Postupak određivanja krvnih grupa pomoću ABO sistema sastoji se od identifikacije A i B antigena u eritrocitima pomoću standardnih antitela i upotrebe aglutinina u plazmi ili serumu analizirane krvi sa standardnim eritrocitima. Tehnika je razvijena početkom 20. stoljeća i još uvijek se aktivno koristi u medicini. Određivanje antigena A i B vrši se zahvaljujući anti-A i anti-B ciklonima.

Osnovni koncepti

Kod donora se uvijek određuju ne samo antigeni u eritrocitima, već i aglutinini u serumu (plazmi) pomoću standardnih eritrocita. Venska krv se koristi kao biomaterijal. Prije testa morate odustati od masne hrane jedan dan prije testa i ne pušiti pola sata prije testiranja. Krvne grupe se određuju dva puta: prvo na medicinskom odjelu, gdje se priprema materijal, a zatim potvrđuju laboratorijskim istraživanjem.

Određivanje krvnih grupa pomoću ABO sistema je glavni test koji se koristi u transfuziologiji. Također, neke životinje imaju sličan sistem krvnih grupa, kao što su čimpanze, gorile i bonobi.

Istorija otkrića

U nauci postoji općeprihvaćeno mišljenje da je metodu određivanja krvnih grupa pomoću ABO sistema prvi identifikovao Karl Landsteiner, austrijski naučnik, 1900. godine. Zatim je u svom radu opisao tri vrste antigena. Za to mu je trideset godina kasnije dodijeljena Nobelova nagrada za medicinu i fiziologiju. Zbog činjenice da ranije nije bilo bliskih veza između naučnika, kasnije je ustanovljeno da je češki serolog Jan Jansky, bez obzira na istraživanja K. Landsteinera, prvi opisao četiri ljudske krvne grupe, ali njegova istraživanja nisu bila poznat širokoj publici. Trenutno se u Rusiji i republikama bivšeg SSSR-a koristi klasifikacija koju je razvio J. Jansky. U SAD-u je W. L. Moss stvorio svoje slično djelo 1910. godine.

Metoda za određivanje krvnih grupa prema ABO sistemu pomoću zoliklona

Krvnu grupu treba odrediti u prostoriji s dobrim osvjetljenjem, održavajući temperaturni raspon od 15 do 25 stepeni Celzijusa, jer odstupanja od ove norme mogu utjecati na rezultate studije. Na pločici ili pločici ispisani su inicijali i prezime pacijenta. S lijeva na desno ili u krugu se primjenjuju standardne oznake grupa (O(I), A(II), B(III)). Odgovarajući serumi se stavljaju kap po kap ispod njih pomoću zasebnih pipeta za svaki tip. Zatim im se dodaje krv pacijenta. Materijal za studiju uzima se iz ušne resice ili prsta. To zahtijeva tehnika određivanja krvne grupe pomoću ABO sistema.

Također je legalno koristiti crvena krvna zrnca koja se nalaze u epruveti nakon formiranja ugruška. Potrebno je da količina seruma bude deset puta veća od količine dodane krvi. Nakon toga, kapi se miješaju staklenim štapićima (za svaku posebno). Pet minuta, lagano tresući ploču, pazite na pojavu reakcije hemaglutinacije. Otkriva se pojavom malih crvenih kvržica, koje se potom spajaju u veće. Serum u ovom trenutku gotovo potpuno gubi boju.

Da biste eliminisali lažnu hemaglutinaciju jednostavne adhezije crvenih krvnih zrnaca, potrebno je nakon tri minute dodati jednu kap fiziološke otopine i provjeriti da li aglutinacija traje. Ako da, onda je to istina. To je to, određivanje krvnih grupa po ABO sistemu je završeno.

Interpretacija rezultata

Kao rezultat, mogu se uočiti četiri reakcije:

• aglutinacija se ne javlja ni sa jednim serumom - prva grupa O(I);
• reakcija se pojavila sa serumima I(ab) i III(a) - druga grupa A(II);
• aglutinacija se javlja sa serumima I(ab) i II(b) - treća grupa B(III);
• ako se reakcija dogodi sa tri seruma, potrebno je provesti dodatnu proceduru sa reagensima grupe AB (IV), koji su standardni; ako u takvoj kapi nema aglutinacije, možemo pretpostaviti da se radi o 4. krvnoj grupi AB (IV).

Ekspresna metoda za Rh faktor

Metoda za određivanje krvnih grupa pomoću ABO sistema uključuje istovremenu detekciju Rh faktora (Rh).

Površina ploče je prethodno navlažena i na njoj su ispisani „kontrolni serum“ i „antirezus serum“. Zatim se ispod natpisa stavlja jedna ili dvije kapi potrebnih reagensa i njima se dodaje analizirani materijal. Za to možete koristiti i krv iz prsta (u istoj količini kao i volumen seruma) ili crvena krvna zrnca koja ostaju na dnu epruvete nakon pojave ugruška (pola volumena seruma). Izbor materijala ne utiče na konačni rezultat. Zatim se krv i serum miješaju suhom staklenom šipkom, nakon čega se reakcija čeka pet minuta. Da bi se eliminisala lažna očitavanja, nakon tri do četiri minute dodaje se izotonični rastvor natrijum hlorida (samo nekoliko kapi). Određivanje krvne grupe prema ABO i Rh sistemu se vrši vrlo često.

