Pozitív közvetlen Coombs-reakció. Antiglobulin teszt. Közvetlen és közvetett Coombs-reakció. Hogyan történik az elemzés?

A Coombs-teszt egy vérvizsgálat, amelyet annak kimutatására végeznek, hogy a vér tartalmaz-e bizonyos, esetleg nem biztonságos antitesteket. Ezek az antitestek a vörösvértestekhez tapadnak, és megtámadhatják az immunrendszert, és más módon is károsíthatják. Az orvosi terminológiában ezt a vizsgálatot antiglobulin tesztnek (AGT) is nevezik.

Coombs-minták típusai

Kétféle Coombs-teszt létezik: közvetlen és közvetett.

Közvetlen Coombs-teszt direkt (DAT) néven is ismert, kimutatja a vörösvértestek felszínéhez kötődő autoantitesteket. Ezek az antitestek néha bizonyos betegségek következtében vagy bizonyos gyógyszerek, például prokainamid, metildopa vagy kinidin szedésekor termelődnek a szervezetben.

Ezek az antitestek veszélyesek, mert néha vérszegénységet okoznak a vörösvérsejtek elpusztításával.

Ezt a vizsgálatot néha elrendelik a sárgaság vagy anémia okának diagnosztizálására.

Általában a Coombs-reakció negatív.

Pozitív:

• újszülöttek hemolitikus betegségei;
• autoimmun hemolízis;
• hemolitikus transzfúziós reakciók;
• gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus vérszegénység.

Közvetett Coombs-teszt, más néven , a vérszérumban található vörösvértestek elleni antitestek kimutatására szolgál (a szérum a vér tiszta sárga folyadéka, amely a vörösvértestek és a koaguláns eltávolítása után marad vissza).

A közvetett Coombs-tesztet vérátömlesztés során használják annak meghatározására, hogy a donor vére megegyezik-e a recipiens vérével. Ezt kompatibilitási tesztnek nevezik, és segít megelőzni a donor vérével kapcsolatos bármilyen nemkívánatos reakciót. Ez a vizsgálat terhes nők számára is javasolt. Egyes nőknél IgG antitestek találhatók, amelyek átjuthatnak a placentán a magzati vérbe, és károsíthatják az újszülöttet, hemolitikus anémiának nevezett hemolitikus betegséget okozva.

Eljárás

A vért fecskendővel veszik a vénából, általában a kéz hátsó részéből vagy a könyökhajlatból. Ezt megelőzően a szúrás helyét alaposan fertőtlenítik, majd vérvétel után tiszta gézzel vagy vattával kell felvinni.

A kapott vért a laboratóriumban megtisztítják, és a vörösvértesteket elválasztják. A mintát ezután egymás után megvizsgálják különböző szérum- és Coombs-reagensekkel, amelyeket kontraszttal állítanak elő. Ha nincs agglutináció (vörösvértestek csomósodása), ez pozitív eredményt jelent.

Ha azonban a teszt negatív, az azt jelenti, hogy a vérben olyan antitestek vannak, amelyek a vörösvértestek ellen hatnak. Ez különféle betegségekre utalhat, például vérszegénységre (természetes vagy gyógyszeres eredetű), szifiliszre vagy mycoplasma fertőzésre. Az eredmények kézhezvétele után a kezelőorvos megfelelő kezelést ír elő.

Videó

Vigyen fel 1 nagy csepp O(I), A(II), B(III) szérumot egy tányérra vagy tárgylemezre pipettákkal (különböző!). Az idő feljegyzése után használjon tiszta üvegrudat vagy egy tárgylemez tiszta sarkát, hogy a szérumcseppeket vércseppekkel keverje össze. A meghatározás 5 percig tart, a lemezt felrázzuk, majd minden cseppkeverékhez adjunk 1 csepp sóoldatot, és értékeljük az eredményeket. Jobb, ha a szérum 2 különböző sorozatban érkezik. A vércsoport-eredményeknek meg kell egyeznie mindkét szérumtételben.

