Za dijagnozu se koristi serološka metoda istraživanja. Koje se krvne pretrage rade na sifilis i kako se tumače? Glavne metode koje se koriste u serološkoj dijagnostici

Kako bi se postavila tačna dijagnoza, pacijent se sveobuhvatno pregleda. Opći test krvi nije vrlo informativan; ne koristi se za dijagnosticiranje spolno prenosivih infekcija.

Vrste istraživanja i biomaterijali za analizu

Za identifikaciju bolesti koriste se različite tehnike i biomaterijali. U ranim fazama, sifilis se utvrđuje bakterioskopskim testom. Uzorci se ispituju pod mikroskopom. Uređaj vam omogućava da otkrijete sojeve patogena. Serološki testovi se rade naknadno. Zahvaljujući njima, u uzorcima se otkrivaju antigeni i antitijela na bolest.

Metode za određivanje spolno prenosivih infekcija podijeljene su u 2 kategorije:

• Direktno identificiranje patogenih mikroorganizama. To uključuje: mikroskopiju tamnog polja, RIT analizu (infekcija zečeva biomaterijalom za istraživanje), PCR metodu - lančanu reakciju polimeraze (uz nju se pronalaze genetski elementi patogena).
• Indirektni (serološki) testovi omogućavaju otkrivanje antitijela na patogen. Proizvodi ih imuni sistem kao odgovor na infekciju.

Serološke tehnike se dijele u 2 kategorije: treponemske i netreponemske.

Netreponemski, uključujući: toluidin crveni test, RSC analizu, RPR test, test krvi pomoću ekspresne RMP metode.

Treponemski, kombinovanje: imunobloting, RSK test, RIT analiza, RIF studija, RPGA test, ELISA analiza.

Sadržaj informacija testova za infekciju varira. Najčešće se rade glavne vrste testova na sifilis, koje uključuju serološke metode. Pacijentima kojima je potreban pregled, lekar propisuje testove pojedinačno.

Biomaterijal za istraživanje

Za identifikaciju Treponema pallidum, patogena koji izgleda kao spirala i uzrokuje sifilis, uzimaju se uzorci:

• venska krv;
• cerebrospinalna tečnost (sekret iz kičmenog kanala);
• sadržaj limfnih čvorova;
• ulcerativnog tkiva.

Ako je potrebno provesti testove za otkrivanje sifilisa, krv se daruje ne samo iz kubitalne vene, već i iz prsta. Na izbor biomaterijala i metode pregleda utiču težina infekcije i opremljenost dijagnostičkog centra.

Direktno istraživanje

Uvjerljiv dokaz sifilisa je identifikacija infektivnih agenasa pod mikroskopom. Na ovaj način, patogen je pronađen kod 8 od 10 ispitanika. Negativan rezultat kod 2 preostala pacijenta ne znači da nisu zaraženi.

Studija se radi u primarnom i sekundarnom stadijumu (stadijumu) bolesti koje karakteriše pojava kožnih osipa i sifiloma (ulceracija) na epitelnim tkivima ili sluzokožama. Patogeni koji uzrokuju polno prenosive bolesti nalaze se u iscjetku iz lezija.

Preciznije, kompleksni test nazvan RIF, reakcija imunofluorescencije, može identificirati treponeme. Uzorak za istraživanje je prethodno tretiran fluorescentnim antitelima. Jedinjenja koja mogu svijetliti se drže zajedno s bakterijama. Ispitujući uzorke pod mikroskopom, u slučaju infekcije, laboratorijski tehničar vidi blistave patogene.

Test se koristi za ranu dijagnozu bolesti. Što duže traje bolest, to je manja osjetljivost istraživačkih metoda. Osim toga, pada nakon liječenja osipa i čireva antisepticima i kod pacijenata koji su bili podvrgnuti liječenju. Ponekad test daje lažno negativne i lažno pozitivne rezultate.

RIT analiza je vrlo precizna metoda za otkrivanje sifilisa. Kada provodite test, morate dugo čekati na rezultate. Sve dok zaraženi zec ne pokaže znakove infekcije. Test se koristi vrlo rijetko, uprkos činjenici da je izuzetno precizan.

Koristeći lančanu reakciju polimeraze za sifilis, određuju se genetski elementi patogena. Jedini nedostatak PCR-a je njegova visoka cijena.

Netreponemski testovi

Takvi testovi krvi pomažu identificirati antitijela koja se pojavljuju kao odgovor na kardiolipin, spoj koji je povezan s općom strukturom membrana patogena.

Wassermanova reakcija (RW ili RW)

Najpoznatiji test za sifilis je Wassermanova reakcija. RV je uključen u kategoriju reakcija fiksacije komplementa (CFR). Nove RSC metode imaju značajne razlike od tradicionalnih RW. Ali oni su označeni, kao i prije, konceptom „Wassermannove reakcije“.

Imuni sistem sintetiše antitela (markere) kao odgovor na invaziju treponema. Otkrivaju se analizom krvi na sifilis pomoću Wassermanove reakcije. Pozitivan RW rezultat potvrđuje da je subjekt zaražen.

Reakcija hemolize – indeks RT analize. S njim djeluju dvije tvari: hemolitički serum i crvena krvna zrnca ovaca. Serum se proizvodi imunizacijom zeca crvenim krvnim zrncima ovaca. Zagrevanjem se smanjuje aktivnost biološke tečnosti.

RV indikatori zavise od toga da li je došlo do hemolize ili ne. U uzorku bez markera dolazi do hemolize. U ovom slučaju, reakcija na antigene je nemoguća. Komplement se troši na interakciju sa crvenim krvnim zrncima ovaca. Kada u uzorku postoje markeri, kompliment reaguje sa antigenima. U ovom slučaju ne dolazi do hemolize.

Komponente za RAO se mjere u jednakim količinama. Uzorak koji sadrži serum, antigen i komplement se zagrijava. Uzorku se dodaju janjeći eritrociti i serum. Čuvati na temperaturi od 37 stepeni dok ne dođe do hemolize u kontrolnom uzorku, koji umesto antigena sadrži fiziološki rastvor.

Za izvođenje RT koriste se gotovi antigeni. Titri i tehnologija za njihovo razrjeđivanje navedeni su na pakovanju. Pozitivan RW rezultat je označen križićima. Gotovi rezultati ispitivanja su prikazani na sljedeći način:

• ++++ – maksimalno pozitivno (hemoliza odgođena);
• +++ – pozitivno (hemoliza je značajno odgođena);
• ++ – slabo pozitivan (hemoliza je djelimično odgođena);
• + – sumnjivo (hemoliza je blago odgođena).

Uz negativnu RT, hemoliza je u potpunosti postignuta u svim uzorcima. Ali u nekim slučajevima se dobivaju lažno pozitivni podaci. To se dešava kada kardiolipin uđe u ćelije. Odbrambeni mehanizmi ne proizvode markere za "nativni" kardiolipin.

Međutim, povremeno se javljaju izuzetne situacije. Pozitivan RW se otkriva kod neinficiranih ljudi. To je moguće ako je pacijent patio od ozbiljne bolesti uzrokovane virusima (pneumonija, malarija, tuberkuloza, patologije jetre i krvi). Pozitivna RV se javlja kod trudnica. To je zbog činjenice da je imunološki sistem pretjerano oslabljen.

Ako postoji sumnja da je rezultat testa na sifilis lažno pozitivan, pacijent se dodatno pregleda. Problem je što se ova infekcija ne može otkriti jednim kliničkim laboratorijskim testom. Neke studije daju lažne pokazatelje, koji mogu biti i negativni i pozitivni.

Detaljna analiza na sifilis pomaže da se dobiju pouzdani podaci. Zahvaljujući njemu, postavlja se prava dijagnoza: infekcija je dokazana ili isključena. Osim toga, prošireni test vam omogućava da zaustavite razvoj infekcije i eliminišete nepotrebnu terapiju.

RSK i RMP

Prilikom testiranja na sifilis, tradicionalna Wassermanova reakcija se koristi izuzetno rijetko. Umjesto toga, koristi se RSK metoda. Test daje pozitivan rezultat 2 mjeseca nakon infekcije. U sekundarnom obliku bolesti pozitivan je u gotovo 100% slučajeva.

Metoda mikroprecipitacije (MPM) je studija s mehanizmom sličnim Wassermanovoj reakciji. Tehnika je jednostavna za implementaciju. Izvodi se brzo. Za testiranje na sifilis, u ovom slučaju, krv se vadi iz prsta. Tehnika daje pozitivan rezultat 30 dana nakon pojave sifiloma. Nisu isključene greške tokom istraživanja. Lažno pozitivni podaci dobivaju se na pozadini: otežanih infekcija, upale pluća, srčanog udara, moždanog udara, intoksikacije.

Sljedeće dovodi do pogrešnih testova:

Nakon otkrivanja upitnog testa na sifilis, rade se treponemske studije. Pomažu u razjašnjavanju dijagnoze.

RPR i toluidin crveni test

Metoda plazma reagina (RPR) je još jedan analog Wassermanove reakcije. Koristi se kada je potrebno:

• skrining asimptomatskih osoba;
• potvrditi sifilis;
• pregleda darovanu krv.

Toluidin crveni test, kao i RPR, izvodi se kako bi se procijenila dinamika terapije lijekovima. Njihovi pokazatelji padaju kada se bolest povuče, a povećavaju se kada se patologija ponovi.

Netreponemski testovi pokazuju koliko se pacijent oporavio. Dobivanje negativnih rezultata za sifilis ukazuje na to da se bolest potpuno povukla. Prvi pregled se radi 3 mjeseca nakon terapije.

Treponemske studije

Visoko produktivni testovi se provode korištenjem antigena treponeme. Oni su gotovi kada:

• pozitivan rezultat dobijen je RMP metodom;
• potrebno je prepoznati pogrešne podatke koji proizilaze iz skrining testova;
• Sumnja na razvoj sifilisa;
• potrebno je dijagnosticirati skrivenu infekciju;
• potrebno je provesti retrospektivnu dijagnozu.

RIF i RIT testovi

Kod mnogih liječenih pacijenata, treponemsko testiranje uzoraka daje pozitivne rezultate dugo vremena. Ne mogu se koristiti za procjenu stepena efikasnosti liječenja. RIT i RIF su ultra-osjetljivi testovi. Zahvaljujući njima, dobijaju se pouzdani podaci. Ove analize su radno intenzivne, zahtijevaju dosta vremena i naprednu opremu. Mogu ih izvoditi kvalifikovani zdravstveni radnici.

Kada se radi RIF test na sifilis, pozitivni podaci se dobijaju 2 mjeseca nakon infekcije. Negativni parametri potvrđuju da je ispitanik zdrav. Pozitivan - ukazuje na to da je osoba zaražena.