Ako dođe do aglutinacije crvenih krvnih zrnaca u kapi seruma, to ukazuje na pozitivnu Rh krv. Prema statistikama, Rh+ se javlja kod 85% svjetske populacije. Njegov nedostatak nam omogućava da govorimo o Rh-negativnoj pripadnosti. Ako se u kontrolnom serumu pojavi aglutinacija, to znači da je postao neupotrebljiv. Nažalost, algoritam za određivanje krvne grupe pomoću ABO sistema ne radi uvijek savršeno.

Koje greške se mogu napraviti ovom tehnikom?

Netočnosti u određivanju pripada li krvi određenoj grupi zavise od sljedećih razloga:

• Technical.
• Biološka specifičnost krvi koja se ispituje.
• Inferiornost standardnih seruma i eritrocita.

Tehničke greške

Moguće greške pri određivanju ABO krvne grupe unakrsnom metodom:

Greške biološke specifičnosti

Greške povezane s biološkom specifičnošću krvi koja se analizira dijele se u dvije vrste.

• Ovisno o karakteristikama crvenih krvnih zrnaca.
• Greške uzrokovane biološkim karakteristikama seruma.

Pogledajmo svaku vrstu detaljnije.

Ovisno o karakteristikama crvenih krvnih zrnaca

• Kasna aglutinacija, koja se objašnjava „slabim“ oblicima crvenih krvnih zrnaca i antigena. Kako bi se izbjegle greške, potrebno je odrediti krvnu grupu davaoca i primatelja pomoću standardnih crvenih krvnih zrnaca. Aglutinogen A2 treba identificirati ponavljanjem studije s drugim vrstama reagensa i drugog staklenog posuđa, povećavajući vrijeme registracije reakcije.
• “Panaglutinacija” (“autoaglutinacija”) je sposobnost krvi da pokaže istu reakciju nespecifične prirode sa svim serumima, uključujući i svoje. Nakon pet minuta, jačina takve aglutinacije slabi, iako bi se trebala povećati. Slični slučajevi su uočeni kod pacijenata sa rakom, pacijenata sa opekotinama i sl. Kao kontrolu potrebno je procijeniti ispoljavanje aglutinacije analiziranih crvenih krvnih zrnaca u standardnom serumu četvrte grupe i fiziološkom rastvoru. Kod “panaglutinacije” krvna grupa se određuje kao rezultat trostrukog ispiranja crvenih krvnih zrnaca. Ako ne daje željeni rezultat, vrijedi ponovno uzeti uzorak krvi u epruvetu zagrijanu prije postupka i staviti uzorak u termalni spremnik kako bi se održala temperatura od 37 stepeni Celzijusa ili više. Zatim ga treba odnijeti u laboratoriju, gdje se održava gore navedena temperatura i koristi zagrijani fiziološki rastvor, ploča i reagensi.

• Ponekad su crvena krvna zrnca analizirane krvi raspoređena kao „stupci novčića“ i mogu se zamijeniti sa aglutinatima. Ako dodate dvije kapi izotonične otopine i lagano zaljuljate ploču, crvena krvna zrnca će se pomaknuti u ispravan položaj.
• Nepotpuna ili mješovita aglutinacija, koja se javlja kod pacijenata druge, treće i četvrte grupe kao rezultat transplantacije koštane srži ili u prva tri mjeseca nakon transfuzije krvi 0(I).

Zbog bioloških karakteristika seruma

Greške povezane s korištenjem neispravnih standardnih crvenih krvnih stanica i seruma

Slabi serumi kojima je istekao rok trajanja ili imaju titar manji od 1:32 sposobni su za stvaranje slabe i kasne aglutinacije. Upotreba takvih reagenasa je neprihvatljiva.

Upotreba neupotrebljivih standardnih eritrocita ili seruma, pripremljenih u nesterilnim uslovima i nedovoljno očuvanih, dovodi do pojave „bakterijske“ aglutinacije, koja je nespecifične prirode.

Postoje mnoge popularne pretpostavke o ABO krvnim grupama koje su se pojavile odmah nakon njenog otkrića u različitim svjetskim kulturama. Na primjer, 30-ih godina prošlog stoljeća u Japanu i nekim drugim zemljama postala je popularna teorija koja povezuje krvnu grupu s jednom ili drugom vrstom ličnosti. Slične teorije su i danas popularne.

Postoji i mišljenje da je osoba sa grupom A sklona jakom mamurluku, O povezuje se sa dobrim zubima, a grupa A2 sa najvišim nivoom IQ. Ali takve tvrdnje nisu naučno dokazane.

Ispitivali smo određivanje krvnih grupa po ABO sistemu pomoću standardnih seruma.