Az izohemagglutinációs eredmények értékelése:

izohemagglutináció. Ha a reakció pozitív, akkor a keverékben apró, vörös ragadós vörösvértestszemcsék jelennek meg. A szemek nagyobb szemcsékké, az utóbbiak pedig pelyhekké egyesülnek. A szérum szinte elszíneződött;

ha a reakció negatív, az elegy egyenletesen rózsaszínű marad 5 percig, és nem észlelünk szemcséket;

Ha 3 O(I), A(II), B(III) csoportba tartozó szérummal dolgozunk, 4 reakciókombináció lehetséges:

1. ha mind a 3 szérum negatív reakciót adott, vagyis a keverék egyenletesen rózsaszínű - ez az O(I) vércsoport;

   ha csak az A(II) csoport széruma adott negatív reakciót, az O(I) és B(III) szérum pedig pozitív reakciót, azaz szemek jelentek meg - ez az A(II) vércsoport;

   A B(II) csoport széruma negatív, az O(I) és A(II) csoport széruma pedig pozitív reakciót adott - ez a B(III) vércsoport.

mind a 3 szérum pozitív reakciót adott - a vizsgált vér AB(IV) csoport volt. Ebben az esetben vizsgálatot végeznek az AB(IV) csoportú szérummal.

Jegyzet! A vizsgált vércseppeknek 5-10-szer kisebbnek kell lenniük, mint a szérum cseppjei.

Isohemagglutinációs hibák.

Az agglutináció végrehajtásának elmulasztása ott, ahol kellene, és agglutináció jelenléte ott, ahol nem kellene. Ennek oka lehet a gyenge szérumtiter és a gyenge vörösvérsejt-agglutináció.

Agglutináció jelenléte ott, ahol nem kellene- Ez pszeudoagglutináció, amikor a vörösvértestek halmazai „érmeoszlopokat” alkotnak. A tányér felrázása vagy sóoldat hozzáadása elpusztítja őket.

Panagglutináció, amikor a szérum összetapaszt minden vörösvérsejtet, beleértve a saját vércsoportjába tartozókat is. Az 5. percre az agglutináció jelei eltűnnek.

Létezik az úgynevezett hideg panagglutináció is, amikor a vörösvértestek összetapadnak a helyiség alacsony (15 °C alatti) levegőhőmérsékletének köszönhetően.

Mindezekben az esetekben vagy ismételt reakciót hajtanak végre, vagy szabványos vörösvértesteket használnak.

Az Rh vér meghatározása

Az Rh-státusz meghatározására, azaz az Rh-rendszer antigének jelenlétének vagy hiányának kimutatására az emberek vérében, standard anti-Rh-szérumokat (reagenseket) használnak, amelyek különböző specifitásúak, azaz amelyek e rendszer különböző antigénjei ellen antitesteket tartalmaznak. Az Rh 0 (D) antigén meghatározásához leggyakrabban anti-Rhesus szérumot használnak 10%-os zselatin oldat hozzáadásával, vagy 33%-os poliglucin oldattal előzetesen elkészített standard anti-Rhesus reagenst. A pontosabb kutatási eredmények eléréséhez, valamint más szerológiai rendszerek antigénjeinek azonosításához a Coombs-tesztet alkalmazzák (nagyon érzékeny a transzfundált vér kompatibilitásának meghatározására is). A kutatáshoz natív vért vagy valamilyen tartósítószerrel készített vért használnak. Ebben az esetben a vért tízszeres térfogatú izotóniás nátrium-klorid oldattal kell lemosni a tartósítószerről. Az Rh állapot meghatározásakor- Rh 0 (D) két különböző sorozatból származó szérum vagy anti-Rhesus reagens mintát kell használni, és ezzel egyidejűleg Rh-pozitív (Rh +) és Rh-negatív (Rh -) vérből nyert standard vörösvértesteket. egyéneket kell használni az ellenőrzéshez. Más izoantigének meghatározásakor megfelelően kell használni azokat a kontroll vörösvértesteket, amelyek tartalmazzák vagy nem tartalmazzák azt az antigént, amely ellen a standard szérumban lévő antitestek irányulnak.

A részleges hő-agglutininek az antitestek leggyakoribb típusai, amelyek autoimmun hemolitikus anémia kialakulását okozhatják. Ezek az antitestek az IgG-hez, ritkán az IgM-hez, az IgA-hoz tartoznak.

COOMBS-TESZT

Coombs-teszt: bevezetés. A Coombs-teszt a hemagglutinációs reakción alapuló laboratóriumi diagnosztikai módszer.

Az autoimmun hemolitikus anémia diagnosztizálásának fő módszere a Coombs-teszt. Azon alapul, hogy az immunglobulinokra (különösen az IgG-re) vagy a komplement komponensekre (különösen az S3-ra) specifikus antitestek képesek agglutinálni az IgG-vel vagy S3-mal bevont eritrocitákat.