RIT se izvodi kada je reakcija mikroprecipitacije pozitivna. Ovaj test krvi na sifilis pomaže da se pobije ili potvrdi prisutnost infekcije. Test je ultra-osjetljiv, precizno pokazuje da li je pacijent zaražen ili zdrav. Ali studija daje pouzdane podatke samo 3 mjeseca nakon što treponeme uđu u tijelo.

Imunobloting metoda

Ultra precizni testovi uključuju imunobloting. Ovaj test krvi se rijetko radi na sifilis. Koristi se prilikom pregleda novorođenčadi. Nije pogodan za brzo testiranje. Pozitivni rezultati se postižu sa zakašnjenjem. Dobivaju se mnogo ranije metodom mikroprecipitacije.

ELISA i RPGA

Informativne ultraprecizne metode istraživanja uključuju ELISA i RPGA testove. Uz njihovu pomoć provodi se brza dijagnostika. Laboratorijski tehničari rade ogroman broj ovakvih testova. Zahvaljujući njima moguće je postaviti tačnu dijagnozu.

RPGA test na sifilis je pozitivan 30 dana nakon što patogen uđe u tijelo. Koristi se za dijagnosticiranje primarne infekcije kada se pojave čirevi i osip.

Zahvaljujući njemu, moguće je identificirati napredne, potajno tekuće, kao i urođene oblike patologije. Ali provodi se zajedno s netreponemskim i treponemskim testovima. Sveobuhvatna dijagnostika garantuje pouzdanost rezultata. Trostruko testiranje precizno dokazuje prisustvo ili odsustvo polno prenosive infekcije.

Pozitivna reakcija traje dugo vremena. Iz tog razloga, studija se ne koristi za procjenu efikasnosti liječenja.

ELISA test je pozitivan 21 dan nakon infekcije. Test ponekad daje pogrešne rezultate. Pojavljuju se kod sistemskih patologija i poremećenih metaboličkih procesa. Njihova efikasnost je upitna kod djeteta rođenog od zaražene majke.

Greške dobivene serološkim metodama istraživanja postale su razlog za otkrivanje progresivnih dijagnostičkih metoda. Plinska hromatografija i masena spektrometrija ne daju lažne rezultate. Jedina prepreka njihovoj masovnoj upotrebi je njihova visoka cijena.

Algoritam dijagnoze

• Kada je sifilis u primarnoj fazi (do 60 dana od trenutka infekcije), uzročnik se traži na tamnoj pozadini ili se za otkrivanje koriste fluorescentna antitijela.
• Ako je patologija u primarnom, sekundarnom ili latentnom obliku, koriste se RMP i ELISA. RPGA test krvi na sifilis pomaže u potvrđivanju rezultata.
• U slučaju recidiva sekundarne infekcije, analizira se iscjedak ulceracija i osipa. Patogeni se uklanjaju iz uzoraka i proučavaju pod mikroskopom.
• Kada bolest uđe u tercijarnu fazu, 1/3 pacijenata ima negativan RMP. Istovremeno, rezultati ELISA i RPGA su pozitivni. Međutim, oni ne ukazuju uvijek na tercijarno razdoblje, već potvrđuju da je osoba prethodno bila zaražena. Slabo pozitivan test je dokaz potpunog izlječenja, a ne razvoja tercijarne faze.
• Da bi se potvrdio kongenitalni sifilis, uzimaju se krvne pretrage majke i bebe. Uporedite podatke iz RMP testova. Uzima se u obzir da su bebini ELISA i RPGA pozitivni. Dijagnoza se potvrđuje imunoblot tehnikom.

Sifilis, kao i svaka sistemska patologija, utječe na cijelo tijelo. Stoga se testiranje na njega provodi tokom trudnoće, prije pobačaja. Pacijenti se podvrgavaju RMP, ELISA, RPGA.

Kako se testirati

Venerolog šalje pacijente na analizu. Privatne laboratorije rade anonimne pretrage na sifilis na zahtjev klijenta. Za testiranje nije potrebna uputnica ljekara.

Pravila za izvođenje studije:

• Krv se vadi u laboratoriji ujutro na prazan želudac (jede se nakon zahvata). Prije testa smijete piti samo vodu.
• 2 dana prije pregleda zabranjeno je jesti masnu hranu i piti alkohol.
• Krv se uzima iz prsta ili vene.
• Koliko dugo studija traje? Obično ne više od jednog dana. Tumačenje testova na sifilis dobija se od laboratorijskih tehničara ili lekara koji prisustvuje.
• Koliko dugo vrijedi test? Nakon 3 mjeseca rezultati testa postaju nevažeći. Ponovo se iznajmljuju.

Ako transkript analize pokaže da je test pozitivan, potrebno je posjetiti venerologa, koji će propisati dodatni pregled kako bi precizno potvrdio dijagnozu i odabrao potreban režim liječenja.

Ispitivanje spinalnog sadržaja

Dijagnoza neurosifilisa postavlja se nakon pregleda cerebrospinalne tekućine. Ova analiza se radi:

• osobe sa latentnim oblikom infekcije;
• za simptome bolesti nervnog sistema;
• asimptomatski, uznapredovali neurosifilis;
• oporavljenih pacijenata s pozitivnim serološkim reakcijama.

Ljekar daje uputnicu za analizu likvora. Punkcija se uzima iz kičmenog kanala u 2 cijevi. Punkcija je podmazana jodom i prekrivena sterilnom salvetom. Nakon zahvata pacijent ostaje u krevetu 2 dana.

U 1 uzorku se određuje količina proteina, ćelija i tragovi meningitisa. U drugom uzorku se izračunavaju antitijela na uzročnika sifilisa. Da bi to učinili, rade sljedeće testove: RV, RMP, RIF i RIBT.

Ovisno o tome koliko je kršenja otkriveno, postoje 4 vrste cerebrospinalne tekućine. Svaki od njih ukazuje na specifično oštećenje nervnog sistema. Doktor postavlja dijagnozu:

Osim toga, rezultati testa se koriste za procjenu oporavka pacijenta.

Tumačenje testova je zadatak doktora. Samo on može donijeti prave zaključke, ako je potrebno, propisati dodatne preglede i postaviti tačnu dijagnozu. U slučaju opasne sistemske patologije ne biste se trebali baviti samodijagnozom. Greška u dijagnozi ima ozbiljne posljedice.

Reakcija fiksacije komplementa (CFR)

Reakcija fiksacije komplementa (FFR) odvija se u dvije faze: u prvoj fazi se kombinuje antigen sa test serumom, u kojem se pretpostavlja prisustvo antitijela, dodaje se komplement i inkubira u termostatu 30 minuta.

Druga faza: dodati hemolitički sistem (crvena krvna zrnca ovaca + hemolitički serum). Nakon inkubacije u termostatu od 30 minuta, rezultat se uzima u obzir.

Sa pozitivnim RSC, serumska antitijela, kombinujući se sa antigenom, formiraju imuni kompleks koji vezuje komplement i hemoliza neće doći. Ako je reakcija negativna (nema antitijela u test serumu), komplement će ostati slobodan i doći će do hemolize.

RSC se koristi za serološku dijagnostiku sifilisa, gonoreje, tifusa i drugih bolesti.

Imunološke reakcije korištenjem obilježenih antigena i antitijela temelje se na činjenici da je jedan od sastojaka koji su uključeni u reakciju (antigeni ili antitijela) u kombinaciji s nekom vrstom oznake koja se može lako otkriti. Fluorohromi (RIF), enzimi (ELISA), radioizotopi (RIA) i elektronski gusti spojevi (IEM) se koriste kao oznake.

Enzimski imunosorbentni test (ELISA), kao i drugi imunološki testovi, koristi se: 1) za otkrivanje nepoznatog antigena pomoću poznatih antitijela ili 2) za otkrivanje antitijela u krvnom serumu pomoću poznatog antigena. Posebnost reakcije je da se poznati sastojak reakcije kombinira s enzimom (na primjer, peroksidazom). Prisustvo enzima se određuje pomoću supstrata, koji postaje obojen kada enzim djeluje. Najviše se koristi ELISA u čvrstoj fazi.

1) Detekcija antigena. Prva faza je adsorpcija specifičnih antitijela na čvrstu fazu, koja se koristi kao polistiren ili polivinilkloridne površine bunara plastičnih ploča. Druga faza je dodavanje test materijala, u kojem se pretpostavlja prisustvo antigena. Antigen se vezuje za antitela. Nakon toga, bunari se ispiru. Treća faza je dodavanje specifičnog seruma koji sadrži antitijela protiv datog antigena, obilježena enzimom. Obeležena antitela se vezuju za antigene, a višak se uklanja ispiranjem. Dakle, ako testni materijal sadrži antigene, na površini čvrste faze formira se kompleks antitelo-antigen-antitelo obeležen enzimom. Za detekciju enzima dodaje se supstrat. Za peroksidazu, supstrat je ortofenilendiamin pomešan sa H 2 O 2 u puferskom rastvoru. Pod djelovanjem enzima nastaju proizvodi smeđe boje.

2) Detekcija antitela. Prva faza je adsorpcija specifičnih antigena na zidovima jažica. Tipično, u komercijalnim test sistemima, antigeni su već adsorbovani na površini jažica. Druga faza je dodavanje test seruma. U prisustvu antitijela nastaje kompleks antigen-antitijelo. Treća faza - nakon ispiranja, u jažice se dodaju antiglobulinska antitijela (antitijela protiv ljudskih globulina), označena enzimom. Rezultati reakcije se procjenjuju kako je gore opisano.

Očigledno pozitivni i očigledno negativni uzorci, koji su dostupni u komercijalnim sistemima, koriste se kao kontrole.

ELISA se koristi za dijagnosticiranje mnogih zaraznih bolesti, posebno HIV infekcije i virusnog hepatitisa.

Imunobloting je vrsta ELISA (kombinacija elektroforeze i ELISA). Biopolimeri, kao što su antigeni virusa humane imunodeficijencije, odvajaju se pomoću gel elektroforeze. Zatim se razdvojeni molekuli prenose na površinu nitroceluloze istim redoslijedom kojim su se nalazili u gelu. Proces prijenosa naziva se blotiranje, a rezultirajući otisak je mrlja. Na ovaj otisak utiče serum koji se proučava. Zatim se dodaje antihumani globulinski serum obilježen peroksidazom, zatim supstrat, koji pod djelovanjem enzima postaje smeđi. Smeđe pruge se formiraju na mjestima gdje su se antitijela spojila s antigenima. Metoda vam omogućava da otkrijete antitijela na pojedinačne antigene virusa.