Danas je medicina dostigla velike visine. Doktori su u stanju da izvode duge operacije i spasavaju ljude čak i iz naizgled bezizlaznih situacija u smislu preživljavanja. Međutim, u takvim slučajevima se mora suočiti s problemom potrebe za transfuzijom krvi. Dugo vremena to nije bilo izvodljivo zbog činjenice da su pacijenti vrlo brzo umirali. Ali ovo pitanje je riješeno otkrićem koncepta krvnih grupa, odnosno otkrivanjem antigena na eritrocitima i, zauzvrat, antitijela u krvnoj plazmi.

Početkom dvadesetog veka, australijski lekar i honorarni naučnik K. Landsteiner otkrio je prisustvo antigena i antitela u krvi. Antigeni se nalaze na površini crvenih krvnih zrnaca. Postoje 2 vrste njih. Radi jednostavnosti, biolozi su ih označili kao A i B. Zauzvrat, antitijela se nalaze u krvnoj plazmi i nazivaju se α i β. Ako je A povezan sa α, a B sa β, započinje proces zgrušavanja krvi. Ova reakcija se naziva hemaglutinacija.

Dakle, iz dostupnih skupova antigena i antitela, moguće je stvoriti 4 vrste krvi, prikazane u tabeli ispod:

Bitan! Ovisno o tome koja se krv donora daje za transfuziju, krv pacijenta se zgrušava ili ne. Prvi slučaj je fatalan.

Serumi za reakciju

Trenutno postoji prilično velik broj načina za određivanje krvne grupe. Ali većina njih je dizajnirana za analizu u velikim laboratorijama. Međutim, čak i ako se nalazite u malom selu ili u mjestu gdje nema načina da se obratite takvim institucijama, i dalje ostaje mogućnost identifikacije broja vaše krvne grupe.

Određivanje krvne grupe vrši se pomoću četiri specijalna standardna seruma, koji će biti napravljeni od ljudske krvi. Dostupni su u bočicama ili u ampulama od 2-5 ml i odgovaraju različitim krvnim grupama:

1. 0. Dolazi s bijelom etiketom i prozirne je boje.
2. A. Plava tečnost. Na bočici su nanesene dvije plave pruge.
3. B. Blijedo ružičasta tečnost. Na bočici se nalaze tri pruge iste boje.
4. AB. Žuta tečnost. Bočica ima 4 trake iste boje.

Bitan! U stvari, ovi reagensi su bezbojni kada su proizvedeni. Posebno su obojeni tako da ih je nemoguće zbuniti prilikom korištenja.

Takođe na etiketi su:

• titar;
• datum proizvodnje;
• najbolje do datuma;
• informacije o proizvođaču;
• serijski broj.

Kako se određuje krvna grupa?

Za određivanje vaše krvne grupe trebat će vam:

• ravna ploča sa 8 udubljenja;
• staklene šipke ili pipete - 8 komada;
• 2 seta seruma različitih serija za otklanjanje mogućnosti grešaka;
• običan ili pješčani sat.

Serumi se stavljaju u 2 reda na ravnu ploču, nakon čega se uzimaju stakleni štapići. Uz njihovu pomoć, krv koja se testira se unosi u redove. Ona miješa ovim štapićima, nakon čega se tanjir počinje ljuljati. Ako imate sreće, proces se može pratiti za 10-30 sekundi, ali je bolje da to radite do 5 minuta kako biste eliminirali mogućnost spore reakcije. Zatim se dobijeni rezultati proučavaju i dešifruju.

Pažnja! Prije svega treba obratiti pažnju na šolje u koje je sipan serum II i III krvne grupe. Zanimljivo je prisustvo malih pahuljica koje se pojavljuju kao rezultat aglutinacije - nakupljanja crvenih krvnih zrnaca.

1. Ako nema pahuljica ni u II ni u III, a prilikom dodatne kontrole ništa se nije zgrušalo ni u I ni u IV, onda postoji prva krvna grupa.
2. Ako se kao rezultat toga koagulacija opaža svugdje osim u serumu grupe II, tada krv koja se testira pripada drugoj grupi.
3. Ako je koagulacija uočena u svim uzorcima osim seruma grupe III, onda krv koja se ispituje pripada istoimenoj grupi.
4. Ako je došlo do zgrušavanja u svim uzorcima osim seruma grupe IV, onda je analizirana krvna grupa istog imena.

Bitan! Strogo govoreći, krvna grupa se može odrediti ako imamo samo serume krvnih grupa 2 i 3. Međutim, kao što se može zaključiti iz suštine metode, veliki je uticaj ljudskog faktora. Iz tog razloga se serumi krvne grupe I i IV koriste kao dodatni test.

Nakon postupka, upotrebljeni pribor treba dobro isprati toplom vodom i osušiti. Zatim se može koristiti za dalja istraživanja.

Netačni rezultati i njihovi razlozi

Ponekad se dešava da se ugrušci zalijepljenih crvenih krvnih zrnaca ne vide baš jasno. Često se tokom testiranja može dodati izotonični rastvor natrijum hlorida. Eliminira mogućnost lažne aglutinacije, uzrokujući da se ljuspice koje nisu nastale procesom koagulacije ponovno mrve.