Az IgG és C3b kötődését a vörösvértestekhez autoimmun hemolitikus anémiában és gyógyszer-indukálta immunhemolitikus anémiában figyelték meg. Közvetlen Coombs-teszt. A közvetlen Coombs-teszt a vörösvértestek felületén rögzített antitestek vagy komplement komponensek kimutatására szolgál. Ez a következőképpen történik:

Humán immunglobulinok (antiglobulin szérum) vagy komplement (antikomplementer szérum) elleni antitestek előállításához az állatot humán szérummal, immunglobulinokkal vagy humán komplementtel immunizálják. Az állatból nyert szérumot megtisztítják más fehérjék elleni antitestektől.

A páciens vörösvérsejtjeit sóoldattal mossák, hogy teljesen eltávolítsák a szérumot, amely semlegesíti az immunglobulinok és a komplement elleni antitesteket, és hamis negatív eredményt okozhat.

Ha antitestek vagy komplement komponensek rögzülnek a vörösvértestek felületén, az antiglobulin vagy anti-komplement szérum hozzáadása a vörösvértestek agglutinációját okozza.

A közvetlen Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

Autoimmun hemolízis.

Újszülöttek hemolitikus betegségei.

Gyógyszer által kiváltott immunhemolitikus anémia.

Hemolitikus transzfúziós reakciók. Közvetett Coombs-teszt. A közvetett Coombs-teszt kimutatja a vörösvértestek elleni antitesteket a szérumban. Ehhez a páciens szérumát 0-s csoportba tartozó donor vörösvértestekkel inkubálják, majd direkt Coombs-tesztet végeznek.

A közvetett Coombs-tesztet a következő esetekben használják:

A donor és a recipiens vér egyéni kompatibilitásának meghatározása.

Alloantitestek kimutatása, beleértve a hemolitikus transzfúziós reakciókat okozó antitesteket.

Felszíni eritrocita antigének meghatározása az orvosi genetikában és az igazságügyi orvostanban.

Egypetéjű ikrek megerősítése csontvelő-transzplantáció során.

A biológiai teszt elvégzéséhez a vért a lehető leggyorsabban (lehetőleg sugárban) kezdik átadni. 25 ml vér transzfúziója után a rendszercsövet egy bilinccsel rögzítjük. Ezután egy 3 perces szünet következik, amely alatt a címzett állapotát figyelik. A biológiai vizsgálat elvégzéséhez háromszor 25 ml vért fecskendeznek be. A vizsgálat végén (az első 75 ml vér transzfúziója után, 25 ml-es töredékes adagokban 3 perces időközönként) a rendszert a szükséges transzfúziós sebességre állítják be. Ha egynél több üveg vért ad át egy betegnek, el kell távolítani a tűt a vénából. Ebben az esetben a tűt eltávolítják annak az injekciós üvegnek a kémcsövéből, amelyben a vér kifolyt, és behelyezik a következő injekciós üvegbe. A rendszercső (gumi vagy műanyag) ebben a pillanatban egy bilinccsel van rögzítve. Ha a vérátömlesztés során bármilyen más gyógyszer intravénás beadása szükségessé válik a recipiensnek, ezt úgy kell megtenni, hogy átszúrják a rendszer gumicsövét. A műanyag cső lyukasztása elfogadhatatlan, mivel nem esik le. Minden egyes vérátömlesztés után a beteget ellenőrizni kell, hogy azonosítsák és azonnal kiküszöböljék a lehetséges szövődményeket, beleértve az allergiás reakciókat is. 2 órával a vérátömlesztés befejezése után meg kell mérni a testhőmérsékletet. Ha növekszik, a mérést óránként meg kell ismételni a következő 4 órán keresztül. Ugyanilyen fontos a vizeletürítés és a vizelet összetételének monitorozása, amely lehetővé teszi a toxikus transzfúziót követő reakció jelenlétének megállapítását. A vérátömlesztés után fellépő oliguria és anuria, a vérsejtek és a fehérje jelenléte a vizeletben közvetlenül jelzi a transzfúzió utáni hemolízis kialakulását.

Hemolitikus anémia, amelyet a saját vörösvérsejtjeik ellen irányuló autoimmun testek okoznak, nem értjük pontosan. Feltételezik azonban, hogy egyes tényezők (például vírus, abnormális fehérje) úgy változtatják meg a vörösvértesteket, hogy a szervezet „idegennek” érzékeli őket, és antitestek segítségével küzd meg ellenük. Egy másik elmélet szerint a vörösvértestek elleni antitestek szinte véletlenül keletkeznek bizonyos betegségekben abnormális plazmafehérje testek képződése során. Az ilyen fehérjetestek ugyanolyan „véletlenszerűen” olyan reakciókat adhatnak, amelyek segítségével diagnózist lehet felállítani (például a vírusos tüdőgyulladás, mint ismeretes, pozitív Wasserman-reakciót, pozitív Paul-Bunnel-reakciót és hideg agglutinációs reakciót ad). .