Radioimunotest (RIA). Metoda vam omogućava da odredite količinu antigena u uzorku za testiranje. Prvo se u imunološki serum dodaje materijal za koji se pretpostavlja da sadrži antigen, a zatim se dodaje poznati antigen označen radioizotopom, na primjer I 125. Kao rezultat toga, detektabilni (neobilježeni) i poznati obilježeni antigen se veže za ograničenu količinu antitijela. S obzirom da se obilježeni antigen dodaje u određenoj dozi, moguće je odrediti koji je dio vezan za antitijela, a koji je ostao slobodan zbog konkurencije sa neobeleženim antigenom i uklonjen. Količina obilježenog antigena vezanog za antitijela određuje se pomoću brojača. On je obrnuto proporcionalan količini otkrivenog antigena.

Imunoelektronska mikroskopija (IEM). Antigen, na primjer, virus gripe, vezan je za specifični antiserum obilježen supstancom gustom elektronom. Kao oznake koriste se proteini koji sadrže metal (feritin, hemocijanin) ili koloidno zlato. Tokom mikroskopije, u elektronskom mikroskopu se snimaju fotografije u kojima su vidljivi virioni gripa sa pričvršćenim tamnim tačkama - molekulima obilježenih antitijela.

Stečeni imunitet, njegova razlika od nasljednog (specifičnog, urođenog). Vrste stečenog imuniteta.

Zadatak. Trogodišnje dijete Valery oboljelo je od difterije. Ostali članovi porodice nisu oboljeli, a majka je u djetinjstvu imala difteriju, a otac je vakcinisan difterijskim toksoidom. Starija sestra Nataša, petogodišnjakinja, svojevremeno zbog medicinskih kontraindikacija nije bila vakcinisana toksoidom difterije, pa je morala na hitnu profilaksu uz pomoć antidifterijskog antitoksičnog seruma. Mlađi brat Vitalij, star tri mjeseca, nije se razbolio, iako nije bio ničim vakcinisan. Mačka i pas su u kući, nisu bolesni. Za svakog člana porodice i za životinje navedite vrstu imuniteta koja ih je spriječila da se razbole.

Šta je antigen? Koje supstance mogu biti antigeni? Pravi antigeni i hapteni, kako se razlikuju jedni od drugih? Struktura antigena. Kako se zove dio molekule antigena koji određuje njegovu specifičnost? Imenujte antigene koje poznajete. Šta su autoantigeni? Antigenska struktura mikrobne ćelije. Flagelarni i somatski antigeni; lokalizacija, slovna oznaka, hemijska priroda, odnos prema temperaturi, način pripreme, praktična primena. Anatoksin, njegova svojstva, primjena, proizvodnja. Koje tkivo čini imunološki sistem organizma? Označite centralne i periferne organe ljudskog imunološkog sistema. Opišite proces formiranja humoralnih i ćelijskih imunih odgovora. Navedite ćelije koje hvataju i vare antigen; ćelije koje međusobno djeluju u stvaranju humoralnog imuniteta, ćelijskog imuniteta; ćelije koje se transformišu i postaju plazma ćelije koje proizvode antitijela; ćelije koje stimulišu ovaj proces; ćelije koje potiskuju imuni odgovor; ćelije koje ubijaju tumorske ćelije i ćelije inficirane virusom. Šta su antitela? Kako doći do imunološkog seruma? Kako doći do seruma koji bi neutralizirao toksin tetanusa? Protiv kojih antigena nastaju antitoksini, aglutinini i hemolizini? Koja se antitela stvaraju kada se toksoid difterije unese u organizam? bakterija difterije? Hemijska priroda i struktura antitijela. Koje je aktivno mjesto imunoglobulina? Navedite klase imunoglobulina i njihova svojstva. Navedite klasu imunoglobulina koji mogu prodrijeti u placentu. Kojoj klasi pripadaju sekretorni imunoglobulini? Dinamika akumulacije antitijela. Kako se sekundarni imunološki odgovor razlikuje od primarnog? Kako se znanje o dinamici imunološkog odgovora koristi u praktičnoj medicini? Šta su imunološke reakcije, koji je njihov mehanizam, faze reakcije. U koja 2 smjera se koriste imunološke reakcije? Navedite imunološke reakcije.

Zadatak. Zamijenite riječi koje nedostaju sa "anatoksin" ili "antitoksin": _________ je antigen, _________ je antitelo, __________ stvara aktivni imunitet kada se unese u organizam, __________ stvara pasivni imunitet kada se unosi u organizam, __________ se dobija imunizacijom životinja, ___________ se dobija iz toksina kada je izložen formalinu i toploti, ___________ neutrališe toksine, __________ izaziva stvaranje antitela u telu.

Reakcija aglutinacije: šta je aglutinacija, šta je antigen, šta je antitelo; metode postavljanja, koje kontrole se postavljaju i zašto; kako bi kontrole trebale izgledati. Aglutinirajući serumi, šta sadrže, kako se dobijaju, za šta se koriste; Koliki je titar aglutinirajućeg seruma? Indirektna (pasivna) reakcija hemaglutinacije: šta služi kao antigen u ovoj reakciji, kako se dobija, mehanizam reakcije. Šta je dijagnostikum eritrocita? Šta je dijagnostikum antitijela eritrocita? Reakcije precipitacije: šta je precipitacija, šta služi kao antigen; Kako dobiti precipitirajući serum? Koliki je titar seruma precipitacije? Načini postavljanja, praktična primjena.

Reakcija fiksacije komplementa (CFR): princip CFR; šta nastaje kada imunološki serum stupi u interakciju sa specifičnim antigenom; šta se dešava sa komplementom ako je prisutna tokom ove interakcije? Kakva je sudbina komplementa ako ne postoji specifičan afinitet između antigena i antitijela? Ako je krajnji rezultat RSC hemoliza, znači li to pozitivan ili negativan rezultat? Metodologija postavljanja RSC-a. Zašto je potrebno deaktivirati test serum? Hemolitički serum: šta sadrži, kako se dobija, koji je titar i kako se određuje? Komplement: hemijska priroda, odnos prema visokoj temperaturi, gde se nalazi? Kako se komplement može uništiti? Šta se praktično koristi kao dopuna?

Zadatak. Na odeći muškarca optuženog za ubistvo pronađena je mrlja od krvi. Kojom reakcijom se može utvrditi da li se radi o ljudskoj krvi; šta će u ovoj reakciji biti antigen, a šta antitela; Koji dijagnostički lijek bi trebao biti dostupan u laboratoriji za ovu reakciju, kako se priprema?

Zadatak. Kako koristiti reakciju taloženja da se utvrdi da li je uzorak mesa dostavljenog na analizu govedo ili konjsko meso; koji dijagnostički lijekovi su potrebni?

Reakcija precipitacije u agar gelu, metode formulacije, praktična primjena.

Šta pokazuje serološki test krvi?

Šta pokazuje serološki test krvi? Dijagnostičke mjere su najvažnija faza u liječenju svake bolesti. Uspjeh liječenja ne ovisi samo o propisanim lijekovima, već u velikoj mjeri i o tome koliko je tačna dijagnoza postavljena.

Osim toga, dijagnoza vam omogućava da spriječite komplikacije i popratne bolesti. Serološkim testom krvi pacijenta otkriva se prisustvo antitijela i antigena. Studija pomaže u pronalaženju mnogih bolesti, određivanju njihove faze i praćenju napretka liječenja.

Šta je serologija?

Serologija je grana imunologije koja proučava reakcije antigena na antitijela. Ova grana medicine bavi se proučavanjem krvne plazme i njenih imunoloških karakteristika.

Danas je serološki test krvi na antitijela pouzdan način za otkrivanje virusa humane imunodeficijencije, hepatitisa, bruceloze, spolno prenosivih bolesti i drugih bolesti opasnih po život. Hajde da shvatimo u kojim slučajevima je to propisano.

Indikacije za upotrebu

Serološki test krvi je neophodan za identifikaciju uzročnika bolesti ako je teško postaviti dijagnozu.

Da bi se izvela ova reakcija, antigeni patogena se unose u plazmu, a zatim laboratorijski asistent proučava tekući proces. Ili provode obrnutu reakciju: antitijela se ubrizgavaju u inficiranu krv kako bi se utvrdio specifični identitet patogena.

Područje primjene

Ovo istraživanje se koristi u raznim granama medicine. Ova reakcija identificira specifične stanice i antitijela koje tijelo proizvodi za borbu protiv infekcija i virusa.

Osim toga, serološkom metodom određuje se krvna grupa osobe.

Sličan serološki test krvi koristi se u ginekologiji za dijagnosticiranje spolno prenosivih bolesti. Ova metoda se koristi i za sveobuhvatne preglede trudnica (otkrivanje toksoplazmoze, HIV-a, sifilisa i dr.). Polaganje ovog testa je obavezno prilikom prijave u antenatalnu ambulantu.

Kod djece se serološkom reakcijom potvrđuje dijagnoza tzv. "dječijih" bolesti (varičele, boginje, rubeola i dr.) ako simptomi nemaju izražene manifestacije i nije moguće identificirati bolest analizom kliničkih indikacija. .

Otkrivanje spolno prenosivih bolesti

Za venereologe, ovo testiranje je zaista nezamjenjivo i omogućava vam da vrlo precizno postavite dijagnozu.

Uz zamagljenu kliničku sliku, serološkim testom krvi na sifilis, giardiju, ureaplazmozu, klamidiju, herpes i druge bolesti može se brzo otkriti prisustvo antitijela.

Virusne i zarazne bolesti

Serološku analizu aktivno koriste gastroenterolozi, hepatolozi i specijalisti za infektivne bolesti za dijagnosticiranje virusnog hepatitisa.

Dešifriranje serološkog testa krvi omogućava određivanje stadija bolesti i odgovor na pitanje koliko je hospitalizacija potrebna u ovom trenutku. Kako se pravilno pripremiti?

Priprema za test

Serološke analize krvi rade se u javnim i komercijalnim klinikama. Prednost treba dati laboratoriji sa savremenom opremom i kvalifikovanim osobljem.

Biološki uzorci za testiranje mogu biti pljuvačka i izmet, ali se u većini slučajeva koristi venska krv pacijenta. Krv za serološki test se uzima iz kubitalne vene u laboratoriji. Prije poduzimanja testa, trebate se posavjetovati sa svojim ljekarom o pripremi za ovu proceduru.

Da biste se pripremili za serološki test, morate slijediti nekoliko jednostavnih pravila.

Krv se daje u mirnom stanju prije jela, odnosno na prazan želudac. Prije toga ne biste se trebali podvrgavati drugim testovima, kao što su rendgenski snimci, ultrazvuk itd.

Neophodno je izbjegavati uzimanje antibakterijskih i nekih drugih lijekova nekoliko sedmica prije davanja krvi. Određene preporuke u ovom slučaju zavise od bolesti za koju se radi test. Na primjer, test na hepatitis uključuje izbacivanje masne hrane i alkohola 48 sati prije zahvata.

