Pozitivna direktna Coombsova reakcija. Antiglobulinski test. Direktna i indirektna Coombsova reakcija. Kako se vrši analiza?

Coombsov test je test krvi koji se radi kako bi se otkrilo da li krv sadrži određena antitijela koja mogu biti nesigurna. Ova antitijela se lijepe za crvena krvna zrnca i mogu napasti imunološki sistem i uzrokovati štetu na druge načine. U medicinskoj terminologiji, ova studija se naziva i antiglobulinski test (AGT).

Vrste Coombsovih uzoraka

Postoje dvije vrste Coombsovih testova - direktni i indirektni.

Direktan Coombsov test, također poznat kao direktni (DAT), otkriva auto-antitijela koja se vezuju za površinu crvenih krvnih zrnaca. Ova antitijela se ponekad stvaraju u tijelu zbog određenih bolesti ili prilikom uzimanja određenih lijekova, kao što su prokainamid, metildopa ili kinidin.

Ova antitijela su opasna jer ponekad uzrokuju anemiju uništavanjem crvenih krvnih stanica.

Ovaj test se ponekad naređuje kako bi se dijagnosticirao uzrok žutice ili anemije.

Normalno, Coombsova reakcija je negativna.

Pozitivno za:

• hemolitička bolest novorođenčadi;
• autoimuna hemoliza;
• hemolitičke transfuzijske reakcije;
• imunohemolitička anemija izazvana lijekovima.

Indirektni Coombsov test, također poznat kao , koristi se za otkrivanje antitijela na crvena krvna zrnca koja se nalaze u krvnom serumu (serum je bistra žuta tekućina krvi koja ostaje nakon što su crvena krvna zrnca i koagulant eliminirani).

Indirektni Coombsov test se koristi tokom transfuzije krvi kako bi se utvrdilo da li krv davaoca odgovara krvi primaoca. Ovo se zove test kompatibilnosti i pomaže u sprečavanju bilo kakve štetne reakcije na krv davaoca. Ovaj test se preporučuje i trudnicama. Neke žene imaju IgG antitijela, koja mogu proći kroz placentu u fetalnu krv i oštetiti novorođenče, uzrokujući hemolitičku bolest poznatu kao hemolitička anemija.

Procedura

Krv se vadi štrcaljkom iz vene, obično sa stražnje strane šake ili pregiba lakta. Prije toga, mjesto uboda se temeljito dezinficira, a nakon uzimanja krvi stavlja se čista gaza ili vata.

Dobivena krv se pročišćava u laboratoriju i crvena krvna zrnca se odvajaju. Uzorak se zatim testira uzastopno upotrebom različitih seruma i Coombsovih reagensa, koji se kontrastiraju. Ako nema aglutinacije (skupljanja crvenih krvnih zrnaca), to znači pozitivan rezultat.

Međutim, ako je test negativan, to znači da u krvi postoje antitijela koja djeluju protiv crvenih krvnih stanica. To može ukazivati ​​na različite bolesti, kao što je anemija (bilo prirodna ili uzrokovana lijekovima), sifilis ili infekcija mikoplazmama. Nakon dobijanja rezultata, ljekar će propisati odgovarajući tretman.

Video

Nanesite 1 veliku kap seruma O(I), A(II), B(III) na tanjir ili staklo pomoću pipeta (različitih!). Nakon što zabilježite vrijeme, koristite čistu staklenu šipku ili čisti ugao staklenog stakala da sjedinite kapi seruma s kapima krvi. Određivanje traje 5 minuta, protresite ploču, zatim dodajte 1 kap fiziološkog rastvora u svaku mešavinu kapi i procenite rezultate. Bolje je da serum dolazi u 2 različite serije. Rezultati krvne grupe moraju se podudarati u obje serije seruma.