Van két Az autoantitestek fő típusai hemolitikus anémia esetén, nevezetesen: meleg antitestek (37 °C-on reagálnak) és hideg antitestek (amelyek reakcióképessége nő, ha a hőmérséklet nullához közelít). A meleg antitestek gyakoribbak, mint a hideg ellenanyagok. Dacie azt találta, hogy a meleg hemolizin kétszer gyakrabban fordul elő, mint a hideg. A hemolizinek és az agglutininek nem alapvetően különböző antitestek: csupán hatásuk jellegében különböznek egymástól. Az agglutininek agglutinálják a vörösvérsejteket, a hemolizinek pedig érzékenyebbé teszik a hemolízis összetett folyamatára (kiegészít!). Az eritrocitákhoz kötődő autoantitestek eritrocita-globin komplexet alkotnak. Ezt a komplexet a Coombs antiglobin teszt segítségével mutatják ki.

Coombs teszt Coombs szérummal végezzük, melynek elkészítéséhez a nyulat humán szérummal érzékenyítjük, amely ellen a nyúlszérumban antitestek képződnek. Amikor egy ilyen szenzitizált szérum a humán eritrocitákra hat, agglutinációjuk következik be, ha az eritrocita receptorokat blokkoló antitestek foglalják el. Mivel ezek a blokkoló antitestek humán szérumból származnak, agglutinálódnak a humán plazmára érzékenyített és precipitint tartalmazó nyúlszérummal. Ezt a reakciót Coombs-tesztnek nevezik; az autoimmun testek miatti hemolitikus vérszegénységre (Lo tit) szinte specifikus (részletesen lásd Maier).

Általában hemolitikus anémiák esetén primer vörösvértest-rendellenesség esetén a Coombs-teszt negatív, szerzetteknél pedig pozitív. Van azonban néhány kivétel e szabály alól: hamis pozitív Coombs-tesztet találnak alkotmányos hemolitikus anémia krízisei során, és gyenge mértékben, esetenként splenectomia után is, reumás ízületi gyulladás, sarcoidosis, gyakori vérátömlesztés és szisztémás lupus esetén. erythematosus. Természetesen szerzett hemolitikus vérszegénységben, autoimmun testek kialakulása nélkül, negatív.

Hemolitikus anémia Az autoimmun testek által okozott betegségek a következőkre oszthatók:
a) akut, szubakut és krónikus formák, valamint
b) ismeretlen etiológiájú idiopátiás és c) tüneti [vírusos tüdőgyulladás (csak hideg agglutininek), krónikus limfatikus leukémia, reticulosarcoma, lymphosarcoma, szisztémás lupus erythematosus (főleg meleg, ritkábban hideg agglutininek), szifilisz (hideg agglutininek, Miesovcherarian tumorok) alkalmazottakkal)).
c) tüneti [vírusos tüdőgyulladás (csak hideg agglutininek), krónikus limfatikus leukémia, reticulosarcoma, lymphosarcoma, szisztémás lupus erythematosus (főleg meleg, ritkábban hideg agglutininek), szifilisz (hideg agglutininek), petefészekdaganatok (Miescher és munkatársai)).

A hemolitikus vérszegénység klinikája, az autoimmun testek hatására fejlődő nagyon változatos, ezért aligha lehet általános klinikai képüket megrajzolni. Minden korú és mindkét nemű személy egyaránt érintett. Ennek ellenére úgy tűnik, hogy az idiopátiás formák gyakrabban figyelhetők meg nőknél (Sacks és Workman).

Az idiopátiás forma klinikai képe a betegség súlyosságától függően változik. Krónikus esetekben a megjelenés fokozatos, a betegség sok éven át húzódik, gyakori exacerbációkkal. A vérszegénység súlyossága a hemolízis mértékétől függően változik. A hemoglobin 10% -os csökkenése figyelhető meg, más esetekben a hemoglobin hosszú ideig 50-60% marad. A retikulocitózis intenzitása, valamint a bőr és a szérum icterikus elszíneződése megfelel a hemolízis mértékének. A bilirubin nagyon ritkán található a vizeletben, mivel nem jut át ​​a vesén, de hemoglobinuria figyelhető meg. Krónikus esetekben a lép gyakran megnagyobbodik, és akár igen jelentős méretet is elérhet, de más esetekben még érezhető. A máj ritkán nincs megnagyobbítva.

