią diagnozę HIV, zawsze wysyłają pacjenta na badanie immunologiczne.

Podstawowe metody diagnostyki laboratoryjnej zakażenia wirusem HIV: immunoblotting

AIDS, którego diagnostyka i leczenie są ze sobą ściśle powiązane, wykrywa się na kilka sposobów. Jak wspomniano powyżej, jeden test ELISA nie wystarczy, aby ostatecznie postawić diagnozę. Diagnostykę różnicową zakażenia wirusem HIV w tym przypadku uzupełnia immunoblot. We współczesnej medycynie nazywa się to ostateczną metodą potwierdzającą diagnozę. W tym przypadku do badań wykorzystywane są białka zawarte we krwi pacjenta. Są one rozdzielane w specjalnym żelu, po czym pracownicy laboratorium mają możliwość zbadania składu molekularnego krwi.

Czas potrzebny do zdiagnozowania wirusa HIV przy użyciu tej metody waha się od jednego do trzech dni. Do badania pobierana jest krew z żyły pacjenta i umieszczana na testerze z żelem. Wynik, który jest kwestionowany, może wystąpić w czasie ciąży, obecności procesów onkologicznych lub gruźlicy. Fałszywie negatywna reakcja na test może wystąpić, jeśli test zostanie przeprowadzony nieprawidłowo lub jeśli zostanie przeprowadzony zbyt wcześnie. Od momentu zakażenia muszą minąć co najmniej trzy tygodnie. W końcu czas, po którym zdiagnozowano HIV, zależy bezpośrednio od stanu układu odpornościowego.

Inne metody diagnozowania AIDS i HIV

Metody diagnostyki radiacyjnej AIDS stosuje się z reguły w stadium terminalnym lub wtórnym. Za ich pomocą możliwa jest identyfikacja zmian, jakie zachodzą w organizmie na skutek chorób wtórnych czy infekcji oportunistycznych.

Diagnostyka biorezonansowa wirusa HIV, zwana także skanowaniem nieliniowym, stosowana jest głównie w prywatnych klinikach do wykrywania wirusa niedoboru odporności. Oficjalna medycyna uważa tę metodę za niewystarczająco dokładną i skuteczną. Być może udoskonalenie diagnostyki nieliniowej w przyszłości umożliwi identyfikację tej strasznej diagnozy już w okresie inkubacji.

Diagnostyka zakażenia wirusem HIV: metoda serologiczna i jej cechy

Jest to stosunkowo nowa technika, w której laboratoryjne kryteria diagnozowania zakażenia wirusem HIV opierają się na zasadzie antygen-przeciwciało. W przypadku wirusa niedoboru odporności w organizmie człowieka następuje poszukiwanie przeciwciał przeciwko wirusowi. W tym celu wykorzystuje się sztucznie uzyskany antygen, na który muszą zareagować przeciwciała. Specyficzne markery serologiczne zakażenia wirusem HIV powodują specyficzne zmiany w składzie krwi. Warto zaznaczyć, że ta metoda badawcza jest najskuteczniejsza w ostrej fazie, która kończy się serokonwersją. Po tym następuje bezobjawowy okres utajony, podczas którego znalezienie antygenu nie jest łatwe.

Diagnostyka referencyjna zakażenia wirusem HIV: opis i cechy

Wartości referencyjne HIV są uważane za najdokładniejsze w ustalaniu diagnozy. Ta metoda badawcza łączy w sobie test ELISA i immunoblot. Laboratorium referencyjne diagnostyki HIV umożliwia pobieranie i późniejsze przetwarzanie próbek na dwa sposoby. Pozwala to uzyskać najdokładniejszy wynik w ciągu 24 godzin. Ponowne sprawdzenie analizy uzyskanej w laboratorium referencyjnym jest konieczne tylko wtedy, gdy dane z testu ELISA i immunoblotu są ze sobą sprzeczne. Jest to dość rzadkie zjawisko, które najczęściej występuje u osób z opisanymi powyżej chorobami współistniejącymi.