Procjena rezultata izohemaglutinacije:

izohemaglutinacija. Ako je reakcija pozitivna, u smjesi se pojavljuju sitna crvena zrnca ljepljivih crvenih krvnih zrnaca. Zrna se spajaju u veća zrna, a ova u ljuspice. Serum je skoro bezbojan;

ako je reakcija negativna, smjesa ostaje jednolično ružičasta 5 minuta i nema zrnaca;

Pri radu sa 3 seruma grupa O(I), A(II), B(III) moguće su 4 kombinacije reakcija:

1. ako su sva 3 seruma dala negativnu reakciju, odnosno smjesa je jednolično obojena ružičastom - to je O(I) krvna grupa;

   ako je samo serum grupe A(II) dao negativnu reakciju, a serumi O(I) i B(III) pozitivnu reakciju, odnosno pojavila su se zrna - to je A(II) krvna grupa;

   serum grupe B(II) je dao negativnu reakciju, a serumi grupe O(I) i A(II) su dali pozitivnu reakciju - to je B(III) krvna grupa.

sva 3 seruma su dala pozitivne reakcije - testirana krv je bila AB(IV) grupa. U ovom slučaju, studija se provodi sa serumom AB(IV) grupe.

Bilješka! Kapljice krvi koja se testira treba da budu 5-10 puta manje od kapi seruma.

Greške izohemaglutinacije.

Neizvođenje aglutinacije tamo gdje bi trebalo biti i prisustvo aglutinacije tamo gdje ne bi trebalo biti. Ovo može biti zbog slabog titra seruma plus slabe aglutinacije crvenih krvnih zrnaca.

Prisustvo aglutinacije tamo gdje je ne bi trebalo biti- Ovo je pseudoaglutinacija, kada gomile crvenih krvnih zrnaca formiraju „stupove novčića“. Protresanje ploče ili dodavanje fiziološke otopine ih uništava.

Panaglutinacija, kada serum spaja sva crvena krvna zrnca, uključujući i one svoje krvne grupe. Do 5. minute nestaju znaci aglutinacije.

Postoji i takozvana hladna panaglutinacija, kada se crvena krvna zrnca spajaju zbog niske temperature vazduha (ispod 15°C) u prostoriji.

U svim ovim slučajevima se provodi ili ponovljena reakcija, ili korištenje standardnih crvenih krvnih zrnaca.

Određivanje Rh krvi

Za određivanje Rh statusa, odnosno za otkrivanje prisustva ili odsustva antigena Rh sistema u krvi ljudi, koriste se standardni anti-Rh serumi (reagensi), različiti po specifičnosti, odnosno koji sadrže antitela na različite antigene ovog sistema. Za određivanje Rh 0 (D) antigena najčešće se koristi antirezus serum uz dodatak 10% rastvora želatine ili se koristi standardni antirezus reagens pripremljen unapred sa 33% rastvorom poliglucina. Za dobivanje preciznijih rezultata istraživanja, kao i za identifikaciju antigena drugih seroloških sistema, koristi se Coombsov test (također je vrlo osjetljiv u određivanju kompatibilnosti transfuzirane krvi). Za istraživanje se koristi izvorna krv ili krv pripremljena s nekim konzervansom. U tom slučaju krv treba isprati od konzervansa desetostrukom zapreminom izotonične otopine natrijum hlorida. Prilikom određivanja Rh statusa- Rh 0 (D) treba koristiti dva uzorka seruma ili anti-Rhesus reagensa dvije različite serije i istovremeno standardna crvena krvna zrnca dobijena iz krvi Rh-pozitivnih (Rh+) i Rh-negativnih (Rh -) pojedince treba koristiti za kontrolu. Prilikom određivanja drugih izoantigena, potrebno je koristiti kontrolna crvena krvna zrnca koja sadrže ili nemaju antigen protiv kojih su usmjerena antitijela u standardnom serumu.

Parcijalni toplotni aglutinini su najčešći tip antitijela koja mogu uzrokovati razvoj autoimune hemolitičke anemije. Ova antitela pripadaju IgG, ređe IgM, IgA.

COOMBS TEST

Coombsov test: uvod. Coombsov test je laboratorijska dijagnostička metoda zasnovana na reakciji hemaglutinacije.

Glavna metoda za dijagnosticiranje autoimune hemolitičke anemije je Coombsov test. Zasniva se na sposobnosti antitijela specifičnih za imunoglobuline (posebno IgG) ili komponente komplementa (posebno S3) da aglutiniraju eritrocite obložene IgG ili S3.

Vezivanje IgG i C3b za eritrocite uočeno je kod autoimune hemolitičke anemije i imunohemolitičke anemije izazvane lijekovima. Direktni Coombsov test. Direktni Coombsov test se koristi za otkrivanje antitijela ili komponenti komplementa fiksiranih na površini crvenih krvnih stanica. Izvodi se na sljedeći način:

Da bi se dobila antitijela na humane imunoglobuline (antiglobulinski serum) ili komplementar (antikomplementarni serum), životinja se imunizira ljudskim serumom, imunoglobulinima ili ljudskim komplementom. Serum dobiven od životinje se pročišćava od antitijela na druge proteine.

Pacijentova crvena krvna zrnca se ispiru fiziološkom otopinom kako bi se potpuno uklonio serum, koji neutralizira antitijela na imunoglobuline i komplement i može uzrokovati lažno negativan rezultat.

Ako su antitijela ili komponente komplementa fiksirane na površini crvenih krvnih stanica, dodavanje antiglobulina ili antikomplementnog seruma uzrokuje aglutinaciju crvenih krvnih stanica.

Direktni Coombsov test se koristi u sljedećim slučajevima:

Autoimuna hemoliza.

Hemolitička bolest novorođenčadi.

Imunološka hemolitička anemija izazvana lijekovima.

Hemolitičke transfuzijske reakcije. Indirektni Coombsov test. Indirektni Coombsov test otkriva antitijela na crvena krvna zrnca u serumu. Da bi se to postiglo, pacijentov serum se inkubira sa crvenim krvnim zrncima donora grupe 0, a zatim se izvodi direktan Coombsov test.

Indirektni Coombsov test se koristi u sljedećim slučajevima:

Određivanje individualne kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca.

Detekcija aloantitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke transfuzijske reakcije.

Određivanje površinskih eritrocitnih antigena u medicinskoj genetici i sudskoj medicini.

Potvrda identičnih blizanaca tokom transplantacije koštane srži.

Za provođenje biološkog testa krv se počinje transfuzirati što je brže moguće (po mogućnosti u mlazu). Nakon transfuzije 25 ml krvi, sistemska cijev se steže stezaljkom. Zatim sledi pauza od 3 minuta, tokom koje se prati stanje primaoca. Za izvođenje biološkog testa ubrizgava se tri puta po 25 ml krvi. Na kraju testa (nakon transfuzije prvih 75 ml krvi u frakcionim dozama od 25 ml u intervalima od 3 minute), sistem se podešava na potrebnu brzinu transfuzije. Prilikom transfuzije više od jedne boce krvi pacijentu, potrebno je izvaditi iglu iz vene. U tom slučaju, igla se izvadi iz epruvete bočice u kojoj je krv istekla i umetne se u sljedeću bočicu. Sistemska cijev (gumena ili plastična) je u ovom trenutku stegnuta stezaljkom. Ako tokom transfuzije krvi postane neophodno da se primaocu da intravenozno bilo koji drugi lijek, to se radi probijanjem gumene cijevi sistema. Probijanje plastične cijevi je neprihvatljivo, jer ne otpada. Nakon svake transfuzije krvi, pacijent mora biti pod nadzorom kako bi se identificirale i pravovremeno otklonile moguće komplikacije, uključujući alergijske reakcije. 2 sata nakon završetka transfuzije krvi potrebno je izmjeriti tjelesnu temperaturu. Ako se povećava, mjerenje se mora ponavljati svakih sat vremena u naredna 4 sata. Jednako je važno praćenje mokrenja i sastava urina, što omogućava utvrđivanje prisutnosti toksične posttransfuzijske reakcije. Pojava oligurije i anurije nakon transfuzije krvi, prisustvo krvnih zrnaca i proteina u urinu direktan su pokazatelj razvoja posttransfuzijske hemolize.

Hemolitička anemija, uzrokovane autoimunim tijelima koja su usmjerena protiv vlastitih crvenih krvnih zrnaca, nisu precizno shvaćeni. Međutim, pretpostavlja se da neki faktori (na primjer, virus, abnormalni protein) mijenjaju crvena krvna zrnca na način da ih tijelo doživljava “kao nešto strano” i bori se protiv njih uz pomoć antitijela. Prema drugoj teoriji, antitijela usmjerena protiv crvenih krvnih zrnaca nastaju gotovo slučajno tokom formiranja abnormalnih proteinskih tijela plazme kod nekih bolesti. Takva proteinska tijela, jednako "nasumično", mogu dati reakcije koje se mogu koristiti za postavljanje dijagnoze (na primjer, virusna pneumonija, kao što je poznato, daje pozitivnu Wassermanovu reakciju, pozitivnu Paul-Bunnelovu reakciju i reakciju hladne aglutinacije) .

Postoje dva glavne vrste autoantitijela za hemolitičku anemiju i to: topla antitijela (reaguju na 37°C) i hladna antitijela (čija reaktivnost raste kako se temperatura približava nuli). Topla antitijela su češća od hladnih antitijela. Dacie je otkrio da se topli hemolizini javljaju 2 puta češće od hladnih. Hemolizini i aglutinini nisu suštinski različita antitijela: razlikuju se samo po prirodi svog djelovanja. Aglutinini aglutiniraju crvena krvna zrnca, a hemolizini ih čine podložnijim složenom procesu hemolize (komplement!). Autoantitijela, fiksirajući se na eritrocite, formiraju kompleks eritrocit-globin. Ovaj kompleks se otkriva pomoću Coombsovog antiglobinskog testa.

Coombsov test izvršeno sa Coombs serumom, za čiju pripremu se zec senzibilizira ljudskim serumom, protiv kojeg se u zečjem serumu stvaraju antitijela. Kada tako senzibilizirani serum djeluje na ljudske eritrocite, dolazi do njihove aglutinacije ako su receptori eritrocita zauzeti blokirajućim antitijelima. Budući da su ova blokirajuća antitijela izvedena iz ljudskog seruma, aglutiniraju sa zečjim serumom koji je osjetljiv na ljudsku plazmu i koji sadrži precipitine. Ova reakcija se naziva Coombsov test; za hemolitičku anemiju uzrokovanu autoimunim tijelima (Lo tit) gotovo je specifična (za detalje vidjeti Maier).

Općenito za hemolitičke anemije kod primarnog poremećaja eritrocita Coombsov test je negativan, a kod stečenih pozitivan. Međutim, postoje neki izuzeci od ovog pravila: lažno pozitivan Coombsov test se nalazi za vrijeme kriza konstitucijske hemolitičke anemije, i to u slabom stupnju, ponekad i nakon splenektomije, kod reumatskog artritisa, sarkoidoze, nakon čestih transfuzija krvi i kod sistemskog lupusa. eritematozus. Naravno, kod stečene hemolitičke anemije bez formiranja autoimunih tijela ona je negativna.

Hemolitička anemija uzrokovane autoimunim tijelima mogu se podijeliti na:
a) akutni, subakutni i hronični oblici, kao i
b) idiopatski sa nepoznatom etiologijom i c) simptomatski [virusna pneumonija (samo hladni aglutinini), hronična limfatična leukemija, retikulosarkom, limfosarkom, sistemski eritematozni lupus (uglavnom topli, rjeđe hladni aglutinini), sifiliglutinini (tumori jajnika) sa zaposlenima)).
c) simptomatska [virusna pneumonija (samo hladni aglutinini), hronična limfatična leukemija, retikulosarkom, limfosarkom, sistemski eritematozni lupus (uglavnom topli, rjeđe hladni aglutinini), sifilis (hladni aglutinini), tumori jajnika i kooperativni tumori jajnika i kooperativnih tumora.

Klinika za hemolitičku anemiju, koji se razvijaju pod utjecajem autoimunih tijela, vrlo je raznolik, te je stoga teško moguće nacrtati njihovu opštu kliničku sliku. Podjednako su pogođene osobe svih uzrasta i oba pola. Ipak, čini se da se idiopatski oblici češće primjećuju kod žena (Sacks i Workman).

Klinička slika idiopatskog oblika varira u zavisnosti od težine bolesti. U kroničnim slučajevima, početak je postepen, bolest se vuče godinama uz česta pogoršanja. Ozbiljnost anemije varira u zavisnosti od stepena hemolize. Zapaža se pad hemoglobina do 10%, u drugim slučajevima hemoglobin ostaje na 50-60% dugo vremena. Intenzitet retikulocitoze i ikterične boje kože i seruma odgovara stepenu hemolize. Bilirubin se vrlo rijetko nalazi u urinu, jer ne prolazi kroz bubrege, ali se opaža hemoglobinurija. U kroničnim slučajevima, slezena je često uvećana i može čak dostići vrlo značajnu veličinu, ali u drugim slučajevima se i dalje može opipati. Jetra rijetko nije uvećana.

U krvi u većini slučajeva uočava se makrocitoza, u akutnim stadijumima ima i mnogo mikrocita, normoblastoza i polihromazija retko izostaju, leukocitoza može dostići 30.000, trombociti su normalni. U nekim slučajevima, međutim, postoji teška trombocitopenija. Evans ove slučajeve objašnjava istovremenim prisustvom antitijela protiv trombocita, tako da postoji i hemolitička anemija i trombocitopenija zbog djelovanja autoimunih tijela - Evansov sindrom. Osmotska rezistencija je blago smanjena, ali ne u istoj mjeri i ne tako trajno kao kod konstitucijske globularne anemije. Test otpornosti na toplinu (Hegglin-Maier) nakon 6 sati također može dati blagu hemolizu (sopstveno zapažanje), ali u manjoj mjeri nego kod anemije Marchiafava. Hemosiderin se takođe nalazi u urinu (sopstveno zapažanje).

Antitela, koji se nalazi na površini eritrocita, može biti u statičkom ili slobodnom stanju krvna plazma. U zavisnosti od stanja antitijela, izvodi se direktna ili indirektna Coombsova reakcija. Ako postoji razlog za vjerovanje da su antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih zrnaca, izvodi se direktan Coombsov test. U ovom slučaju, test se odvija u jednoj fazi - zbrajanju antiglobulinski serum. Ako su nekompletna antitijela prisutna na površini crvenih krvnih stanica, aglutinacija crvena krvna zrnca

Indirektna reakcija

Indirektna Coombsova reakcija se javlja u 2 faze. Prvo morate umjetno implementirati senzibilizacija crvena krvna zrnca Da bi se to postiglo, crvena krvna zrnca i krvni serum koji se testira se inkubiraju, što uzrokuje fiksiranje antitijela na površini crvenih krvnih stanica. Nakon čega se provodi druga faza Coombsovog testa - dodavanje antiglobulinskog seruma.

Reakcija precipitacije - RP (od latinskog praecipilo precipitirati) je stvaranje i taloženje kompleksa rastvorljivog molekularnog antigena sa antitelima u obliku zamućenja tzv. precipitat. Nastaje miješanjem antigena i antitijela u ekvivalentnim količinama; višak jednog od njih smanjuje nivo formiranja imunološkog kompleksa. Reakcija precipitacije se izvodi u epruvetama (reakcija precipitacije prstena), u gelovima, hranljivim medijima itd. Ouchterlony, radiap imunodifuzija, imunoepektroforeza i sl.

HLA kucanje- proučavanje ljudskog glavnog kompleksa histokompatibilnosti - HLA kompleksa. Ova formacija uključuje regiju gena na hromozomu 6 koji kodiraju HLA antigene uključene u različite imunološke odgovore.

Zadaci za HLA kucanje može biti vrlo različita - biološka identifikacija (HLA tip se nasljeđuje uz roditeljske gene), određivanje predispozicije za razne bolesti, odabir donora za transplantaciju organa - u ovom slučaju se upoređuju rezultati HLA tipizacije tkiva donora i primaoca. Koristeći HLA tipizaciju, utvrđuje se koliko su supružnici slični ili različiti u pogledu antigena histokompatibilnosti kako bi se dijagnosticirali slučajevi neplodnosti.

HLA kucanje sugerira Analiza HLA polimorfizma a provodi se dvije metode - serološkom i molekularno genetičkom. Klasična serološka metoda HLA tipizacije zasniva se na mikrolimfocitotoksičnom testu, a molekularna metoda koristi PCR (lančana reakcija polimeraze).

Serološki HLA kucanje sprovedeno na izolovanim populacijama ćelija. Antigene glavnog kompleksa histokompatibilnosti prenose uglavnom limfociti. Stoga se suspenzija T limfocita koristi kao glavni nosilac antigena klase I, a suspenzija B limfocita za određivanje antigena HLA klase II. Za izolaciju potrebne populacije stanica iz pune krvi koristi se centrifugiranje ili imunomagnetsko odvajanje. Vjeruje se da prva metoda može dovesti do lažno pozitivnih podataka, jer to rezultira smrću nekih stanica. Druga metoda je prepoznata kao specifičnija - više od 95% ćelija ostaje održivo.

Ali osnova za izvođenje limfocitotoksičnog testa HLA kucanje je specifičan serum koji sadrži antitijela na različite alelne varijante antigena HLA klase I i II. Serološkim testom se može utvrditi HLA tip ispitivanjem koji serumi reaguju sa limfocitima, a koji ne.

Ako dođe do reakcije između stanica i seruma, rezultat je stvaranje kompleksa antigen-antitijelo na površini stanice. Nakon dodavanja otopine koja sadrži komplement, dolazi do lize stanica i smrti. Serološki test tipizacije HLA se procjenjuje korištenjem fluorescentne mikroskopije za procjenu pozitivnih (crvena fluorescencija) i negativnih (zelena fluorescencija) reakcija, ili fazno-kontrastne mikroskopije za bojenje jezgara mrtvih ćelija. Rezultat HLA tipizacije se dobija uzimajući u obzir specifičnost reagovanih seruma i grupa antigena unakrsne reakcije, kao i intenzitet reakcije citotoksičnosti.

Nedostaci serološke HLA kucanje su prisustvo unakrsnih reakcija, slab afinitet antitela ili niska ekspresija HLA antigena, odsustvo proteinskih proizvoda u nizu HLA gena.

Modernije, molekularne metode HLA kucanje koriste već standardizovane sintetičke uzorke koji ne reaguju sa antigenima na površini leukocita, već sa DNK i direktno ukazuju koji su antigeni prisutni u uzorku. Molekularne metode ne zahtijevaju živa bijela krvna zrnca; bilo koja ljudska stanica se može proučavati, a nekoliko mikrolitara krvi je dovoljno za rad, ili se možete ograničiti na struganje sa oralne sluznice.

Molekularna genetika HLA kucanje koristi PCR metodu čiji je prvi korak dobivanje čiste genomske DNK (iz pune krvi, suspenzije leukocita, tkiva).

Uzorak DNK se zatim kopira - amplificira in vitro korištenjem prajmera (kratka jednolančana DNK) specifična za specifični HLA lokus. Krajevi svakog para prajmera moraju biti striktno komplementarni jedinstvenoj sekvenci koja odgovara specifičnom alelu, inače neće doći do amplifikacije.

Nakon PCR-a, tokom ponovljenog kopiranja, dobija se veliki broj DNK fragmenata koji se mogu vizuelno proceniti. Da bi se to postiglo, reakcione smjese se podvrgavaju elektrolizi ili hibridizaciji, a da li je došlo do specifičnog pojačanja utvrđuje se pomoću programa ili tablice. Rezultat HLA tipizacije je predstavljen u obliku sveobuhvatnog izvještaja na nivou gena i alela. Zbog standardizacije korištenih uzoraka, molekularni HLA kucanje tačnije serološki. Osim toga, pruža više informacija (više novih DNK alela) i viši nivo detalja, jer vam omogućava da identifikujete ne samo antigene, već i same alele, koji određuju koji je antigen prisutan u ćeliji.

Reakcija imunološke lize. Reakcija se zasniva na sposobnosti specifičnih antitela da formiraju imune komplekse sa ćelijama, uključujući eritrocite i bakterije, što dovodi do aktivacije sistema komplementa klasičnim putem i lize ćelija. Od reakcija imunološke lize najčešće se koristi reakcija hemolize, a reakcija bakteriolize rijetko se koristi (uglavnom u diferencijaciji kolere i vibrija sličnih koleri).

Reakcija hemolize. Pod utjecajem reakcije s antitijelima u prisustvu komplementa, zamućena suspenzija crvenih krvnih zrnaca pretvara se u svijetlocrvenu prozirnu tekućinu - "krv laka" zbog oslobađanja hemoglobina. Prilikom postavljanja dijagnostičke reakcije fiksacije komplementa (FFR), reakcija hemolize se koristi kao indikator: za testiranje prisutnosti ili odsustva (fiksacije) slobodnog komplementa.

Lokalna reakcija hemolize u gelu(Erne reakcija) je jedna od varijanti reakcije hemolize. Omogućava vam da odredite broj ćelija koje stvaraju antitijela. Broj ćelija koje luče antitijela - hemolizine - određen je brojem hemoliznih plakova koji se pojavljuju u agar gelu koji sadrži eritrocite, suspenziju stanica limfoidnog tkiva koje se proučava i komplementa.

Metoda imunofluorescencije

(RIF, reakcija imunofluorescencije) je metoda za detekciju specifičnih Ags (Abs) pomoću Abs (Ags) konjugiranih na fluorohrom. Ima visoku osjetljivost i specifičnost. Koristi se za ekspresnu dijagnostiku infekcija. bolesti (identifikacija patogena u materijalu za istraživanje), kao i za određivanje Ab i površinskih receptora i markera leukocita (imunofenotipizacija) i drugih ćelija. Direktno I. m. sastoji se od obrade dijela tkiva ili razmaza od patološkog materijala ili mikrobne kore koji sadrži specifične Abs konjugirane s fluorohromom; preparat se ispere da se oslobodi nevezanih abs i pregleda pod fluorescentnim mikroskopom. U pozitivnim slučajevima, svijetleći imunološki kompleks pojavljuje se oko periferije objekta. Kontrola je neophodna kako bi se isključila nespecifična luminiscencija. At indirektno. Njih. u prvoj fazi, presjek tkiva ili razmaz se tretira nefluorescentnim specifičnim sredstvom, u drugom - luminiscentnim sredstvom protiv -globulina životinje koja je korištena u prvoj fazi. U pozitivnom slučaju formira se blistavi kompleks koji se sastoji od Ar, At prema njemu i At protiv At (sendvič metoda). Pored fluorescentnog mikroskopa, RIF se uzima u obzir prilikom fenotipizacije ćelija. laserski sorter ćelija .

Protočna citometrija- metoda optičkog mjerenja parametara ćelije, njenih organela i procesa koji se u njoj odvijaju.

Tehnika uključuje detekciju rasipanja svjetlosti iz laserskog snopa dok ćelija prolazi kroz nju u mlazu tekućine, a stupanj disperzije svjetlosti omogućava da se dobije predodžbu o veličini i strukturi ćelije. Osim toga, analiza uzima u obzir nivo fluorescencije hemijskih spojeva koji su dio ćelije (autofluorescencija) ili su dodani uzorku prije protočne citometrije.

Suspenzija ćelija, prethodno obeležena fluorescentnim monoklonskim antitelima ili fluorescentnim bojama, ulazi u tok tečnosti koji prolazi kroz protočnu ćeliju. Uslovi su odabrani tako da se ćelije redaju jedna za drugom zbog tzv. hidrodinamičko fokusiranje mlaza u mlazu. U trenutku kada ćelija pređe laserski snop, detektori bilježe:

raspršivanje svjetlosti pod malim uglovima (od 1° do 10°) (ova karakteristika se koristi za određivanje veličine ćelija).

rasipanje svetlosti pod uglom od 90° (omogućava nam da procenimo odnos jezgra/citoplazma, kao i heterogenost i granularnost ćelija).

Intenzitet fluorescencije kroz nekoliko kanala fluorescencije (od 2 do 18-20) - omogućava vam da odredite subpopulacijski sastav ćelijske suspenzije itd.

- studija koja pomaže u određivanju sadržaja nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela u krvi. Ovaj antiglobulinski test vam omogućava da otkrijete antitela na kod trudnica.

Osim toga, omogućava dijagnosticiranje hemolitičke anemije kod novorođenčadi s Rh konfliktom u početnim fazama. Ovo pomaže u sprječavanju uništavanja crvenih krvnih stanica neophodnih za normalno stvaranje krvi. Ovaj test je 1945. godine kreirao Robert Coombs, zbog čega je i dobio ime.

Coombsov test je svestran test koji omogućava pravovremenu dijagnozu hematopoetskih poremećaja kod odraslih i djece.

Postoje sljedeće vrste takvih testova:

1. Direktan Coombsov test– omogućava vam da odredite antitijela koja se nalaze na površini crvenih krvnih zrnaca. Obično se takva studija propisuje za sumnju na hemolizu, autoimunu hemolitičku anemiju ili druge autoimune bolesti. Osim toga, provodi se nakon terapije lijekovima na bazi kinina, penicilina ili metildope, ili nakon transfuzije krvi. Da biste dobili preciznije rezultate, morate potpuno prestati uzimati lijekove najmanje 1 tjedan prije studije.
2. Indirektni Coombsov test– test koji se može koristiti za otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u plazmi. Obično se izvodi tokom trudnoće i prije transfuzije krvi. Anti-eritrocitna antitijela se pojavljuju u krvi osobe tokom reaktivnog imunološkog sistema ili kao reakcija na određene lijekove. Za precizniju studiju, nekoliko uzoraka se provodi odjednom u intervalu od 2 sata.

Indikacije za upotrebu

Coombsov test se izvodi samo ako postoje ozbiljne indikacije. Ovo je skupa i dugotrajna studija, koja je specifičan test.

Obično se sljedeće situacije smatraju indikacijama za njegovu primjenu:

1. Tokom transfuzije krvi. Test vam omogućava da utvrdite hoće li se krv primaoca ukorijeniti u ljudskom tijelu, kao i da li je moguće doniranje. U tom slučaju potrebno je pregledati materijal i od donatora i od primaoca. Važno je utvrditi prirodu antitijela, jer ako su nekompatibilna u tijelu u pozadini Rh konflikta, imunološki sistem je uništen. To dovodi do razvoja teških bolesti, au rijetkim slučajevima čak i smrti.
2. Prije operacije kada postoji opasnost od gubitka krvi. To se radi kako bi ljekar mogao odmah uvesti odgovarajuću krv za obnavljanje tijela.
3. Za otkrivanje Rh senzibilizacije. Rhesus je specifičan antigen koji se pojavljuje u tijelu svake žene tokom trudnoće. Ako majka ima pozitivan Rh, a otac negativan, ili obrnuto, za dijete nema zavisnosti – može naslijediti bilo koga. Ako dijete dobije suprotan rezus od majke, postoji visok rizik od senzibilizacije. Ovaj fenomen karakterizira miješanje krvi majke i djeteta. To se može dogoditi i tokom gestacije i tokom porođaja.

Ako u tijelu trudnice dođe do Rhesus konflikta, imunološki sistem majke počinje da doživljava njen fetus kao strano tijelo. Zbog toga postoji veliki rizik da će početi da ga napada.

Kao rezultat takvih radnji, beba može razviti ozbiljne patologije. Najčešće se javlja eritroblastoza - pojava u kojoj djetetov organizam ne može proizvesti dovoljan broj crvenih krvnih zrnaca.

Osim toga, zbog Rh konflikta, fetalna smrt može nastupiti u maternici ili odmah nakon rođenja. Uz pravilan pristup liječenju, takve ozbiljne posljedice mogu se lako izbjeći.

Odstupanja od norme

Ako je Coombsov test pozitivan, doktor zaključuje da u krvnom serumu postoje antitijela na crvena krvna zrnca. To znači da krv davaoca možda nije kompatibilna s krvlju pacijenta.

Ako se u tijelu trudnice s Rh negativnom krvlju dijagnosticira pozitivan rezultat, tada njeno tijelo sadrži antitijela na krv fetusa.

To ukazuje na Rh konflikt, koji zahtijeva izuzetno pažljiv pristup liječenju trudnoćom od strane doktora, kao i poštovanje svih uputa i preporuka žene.

Ako su u krvi djeteta prisutna antitijela, dijagnosticira se hemolitička bolest novorođenčeta. U tom slučaju se provodi ponovljena studija kako bi se utvrdilo dolazi li do povećanja razine antitijela u krvi buduće majke ili ne.

Moguće komplikacije iz Coombsovog testa

Coombsov test je prilično siguran test koji vam omogućava dijagnosticiranje niza autoimunih bolesti u ranim fazama. Rijetko uzrokuje komplikacije, obično su negativne posljedice povezane s uzimanjem krvi.

Oni su:

• Krvarenje ili krvarenja ispod kože
• Vrtoglavica i nesvjestica
• Infektivna infekcija

7 295