A legtöbb esetben a vérben macrocytosis figyelhető meg, akut stádiumban szintén sok mikrocita van, normoblastosis és polychromasia ritkán hiányzik, a leukocytosis elérheti a 30 000-et, a vérlemezkék normálisak. Egyes esetekben azonban súlyos thrombocytopenia lép fel. Evans ezeket az eseteket a vérlemezkék elleni antitestek egyidejű jelenlétével magyarázza, így hemolitikus anémia és thrombocytopenia is előfordul az autoimmun testek működése miatt - Evans-szindróma. Az ozmotikus rezisztencia enyhén csökken, de nem olyan mértékben és nem olyan tartósan, mint az alkotmányos globuláris sejtes vérszegénységben. Hőállósági teszt (Hegglin-Maier) 6 óra elteltével enyhe hemolízist is adhat (saját megfigyelés), de kisebb mértékben, mint Marchiafava vérszegénység esetén. Hemosiderin a vizeletben is megtalálható (saját megfigyelés).

Antitestek, az eritrociták felszínén található, lehet statikus vagy szabad állapotban ben vérplazma. Az antitestek állapotától függően közvetlen vagy közvetett Coombs-reakciót hajtanak végre. Ha okkal feltételezhető, hogy antitestek rögzülnek a vörösvértestek felületén, közvetlen Coombs-tesztet kell végezni. Ebben az esetben a teszt egy szakaszban történik - hozzáadásban antiglobulin szérum. Ha hiányos antitestek vannak jelen a vörösvértestek felületén, agglutináció vörös vérsejtek

Közvetett reakció

A közvetett Coombs-reakció 2 szakaszban megy végbe. Először mesterségesen kell végrehajtania túlérzékenységet vörös vérsejtek Ennek érdekében a vörösvértesteket és a vizsgált vérszérumot inkubálják, aminek hatására az antitestek a vörösvértestek felületén fixálódnak. Ezt követően a Coombs-teszt második szakaszát hajtják végre - antiglobulin szérum hozzáadása.

Csapadék reakció - Az RP (a latin praecipilo szóból precipitate) az oldható molekuláris antigén komplexének kialakulása és kicsapódása antitestekkel felhősség formájában, ún. kicsapódik. Antigének és antitestek egyenértékű mennyiségben történő összekeverésével jön létre, ezek egyikének feleslege csökkenti az immunkomplex képződésének szintjét. A kicsapási reakciót kémcsövekben (gyűrűs precipitációs reakció), gélekben, táptalajokban stb. hajtják végre. A kicsapási reakció változatai félfolyékony agarban vagy agaróz gélben, kettős immundiffúzióval Ouchterlony, radiap immunodiffúzió, immunoektroforezis satöbbi.

HLA gépelés- a humán fő hisztokompatibilitási komplex vizsgálata - HLA komplex. Ez a formáció magában foglalja a 6. kromoszómán lévő gének egy régióját, amelyek különböző immunválaszokban részt vevő HLA antigéneket kódolnak.

Feladatok a HLA gépelés nagyon eltérő lehet - biológiai azonosítás (a HLA típus a szülői génekkel együtt öröklődik), a különböző betegségekre való hajlam meghatározása, a donorok kiválasztása szervátültetésre - ebben az esetben a donor és a recipiens szövetek HLA tipizálásának eredményeit hasonlítják össze. HLA-tipizálás segítségével megállapítható, hogy a házastársak mennyire hasonlóak vagy különbözőek a hisztokompatibilitási antigének tekintetében a meddőségi esetek diagnosztizálása érdekében.

A HLA tipizálás azt sugallja HLA polimorfizmus elemzésés két módszerrel - szerológiai és molekuláris genetikai - hajtják végre. A HLA tipizálás klasszikus szerológiai módszere mikrolimfocitotoxikus teszten alapul, a molekuláris módszer PCR-t (polimeráz láncreakció) alkalmaz.

Szerológiai HLA gépelés izolált sejtpopulációkon végezzük. A fő hisztokompatibilitási komplex antigéneket főként limfociták hordozzák. Ezért a T-limfociták szuszpenzióját használják az I. osztályú antigének fő hordozóiként, és a B-limfociták szuszpenzióját a HLA II. osztályú antigének meghatározására. A szükséges sejtpopulációk teljes vérből történő izolálásához centrifugálást vagy immunmágneses elválasztást alkalmaznak. Úgy gondolják, hogy az első módszer hamis pozitív adatokhoz vezethet, mivel ez egyes sejtek elpusztulásához vezet. A második módszert specifikusabbnak ismerik el - a sejtek több mint 95%-a életképes marad.