Reakcija fluorescencije

Među vrstama seroloških reakcija postoji reakcija fluorescencije. Ova tehnika koristi reagens koji osvjetljava antitijela u krvnom serumu.

Postavljanje direktne serološke reakcije uključuje obilježavanje specifičnih antitijela fluorescentnom supstancom. Ova reakcija je najbrža i odvija se u jednoj fazi.

Druga opcija za provođenje takve analize naziva se indirektna ili RNIF. Izvodi se u dvije faze. U prvom koraku, antitijela se ne obilježavaju fluorescentnim oznakama, au drugom se za identifikaciju antigena i antitijela koriste odgovarajuće označena antitijela. Sjaj se javlja tek nakon što dođe do vezivanja za specifično antitijelo.

Šta pokazuje serološki test krvi? Rezultat cjelokupnog postupka procjenjuje se posebnim uređajem koji analizira jačinu zračenja i otkriva oblik i veličinu predmeta koji se proučava. Uzročnici zaraznih bolesti otkrivaju se rezultatom čija je pouzdanost %, ovisno o vrsti i stadiju patologije.

Vezani imunosorbentni test

Ove vrste seroloških ispitivanja koriste jedinstvene, stabilne reagense. Čini se da se označene supstance lijepe za željena antitijela. Kao rezultat, dobijamo kvalitativni ili kvantitativni rezultat.

Ako se ne pronađu izraziti markeri, rezultat će se smatrati negativnim. Ako se tokom kvalitativne studije otkrije prisustvo antitijela u biološkim uzorcima, tada se rezultat testa smatra pozitivnim. Kvantifikacijom ćelija, analiza daje precizniji rezultat.

Analizom indikatora analize (na primjer, zbroj identificiranih stanica), specijalist utvrđuje je li bolest u početnoj fazi, u akutnoj fazi ili je kronični oblik patologije pogoršan. Da bi postavio dijagnozu, liječnik uzima u obzir ne samo podatke serološke studije, već i kliničku sliku bolesti.

Karakteristike ovog testa

Izvođenje ove analize nije uvijek u mogućnosti pružiti 100% sigurnost da je određena bolest otkrivena. Dešava se da rezultati mogu biti dvosmisleni i da su potrebne druge procedure.

Na primjer, tokom testa na brucelozu, krvni serum se kontrolira za samozadržavanje bez antigena. Ovo značajno povećava pouzdanost testiranja. Test na brucelozu može biti pozitivan ili negativan, a može izazvati i sumnje.

Ako dobijete upitne rezultate koji nemaju jednoznačnu interpretaciju, preporučuje se da ponovo uradite test. Osim toga, bruceloza se može otkriti hemokulturom, pregledom koštane srži i cerebrospinalne tekućine.

Prednosti serološke analize krvi

Dijagnostičke tehnike koje koriste serološke reakcije naširoko se koriste u modernoj medicinskoj praksi. To se posebno često radi pri određivanju virusnih i zaraznih patologija.

Isti testovi se koriste tokom geografskog skrininga i medicinskog pregleda kako bi se spriječilo epidemiološko širenje infekcije.

Prednosti metode uključuju:

• Visok nivo samopouzdanja.
• Brza reakcija i rezultati. Rezultati RSC-a poznati su u roku od 24 sata. U posebnoj situaciji, u bolničkom okruženju, analiza će biti gotova za nekoliko sati.
• Praćenje razvoja bolesti i efikasnosti terapije.
• Niska cijena i pristupačnost za pacijente.

Nedostaci metode

Međutim, serološke studije imaju i svoje nedostatke.

To uključuje činjenicu da prilikom provođenja analize treba uzeti u obzir period inkubacije bolesti kako bi se dobila pouzdanija slika.

Na primjer, određivanje herpes simplex tipa 1 ili 2 moguće je tek 14 dana nakon infekcije. Analiza na prisustvo virusa imunodeficijencije vrši se 30 dana, 90 dana i šest mjeseci nakon kontakta sa zaraženom osobom.

Naravno, na pouzdanost rezultata može utjecati i ljudski faktor: zanemarivanje pravila pripreme za vađenje krvi ili greška laboratorijskog asistenta prilikom izvođenja reakcije.

Prema statistikama, pogrešan rezultat može se dobiti u 5% slučajeva. Iskusan doktor, prilikom pregleda pacijenta, proučavajući kliničku sliku, u većini slučajeva može izračunati učinjenu grešku.

Koje se krvne pretrage uzimaju na sifilis: RW, RPGA, ELISA, VDRL, RPR, RIBT, interpretacija rezultata testova

Sifilis je zarazna bolest uzrokovana spirohetom Treponema pallidum, sklona progresivnom kroničnom toku, sa jasnom periodizacijom kliničkih simptoma.

Dominacija seksualnog prijenosa nad kontaktnim i transplacentarnim prijenosom ovu bolest svrstava među spolno prenosive bolesti (STD, SPI). Pored ovih metoda prijenosa infekcije, posebnu ulogu igra umjetni put (od latinskog "artificio" - umjetno stvoren).

Tipičan je za medicinske ustanove, uglavnom se sprovodi u bolničkom okruženju. Do infekcije dolazi prilikom transfuzije krvi, raznih hirurških operacija i invazivnih dijagnostičkih metoda.

Unatoč karantinu darovane krvi, problem identifikacije sifilisa kod donatora u različitim fazama bolesti i dalje je aktuelan.

Stoga dijagnostičke mjere za sifilis zahtijevaju standardizaciju, uvođenje novih osjetljivih i informativnih metoda identifikacije, kao i minimiziranje grešaka i pogrešne interpretacije rezultata testova.

Klasifikacija laboratorijskih dijagnostičkih metoda

Dijagnoza sifilisa ima neke karakteristike i razlikuje se od dijagnoze drugih bakterijskih infekcija. Složena struktura i antigena svojstva Treponema pallidum uzrokuju greške u interpretaciji rezultata seroloških testova.

Test krvi na sifilis nudi se 3 glavne grupe pacijenata:

1. 1 Skrining i medicinski pregled grupa stanovništva (uključujući trudnoću, prijavu u preporođajnu kliniku, zapošljavanje i registraciju zdravstvenog kartona, itd.).
2. 2 Skrining u rizičnim grupama (nezaštićeni seksualni odnos sa osobom zaraženom sifilisom, osobe nakon prisilnog seksualnog kontakta, osobe zaražene HIV-om itd.).
3. 3 Osobe sa simptomima bolesti ili osobe za koje se sumnja da imaju sifilitičnu infekciju.

Sve laboratorijske metode se konvencionalno dijele na direktne i indirektne.

Direktne metode

1. 1 Identifikacija Treponema pallidum u tamnom polju (mikroskopija tamnog polja).
2. 2 Infekcija eksperimentalnih životinja (kultivacija u laboratorijskim životinjama).
3. 3 PCR (lančana reakcija polimeraze).
4. 4 DNK sonda ili hibridizacija nukleinske kiseline.

Indirektne metode

Serološke reakcije su laboratorijske dijagnostičke metode zasnovane na detekciji antitijela (skraćeno AT) na antigene Treponema pallidum (skraćeno AG). Oni su od primarnog značaja za potvrđivanje dijagnoze.

1. 1 Netreponemski testovi:
   • Wassermanova reakcija (WRS);
   • Reakcija mikroprecipitacije (MR, RMP) i njeni analozi, koji su dati u nastavku;
   • Brzi plazma reagin test (RPR, RPR);
   • Test crvenog toluidina seruma (TRUST);
   • Netreponemski test Laboratorije za istraživanje veneričnih bolesti - VDRL.
2. 2 treponemska testa:
   • Treponema pallidum rastvor za imobilizaciju – RIBT/RIT;
   • Imunofluorescentni rastvor - RIF, FTA (razblaženja seruma RIF-10, RIF-200, RIF-abs);
   • R-cija pasivne hemaglutinacije (RPGA, TRPGA, TPHA);
   • Enzimski imunotest (ELISA, EIA);
   • Imunobloting.

Slika 1 – Algoritam za serodijagnostiku sifilisa

Histomorfološke metode

Ove metode se svode na utvrđivanje karakteristika histomorfologije sifilitičkih manifestacija. Pažnja se posvećuje suptilnostima strukture šankra. Međutim, diferencijalna dijagnoza infekcije pomoću histologije je vrlo teška. Histomorfologija se koristi s drugim laboratorijskim i kliničkim testovima.

Mikroskopija tamnog polja Treponema pallidum

Ova metoda se zasniva na direktnoj detekciji treponema pallidum u ispitivanom materijalu pomoću mikroskopa i posebnih uređaja (najčešće iscjedak iz erozija i čireva, rjeđe likvor i drugi supstrati).

Koristeći skarifikaciju, struganje, ceđenje, dobija se eksudat od erozija i ulceroznih defekata, a zatim se pripremljeni preparat pregleda pod mikroskopom.

Tipično, treponema pallidum se otkriva u preparatu dobijenom iz šankra, iz žarišta sekundarnog svježeg, sekundarnog rekurentnog sifilisa, kao i punktata limfnih čvorova i placente.

Zasnovana na fenomenu malih čestica koje svijetle u tamnom polju kada ih udari snop svjetlosti (Tyndallov fenomen), metoda savršeno omogućava razlikovanje uzročnika sifilisa od drugih treponema na osnovu morfoloških razlika i razlika u načinima kretanja bakterija.

Za mikroskopiju se koristi poseban kondenzator tamnog polja odgovarajuće optičke rezolucije. Lijek se dobiva metodom zgnječenih kapi (kap materijala se nanosi na čisto staklo bez masti i prekriva vrlo tankim pokrovnim stakalcem).

Ulje za potapanje kapa se na pokrivno staklo. Okretanjem cijevi i okretanjem uveličavajućeg sočiva podešava se željeno osvjetljenje.

U tamnom polju mikroskopa otkrivaju se krvne stanice, epitelne stanice i uzročnik sifilisa. Treponema pallidum izgleda kao spirala, vrlo tanak, emituje srebrnastu boju, glatkim pokretima.

Slika 2 – Mikroskopija tamnog polja kao način za vizualizaciju Treponema pallidum u materijalu koji se proučava. Izvor ilustracije - CDC

Treponema pallidum se mora razlikovati od drugih treponema, uključujući Tr. refringens, koji se može naći u orofarinksu i na sluznici genitalnih organa. Ova bakterija pravi haotične pokrete, ima široke i asimetrične, prilično grube kovrče. Osim toga, Treponema pallidum se razlikuje od Tr. Microdentium, Tr. Buccalis i Tr. vincenti.