Bitan! Ako rezultat analize nije vrlo jasno vidljiv, mora se ponoviti i pomoću mikroskopa ispitati finu aglutinaciju.

U slučaju jasno identificiranog rezultata, pacijentu možete odmah točno reći njegovu krvnu grupu. U suprotnom, trebali biste se obratiti drugim metodama analize.

Ne treba zaboraviti na mogućnost grešaka, koje se najčešće javljaju iz sljedećih razloga:

• upotreba surutke sa isteklim rokom trajanja ili slabe surutke;
• korištenje previše krvi za ispitivanje u odnosu na volumen seruma;
• reakcija traje mnogo duže nego što je propisano propisima;
• temperatura okoline ne odgovara normalnoj, što rezultira hladnom aglutinacijom crvenih krvnih zrnaca.

Osim toga, vrijedno je napomenuti da se tokom procesa sušenja mogu formirati zrnasta područja duž rubova mješavine seruma i test krvi, što ne može poslužiti kao indikator reakcije.

Korištenje rezultata u praksi

Kao što je već spomenuto, određivanje krvne grupe provodi se kako bi se isključila smrt tijekom transfuzije krvi. U idealnom slučaju, pacijent koji prima krv - primalac - treba da dobije transfuziju krvi iste vrste kao i njegova. Međutim, to nije uvijek slučaj. Ako samo zato što je ogroman broj ljudi sa prvom krvnom grupom 50%. Istovremeno su univerzalni donori jer im nedostaju aglutinogeni koji potiču proces zgrušavanja krvi.

Pažnja!Što se tiče pacijenata sa IV krvnom grupom, oni se mogu nazvati univerzalnim primaocima, jer njihovo tijelo može prihvatiti krv bilo koje grupe. Istovremeno, njihova krv se ne može transfuzirati predstavnicima druge grupe.

Da bismo ilustrirali kompatibilnost donatora i primatelja, predstavljamo tabelu:

Broj grupe	Za koje grupe postaje donator?	Za koje grupe postaje primalac?
I	I, II, III, IV	I
II	II, IV	I, II
III	III, IV	I, III
IV	IV	I, II, III, IV

U savremenom svetu poznavanje krvne grupe je od vitalnog značaja. Sa stajališta liječnika, o tome će ovisiti stopa preživljavanja pacijenata. Sa stanovišta običnih ljudi, ovo je prilika da spase svoje živote u hitnim slučajevima. S tim u vezi, neće biti suvišno znati svoju krvnu grupu i, ako je moguće, staviti je u pasoš ili druge dokumente, jer rizik za zdravlje i život može nastati u svakom trenutku.

Video - Određivanje krvne grupe

Video - Određivanje krvne grupe i Rh faktora

AB0 krvne grupe

Krvne grupe sistema AB0 otkrio je 1900. K. Landsteiner, koji je miješanjem crvenih krvnih zrnaca nekih osoba s krvnim serumom drugih osoba otkrio da se kod nekih kombinacija krv zgrušava, stvarajući ljuspice (reakcija aglutinacije) , ali kod drugih nije. Na osnovu ovih studija, Landsteiner je podijelio krv svih ljudi u tri grupe: A, B i C. Godine 1907. otkrivena je još jedna krvna grupa.

Utvrđeno je da se reakcija aglutinacije javlja kada se antigeni jedne krvne grupe (oni se nazivaju aglutinogeni), koji se nalaze u crvenim krvnim zrncima – eritrocitima, zalijepe s antitijelima druge grupe (nazivaju se aglutinini) koja se nalaze u plazmi – tečni dio krvi. Podjela krvi prema sistemu AB0 u četiri grupe zasniva se na činjenici da krv može, ali i ne mora sadržavati antigene (aglutinogene) A i B, kao i antitijela (aglutinine) α (alfa ili anti-A) i β (beta ili anti-B).

Prva krvna grupa - 0 (I)

Grupa I - ne sadrži aglutinogene (antigene), ali sadrži aglutinine (antitijela) α i β. Označen je sa 0 (I). Budući da ova grupa ne sadrži strane čestice (antigene), može se transfuzirati svim ljudima. Osoba sa ovom krvnom grupom je univerzalni davalac.

Druga krvna grupa A β (II)

Grupa II sadrži aglutinogen (antigen) A i aglutinin β (antitela na aglutinogen B). Stoga se može transfuzirati samo u one grupe koje ne sadrže antigen B - to su grupe I i II.

Treća krvna grupa Bα (III)

Grupa III sadrži aglutinogen (antigen) B i aglutinin α (antitijela na aglutinogen A). Stoga se može transfuzirati samo u one grupe koje ne sadrže antigen A - to su grupe I i III.

Četvrta krvna grupa AB0 (IV)

Krvna grupa IV sadrži aglutinogene (antigene) A i B, ali sadrži aglutinine (antitijela). Stoga se može transfuzirati samo onima koji imaju istu, četvrtu krvnu grupu. Ali, budući da u krvi takvih ljudi nema antitijela koja se mogu zalijepiti sa antitijelima unesenim izvana, mogu se transfuzirati krvlju bilo koje grupe. Ljudi sa krvnom grupom IV su univerzalni primaoci.