De a limfocitotoxikus teszt elvégzésének alapja HLA gépelés egy specifikus szérum, amely a HLA I. és II. osztályú antigének különböző allélváltozatai ellen antitesteket tartalmaz. A szerológiai teszt meghatározhatja a HLA típusát annak vizsgálatával, hogy mely szérumok reagálnak a limfocitákra és melyek nem.

Ha reakció lép fel a sejtek és a szérum között, az eredmény egy antigén-antitest komplex képződése a sejt felszínén. A komplementet tartalmazó oldat hozzáadása után a sejt lízise és elpusztulása következik be. A szerológiai HLA tipizálási tesztet fluoreszcens mikroszkóppal értékelik a pozitív (vörös fluoreszcencia) és negatív (zöld fluoreszcencia) reakciók értékelésére, vagy fáziskontraszt mikroszkóppal az elhalt sejtek magjainak megfestésére. A HLA-tipizálás eredményét a reagált szérumok és az antigének keresztreagáló csoportjainak specifitásának, valamint a citotoxicitási reakció intenzitásának figyelembevételével határozzák meg.

A szerológiai hátrányai HLA gépelés keresztreakciók jelenléte, gyenge antitest-affinitás vagy HLA-antigének alacsony expressziója, fehérjetermékek hiánya számos HLA-génben.

Modernebb, molekuláris módszerek HLA gépelés már szabványosított szintetikus mintákat használnak, amelyek nem a leukociták felszínén lévő antigénekkel, hanem DNS-sel reagálnak, és közvetlenül jelzik, hogy mely antigének vannak jelen a mintában. A molekuláris módszerekhez nincs szükség élő fehérvérsejtekre, bármilyen emberi sejt tanulmányozható, és néhány mikroliter vér elegendő a működéshez, vagy korlátozódhat a szájnyálkahártya lekaparására.

Molekuláris genetika HLA gépelés PCR módszert alkalmaz, melynek első lépéseként tiszta genomiális DNS-t nyernek (teljes vérből, leukocita szuszpenzióból, szövetekből).

A DNS-mintát ezután lemásolják – in vitro amplifikálják egy specifikus HLA-lókuszra specifikus primerek (rövid egyszálú DNS) használatával. Az egyes primerpárok végeinek szigorúan komplementereknek kell lenniük az adott allélnak megfelelő egyedi szekvenciával, különben nem történik amplifikáció.

A PCR után az ismételt másolás során nagyszámú DNS-fragmentumot kapunk, amely vizuálisan értékelhető. Ehhez a reakcióelegyeket elektrolízisnek vagy hibridizációnak vetik alá, és egy program vagy táblázat segítségével meghatározzák, hogy történt-e specifikus amplifikáció. A HLA tipizálás eredményét átfogó jelentés formájában mutatjuk be gén- és allélszinten. A felhasznált minták szabványosítása miatt molekuláris HLA gépelés pontosabban szerológiai. Ezen kívül több információt (több új DNS allélt) és nagyobb részletezést biztosít, mivel nemcsak az antigének azonosítását teszi lehetővé, hanem magukat az allélokat is, amelyek meghatározzák, hogy melyik antigén van jelen a sejten.

Immun lízis reakció. A reakció a specifikus antitestek azon képességén alapul, hogy immunkomplexeket képeznek a sejtekkel, beleértve a vörösvértesteket és a baktériumokat, ami a komplementrendszer aktiválásához vezet a klasszikus útvonal és a sejtlízis mentén. Az immunlízis reakciók közül leggyakrabban a hemolízis reakciót, a bakteriolízis reakciót ritkán alkalmazzák (főleg a kolera és a koleraszerű vibriók differenciálódásában).

Hemolízis reakció. A komplement jelenlétében az antitestekkel való reakció hatására a vörösvértestek zavaros szuszpenziója élénkvörös átlátszó folyadékká - „lakkvérré” alakul a hemoglobin felszabadulása miatt. A diagnosztikus komplementkötési reakció (FFR) felállításakor a hemolízis reakciót indikátorként használják: a szabad komplement jelenlétének vagy hiányának (fixációjának) tesztelésére.