Vizualizacija bakterija u tamnom polju ponekad je dopunjena reakcijom fluorescencije. U tu svrhu, nativni materijal se dodaju antitreponemska antitijela označena fluorescentnom bojom. U tom slučaju nastaje kompleks antigen-antitijelo (skraćeno AG-AT) koji je predmet proučavanja pomoću fluorescentnog mikroskopa.

Metoda lančane reakcije polimeraze (PCR).

PCR, razvijen 1991. godine za otkrivanje molekula deoksiribonukleinske kiseline (DNK) Treponema pallidum, vrlo je osjetljiv i specifičan, omogućava otkrivanje fragmenata DNK patogena.

Ova analiza se zasniva na kopiranju kratkih delova DNK iz blijede spirohete, koja zadovoljava navedene parametre i prisutna je u uzorku. Sve ovo se izvodi u veštačkim uslovima (in vitro). Reakcija se odvija u uređaju - termičkom ciklusu, koji obezbeđuje periodizaciju temperaturnih ciklusa. Dolazi do hlađenja i zagrijavanja epruveta s greškom od 0,1˚C.

DNK šablon se zagrijava 2 minute na temperaturi od 92-98˚C (maksimalna temperatura se koristi ako je polimeraza termostabilna). Kada se zagriju, lanci DNK se odvajaju zbog raspada vodikovih veza između njih. U koraku žarenja, temperatura reakcije se smanjuje kako bi se prajmer vezao za jednolančani šablon.

Žarenje traje oko 30 sekundi, a za to vrijeme se sintetišu stotine nukleotida. Novosintetizirane molekule kopira polimeraza, zbog čega se umnožavaju specifični fragmenti deoksiribonukleinske kiseline. Naknadna detekcija fragmenata provodi se elektroforezom u agar gelu.

PCR dijagnoza sifilisa je i dalje eksperimentalne prirode, ali je opravdana pri otkrivanju kongenitalne infekcije, u složenim dijagnostičkim slučajevima ili kada je sadržaj Treponema pallidum minimalan u ispitivanom materijalu.

DNK hibridizacija

Hibridizacija DNK se izvodi in vitro i zasniva se na potpunom ili delimičnom spajanju dva jednolančana DNK molekula u jedan molekul. U slučaju potpune korespondencije komplementarnih fragmenata, spajanje se odvija lako. Ako je komplementarno poklapanje djelomično, tada se spajanje lanaca DNK odvija sporo. Na osnovu vremena fuzije lanca, može se procijeniti stepen komplementarnosti.

Kada se DNK zagrije u puferskom rastvoru, vodonične veze se prekidaju komplementarnim azotnim bazama, uzrokujući divergaciju lanaca DNK. Zatim se lijek dobiva iz dvije denaturirane deoksiribonukleinske kiseline. Kada se ohlade, jednolančani regioni postaju renaturisani. Formira se takozvani DNK hibrid.

Metoda vam omogućava da procijenite i analizirate brzinu žarenja, uzimajući u obzir karakteristike (sličnosti i razlike) DNK između vrsta ili unutar vrste.

Upotreba DNK sonde uključuje hibridizaciju obeleženog DNK fragmenta sa specifičnim DNK regionom da bi se identifikovale komplementarne sekvence nukleotida. Grupa nezasićenih atoma (hromofora) ili radioaktivnih izotopa koristi se za označavanje sonde.

DNK sonda se koristi za heterogenu i homogenu detekciju nukleinskih kiselina. Uloga sonde je da identifikuje područja u kojima je došlo do fuzije ciljne sonde. Detekcija u homogenom sistemu ima prednost jer omogućava praćenje hibridizacije molekula DNK u realnom vremenu.

Suština metode je denaturacija i renaturacija DNK (ponovno ujedinjenje lanaca DNK). Proces renaturacije nukleinske kiseline i DNK sonde završava se formiranjem “hibrida”.

Specifične sekvence nukleinskih kiselina hibridizuju sa DNK sondom i na taj način se detektuju i omogućavaju da se proceni količina DNK u materijalu koji se proučava.

Infekcija laboratorijskih životinja

Visoka osjetljivost zečeva na Treponema pallidum (oko 99,9%) omogućava im da se koriste u dijagnostici sifilitičke infekcije.

Infekcija kunića se provodi u istraživačkim centrima i predstavlja „zlatni standard“ za procjenu osjetljivosti drugih metoda.

Vratimo se treponemskim i netreponemskim testovima, jer se oni najčešće koriste. Razmotrimo njihove prednosti i nedostatke, kao i greške u tumačenju rezultata.

Netreponemski testovi

Ovo su testovi za određivanje IgG i IgM antitela na standardizovani kardiolipin antigen. Njihov značajan nedostatak je njihova relativno niska specifičnost.

Niska cijena i lakoća implementacije omogućavaju da se ovi testovi klasificiraju kao dijagnostički testovi neophodni za postavljanje preliminarne dijagnoze i skrining među populacijom.

Radi se o netreponemskim testovima koji se rade prilikom prijave za zdravstveni karton, prijave za posao ili prijave u preporođajnu ambulantu.

1. 1 Minimalna osetljivost u stadijumu primarnog sifilisa – 70%;
2. 2 Minimalna osetljivost u stadijumu kasnog sifilisa – 30%;
3. 3 Mogućnost lažno negativnih i lažno pozitivnih rezultata;
4. 4 Intenzitet rada izvođenja RSK.

1. 1 Relativno niska cijena testne proizvodnje;
2. 2 Primite brzi odgovor;
3. 3 Mogućnost njihove upotrebe za skrining.

Dobivanje lažno pozitivnih ili slabo pozitivnih uzoraka moguće je u sljedećim slučajevima:

1. 1 Kršenje tehnologije izvršenja prilikom blokiranja AG-AT kompleksa.
2. 2 Pacijent ima autoimune bolesti (reumatoidni artritis, reumatizam, skleroderma, sistemski eritematozni lupus, sarkoidoza itd.).
3. 3 Maligne neoplazme.
4. 4 Virusne i bakterijske infekcije.
5. 5 Endokrine bolesti (autoimuni tiroiditis, dijabetes melitus).
6. 6 Trudnoća.
7. 7 Konzumiranje alkohola.
8. 8 Konzumiranje masne hrane.
9. 9 Senilna dob.

Kao što možete vidjeti iz liste, postoji mnogo razloga za netačan rezultat. Stoga, treba biti veoma oprezan prema tome. Razmotrimo još dva uzorka uz RSC. Ovo je reakcija mikroprecipitacije i VDLR (njena modifikacija).

Reakcija fiksacije komplementa (RSK, Wasserman, RW)

Ovo je test zasnovan na sposobnosti komplementa da se veže za AG-AT komplekse. Formirani kompleks se identifikuje pomoću hemolitičkog sistema. Kardiolipin antigen značajno povećava osjetljivost testa.

Osetljiva je i Kolmerova reakcija, koja se sastoji od izvođenja pri različitim temperaturnim uslovima. Dakle, prva faza Kolmerove reakcije teče na temperaturi od 20˚C pola sata, druga faza na temperaturi od 4-8˚C tokom 20 sati. Za to vrijeme dolazi do fiksacije komplementa.

Prilikom izvođenja RSC-a moguće je postići dramatično pozitivne rezultate. Razlog je vjerovatno visok titar antitela u nerazblaženom serumu. U ovom slučaju, uzorci se daju sa opadajućim dozama.

Da bi se razlikovali stadijumi sifilisa i procenila efikasnost antisifilitičkog tretmana, određuje se količina AT u serumu.

Pozitivnost uzorka se procjenjuje pomoću ukrštanja, a razrjeđenje seruma je također indicirano u Wasserman, Kolmer i Kann reakcijama.

Reakcija mikroprecipitacije

Budući da je složenost izvođenja navedenih pretraga velika, razvijena je ubrzana metoda za serodijagnostiku sifilisa, tzv. ekspresna metoda - reakcija mikroprecipitacije (skraćeno MR, RMP), koja pokriva širinu kliničkog pregleda različitih grupa stanovništva. .

Izvodi se s kardiolipin antigenom i pomoćnim supstancama. Njegova prednost je uzimanje periferne krvi za istraživanje. Time se značajno ubrzava i sama tehnika i rad laboratorijskih tehničara.

Slika 2 - Reakcija mikroprecipitacije (šema)

Za izvođenje MR potrebna je plazma ili inaktivirani serum krvi pacijenta (sadrže antitijela). Zatim se plazma stavlja u označene jažice. Zatim se testnom materijalu doda kap kardiolipin antigena, promiješa se i promućka. Kao rezultat toga, u serumu zaražene osobe pojavljuju se karakteristične pahuljice, različitog intenziteta.

Ovo je kvalitetan uzorak. Za kvantitativnu procjenu koristi se 10 razblaženja seruma, stavljenih u 10 jažica sa odgovarajućim oznakama. Kod kvalitativnog MR-a, odgovor je naznačen u obliku krstova (plusova) ili minusa sa kvantitativnim MR-om, naznačen je titar antitela (1:2, 1:4 i tako dalje).

Prisustvo pahuljica smatra se pozitivnim ili slabo pozitivnim odgovorom. Pojava flokulata je moguća i u odsustvu bolesti, pa se konačna procjena dobijenog rezultata vrši nakon kontrolne studije ili drugih reakcija (RIBT, RIF, ELISA, RPGA).

Metoda ispitivanja reakcije lipoidnim antigenom (AG) koju preporučuje Svjetska zdravstvena organizacija s pravom se smatra najboljom među ostalim standardnim netreponemskim testovima. Razvijen u SAD-u, Georgia u laboratoriji za polno prenosive bolesti (Venereal Diseases Research Laboratories).

Skraćenica institucije poslužila je kao naziv za uzorak - VDRL. VDRL je modifikacija MR. Serum bolesnika sa sifilisom se inaktivira i stavlja na staklo. Korišteni antigen se sastoji od kardiolipina, holesterola i lecitina u različitim procentima. Odgovor se registruje skoro odmah.

Izrazita flokulacija se javlja u prisustvu antitijela u serumu. Serum postaje reaktivan nakon 4 sedmice infekcije. Da bi se procijenila količina antitijela, serum se prethodno razrijedi eksponencijalno.

1. 1 relativno visoka osjetljivost;
2. 2 relativno visoka specifičnost;
3. 3 jednostavnost implementacije;
4. 4 niska cijena reagensa;
5. 5 dobijam brz odgovor.

Nedostatak VDRL-a je njegova relativno visoka stopa lažno pozitivnih rezultata.

Njihovi uzroci su iste gore navedene bolesti.

Treponemski testovi se izvode sa specifičnim antigenima Treponema pallidum. Oni su neophodni i obavezni za postavljanje konačne dijagnoze. To su reakcija imunofluorescencije (RIF), reakcija indirektne hemaglutinacije (IPHA), enzimski imunosorbentni test (ELISA) itd.