Krvne grupe po ABO sistemu

Metoda za određivanje krvnih grupa

Krvna grupa prema ABO sistemu se određuje reakcijom aglutinacije. Trenutno postoje tri načina za određivanje krvnih grupa pomoću ABO sistema:

Prema standardnim izohemaglutinirajućim serumima;

Korištenje monoklonskih antitijela (kolikloni anti-A i anti-B).

Određivanje krvnih grupa pomoću standardnih izohemaglutinirajućih seruma

Suština metode je detekcija antigena grupe A i B u testnoj krvi pomoću standardnih seruma. U te svrhe koristi se reakcija aglutinacije. Test treba obaviti u prostoriji sa dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15-25°C.

Za izvođenje testa potrebno je: - Standardni izohemaglutinirajući serumi grupe O (I), A (II), B (III) i AB (IV) dvije različite serije. Serumi za određivanje krvnih grupa pripremaju se od donorske krvi u posebnim laboratorijama. Serumi se čuvaju u frižideru na temperaturi od 4 - 8°C. Rok trajanja seruma je naveden na etiketi. Oznaka također označava titar (maksimalno razrjeđenje seruma pri kojem može doći do reakcije aglutinacije), koji ne smije biti manji od 1:32 (za serum B (III) - ne niži od 1:16/32). Surutka treba da bude providna, bez znakova truljenja. Radi praktičnosti, standardni serumi su obojeni u određenu boju: O (I) - bezbojni (siva), A (II) - plava, B (III) - crvena, AB (IV) - svijetlo žuta. Ove boje prate sve oznake na krvnim proizvodima koji imaju grupnu pripadnost (krv, crvena krvna zrnca, plazma, itd.).

Bijeli porculanski ili emajlirani tanjuri ili drugi tanjuri sa površinom koja se može kvasiti, označena prema krvnoj grupi.

Izotonični rastvor natrijum hlorida.

Igle, pipete, stakleni štapići (slajdovi).

Tehnika reakcije.

1. Pod odgovarajućim oznakama krvne grupe, serum grupe I, II, III nanosi se na ploču (tanjir) u zapremini od 0,1 ml (jedna velika kap prečnika oko 1 cm). Da bi se izbjegle greške, primjenjuju se dvije serije seruma, jer jedna od serija može imati nisku aktivnost i ne dati jasnu aglutinaciju. Tako se dobija 6 kapi, formirajući dva reda od po tri kapi sledećim redom s leva na desno: 0 (I), A (II), B (III).

2. Krv za istraživanje uzima se iz prsta ili iz vene. Koristeći suvu staklenu šipku, 6 kapi krvi za ispitivanje, otprilike veličine glave igle od 0,01 ml (mala kap), sukcesivno se prebacuju na ploču na 6 tačaka, svaka pored kapi standardnog seruma. Štaviše, količina seruma bi trebala biti 10 puta veća od količine krvi koja se testira. Zatim se pažljivo miješaju pomoću staklenih šipki sa zaobljenim rubovima.

Moguća je i jednostavnija tehnika: jedna velika kap krvi se nanese na tanjir, zatim se odatle uzme uglom staklenog stakla i prenese se svaka kap seruma, pažljivo miješajući je s posljednjom. U tom slučaju, krv se svaki put uzima čistim kutom čaše, pazeći da se kapi ne miješaju.

3. Nakon miješanja kapi, povremeno protresite ploču. Aglutinacija počinje u prvih 10-30 sekundi. Ali posmatranje treba provoditi najmanje 5 minuta, jer je moguća kasnija aglutinacija, na primjer s crvenim krvnim zrncima grupe A 2 (II).

4. Dodajte jednu kap izotoničnog rastvora natrijum hlorida u one kapi na kojima je došlo do reakcije, nakon čega se procenjuju rezultati reakcije.

Reakcija aglutinacije može biti pozitivna ili negativna

Ako je reakcija pozitivna, u prvih 10-30 sekundi u smjesi se uočavaju mala crvena zrna (aglutinati), koja se sastoje od lijepljenih crvenih krvnih zrnaca, vidljivih golim okom. Sitna zrna se postepeno spajaju u veća zrna ili čak u pahuljice nepravilnog oblika. U negativnoj reakciji, kap ostaje jednolično obojena crvenom bojom.

Rezultati reakcija dvije serije u kapima sa serumom iste grupe moraju se podudarati.

Pripadnost krvi koja se testira odgovarajućoj grupi određuje se prisustvom ili odsustvom aglutinacije pri reakciji sa odgovarajućim serumom.

Ako su svi serumi dali pozitivnu reakciju, tada testna krv sadrži oba aglutinogena - A i B. Ali u takvim slučajevima, kako bi se isključila nespecifična reakcija aglutinacije, potrebno je izvršiti dodatni kontrolni test krvi sa standardnim serumom. grupe AB (IV).