Helyi hemolízis reakció a gélben(Erne reakció) a hemolízis reakció egyik változata. Lehetővé teszi az antitestképző sejtek számának meghatározását. Az antitesteket - hemolizineket - szekretáló sejtek számát a hemolízis plakkok száma határozza meg, amelyek vörösvértesteket, a vizsgált limfoid szövet sejtszuszpenzióját és komplementjét tartalmazó agargélen jelennek meg.

Immunfluoreszcens módszer

(RIF, immunfluoreszcens reakció) egy módszer specifikus Ag-k (Ab-k) kimutatására fluorokrómhoz konjugált Abs-ek (Ags) használatával. Nagy érzékenységgel és specifitással rendelkezik. Fertőzések expressz diagnosztizálására használják. betegségek (a kórokozó azonosítása a kutatási anyagban), valamint a leukociták Ab és felszíni receptorainak, markereinek meghatározására (immunfenotipizálás) és egyéb sejtek. Közvetlen I. m. fluorokrómmal konjugált specifikus Abs-t tartalmazó szövetmetszet vagy kóros anyagból vagy mikrobiális kéregből készült kenet feldolgozása; a készítményt mossuk, hogy megszabadítsuk a kötetlen Abs-től, és fluoreszcens mikroszkóp alatt vizsgáljuk. Pozitív esetekben egy izzó immunkomplex jelenik meg az objektum perifériáján. A szabályozás a nem specifikus lumineszcencia kizárása érdekében szükséges. Nál nél közvetett. Őket. az első szakaszban egy szövetmetszetet vagy kenetet nem fluoreszcens specifikus szerrel kezelnek, a másodikban - az első szakaszban használt állat -globulinjai elleni lumineszcens szerrel. Pozitív esetben egy világító komplexum keletkezik, amely Ar, At to és At ellen At (szendvics módszer) alkotja. A sejtek fenotipizálása során a fluoreszcens mikroszkóp mellett a RIF-et is figyelembe veszik. lézeres sejtválogató .

Áramlási citometria- a sejt paramétereinek, sejtszervecskéi és a benne lejátszódó folyamatok optikai mérésének módszere.

A technika magában foglalja a lézersugárból származó fény szóródásának detektálását, amikor egy sejt folyadékáramban áthalad rajta, és a fény diszperziós foka lehetővé teszi, hogy képet kapjunk a sejt méretéről és szerkezetéről. Ezenkívül az elemzés figyelembe veszi azon kémiai vegyületek fluoreszcenciájának szintjét, amelyek a sejt részét képezik (autofluoreszcencia), vagy amelyeket az áramlási citometria előtt adnak a mintához.

A fluoreszcens monoklonális antitestekkel vagy fluoreszcens festékekkel előre megjelölt sejtszuszpenzió belép az áramlási cellán áthaladó folyadékáramba. A feltételeket úgy választják ki, hogy a sejtek egymás után sorakoznak fel az ún. a sugár hidrodinamikus fókuszálása a sugárban. Abban a pillanatban, amikor egy cella keresztezi a lézersugarat, a detektorok rögzítik:

fényszórás kis szögben (1°-tól 10°-ig) (ez a jellemző a cellák méretének meghatározására szolgál).

fényszórás 90°-os szögben (lehetővé teszi a sejtmag/citoplazma arány, valamint a sejtek heterogenitásának és szemcsésségének megítélését).

fluoreszcencia intenzitása több fluoreszcencia csatornán keresztül (2-től 18-20-ig) - lehetővé teszi a sejtszuszpenzió szubpopulációs összetételének meghatározását stb.

- egy vizsgálat, amely segít meghatározni a vér hiányos vörösvértest-ellenes antitesteinek tartalmát. Ez az antiglobulin teszt lehetővé teszi a terhes nők antitesteinek kimutatását.

Ezenkívül lehetővé teszi a hemolitikus anémia diagnosztizálását Rh-konfliktusban szenvedő újszülötteknél a kezdeti szakaszban. Ez segít megelőzni a normál vérképzéshez szükséges vörösvérsejtek pusztulását. Ezt a tesztet 1945-ben készítette Robert Coombs, ezért kapta a nevét.

A Coombs-teszt egy sokoldalú teszt, amely lehetővé teszi a vérképzőszervi rendellenességek időben történő diagnosztizálását felnőtteknél és gyermekeknél egyaránt.