Nakon pozitivnog rezultata netreponemskog testa (RPR, MP, VDRL), uvijek treba uraditi treponemske testove (obično kombinacija - RPHA, ELISA, RIF).

Treponemski testovi su složeniji za izvođenje od brzih testova i zahtijevaju više novca.

Ova reakcija (skraćeno RIF) koristi se za dijagnosticiranje sifilisa, uključujući latentne oblike, i za dvostruku provjeru pozitivnih i lažno pozitivnih uzoraka.

RIF se zasniva na sjaju obeleženih antitela kada se kombinuje sa kompleksom antigen-antitelo pod kvarcnom lampom. Metoda se počela koristiti 60-ih godina i odlikovala se jednostavnošću implementacije i visokom specifičnošću (koja je malo inferiorna u odnosu na RIBT).

Ima nekoliko modifikacija: RIF-10, RIF-200 i RIF-abs.

RIF je najosetljiviji kada se razblaži 10 puta, a ostali su specifičniji. RIF se izvodi u dvije faze. Krvni serum pacijenta se dodaje u AG. Formira se AG-AT kompleks koji se proučava u sljedećoj fazi. Zatim se mikroskopski identifikuje kompleks obeležen fluorohromom. Ako se ne uoči sjaj, to ukazuje na odsustvo specifičnih antitijela u krvnom serumu.

RIF-200 je najvredniji od svih razblaženja. Metoda je namijenjena dijagnosticiranju različitih oblika sifilisa, posebno latentnog sifilisa i ponovnoj provjeri pozitivnih uzoraka.

Reakcija imobilizacije Treponema pallidum (skraćeno RIBT, RIT) je jedan od složenih seroloških testova koji zahtijeva značajne napore i finansijske troškove. RIBT se sve manje koristi, ali njegova važnost ostaje u dijagnostici latentnog sifilisa.

Od velikog je značaja u prepoznavanju lažno pozitivnih rezultata kod trudnica i zasniva se na imobilizaciji bakterija u prisustvu imobilizina – kasnih antitijela.

Rezultat se procjenjuje na osnovu procenta (%) imobiliziranih treponema pomoću posebne tablice:

1. 1 Od 0 do 20 - negativan test.
2. 2 Od 21 do 50 - slabo pozitivan test.
3. 3 Od 50 dodatnih pozitivnih reakcija.

Lažno pozitivni rezultati su takođe mogući kada se koristi RIBT. Dakle, netačan odgovor je moguć kod infekcije tropskim trepanematozama, kao i kod tuberkuloze, ciroze jetre, sarkoidoze i starijih pacijenata.

Ovaj test krvi na sifilis naziva se test pasivne hemaglutinacije (skraćeno kao test krvi za RPHA, THRHA).

Antigen za RPHA se priprema od crvenih krvnih zrnaca ovaca obloženih fragmentima Treponema pallidum (dobijenih od zaraženih zečeva (vidi sliku 4)). U analizi se koristi venska krv (plazma ili inaktivirani serum) pacijenta.

Kada se antigen doda u serum bolesnika sa sifilisom, formira se AG-AT kompleks koji dovodi do aglutinacije crvenih krvnih stanica. aglutinaciju subjektivno određuje laboratorijski tehničar.

Slika 3 - Šema RPHA (reakcija pasivne hemaglutinacije)

Uzorak se ocjenjuje kao pozitivan kada se pojave aglutinate ujednačene ružičaste boje. Crveno bojenje taloga ukazuje na precipitaciju crvenih krvnih zrnaca. RPHA je vrlo osjetljiv i vrlo specifičan.

Reakcija mikrohemaglutinacije

To je pojednostavljena verzija RPGA. Razlikuje se od gore opisanog testa po tome što je potrebno manje antigena, razblaživača i seruma za izvođenje reakcije. 4 sata nakon inkubacije seruma, uzorak se može procijeniti. Koristi se za skrining i masovne preglede na sifilis.

Vezani imunosorbentni test

Enzimski imunosorbentni test (skraćeno ELISA) zasniva se na specifičnoj reakciji antigen-antitijelo. Biološki materijal (krvni serum pacijenta, likvor) se unosi u jažice na čijoj su čvrstoj površini fiksirani antigeni treponema pallidum. Ispitni materijal se inkubira, a zatim se ispiru antitela koja se nisu vezala za antigene (vidi sliku 5).

Identifikacija nastalog kompleksa se provodi u fazi fermentacije pomoću imunološkog seruma označenog enzimom. Tokom hemijske reakcije, enzim boji nastale komplekse. Intenzitet bojenja ovisi o količini specifičnih antitijela u krvi pacijenta i bilježi se spektrofotometrom.

Slika 4 - Šema ELISA (enzimski imunosorbentni test)

Osetljivost ELISA testa je veća od 95%. Metoda se koristi u automatizovanom režimu za proučavanje elektivnih populacijskih grupa: donora, trudnica i drugih, radi pojašnjenja dijagnoze pozitivnih i lažno pozitivnih netreponemskih testova.

Imunobloting

Imunobloting je visoko osjetljiva metoda, modifikacija jednostavne ELISA. Reakcija se zasniva na elektroforezi sa odvajanjem antigena Treponema pallidum.

Odvojene imunodeterminante se prenose na nitrocelulozni papir i razvijaju u ELISA testu. Zatim se serum inkubira i nevezana antitijela se ispiru. Dobijeni materijal se tretira imunoglobulinima (IgM ili IgG) označenim enzimom.

Klinička procjena rezultata laboratorijske dijagnostike sifilisa

U tabeli 1 ispod dali smo moguće rezultate testova i njihovu interpretaciju. Kao što možete vidjeti u tabeli, sveobuhvatna procjena testova je od primarne važnosti prilikom dešifriranja.

Tabela 1 - Tumačenje rezultata seroloških reakcija (testovi krvi na sifilis). Za pregled kliknite na tabelu

Reaktivnost testa se također procjenjuje korištenjem "križeva":

1. 1 Maksimalni odgovor (naglo pozitivan test) označen je sa 4 križa.
2. 2 Pozitivan test je označen sa 3 krsta.
3. 3 Slabo pozitivnu reakciju označavaju dva križa.
4. 4 Jedan križić označava sumnjiv i negativan rezultat.
5. 5 Negativan odgovor je označen znakom minus.

Problem optimizacije laboratorijske dijagnostike sifilisa do danas nije izgubio na važnosti. Savremene dijagnostičke metode, uprkos želji naučnika da dijagnostiku dovedu do što većeg stepena osetljivosti i specifičnosti, zahtevaju kontrolna ispitivanja i individualni pristup.

Karakteristika sifilitičke infekcije je fenomen serorezistencije, koji nikada nije dobio naučno objašnjenje. Dijagnoza se postavlja nakon potpunog pregleda pacijenta epidemiološkim, kliničkim i laboratorijskim metodama.

U kontekstu ekonomskog i tehničkog razvoja medicine, primjećuje se i napredak u razvoju novih kriterija za dijagnosticiranje sifilisa. Sve to će Vam omogućiti da brzo, uspješno i precizno liječite pacijente.

Serološka metoda je skup reakcija zasnovanih na interakcija antigen-antitijelo (Ag-Ab) i ima za cilj identifikaciju antitela na antigene patogena zaraznih bolesti, ili same mikrobne antigene, u krvnom serumu i drugim tjelesnim tečnostima. Serološku metodu karakterizira visoka osjetljivost i specifičnost. Većina reakcija ove metode je lako izvesti i zabilježiti, dostupne su širokom spektru laboratorija, obično su sigurne, ekonomične i podložne standardizaciji. TO nedostatke Serološka metoda se može pripisati: 1) indirektnoj prirodi rezultata, kada se o etiologiji bolesti ne sudi prema izolaciji patogena, već prema odgovoru (imunom) organizma na patogen; 2) potreba za parenteralnom intervencijom u tijelu pacijenta; 3) u većini slučajeva kasna dijagnoza, što se objašnjava prirodnom dinamikom humoralnog imunološkog odgovora; 4) mogućnost greške u anamnestičkom trbušnjaku (kao rezultat prethodne bolesti ili vakcinacije) za trbušnjake sa trenutnom infekcijom. Prilikom određivanja mikrobnih antigena 3 i 4 nema nedostataka, ali je potrebno uzeti u obzir karakteristike cirkulacije antigena različitih mikroba i povezati ta svojstva sa mogućnošću uzimanja materijala za istraživanje.

Faze serološke metode:

1) uzimanje materijala za istraživanje. U većini slučajeva materijal je krvni serum. Dobiva se nakon stvaranja krvnog ugruška, krv treba uzeti u strogo aseptičnim uslovima prema standardnim tehnikama,

2) izbor serološke reakcije za određeni slučaj zavisi od svrhe studije, sumnje na bolest, faze bolesti, materijala za ispitivanje, osetljivosti reakcije i mogućnosti određene laboratorije. Za detekciju Ab, kao i Ag, koriste se reakcije aglutinacije ( RA), pasivna hemaglutinacija ( RPGA)), imunofluorescencija (GREBEN), inhibicija hemaglutinacije ( RTGA), padavine, flokulacija, reakcija fiksacije komplementa (FFR) itd.

3) postavljanje serološke reakcije,

4) registraciju serološke reakcije radi utvrđivanja prisustva seroloških markera infekcije.

Različite serološke reakcije karakterizira nekoliko opšte karakteristike:

1) budući da su sve serološke reakcije reakcije interakcije između Ab i Ag, onda se u svim slučajevima, da bi se utvrdilo prisustvo Ab u supstratu koji se proučava, koristi skup poznatih standardnih korpuskularnih ili rastvorljivih Ag, tzv. dijagnostikumi. Zauzvrat, da se utvrdi prisustvo Ag, skup od imunološki dijagnostički serumi,

2) interakcija Ag i Ab se dešava samo u prisustvu elektrolita, koji je obično izotonični rastvor natrijum hlorida ili puferske mešavine, pH sistema treba da bude oko 7;

3) formiranje Ag-At kompleksa zahteva period inkubacije u posebnim temperaturnim uslovima (od +4°C do 37°C). Formiranje specifičnog imunološkog kompleksa dolazi brzo; pojava vidljiva golim okom (aglutinacija, liza, itd.) - polako, nakon nekoliko sati ili čak dana,

4) obe komponente serološke reakcije (antigen i antitela) moraju biti prisutne u ekvivalentnim razmerama. Višak bilo koje komponente blokira stvaranje Ag-At kompleksa i doprinosi lažno negativnim rezultatima.