Određivanje krvnih grupa pomoću monoklonskih antitijela

Za određivanje krvnih grupa ovom metodom koriste se monoklonska antitijela koja se dobivaju hibridom biotehnologijom.

Hibridom je stanični hibrid nastao fuzijom ćelije koštane srži (mijeloma) sa imunim limfocitom koji sintetizira specifična monoklonska antitijela. Hibridom ima sposobnost neograničenog rasta, karakterističan je za tumorsku ćeliju i ima svojstvenu sposobnost limfocita da sintetizira antitijela.

Razvijeni su standardni reagensi: monoklonska antitijela (mAbs): anti-A i anti-B kolikloni, koji se koriste za određivanje aglutinogena eritrocita. Zolikloni su liofilizirani prah crvene (anti-A) i plave (anti-B) boje, koji se razblaži izotoničnim rastvorom natrijum hlorida neposredno pre uzorka.

Tehnika.

Anti-A i anti-B zolikloni se nanose na bijelu tabletu, jednu veliku kap (0,1 ml) ispod odgovarajućih natpisa: anti-A ili anti-B. Uz kapi antitijela treba staviti jednu malu kap test krvi. Nakon miješanja komponenti, promatrajte reakciju aglutinacije 2-3 minute. Procjena rezultata je vrlo jednostavna.

Određivanje krvne grupe može biti praćeno greškama koje dovode do pogrešne interpretacije rezultata. Mogu se razlikovati tri glavne grupe grešaka: greške povezane sa reagensima niskog kvaliteta; tehničke greške; greške povezane sa karakteristikama Šema za procjenu rezultata određivanja krvnih grupa korištenjem monoklonskih antitijela (kolikloni anti-A i anti-B) krvi koja se testira. Prva dva se mogu izbjeći strogim poštovanjem gore opisanih zahtjeva za serumom, reakcionim uslovima itd. Treća grupa je povezana sa fenomenom nespecifične panaglutinacije (Thomsenov fenomen), čija je suština da serum na sobnoj temperaturi aglutinira sa sva crvena krvna zrnca, čak i sa svojim (autoaglutinacija), a eritrociti istovremeno daju aglutinaciju sa svim serumima, čak i sa serumom grupe AB. Slična pojava je opisana kod niza bolesti: bolesti krvi, splenomegalije, ciroze jetre, infektivnih bolesti itd. Opisana je i panaglutinacija i autoaglutinacija kod zdravih ljudi.

Fenomen panaglutinacije i autoaglutinacije se opaža samo na sobnoj temperaturi. Ako se određivanje pripadnosti grupi izvrši na temperaturi od 37°C, oni nestaju.

Mora se striktno imati na umu da u svim slučajevima nejasnih ili upitnih rezultata krvne grupe treba ponovo odrediti korištenjem standardnih seruma iz drugih serija, kao i na način poprečnog presjeka.

Brojne studije su pokazale da krv može sadržavati različite proteine ​​(aglutinogene i aglutinine), čija kombinacija (prisustvo ili odsustvo) formira četiri krvne grupe.
Svaka grupa ima simbol: 0 ( I), A (II), IN (III),AB(IV).
Utvrđeno je da se može transfuzirati samo krv iste vrste. U izuzetnim slučajevima, kada nema krvi iste grupe, a transfuzija je vitalna, dozvoljena je transfuzija krvi druge grupe.Pod ovim uslovima, krv je 0 ( I) grupe mogu se transfuzirati pacijentima sa bilo kojom krvnom grupom, kao i pacijentima sa krvlju AB(IV) grupe, može se transfuzirati krv davaoca bilo koje grupe.

Stoga je prije početka transfuzije krvi potrebno precizno odrediti krvnu grupu pacijenta i vrstu krvi koja se transfuzira.

Određivanje krvne grupe.

Za određivanje krvne grupe koriste se standardni serumi grupe 0 ( I), A (II), IN (III), koji se posebno pripremaju u laboratorijama stanica za transfuziju krvi.
Brojevi se postavljaju na bijelu ploču na udaljenosti od 3-4 cm s lijeva na desno. I, II, III, označava standardne serume. Kap standardnog seruma 0( I) grupe se nanose pipetom na sektor ploče označen brojem I; zatim drugom pipetom nanesite kap seruma A (II) grupe po broju II; uzimaju i surutku IN (III) grupa i treća pipeta - nanesena pod brojem III.

Zatim se ispitaniku ubode u prst i staklenim štapićem se krv koja teče prenosi na kap seruma koja se nalazi na ploči i miješa do ujednačene boje. Novi štapić se prenosi u svaki krvni serum. Nakon 5 minuta od trenutka bojenja (po satu!) krvna grupa se određuje po promjeni smjese. U serumu gdje dolazi do aglutinacije (ljepljenja crvenih krvnih zrnaca) pojavljuju se jasno vidljiva crvena zrna i grudvice; u serumu, gdje ne dođe do aglutinacije, kap krvi će ostati homogena, jednolično obojene ružičaste boje.