A következő típusú tesztek léteznek:

1. Közvetlen Coombs-teszt– lehetővé teszi a vörösvértestek felszínén található antitestek meghatározását. Általában egy ilyen vizsgálatot hemolízis gyanúja, autoimmun hemolitikus anémia vagy más autoimmun betegségek esetén írnak elő. Ezenkívül kinin, penicillin vagy metildopa alapú gyógyszeres kezelés után vagy vérátömlesztés után hajtják végre. A pontosabb eredmények elérése érdekében a vizsgálat előtt legalább 1 hétig teljesen abba kell hagynia a gyógyszerek szedését.
2. Közvetett Coombs-teszt– egy teszt, amellyel a plazmában kimutatható vörösvértest-ellenes antitestek. Általában terhesség alatt és vérátömlesztés előtt végzik. Az eritrocitaellenes antitestek az ember vérében reaktív immunrendszer alatt vagy bizonyos gyógyszerekre adott reakcióként jelennek meg. A pontosabb vizsgálat érdekében egyszerre több mintavételt kell végezni 2 órás időközönként.

Használati javallatok

A Coombs-tesztet csak komoly jelzések esetén kell elvégezni. Ez egy költséges és időigényes tanulmány, amely egy speciális teszt.

Jellemzően a következő helyzeteket tekintik annak végrehajtására utaló jelnek:

1. Vérátömlesztés során. A teszt lehetővé teszi annak meghatározását, hogy a recipiens vére gyökeret ereszt-e az emberi szervezetben, valamint, hogy lehetséges-e az adományozás. Ebben az esetben mind a donortól, mind a recipienstől meg kell vizsgálni az anyagot. Fontos meghatározni az antitestek természetét, mert ha az Rh-konfliktus hátterében nem kompatibilisek a szervezetben, az immunrendszer megsemmisül. Ez súlyos betegségek kialakulásához, ritka esetekben akár halálhoz is vezet.
2. A műtét előtt, amikor fennáll a vérveszteség veszélye. Ez azért történik, hogy az orvos azonnal megfelelő vért tudjon bevezetni a szervezet helyreállításához.
3. Az Rh szenzibilizáció kimutatására. A Rhesus egy specifikus antigén, amely minden nő testében megjelenik a terhesség alatt. Ha az anya Rh pozitív, az apa pedig negatív, vagy fordítva, akkor a gyermeknek nincs függősége – bárkit örökölhet. Ha a gyermek az anyától az ellenkező rhesust kapja, nagy a szenzibilizáció veszélye. Ezt a jelenséget az anya és a gyermek vérének keveredése jellemzi. Ez mind a terhesség, mind a szülés során előfordulhat.

Ha egy terhes nő testében Rhesus-konfliktus lép fel, az anya immunrendszere elkezdi idegen testként érzékelni magzatát. Emiatt nagy a kockázata annak, hogy támadni kezd.

Az ilyen intézkedések eredményeként a baba súlyos patológiákat alakíthat ki. Leggyakrabban eritroblasztózis fordul elő - olyan jelenség, amelyben a gyermek teste nem tud elegendő számú vörösvérsejtet előállítani.

Ezenkívül az Rh-konfliktus miatt a magzati halál az anyaméhben vagy közvetlenül a születés után következhet be. A kezelés megfelelő megközelítésével az ilyen súlyos következmények könnyen elkerülhetők.

Eltérés a normától

Ha a Coombs-teszt pozitív, az orvos arra a következtetésre jut, hogy a vérszérumban vörösvértestek elleni antitestek találhatók. Ez azt jelenti, hogy előfordulhat, hogy a donor vére nem kompatibilis a páciens vérével.

Ha pozitív eredményt diagnosztizálnak egy terhes nő testében, akinek Rh-negatív vére van, akkor teste antitesteket tartalmaz a magzat vérével szemben.

Ez Rh-konfliktusra utal, amely megköveteli az orvos rendkívül körültekintő megközelítését a terhesség kezelésében, valamint a nő összes utasításának és ajánlásának betartását.

Ha antitestek vannak jelen a gyermek vérében, az újszülött hemolitikus betegségét diagnosztizálják. Ebben az esetben megismételt vizsgálatot végeznek annak meghatározására, hogy a várandós anya vérében az antitestszint emelkedése bekövetkezik-e vagy sem.

A Coombs-teszt lehetséges szövődményei

A Coombs-teszt egy meglehetősen biztonságos teszt, amely lehetővé teszi számos autoimmun betegség diagnosztizálását a korai szakaszban. Ritkán okoz szövődményeket, általában negatív következményekkel jár a vérvétel.

Ők:

• Bőr alatti vérzés vagy vérzés
• Szédülés és ájulás
• Fertőző fertőzés

7 295