Serološke reakcije se bilježe vizualno, ponekad pomoću lupe. Suština uzimanja u obzir serološke reakcije svodi se na utvrđivanje fenomena vezivanja Ag i Ab formiranjem Ag-At kompleksa. Vizualno, formiranje Ag-At kompleksa praćeno je dvije glavne pojave - aglutinacijom i precipitacijom. Razlike između njih određene su karakteristikama antigena i za njih specifičnih antitijela. Istovremeno, među mikrobnim antigenima postoje i oni koji induciraju sintezu netaložnih antigena u ovom slučaju ne prati ni fenomen aglutinacije, ni fenomen precipitacije; činjenica formiranja Ag-Ab kompleksa zahtijeva obilježavanje dijagnostičke komponente reakcije posebnim oznakama, odnosno prijenos dijagnostičkog antigena u drugo agregacijsko stanje.

Prilikom procene reakcije koriste se 3 glavna kriterijuma: 1) prisustvo i intenzitet reakcije (u plusu itd.); 2) dijagnostički titar, 3) povećanje Ab titra u toku bolesti za 4 i više puta. Prisustvo reakcije određuje se vizuelnim fenomenima ili vezivanjem imunohemijskog markera. Za procjenu intenziteta serološke reakcije koristi se princip 4 “+” (tabela 7).

Tabela 7.

Sistem za procjenu seroloških reakcija sa 4 "+" za reakcije aglutinacije i precipitacije

Za kvantitativno predstavljanje rezultata serološke reakcije koristi se koncept titra antitijela ili antigena. Da bi se odredio nivo Ab (ili Ag titar), potrebno je izvršiti serološku reakciju pripremanjem većeg broja razblaženja krvnog seruma ili drugog materijala (titriranje). Prilikom pripreme razrjeđenja krvnog seruma koristi se otopina elektrolita (najčešće izotonična otopina natrijevog klorida). Korak razrjeđivanja (titracija) određuje se omjerom volumena otopine elektrolita i volumena krvnog seruma. Na primjer, uz uzastopna razrjeđenja s korakom od 2 puta, jednake količine otopine elektrolita i krvnog seruma pomiješaju se u 1. epruveti, s korakom od 5 puta, 1 volumen seruma se dodaje na 4 zapreminska dijela elektrolita. rastvor, sa korakom od 10 puta - sa 9 1 zapremine krvnog seruma dodaje se zapremini rastvora elektrolita (tabela 8).

Serologija(od latinskog serum - "serum", logos - "nauka") je grana imunologije koja proučava specifičnosti interakcije serumskih antitijela s antigenima.

Osnova dijagnoze je otkrivanje specifičnih antitijela koja nastaju kao reakcija na infekciju organizma specifičnim antigenom. Ovisno o tome koja se antitijela nalaze u krvi, donosi se zaključak o prirodi infekcije, a broj ovih antitijela ukazuje na stupanj aktivnosti zarazne bolesti.

Materijal uzet za istraživanje u sklopu serološke analize krvi proučava se na druge opasne bolesti - herpes, crijevne infekcije, rubeolu, toksoplazmozu, klamidiju, boginje, klamidiju. Osim toga, ova studija vam omogućava da potvrdite svoju krvnu grupu i odredite specifičnost proteina.

Dakle, serološke studije se provode:

• ako je postavljena preliminarna dijagnoza i sada je potrebna njena potvrda. Studija se zasniva na dodavanju odgovarajućeg antigena u krvni serum. Odgovor nam omogućava da izvučemo zaključak o prisutnosti ili odsustvu bolesti;
• ako se dijagnoza ne može postaviti. U sklopu studije u krv se dodaju antitijela i određuje se vrsta antigena, što omogućava određivanje specifične bolesti;
• ako je potrebno.

Dakle, serološki test krvi pomaže u postavljanju dijagnoze ili prepisivanju najefikasnijeg liječenja - uz minimalne vremenske i financijske troškove.

Prednosti seroloških studija uključuju:

• sposobnost identifikacije patoloških mikroorganizama u ranim fazama infekcije;
• praćenje razvoja bolesti i stepena efikasnosti terapije;
• nema potrebe za posebnom pripremom prije uzimanja biomaterijala;
• efikasnost. Rezultat će biti dostupan za dva do tri sata, što je veoma važno u uslovima bolničkog lečenja;
• finansijska dostupnost reagensa, što omogućava da se uzorci provode onoliko često koliko je potrebno;
• nema kontraindikacija.

Kako se radi serološko testiranje?

Krv se vadi iz ulnarne vene. Važna stvar je da se krv ne uzima štrcaljkom, već gravitacijom - igla se ubacuje u venu bez šprica i do pet ml krvi se skuplja u epruvetu. Postupak se izvodi ujutro.

Ovisno o reakcijama koje su u osnovi studije, razlikuje se nekoliko vrsta postupaka:

1. reakcija neutralizacije. Zasnovan je na svojstvu antitijela imunološkog seruma da reagiraju kao neutralizirajuće sredstvo na mikroorganizme ili toksine, sprječavajući njihovo negativno djelovanje na tijelo;
2. reakcija aglutinacije. Može biti direktno ili indirektno. U prvom slučaju radi se o proučavanju krvnog seruma na prisustvo antitijela (ubijeni mikrobi se ubrizgavaju u materijal i procjenjuje se reakcija - ako postoji talog u obliku pahuljica, reakcija je pozitivna), indirektna reakcija se zasniva na uvođenju eritrocita sa antigenima adsorbovanim na njima u materijal (zupčasti sediment ukazuje na pozitivnu reakciju);
3. reakcija precipitacije. Rastvor antigena se nanosi na imuni serum (djeluje kao tečni medij). Koristi se rastvorljivi antigen. Ako se kompleks antigen-antitijelo precipitira, reakcija se smatra pozitivnom;
4. reakcija koja uključuje komplement. Područje primjene: otkrivanje zaraznih bolesti. Komplement se aktivira i reakcije se ispituju;
5. reakcija sa obilježenim antigenima i antitijelima. Zasniva se na činjenici da tkivni antigeni ili mikrobi, obrađeni na poseban način, počinju da emituju svetlost pod uticajem UV zraka. Metoda se široko koristi ne samo u dijagnostici antigena, već i za određivanje hormona, enzima i lijekova.

Za testiranje je potrebno pripremiti se: četiri dana unaprijed, pacijent mora prestati uzimati lijekove za srce, mora isključiti i alkohol u bilo kojem obliku, začinjenu i masnu hranu, slatkiše, ograničiti fizički napor, izbjegavati stres.

Ako se ova pravila ne poštuju, povećava se rizik od lažno pozitivnog rezultata. Prije prepisivanja ponovljenog testa, liječnik mora saznati šta je pacijent radio dan prije zahvata i dati preporuke kako se pravilno pripremiti za pregled.

Serološka analiza: objašnjenje

Serološki test krvi je test koji vam omogućava da odredite/potvrdite vrstu infektivnog agensa i pomažete specijalistu da postavi dijagnozu. Ovo je nezamjenjiva pomoć ako liječnik ne može odabrati medikamentoznu terapiju, jer se uzročnici različitih bolesti razlikuju po različitoj osjetljivosti na djelovanje određenih lijekova i antibiotika.

Nakon što je postupak prikupljanja materijala završen, laboratorijski asistenti prelaze na sljedeću fazu - dešifriranje indikatora. Dakle, ako se u krvi pacijenta ne otkriju antitijela, možemo zaključiti da u tijelu nema infekcija - rezultat testa u ovom slučaju je pozitivan.

Ali ovo stanje je prije izuzetak od pravila: ako postoje simptomi bolesti, serološke studije identificiraju i dokazuju prisutnost ozbiljne patologije u tijelu.

Prvo se analizom pronalaze patogeni u tijelu, zatim se procjenjuje količina antitijela na osnovu čega se donosi zaključak o ozbiljnosti infekcije.

Serološko testiranje na hepatitis, HIV, sifilis: karakteristike

sifilis . Prilikom provođenja analize na sifilis, stručnjaci traže proteine ​​koji su odgovorni za ulazak infektivnog agensa u ljudsko tijelo - govorimo o Treponema pallidum. U ovom slučaju, krvni serum djeluje kao biološki materijal.

. Virusni hepatitis je ozbiljna zarazna bolest, čija opasnost leži u činjenici da može dugo živjeti u tijelu, a da se ne manifestira. Bolest se može otkriti u ranoj fazi, kada je lakše izlječiva, analizom markera – markeri se pojavljuju u krvi nakon bolesti ili primjene vakcine.

Treba razumjeti da je identifikacija patogena moguća tek 1,5-2 mjeseca nakon infekcije. Ako trudnica uradi test, moguć je lažno pozitivan rezultat.

Preporučujemo pregled medicinske web stranice https://tabletix.ru/. Na stranici ćete pronaći korisne informacije i medicinska mišljenja.
Ako osjetite jedan ili više simptoma navedenih u nastavku, trebali biste razmisliti o serološkom testu:

• povraćati;
• slab apetit ili nedostatak istog;
• bezuzročna slabost tijela, prekomjeran rad;
• žućkasti ten;
• promjene u boji stolice i urina.

HIV. Ako je rezultat pozitivan, to ne znači da je pacijent zaražen AIDS-om. Ako se infekcija dogodila nedavno (prije ne više od dva mjeseca), prisustvo antitijela ne dozvoljava nam da utvrdimo da li se bolest razvila. Nalaže se ponovljena studija.

Serološki test krvi- najvažnija istraživačka metoda, čija je glavna svrha brzo prepoznavanje virusa, infekcija, mikroba u tijelu.

Ovaj jedinstveni laboratorijski „alat“ omogućava vam da identifikujete bilo koju bolest koja je posljedica imunosupresije, stoga nemojte biti lijeni, već se redovno testirajte kako biste mogli na vrijeme prepoznati bolest i brzo je se riješiti.

8 057

Stranica pruža referentne informacije samo u informativne svrhe. Dijagnoza i liječenje bolesti moraju se provoditi pod nadzorom specijaliste. Svi lijekovi imaju kontraindikacije. Konsultacija sa specijalistom je obavezna!

Serološki analiza krvi je metoda za laboratorijsko testiranje određenih antigena ili antitijela ( specifičnih proteina) u krvnom serumu pacijenta, na osnovu imunoloških odgovora tijela. Ova metoda se koristi kada dijagnostika zarazne bolesti radi otkrivanja prisutnosti antitijela u krvi pacijenta na određenu vrstu virusa ili bakterija, kao i određivanje krvne grupe.