Ovisno o krvnoj grupi osobe koja se ispituje, u određenim uzorcima će doći do aglutinacije. Ako subjekt ima 0 ( I) krvne grupe, tada se crvena krvna zrnca neće zalijepiti ni sa jednim serumom.
Ako subjekt ima A (II) krvne grupe, onda se aglutinacija neće dogoditi samo sa serumom te grupe A (II), i ako subjekt ima B (III) grupe, tada neće doći do aglutinacije sa serumom B (III). Aglutinacija se opaža sa svim serumima ako je krv koja se testira AB(IV) grupe.

Rh faktor.

Ponekad, čak i kod transfuzije krvi iste grupe, uočavaju se teške reakcije. Istraživanja su pokazala da oko 15% ljudi nema poseban protein u krvi, takozvani Rh faktor.

Ako se ovim osobama daje ponovljena transfuzija krvi koja sadrži ovaj faktor, pojavit će se teška komplikacija koja se zove Rh konflikt i razviti šok. Stoga se trenutno od svih pacijenata traži da se odredi njihov Rh faktor, jer se primaocu sa negativnim Rh faktorom može transfuzirati samo Rh negativna krv.

Ubrzana metoda za određivanje Rh statusa.Nanesite 5 kapi anti-Rh seruma iste grupe kao primatelj na staklenu Petrijevu posudu. U serum se dodaje kap krvi subjekta i temeljito se miješa. Petrijeva posuda se stavlja u vodeno kupatilo na temperaturi od 42-45°C. Rezultati reakcije se procjenjuju nakon 10 minuta. Ako dođe do aglutinacije krvi, onda subjekt ima Rh-pozitivnu (Rh+) krv; ako nema aglutinacije, tada je krv koja se testira Rh-negativna (Rh-).
Razvijen je niz drugih metoda za određivanje Rh faktora, posebno korištenjem univerzalnog anti-Rhesus reagensa D.

Obavezno je utvrđivanje krvne grupe i Rh statusa svih pacijenata u bolnici. Rezultati studije moraju biti uključeni u putovnicu pacijenta.

U modernoj medicini krvna grupa karakterizira skup antigena koji se nalaze na površini crvenih krvnih stanica, koji određuju njihovu specifičnost. Postoji ogroman broj takvih antigena (obično se koristi tabela krvnih grupa sa različitim antigenima), ali se određivanje krvne grupe provodi svugdje koristeći klasifikaciju prema Rh faktoru i AB0 sistemu.

Određivanje grupe je obavezan postupak prilikom pripreme za bilo koju operaciju. Takva analiza je neophodna i prilikom stupanja u službu u određenim kontingentima, uključujući vojsku, službenike organa unutrašnjih poslova i agencije za provođenje zakona. Ovaj događaj se provodi zbog povećanog rizika od stanja opasnog po život kako bi se smanjilo vrijeme potrebno za pružanje pomoći u vidu transfuzije krvi.

Sastav krvi različitih krvnih grupa

Suština AB0 sistema je prisustvo antigenskih struktura na crvenim krvnim zrncima. Nema odgovarajućih tipičnih antitela (gama globulina) u plazmi. Stoga se reakcija "antigen + antitijelo" može koristiti za testiranje krvi.

Crvena krvna zrnca se spajaju kada se antigen i antitijelo sretnu. Ova reakcija se naziva hemaglutinacija. Reakcija se pojavljuje kao male pahuljice kada se analizira. Studija se zasniva na dobijanju slika aglutinacije sa serumima.

Antigeni crvenih krvnih zrnaca "A" vezuju se za antitela "ά", kao i "B" za "β", respektivno.

Po sastavu se razlikuju sljedeće krvne grupe:

• I (0) – ά, β - površina eritrocita uopšte ne sadrži antigene;
• II (A) – β - na površini se nalazi antigen A i antitelo β;
• III (B) – ά - površina sadrži B sa antitelom tipa ά;
• IV (AB) – 00 - površina sadrži oba antigena, ali nema antitela.

Fetus već ima antigene u embrionalnom stanju, a aglutinini (antitijela) se pojavljuju u prvom mjesecu života.

Metode određivanja

Standardna metoda

Postoji mnogo tehnika, ali laboratorijski testovi obično koriste standardne serume.

Standardna serumska metoda se koristi za određivanje tipova AB0 antigena. Sastav standardnog izohemaglutinirajućeg seruma sadrži set antitijela na molekule crvenih krvnih zrnaca. U prisustvu antigena koji je podložan djelovanju antitijela, formira se kompleks antigen-antitijelo, koji pokreće kaskadu imunoloških reakcija.

Rezultat ove reakcije je aglutinacija crvenih krvnih zrnaca; na osnovu prirode aglutinacije koja se javlja, moguće je utvrditi pripada li uzorak nekoj grupi.

Za pripremu standardnog seruma koristi se krv donora i određeni sistem - kroz izolaciju plazme, uključujući antitijela, i njeno naknadno razrjeđivanje. Razrjeđivanje se izvodi korištenjem izotonične otopine natrijum hlorida.

Uzgoj se vrši na sledeći način:

Samo istraživanje se provodi na sljedeći način:

1. Kap svakog seruma (ukupne zapremine oko 0,1 mililitar) stavlja se na posebnu tabletu na mesto gde se nalazi odgovarajuća oznaka (koriste se 2 uzorka, jedan je kontrolni, drugi je namenjen za istraživanje) .
2. Zatim se pored svake kapi seruma stavlja test uzorak u zapremini od 0,01 mililitara, nakon čega se posebno miješa sa svakim dijagnostikumom.

Pravila za dekodiranje rezultata

Nakon pet minuta možete ocijeniti rezultate studije. U velikim kapima seruma dolazi do pročišćavanja; kod nekih se opaža reakcija aglutinacije (formiraju se male ljuskice), u drugima - ne.

Video: Određivanje krvne grupe i Rh faktora

Evo mogućih opcija:

• Ako nema reakcije aglutinacije u oba uzorka sa serumima II i III (+ kontrola 1 i IV) - određivanje prve grupe;
• Ako je koagulacija uočena u svim uzorcima osim II, odredite drugi;
• U odsustvu reakcije aglutinacije samo u uzorku iz grupe III - određivanje III;
• Ako je koagulacija uočena u svim uzorcima, uključujući IV kontrolu, odredite IV.

Kada su serumi raspoređeni u ispravnom redoslijedu i označeni na ploči, lako je navigirati: grupa odgovara mjestima bez aglutinacije.

U nekim slučajevima, veza nije jasno vidljiva. Zatim se analiza mora ponoviti; fina aglutinacija se promatra pod mikroskopom.

Metoda unakrsne reakcije

Suština ove tehnike je određivanje aglutinogena pomoću standardnih seruma ili koliklona uz paralelno određivanje aglutinina pomoću standardnih eritrocita.

Tehnika analize poprečnog presjeka praktički se ne razlikuje od studije sa serumom, ali postoje neki dodaci.

Na ploču ispod seruma potrebno je dodati kap standardnih crvenih krvnih zrnaca. Zatim se iz epruvete sa pacijentovom krvlju, koja je prošla kroz centrifugu, pipetom izdvaja plazma u koju se stavljaju standardna crvena krvna zrnca, koja se nalaze na dnu – dodaju se standardnom serumu.

Kao iu standardnoj tehnici, rezultati studije se procjenjuju nekoliko minuta nakon početka reakcije. U slučaju reakcije aglutinacije možemo govoriti o prisustvu AB0 aglutinina, u slučaju reakcije plazme možemo govoriti o aglutinogenima.

Rezultati krvnih pretraga pomoću standardnih crvenih krvnih zrnaca i seruma:

aglutinacija;

– nema aglutinacije;

- reakcija nije izvedena.

Crossover metoda je postala široko rasprostranjena zbog činjenice da sprječava dijagnostičke greške koje nastaju pri korištenju standardnih tehnika.

Određivanje krvne grupe zoliklonima

Zolikloni su sintetičke zamjene seruma koje sadrže umjetne zamjene za aglutinine tipa ά i β. Nazivaju se eritrotesti “Tsoliklon anti-A” (ružičaste boje), kao i “anti-B” (plave boje). Očekivana aglutinacija se opaža između aglutinina koliklona i crvenih krvnih zrnaca.

Ova tehnika ne zahtijeva dvije serije, pouzdanija je i preciznija. Provođenje studije i evaluacija njenih rezultata odvija se na isti način kao i kod standardne metode.

Grupa IV (AB) je nužno potvrđena aglutinacijom sa anti-AB koliklonom, kao i odsustvom adhezije crvenih krvnih zrnaca u izotoničnom rastvoru natrijum hlorida.

Ekspresna metoda pomoću kompleta “Erythrotest-group card”.

Iako su općeprihvaćene metode utvrđivanja pripadnosti krvi određenoj grupi raširene, u modernoj medicini uvode se ekspresne metode, od kojih je najčešći „Eritrotest“.

Prilikom određivanja grupe tehnikom “Erythrotest group card” potreban je set alata, uključujući sljedeće uređaje:

• Tableta sa pet rupa za određivanje grupe prema Rh pripadnosti i AB0 sistemu;
• Scarifier dizajniran za dobivanje uzorka potrebnog za istraživanje;
• Staklene šipke za miješanje uzoraka;
• Očistite pipetu za sakupljanje rastvora.

Svi navedeni alati neophodni su za dijagnostiku bez grešaka.

Komplet za testiranje krvi “Erythrotest-Groupcard” omogućava vam da proučavate Rh faktor i odredite svoju krvnu grupu u bilo kojim uslovima, posebno je efikasan kada nije moguće koristiti opšteprihvaćene metode.

U jamicama na tableti nalaze se tsolikloni za antigene (to su tsoliklon anti-A, -B, -AB) i za glavni antigen, koji određuje nasljeđivanje Rh faktora (ovo je tsoliklon anti-D). Peta rupa sadrži kontrolni reagens, koji vam omogućava da spriječite moguće greške i pravilno odredite svoju krvnu grupu.

Video: Određivanje krvnih grupa pomoću zoliklona