Materijal koji se proučava

Prije svega, za serološke analize koristi se biološki materijal sakupljen od pacijenta:

• krvni serum
• pljuvačke
• fekalne materije

U nekim slučajevima se ispituje materijal izolovan od određenih objekata okoline:

• tlo

Metoda izvođenja analize ili vađenja krvi

Ova analiza ne zahtijeva posebnu pripremu pacijenta. Uzimanje krvi se vrši u jutarnjim satima na prazan želudac i obavlja se u salama za tretmane zdravstvenih ustanova, prema opšteprihvaćenim hematološkim metodama. Za serološko ispitivanje krv se uzima pomoću dvije metode: venska krv se uzima iz pacijentove ulnarne vene, a kapilarna krv iz prstenjaka. Krv se stavlja u sterilne zatvorene epruvete.

Karakteristike transporta krvi i skladištenja seruma

Odmah nakon uzimanja krvi se transportuje u poseban laboratorij, gde se istog dana priprema serum. Sirutka se može čuvati ne više od 4-6 dana u frižideru na temperaturi od 2-4 stepena. Ako je potrebno duže skladištenje, surutka se zamrzava. Kako bi se izbjeglo ugrožavanje kvalitete sirutke, dopušteno je jednom zamrznuti i, shodno tome, odmrznuti. Tokom dugotrajnog skladištenja, antitijela gube svoja svojstva i postaju djelomično neaktivna M. Nakon odmrzavanja seruma, potrebno ga je dobro promiješati do glatke smjese, što pomaže vraćanju koncentracije antitijela sadržanih u ovom serumu.

Za šta se koriste serološki testovi?

Serološke laboratorijske dijagnostičke metode koriste se za identifikaciju bolesti kao npr ehinokokoza, trihineloza, toksokaroza, opistorhijaza, cisticerkoza, toksoplazmoza, amebijaza, giardijaza, kako bi se utvrdila efikasnost tijeka liječenja i, konačno, otkrila recidivirajuća bolest nakon što se pacijent potpuno oporavi.

Osnovne metode serološke dijagnostike

Imunofluorescentna reakcija (RIF)

Ova reakcija je indirektna verzija serološkog testa, odnosno provodi se u dvije faze. U prvoj fazi, potrebno antitijelo se identifikuje u cirkulirajućem kompleksu antigen-antitijelo pomoću antiglobulina, koji je po strukturi sličan proteinima imunološkog seruma. Identifikacija željenog antitela je moguća i proučavanjem unapred pripremljenog antigenskog preparata pod fluorescentnim mikroskopom, bez upotrebe antiglobulina.

Reakcija imunofluorescencije je vrlo radno intenzivan proces koji od specijaliste zahtijeva puno vremena i odgovornosti. Reakcija počinje pripremom rastvora, zatim se titriraju serumi i njihovi kontrolni uzorci ( proces koji vam omogućava da odredite sadržaj određene tvari postupnim miješanjem ispitne otopine s kontroliranom količinom reagensa). Prethodno pripremljena razblaženja i njihovi kontrolni uzorci pažljivo se nanose na staklena stakalca sa antigenom. Zatim se preparati inkubiraju, nakon čega slijedi pranje i sušenje na zraku. Na stakalce sa antigenom se nanosi tanak sloj antiseruma, nakon čega se vrši sekundarna inkubacija preparata i ponavlja čitav prethodni lanac delovanja, koji se završava sušenjem preparata. Kao rezultat, preparat na predmetnom predmetu se tretira glicerolom i ispituje pod fluorescentnim mikroskopom.

Rezultati reakcije se ocjenjuju na skali od četiri tačke, koju karakterizira intenzitet površinskog žuto-zelenog sjaja antigenskih stanica:
+ veoma slab sjaj ćelije, primetan samo na njenoj periferiji
++ slab sjaj periferije ćelije, ali sa jasno uočljivom zelenom nijansom
+++/++++ jarko zeleni sjaj periferije ćelije
Reakcionim titrom se smatra razrjeđenje seruma u kojem najmanje 50% antigenskih stanica pokazuje jasan površinski sjaj, odnosno rezultat reakcije +++ ili ++++ . Vrijednost raspona reakcije je od 1/80 do 1/100.

Intenzitet reakcije ovisi o broju precipitiranih crvenih krvnih stanica na dnu formiranih rupa:
– negativna reakcija, koju karakterizira taloženje crvenih krvnih zrnaca na dno jažica u obliku malog prstena s glatkim rubovima ili "dugme"
+ niskog intenziteta, ova reakcija se odlikuje malim pojedinačnim naslagama na dnu rupe. Neaglutinirana crvena krvna zrnca formiraju "mali prsten" u centru bunara
++ srednjeg intenziteta, karakteriše ga formiranje na dnu rupe "širokog gustog prstena" neaglutiniranih eritrocita
+++ intenzivna reakcija, aglutinirani eritrociti formiraju takozvane "kišobrane", u čijem središtu su jasno vidljivi prstenovi formirani od staloženih neaglutiniranih eritrocita
++++ oštro intenzivna reakcija u kojoj se sva crvena krvna zrnca aglutiniraju i, formirajući "kišobrane", oblažu dno jažica.
Titar ove reakcije smatra se posljednjim razrjeđenjem seruma pri kojem se najmanje otkriva očigledna aglutinacija eritrocita. +++ , odnosno sa intenzivnom ili oštro intenzivnom reakcijom.

Pouzdanost i kvaliteta seroloških dijagnostičkih metoda zavise od organizacije interne i eksterne laboratorijske kontrole, koja se sastoji od nekoliko nezavisnih procedura osmišljenih za procjenu kvaliteta rezultata analize.

Zarazne bolesti pokreću proizvodnju odgovarajućih antitijela u krvi bolesne osobe. Ovako funkcioniše imunološka odbrana organizma.

Utvrđivanje prisutnosti antitijela na određeni virus ili bakteriju omogućava da se sazna o početku bolesti prije nego se pojave njeni glavni simptomi. Danas serološki testovi daju najpotpuniju sliku. Stoga ćemo u ovom članku govoriti o serološkom testiranju.

Šta su serološki testovi

Metode za proučavanje bioloških materijala ljudi i životinja koje u njima mogu otkriti antitijela ili antigene koje tijelo proizvodi kao zaštitnu reakciju u borbi protiv infekcija nazivaju se serološke studije. Takve metode se koriste za određivanje uzročnika infekcije, kao iu svrhu:

• određivanje krvne grupe,
• proučavanje imuniteta kroz određivanje nivoa njegove humoralne komponente,
• određivanje tkivnih antigena.

Kome je propisana?

Zašto to učiniti?

Metodu stručnjaci cijene kao način za postavljanje visokokvalitetne dijagnoze bolesti.

• Ako je pacijent u stadijumu bolesti, preporučuje se ponovljena ispitivanja u intervalima od otprilike tjedan dana kako bi se pratila učinkovitost primijenjenog liječenja.
• Serološki testovi se često koriste kako bi se utvrdilo koji je patogen izazvao bolest nakon što ju je pacijent pretrpio.

Vrste postupaka

Serološke metode istraživanja temelje se na različitim reakcijama:

• Reakcija neutralizacije oslanja se na svojstvo antitijela imunološkog seruma da djeluju kao neutralizirajuće sredstvo protiv samih toksina ili mikroorganizama, sprječavajući njihovo štetno djelovanje.
• Reakcija aglutinacije, koji je pak podijeljen na sljedeće podtipove:
  • direktne reakcije - koriste se za ispitivanje krvnog seruma na prisutnost antitijela. Ubijeni mikrobi se dodaju u sastav koji se proučava, a ako se pojavi talog u obliku pahuljica, to znači da je reakcija na ovu vrstu mikroba pozitivna;
  • reakcija indirektne hemaglutinacije se provodi uvođenjem u krvni serum eritrocita na kojima se adsorbiraju antigeni; ovi agensi stupaju u interakciju s istom vrstom antigena prisutnih u krvnom serumu, što rezultira precipitatom.
• Reakcija koja uključuje komplement koristi se za otkrivanje zaraznih bolesti. Metoda se realizuje kroz aktivaciju komplementa i posmatranje reakcija koje se dešavaju u medijumu koji se proučava.
• Reakcija precipitacije izvodi se nanošenjem rastvora antigena na tečni medij – imuni serum. Antigen koji se koristi za ovu metodu je rastvorljiv. Reakcija je da kompleks antigen-antitijelo podliježe precipitaciji; nastali talog se naziva precipitat.
• Reakcija upotrebom obilježenih antigena i antitijela zasniva se na činjenici da mikrobi ili tkivni antigeni, obrađeni na određeni način, stiču sposobnost emitovanja svjetlosti pod utjecajem ultraljubičastih zraka. Metoda se koristi ne samo za dijagnosticiranje antigena, već i za određivanje ljekovitih tvari, enzima i hormona.

Kontraindikacije za

Zbog činjenice da metoda uključuje proučavanje biološkog materijala pacijenta, ne može imati negativan utjecaj na čovjeka. Stoga nema kontraindikacija za upotrebu.

Studija je potpuno sigurna.

U nastavku ćemo opisati kako se provodi serološki test.

Indikacije za testiranje

Metoda se koristi za određivanje uzročnika infekcije, uključujući i za sljedeće bolesti:

• HIV infekcija,
• toksoplazmoza,
• zarazne bolesti stečene seksualnim kontaktom;
• difterija,
• Dostupnost ;
• bruceloza,
• stafilokokne infekcije,
• hepatitis.

Metoda se također koristi za identifikaciju sljedećih bolesti:

• opistorhijaza,
• amebijaza,
• cisticerkoza,
• giardijaza,
• upala pluća.

Priprema za proceduru

Za postupak nisu potrebne posebne pripreme. Mora se poštovati jedan uslov: vađenje krvi se vrši na prazan želudac.

U nastavku je opisan algoritam za uzorkovanje (uzimanje) krvi (materijala) za serološko testiranje.

Sprovođenje analize

Krv se vadi iz ulnarne vene. Da bi studija funkcionirala, krv se ne vadi špricom, već gravitacijom. Igla bez šprica se uvodi u venu i u epruvetu se sakupi do 5 ml krvi.

Tokom zahvata pacijent osjeća blagu nelagodu prilikom uvođenja igle u venu. Naredni koraci nisu nimalo zabrinjavajući.

Tumačenje rezultata serološke analize krvi opisano je u nastavku.

Dekodiranje rezultata

Dobivene rezultate treba razmotriti u vezi sa kliničkom slikom bolesti, provjeravajući sumnjivu dijagnozu pomoću nekoliko testova. To je zbog činjenice da su testovi specifični i ponekad nemaju apsolutnu osjetljivost na zarazne bolesti.

Cijena za sveobuhvatni serološki test krvi je opisana u nastavku.

Prosječna cijena procedure

Cijena postupka ovisit će o vrsti studije. Sastoji se od cijene analize i cijene antitijela na određeni patogen. Prosječna cijena postupka je unutar 700 rubalja.

Serološke reakcije su opisane u videu ispod: