Laboratorijska dijagnoza HIV-a. Metode laboratorijske dijagnostike HIV-a. Šta je retrovirus

U visokospecijalizovanoj laboratoriji izvodi se sledeće:

A) određivanje antitela, antigena i imunoloških kompleksa koji cirkulišu u krvi; kultiviranje virusa, identificiranje njegovog genomskog materijala i enzima;

B) procjena funkcija ćelijskog dijela imunog sistema. Glavna uloga pripada serološkim dijagnostičkim metodama koje imaju za cilj određivanje antitijela, kao i antigena patogena u krvi i drugim biološkim tekućinama organizma.

Testiranje na HIV antitela vrši se na:

A) sigurnost transfuzije i transplantacije krvi;

B) nadzor, testiranje u cilju praćenja prevalencije HIV infekcije i proučavanja dinamike njene prevalencije u određenoj populaciji;

C) dijagnostika HIV infekcije, odnosno dobrovoljno ispitivanje krvnog seruma praktično zdravih ljudi ili pacijenata sa različitim kliničkim znacima i simptomima sličnim HIV infekciji ili AIDS-u.

Sistem za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije izgrađen je na principu od tri faze. Prva faza je skrining, namijenjen za obavljanje primarnih testova krvi na prisustvo antitijela na HIV proteine. Druga faza je referentna - omogućava, koristeći posebne metodološke tehnike, da se razjasni (potvrdi) primarni pozitivan rezultat dobijen u fazi skrininga. Treća faza je ekspertna faza, namijenjena konačnoj provjeri prisustva i specifičnosti markera HIV infekcije identifikovanih u prethodnim fazama laboratorijske dijagnostike. Potreba za nekoliko faza laboratorijske dijagnostike je prvenstveno zbog ekonomskih razloga.

U praksi se koristi nekoliko testova koji omogućavaju identifikaciju osoba zaraženih HIV-om s dovoljnim stepenom pouzdanosti:

ELISA test (enzimski imunosorbentni test) za detekciju prvog nivoa, odlikuje se visokom osetljivošću, iako manje specifičnosti od sledećeg;

Imuni blot (Western-blot), vrlo specifičan i najčešće korišten test za razlikovanje HIV-1 i HIV-2;

Test antigenemije p25, efikasan u početnim fazama infekcije;

Lančana reakcija polimeraze (PCR).

U slučajevima masovnog skrininga uzoraka krvi, preporučuje se testiranje mješavina seruma iz grupe ispitanika, sastavljenih na način da konačno razrjeđenje svakog uzorka ne prelazi 1:100. Ako je mješavina seruma pozitivna, testira se svaki serum u pozitivnoj smjesi. Ova metoda ne dovodi do gubitka osjetljivosti i kod ELISA i imunoblota, ali smanjuje troškove rada i troškove inicijalnog pregleda za 60-80%.

Imunološke metode

1. broj T pomagača,

2. odnos T4 i T8,

3. stanje preosjetljivosti,

4. kompenzatorna funkcija T-ćelijskog sistema.

Manifestuje se hiperprodukcijom imunoglobulina, oni su niskog afiniteta, a tjelesni materijal se još više troši.

Nedostaci: pojavljuju se kasno, neki imunološki pokazatelji mogu biti prisutni kod drugih infekcija.

Kliničke metode – m.b. slične su drugim bolestima, najtipičnije manifestacije se bilježe u kasnijim fazama, pa klinička dijagnoza nije previše efikasna

Glavna metoda – serološka – provodi se u 2 faze:

1 – skrining pregled – uzimanje uzoraka na ukupna antitela na sve proteine ​​imunotesta. Ova faza daje 95% istinitih rezultata i 5% lažno pozitivnih.

2 – potvrdna metoda – svi uzorci se ispituju potvrdnom metodom. Ova tehnika vam omogućava da otkrijete antitijela na virusni protein. Pozitivan rezultat je kada se otkriju antitijela na najmanje 3 virusna proteina, ako je na 1 ili 2 rezultat upitan i zahtijeva dodatno ispitivanje.

Tokom primarne serodijagnostike HIV infekcije, ukupna antitijela se određuju skrining testovima - ELISA i reakcijama aglutinacije. U drugoj (arbitražnoj) fazi koristi se složeniji test - imunoblot, koji omogućava ne samo da se potvrdi ili odbije početni zaključak, već i da se to učini na razini određivanja antitijela na pojedinačne proteine ​​virusa.

Interpretacija rezultata testa na HIV antitela

Prilično veliki broj različitih faktora utiče na rezultat testa na HIV antitela, a među njima je važno i vreme testiranja nakon moguće infekcije.

U većini slučajeva, antitijela na HIV mogu se otkriti 6-12 sedmica nakon infekcije. Ovaj period od ulaska virusa u tijelo do pojave detektabilne količine antitijela naziva se period pozitivne serokonverzije ili period "prozora". Rijetki su slučajevi pojave antitijela 6 mjeseci nakon infekcije, a izvještaji o otkrivanju antitijela tek nakon 1 godine nemaju dokaza. Trenutno, dijagnostička služba koristi nove generacije ELISA metoda koje omogućavaju otkrivanje antitijela na HIV 3-4 sedmice nakon infekcije, a određene kombinacije ovih metoda, tzv. 3 sedmice, tj. omogućavaju otkrivanje antitijela na HIV čim se počnu proizvoditi u tijelu.

Negativan rezultat znači da u krvi osobe koja se ispituje nisu otkrivena antitijela na HIV. Ovo stanje se naziva seronegativnost i obično znači da osoba nije zaražena.

Negativan rezultat ne daje nikakvu garanciju za budućnost. On samo navodi stanje u trenutku pregleda. Mala je šansa da je istraživanje sprovedeno tokom perioda prozora. Stoga, ako je osoba prethodno bila izložena HIV-u i bila negativna na testu, treba je ponovo testirati najmanje 6 mjeseci nakon rizičnog događaja.

Pozitivan rezultat znači da su u krvi pacijenta pronađena antitijela na HIV. Ovo stanje se naziva seropozitivnost - osoba je zaražena HIV-om. Važno je shvatiti da pozitivan rezultat ukazuje samo na HIV infekciju, a ne na SIDU. Međutim, izuzetno je važno da se nakon pozitivnog nalaza obratite lekaru za savet i, ako je potrebno, medicinsku pomoć, što će vam omogućiti da održite kvalitet svog života na dobrom nivou dugo vremena.

Neizvjestan rezultat. U rijetkim slučajevima, rezultat testa na HIV antitijela je nejasan. Laboratorij ne može odgovoriti da li je osoba seropozitivna ili seronegativna. U takvim okolnostima potrebno je konsultovati lekara i ponovo se testirati.



Pravovremena dijagnoza HIV infekcije postaje izuzetno važna mjera, jer rano započinjanje liječenja u velikoj mjeri može odrediti daljnji razvoj bolesti i produžiti život pacijenta. Posljednjih godina zabilježen je značajan napredak u identifikaciji ove strašne bolesti: stariji sistemi za testiranje zamjenjuju se naprednijim, metode ispitivanja postaju pristupačnije, a njihova preciznost se značajno povećava.

U ovom članku ćemo govoriti o savremenim metodama dijagnosticiranja HIV infekcije, čije je poznavanje korisno za pravovremeno liječenje ovog problema i održavanje normalne kvalitete života pacijenta.

Metode dijagnostike HIV-a

U Rusiji se provodi standardna procedura za dijagnosticiranje HIV infekcije, koja uključuje dva nivoa:

• ELISA test sistem (skrining analiza);
• imunobloting (IB).

Za dijagnozu se mogu koristiti i druge metode:

• brzi testovi.

ELISA test sistemi

U prvoj fazi dijagnoze koristi se skrining test (ELISA) za otkrivanje HIV infekcije, koji se zasniva na HIV proteinima stvorenim u laboratorijama koji hvataju specifična antitijela proizvedena u tijelu kao odgovor na infekciju. Nakon njihove interakcije sa reagensima (enzimima) test sistema, boja indikatora se menja. Zatim se ove promjene boje obrađuju pomoću posebne opreme, koja određuje rezultat izvršene analize.

Takvi ELISA testovi mogu pokazati rezultate u roku od nekoliko sedmica nakon uvođenja HIV infekcije. Ovaj test ne utvrđuje prisustvo virusa, već otkriva proizvodnju antitijela na njega. Ponekad u ljudskom tijelu proizvodnja antitijela na HIV počinje nakon 2 sedmice nakon infekcije, ali kod većine ljudi se stvaraju kasnije, nakon 3-6 sedmica.

Postoje četiri generacije ELISA testova različite osjetljivosti. Poslednjih godina sve se više koriste test sistemi treće i četvrte generacije koji se baziraju na sintetičkim peptidima ili rekombinantnim proteinima i imaju veću specifičnost i tačnost. Mogu se koristiti za dijagnosticiranje HIV infekcije, praćenje prevalencije HIV-a i osiguranje sigurnosti prilikom testiranja darovane krvi. Preciznost ELISA test sistema III i IV generacije je 93-99% (testovi proizvedeni u zapadnoj Evropi su osetljiviji - 99%).

Za izvođenje ELISA testa uzima se 5 ml krvi iz vene pacijenta. Između posljednjeg obroka i analize mora proći najmanje 8 sati (obično se radi ujutro na prazan želudac). Preporučuje se da se takav test uradi najkasnije 3 sedmice nakon sumnje na infekciju (na primjer, nakon nezaštićenog spolnog odnosa sa novim seksualnim partnerom).

Rezultati ELISA testa se dobijaju za 2-10 dana:

• negativan rezultat: ukazuje na odsustvo HIV infekcije i ne zahtijeva kontaktiranje specijaliste;
• lažno negativan rezultat: može se uočiti u ranim fazama infekcije (do 3 sedmice), u kasnijim stadijumima AIDS-a sa jakom supresijom imunološkog sistema i nepravilnim pripremanjem krvi;
• lažno pozitivan rezultat: može se uočiti kod nekih bolesti i u slučaju nepravilne pripreme krvi;
• pozitivan rezultat: ukazuje na infekciju HIV-om, potrebno je uraditi IB i javiti se pacijentu specijalistu u centru za AIDS.

Zašto ELISA test može dati lažno pozitivne rezultate?

Lažno pozitivni rezultati HIV ELISA testa mogu se javiti zbog nepravilne obrade krvi ili kod pacijenata sa sljedećim stanjima i bolestima:

• multipli mijelom;
• zarazne bolesti uzrokovane Epstein-Barr virusom;
• stanje nakon ;
• autoimune bolesti;
• na pozadini trudnoće;
• stanje nakon vakcinacije.

Iz gore opisanih razloga, u krvi mogu biti prisutna nespecifična unakrsna antitijela, čija proizvodnja nije izazvana HIV infekcijom.

Posljednjih godina učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno se smanjila zbog upotrebe test sistema generacije III i IV, koji sadrže osjetljivije peptidne i rekombinantne proteine ​​(sintetizirani su genetskim inženjeringom in vitro). Nakon uvođenja ovakvih ELISA testova, učestalost lažno pozitivnih rezultata značajno se smanjila i iznosi oko 0,02-0,5%.

Lažno pozitivan rezultat ne znači da je osoba zaražena HIV-om. U takvim slučajevima, SZO preporučuje provođenje još jednog ELISA testa (obavezno IV generacije).

Krv pacijenta se šalje u referentnu ili arbitražnu laboratoriju sa oznakom "ponoviti" i testira se pomoću ELISA test sistema IV generacije. Ako je rezultat nove analize negativan, tada se prvi rezultat smatra pogrešnim (lažno pozitivnim) i IS se ne provodi. Ako je rezultat pozitivan ili upitan tokom drugog testa, pacijent mora da se podvrgne IB nakon 4-6 sedmica da potvrdi ili opovrgne HIV infekciju.

Imuno blotting

Konačna dijagnoza HIV infekcije može se postaviti samo nakon što se dobije pozitivan rezultat imunoblotinga (IB). Za njegovo izvođenje koristi se nitrocelulozna traka na koju se nanose virusni proteini.

Uzimanje krvi za IB se vrši iz vene. Zatim se podvrgava posebnoj obradi i proteini sadržani u njegovom serumu se odvajaju u poseban gel prema njihovom naboju i molekularnoj težini (manipulacija se vrši pomoću posebne opreme pod utjecajem električnog polja). Nitrocelulozna traka se nanosi na gel krvnog seruma, a upijanje („blotting“) se provodi u posebnoj komori. Traka se obrađuje i ako upotrijebljeni materijali sadrže antitijela na HIV, vezuju se za antigenske trake na IB i pojavljuju se kao linije.

IB se smatra pozitivnim ako:

• prema američkim kriterijima CDC-a - postoje dvije ili tri linije gp41, p24, gp120/gp160 na traci;
• prema američkom FDA kriteriju, traka ima dvije linije p24, p31 i liniju gp41 ili gp120/gp160.

U 99,9% slučajeva pozitivan IB nalaz ukazuje na HIV infekciju.

Ako nema linija, IB je negativan.

Kada se identifikuju linije sa gr160, gr120 i gr41, IB je sumnjiv. Ovaj rezultat se može pojaviti kada:

• onkološke bolesti;
• trudnoća;
• česte transfuzije krvi.

U takvim slučajevima preporučuje se ponavljanje studije uz pomoć kompleta druge kompanije. Ako nakon dodatnog IB rezultat ostane sumnjiv, tada je potrebno promatranje šest mjeseci (IB se provodi svaka 3 mjeseca).

Lančana reakcija polimeraze

PCR test može otkriti RNK virusa. Njegova osjetljivost je prilično visoka i omogućava otkrivanje HIV infekcije u roku od 10 dana nakon infekcije. U nekim slučajevima, PCR može dati lažno pozitivne rezultate, jer njegova visoka osjetljivost također može odgovoriti na antitijela na druge infekcije.

Ova dijagnostička tehnika je skupa i zahtijeva posebnu opremu i visoko kvalificirane stručnjake. Ovi razlozi ne omogućavaju masovno testiranje populacije.

PCR se koristi u sljedećim slučajevima:

• otkrivanje HIV-a kod novorođenčadi rođenih od majki zaraženih HIV-om;
• za otkrivanje HIV-a u „prozorskom periodu“ ili u slučaju sumnjive IB;
• za kontrolu koncentracije HIV-a u krvi;
• za proučavanje krvi donora.

PCR test sam po sebi ne postavlja dijagnozu HIV-a, već se provodi kao dodatna dijagnostička metoda za rješavanje kontroverznih situacija.

Ekspresne metode

Jedna od inovacija u dijagnostici HIV-a su brzi testovi, čiji se rezultati mogu procijeniti u roku od 10-15 minuta. Najefikasniji i najprecizniji rezultati se dobijaju imunohromatografskim testovima na principu kapilarnog toka. To su posebne trake na koje se nanosi krv ili druge testne tekućine (slina, urin). Ako su prisutna antitijela na HIV, nakon 10-15 minuta na testu se pojavljuje obojena i kontrolna traka - pozitivan rezultat. Ako je rezultat negativan, pojavljuje se samo kontrolna traka.

Kao i kod ELISA testova, rezultati brzih testova moraju biti potvrđeni IB analizom. Tek nakon toga može se postaviti dijagnoza HIV infekcije.

Dostupni su kompleti za brzo kućno testiranje. Test OraSure Technologies1 (SAD) je odobren od strane FDA, dostupan je u slobodnoj prodaji i može se koristiti za otkrivanje HIV-a. Nakon testa, ako je rezultat pozitivan, pacijentu se preporučuje pregled u specijaliziranom centru kako bi se potvrdila dijagnoza.

Ostale testove za kućnu upotrebu još nije odobrila FDA i njihovi rezultati mogu biti vrlo upitni.

Unatoč činjenici da su brzi testovi inferiorni u preciznosti od IV generacije ELISA testova, oni se široko koriste za dodatno testiranje populacije.

Testovi za otkrivanje HIV infekcije mogu se poduzeti u bilo kojoj klinici, centralnoj okružnoj bolnici ili specijalizovanim centrima za AIDS. Na teritoriji Rusije provode se potpuno povjerljivo, ili anonimno. Svaki pacijent može očekivati ​​medicinsku ili psihološku konsultaciju prije ili nakon testa. Testove na HIV ćete morati platiti samo u komercijalnim medicinskim ustanovama, dok se u javnim klinikama i bolnicama rade besplatno.

Pročitajte o načinima na koje se možete zaraziti HIV-om i koji mitovi postoje o mogućnostima zaraze.

Trenutno, nove dijagnostičke tehnologije omogućuju identifikaciju etioloških i patogenetskih uzroka mnogih bolesti i radikalno utječu na rezultate liječenja. Možda najimpresivniji rezultati uvođenja ovih tehnologija u kliničku praksu postignuti su u oblasti imunologije i dijagnostike zaraznih bolesti.

Test sistemi zasnovani na enzimskim imunosorbentnim i hemiluminiscentnim imunotestovima mogu detektovati antitela različitih klasa, što značajno povećava informativni sadržaj kliničko-analitičkih metoda osetljivosti i specifičnosti za dijagnostiku zaraznih bolesti. Treba napomenuti da je najznačajniji napredak u dijagnostici infekcija povezan sa uvođenjem u laboratorijsku praksu metode polimerazne lančane reakcije, koja se smatra „zlatnim standardom“ u dijagnostici i procjeni efikasnosti liječenja velikog broja infektivnih bolesti. bolesti.

Za istraživanje se mogu koristiti različiti biološki materijali: serum, krvna plazma, struganje, biopsija, pleuralna ili cerebrospinalna tekućina (CSF). Prije svega, metode laboratorijske dijagnostike infekcija usmjerene su na prepoznavanje bolesti kao što su virusni hepatitis B, C, D, infekcija citomegalovirusom, spolno prenosive infekcije (gonoreja, klamidija, mikoplazma, ureaplazma), tuberkuloza, HIV infekcija itd.

HIV infekcija je bolest uzrokovana virusom humane imunodeficijencije (HIV) koji dugo perzistira u limfocitima, makrofagima i ćelijama nervnog tkiva, što rezultira razvojem polako progresivnog oštećenja imunološkog i nervnog sistema organizma, koji se manifestuje sekundarnim infekcijama, tumorima, subakutnim encefalitisom i drugim patološkim stanjima.

Uzročnici infekcije - virusi humane imunodeficijencije tip 1 i 2 (HIV-1, HIV-2) - pripadaju porodici retrovirusa, podfamiliji sporih virusa. Virioni su sferne čestice prečnika 100-140 nm. Virusna čestica ima vanjsku fosfolipidnu ovojnicu, koja uključuje glikoproteine ​​(strukturne proteine) određene molekularne težine, mjerene u kilodaltonima. Kod HIV-1, to su gpl60, gpl20, gp41. Unutrašnja ljuska virusa, koja pokriva jezgro, također je predstavljena proteinima poznate molekularne težine - p17, p24, p55 (HIV-2 sadrži gpl40, gpl05, gp36, p16, p25, p55).

HIV genom sadrži RNK i enzim reverznu transkriptazu (revertazu). Da bi se genom retrovirusa povezao sa genomom ćelije domaćina, DNK se prvo sintetizira na virusnoj RNK šabloni pomoću reverzne. Provirusna DNK se zatim integriše u genom ćelije domaćina. HIV ima izraženu antigensku varijabilnost, značajno nadmašujući onu kod virusa influence.

U ljudskom tijelu, glavna meta HIV-a su T-limfociti, koji na svojoj površini nose najveći broj CD4 receptora. Nakon što HIV uđe u ćeliju pomoću reversease, virus sintetizira DNK na osnovu svog uzorka RNK, koji je integriran u genetski aparat ćelije domaćina (CD4 limfociti) i tamo ostaje doživotno u stanju provirusa. Osim pomagača T-limfocita, zahvaćeni su makrofagi, B-limfociti, neuroglijalne ćelije, crijevna sluznica i neke druge ćelije. Razlog za smanjenje broja T-limfocita (CD4 stanica) nije samo direktan citopatski učinak virusa, već i njihova fuzija sa neinficiranim stanicama. Uz oštećenje T-limfocita, kod pacijenata sa HIV infekcijom dolazi do poliklonske aktivacije B-limfocita sa povećanjem sinteze imunoglobulina svih klasa, posebno IgG i IgA, te kasnijim iscrpljivanjem ovog dijela imunog sistema. Disregulacija imunoloških procesa manifestuje se i povećanjem nivoa α-interferona, β2-mikroglobulina i smanjenjem nivoa IL-2. Kao rezultat disfunkcije imunološkog sistema, posebno kada se broj T limfocita (CD4) smanji na 400 ćelija u 1 μl krvi ili manje, nastaju uslovi za nekontrolisanu replikaciju HIV-a sa značajnim povećanjem broja viriona u različitim životne sredine tela. Kao rezultat oštećenja mnogih dijelova imunološkog sistema, osoba zaražena HIV-om postaje bespomoćna protiv patogena raznih infekcija.

U pozadini sve veće imunosupresije razvijaju se teške progresivne bolesti koje se ne javljaju kod osobe s normalno funkcionirajućim imunološkim sustavom. Riječ je o bolestima koje je Svjetska zdravstvena organizacija (SZO) definisala kao bolesti koje označavaju AIDS ili AIDS-definišu bolesti.

Bolesti koje definišu AIDS

Prva grupa - bolesti svojstvene samo teškoj imunodeficijenciji (nivo CD4).<200). Клинический диагноз ставится при отсутствии анти-ВИЧ-антител или ВИЧ-антигенов.

Druga grupa su bolesti koje se mogu razviti i na pozadini teške imunodeficijencije, au nekim slučajevima i bez nje.

Stoga je u ovim slučajevima neophodna laboratorijska potvrda dijagnoze.

prva grupa:

• kandidijaza jednjaka, traheje, bronhija;
• ekstrapulmonalna kriptokokoza;
• kriptosporidioza s proljevom duže od 1 mjeseca;
• citomegalovirusne lezije različitih organa osim jetre, slezene ili limfnih čvorova kod pacijenata starijih od 1 mjeseca;
• infekcija uzrokovana virusom herpes simplexa, koja se manifestira ulkusima na koži i sluznici koji traju duže od 1 mjeseca, kao i bronhitisom, upalom pluća ili ezofagitisom bilo kojeg trajanja, koji pogađaju pacijenta starijeg od 1 mjeseca;
• generalizovani Kaposijev sarkom kod pacijenata mlađih od 60 godina;
• limfom mozga (primarni) kod pacijenata mlađih od 60 godina;
• limfocitna intersticijska pneumonija i/ili plućna limfoidna displazija kod djece mlađe od 12 godina;
• diseminirana infekcija uzrokovana atipičnim mikobakterijama (mikobakterije kompleksa M. aviumintracellulare) s ekstrapulmonalnom lokalizacijom ili lokalizacijom (pored pluća) u koži, cervikalnim limfnim čvorovima, limfnim čvorovima korijena pluća;
• Pneumocystis pneumonia;
• progresivna multifokalna leukoencefalopatija;
• cerebralna toksoplazmoza kod pacijenata starijih od 1 mjeseca.

druga grupa:

• bakterijske infekcije, kombinovane ili rekurentne, kod dece mlađe od 13 godina (više od dva slučaja u toku 2 godine posmatranja): sepsa, pneumonija, meningitis, oštećenje kostiju ili zglobova, apscesi izazvani Haemophilus influenzae, streptokoki;
• diseminirana kokcidioidomikoza (ekstrapulmonalna lokalizacija);
• HIV encefalopatija (HIV demencija, AIDS demencija);
• histoplazmoza s dijarejom koja traje duže od 1 mjeseca;
• izosporoza s dijarejom koja traje duže od 1 mjeseca;
• Kaposijev sarkom u bilo kojoj dobi;
• limfom mozga (primarni) kod ljudi bilo koje dobi;
• drugi B-ćelijski limfomi (osim Hodgkinove bolesti) ili limfomi nepoznatog imunofenotipa: limfomi malih ćelija (kao što je Burkittov limfom, itd.); imunoblastični sarkomi (imunoblastični, krupnoćelijski, difuzni histiocitni, difuzni nediferencirani limfomi);
• diseminirana mikobakterioza (ne tuberkuloza) sa oštećenjem kože, cervikalnih ili hilarnih limfnih čvorova pored pluća;
• ekstrapulmonalna tuberkuloza (zahvaćajući unutrašnje organe osim pluća);
• Salmonela septikemija, ponavljajuća;
• HIV distrofija (mršavost, nagli gubitak težine).

Tabela 1 (pogledajte vezu sa izvorom iznad) navodi bolesti koje definišu AIDS i njihove etiološke uzročnike.

Postoji mnogo klasifikacija AIDS-a.

Prema novoj klasifikaciji koju je predložio Centar za kontrolu bolesti u SAD (tabela 2 – vidi link na izvor iznad), dijagnoza AIDS-a se postavlja za osobe sa brojem CD4 limfocita manjim od 200/μl, čak i u odsustvo bolesti koje definišu AIDS.

U kategoriju B spadaju različiti sindromi, od kojih su najvažniji bacilarna angiomatoza, orofaringealna kandidijaza, rekurentna vulvovaginalna kandidijaza, teško lječiva, cervikalna displazija, karcinom grlića materice, idiopatska trombocitopenična purpura, listerioza, periferna neuropatija.

Antitela na HIV-1 i HIV-2 u krvi

Antitijela na HIV-1 i HIV-2 normalno su odsutna u krvnom serumu.

Određivanje antitijela na HIV je glavna metoda laboratorijske dijagnostike HIV infekcije. Metoda se zasniva na enzimskom imunosorbentnom testu (ELISA) - osjetljivost je veća od 99,5%, specifičnost je veća od 99,8%. Antitela na HIV se javljaju kod 90-95% inficiranih osoba u roku od 1 meseca nakon infekcije, u 5-9% - nakon 6 meseci, u 0,5-1% - kasnije. Tokom stadijuma AIDS-a, broj antitela može da se smanji sve dok potpuno ne nestanu.

Rezultat studije se izražava kvalitativno: pozitivan ili negativan.

Negativan rezultat testa ukazuje na odsustvo antitijela na HIV-1 i HIV-2 u krvnom serumu. Laboratorija daje negativan rezultat odmah kada je spremna. Ako se dobije pozitivan rezultat - otkrivanje antitijela na HIV - kako bi se izbjegli lažno pozitivni rezultati u laboratoriji, analiza se ponavlja još 2 puta.

Imunobloting za antitijela na HIV virusne proteine ​​u krvnom serumu

Antitijela na HIV virusne proteine ​​normalno su odsutna u krvnom serumu.

ELISA metoda za određivanje antitijela na HIV je metoda skrininga. Kada se dobije pozitivan rezultat, da bi se potvrdila njegova specifičnost, koristi se imunoblot metoda - Western-blot - kontrataloženje u gelu antitijela u krvnom serumu pacijenta s različitim virusnim proteinima, podvrgnuto separaciji po molekulskoj težini pomoću elektroforeze i primijenjeno na nitrocelulozu. Određuju se antitela na virusne proteine ​​gp41, gpl20, gpl60, p24, pi8, p17 itd.

Prema preporukama Ruskog centra za prevenciju i kontrolu AIDS-a, otkrivanje antitijela na jedan od glikoproteina gp41, gpl20, gpl60 treba smatrati pozitivnim rezultatom. Ako se otkriju antitijela na druge virusne proteine, rezultat se smatra sumnjivim, takvog pacijenta treba pregledati dva puta - nakon 3 i 6 mjeseci.

Odsustvo antitijela na specifične proteine ​​HIV-a znači da je metoda enzimskog imunotestiranja dala lažno pozitivan rezultat. Istovremeno, u praktičnom radu, prilikom procjene rezultata imunobloting metode, potrebno je slijediti upute koje je kompanija dostavila uz korišteni “Immunoblotting Kit”.

Imunobloting metoda se koristi za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije.

Antigen p24 u krvnom serumu

Antigen p24 normalno je odsutan u krvnom serumu.

Antigen p24 je protein na zidu HIV nukleotida. Faza primarnih manifestacija nakon infekcije HIV-om posljedica je početka procesa replikacije. Antigen p24 pojavljuje se u krvi 2 sedmice nakon infekcije i može se otkriti ELISA-om u periodu od 2 do 8 sedmica. Nakon 2 mjeseca od trenutka infekcije, p24 antigen nestaje iz krvi. Nakon toga, u kliničkom toku HIV infekcije, uočava se drugo povećanje nivoa p24 proteina u krvi. Pada tokom formiranja AIDS-a. Postojeći ELISA test sistemi za detekciju p24 antigena koriste se za rano otkrivanje HIV-a kod davalaca krvi i dece, utvrđivanje prognoze toka AIDS-a i praćenje terapije kod pacijenata sa AIDS-om. ELISA ima visoku analitičku osjetljivost, što omogućava otkrivanje HIV-1 p24 antigena u krvnom serumu u koncentraciji od 5-10 pkg/ml i HIV-2 - manje od 0,5 ng/ml, i specifičnost. Međutim, treba napomenuti da je nivo p24 antigena u krvi podložan individualnim varijacijama, što znači da se samo 20-30% pacijenata može otkriti ovim testom u ranom periodu nakon infekcije (Rose N.R. et al., 1997).

Antitela na p24 antigen IgM i IgG klase pojavljuju se u krvi od 2. nedelje, dostižu maksimum u roku od 2-4 nedelje i ostaju na ovom nivou različito vreme: Antitela IgM klase - nekoliko meseci, nestaju u roku od godinu dana nakon infekcija, a IgG antitijela mogu trajati godinama.

Algoritam za dijagnozu HIV infekcije zavisi od faze bolesti i karakteriše se promenama u dinamici detekcije antitela različitih klasa (sl. 1, 2 - vidi link ka izvoru iznad).

Rezultat studije se izražava kvalitativno - pozitivan ili negativan. Negativan rezultat testa ukazuje na odsustvo antitela na HIV-1 i HIV-2 i p24 antigen u krvnom serumu.

Laboratorija daje negativan rezultat odmah kada je spremna. Ukoliko se dobije pozitivan rezultat - detekcija antitela na HIV-1 i HIV-2 i/ili p24 antigen - kako bi se izbegli lažno pozitivni rezultati u laboratoriji, analiza se ponavlja još 2 puta.

Bez obzira na rezultate studije, uzorak krvi pacijenta i rezultate 3 studije šalje laboratorij u regionalni centar za AIDS radi potvrde pozitivnog ili neodređenog rezultata. U takvim slučajevima konačan odgovor na ovu studiju daje regionalni centar za AIDS.

Detekcija HIV-a lančanom reakcijom polimeraze (kvalitativno)

Detekcija HIV-a lančanom reakcijom polimeraze - PCR (kvalitativno) se provodi u svrhu:

• rješavanje upitnih rezultata imunoblotinga;
• za ranu dijagnozu HIV infekcije;
• praćenje efikasnosti antivirusnog tretmana;
• određivanje stadijuma AIDS-a (prelazak infekcije u bolest).

Tokom primarne HIV infekcije, PCR metoda može otkriti HIV RNK u krvi 10-14 dana nakon infekcije.

Rezultat studije se izražava kvalitativno: pozitivan ili negativan. Negativan rezultat testa ukazuje na odsustvo HIV RNK u krvi.

Pozitivan rezultat - otkrivanje HIV RNK - ukazuje da je pacijent zaražen.

Detekcija HIV-a lančanom reakcijom polimeraze (kvantitativno)

Obično nema HIV-a u krvi.

Direktna kvantifikacija HIV RNK pomoću PCR-a omogućava preciznije predviđanje stope razvoja AIDS-a kod ljudi zaraženih HIV-om nego određivanje broja CD4 ćelija, te stoga preciznije procjenjuje njihovo preživljavanje. Visoki nivoi virusnih čestica obično koreliraju sa teškim oštećenjem imuniteta i niskim brojem CD4 ćelija. Nizak nivo virusnih čestica općenito korelira s boljim imunološkim statusom i većim brojem CD4 ćelija. Sadržaj virusne RNK u krvi omogućava nam da predvidimo prijelaz bolesti u klinički stadij. Kada je sadržaj HIV RNA-1 >74.100 kopija/ml, gotovo svi pacijenti razvijaju kliničku sliku AIDS-a (Senior D., Holden E., 1996.).

Verovatnoća razvoja AIDS-a je 10,8 puta veća kod osoba sa nivoom HIV-1 u krvi >10.000 kopija/ml nego kod osoba sa nivoom HIV-1 u krvi<10 000 копий/мл. При ВИЧ-инфекции прогноз непосредственно определяется уровнем виремии. Снижение уровня виремии при лечении улучшает прогноз заболевания.

Grupa američkih stručnjaka razvila je indikacije za liječenje pacijenata sa HIV-om. Liječenje je indicirano za pacijente s niskim brojem CD4 ćelija u krvi<300/мкл или уровнем РНК ВИЧ в сыворотке >20.000 kopija/ml (PCR). Rezultati antiretrovirusne terapije kod osoba zaraženih HIV-om procenjuju se smanjenjem nivoa serumske HIV RNK.

Uz efikasan tretman, nivo viremije bi se trebao smanjiti 10 puta tokom prvih 8 sedmica i biti ispod granice osjetljivosti metode (PCR) (<500 копий/мл) через 4-6 месяцев после начала терапии.

Tako su danas uvedene mnoge istraživačke metode koje se koriste u kliničkoj praksi za dijagnosticiranje HIV infekcije, kao i za sve druge virusne infekcije. Među njima vodeću ulogu imaju serološke studije. Glavne metode za dijagnosticiranje HIV infekcija prikazane su u Tabeli 3 (pogledajte vezu sa izvorom iznad), gdje su podijeljene u četiri nivoa ovisno o važnosti svake metode za otkrivanje virusa:

• A - test se obično koristi za potvrdu dijagnoze;
• B - test je koristan u određenim okolnostima za dijagnosticiranje određenih oblika infekcije;
• C - test se rijetko koristi u dijagnostičke svrhe, ali je od velikog značaja za epidemiološka istraživanja;
• D test se obično ne koristi u laboratorijima u dijagnostičke svrhe.

Budući da je za dijagnostiku virusnih infekcija, osim izbora optimalne metode analize, jednako važna i ispravna identifikacija i prikupljanje biomaterijala za istraživanje, u Tabeli 4 (pogledajte link na izvor iznad) date su preporuke za izbor optimalnog biomaterijala za proučavanje. HIV infekcija.

Za praćenje osoba zaraženih HIV-om treba koristiti mogućnosti sveobuhvatne studije imunološkog statusa - kvantitativno i funkcionalno određivanje svih njegovih karika: humoralnog, ćelijskog imuniteta i nespecifične rezistencije općenito.

U savremenim laboratorijskim uslovima, višestepeni princip procjene imunološkog statusa uključuje određivanje subpopulacije limfocita i imunoglobulina krvi. Prilikom procjene indikatora treba uzeti u obzir da HIV infekciju karakteriše smanjenje omjera CD4/CD8 T-ćelija manji od 1. CD4/CD8 indeks od 1,5-2,5 označava normergično stanje, više od 2,5 označava hiperaktivnost, manje od 1,0 - ukazuje na imunodeficijenciju. Takođe, omjer CD4/CD8 može biti manji od 1 u teškim slučajevima upalnog procesa.

Ovaj omjer je od fundamentalnog značaja za procjenu imunološkog sistema kod pacijenata sa AIDS-om, jer HIV selektivno inficira i uništava CD4 limfocite, zbog čega se omjer CD4/CD8 smanjuje na vrijednosti značajno manje od 1.

Procena imunološkog statusa se takođe zasniva na identifikaciji opštih ili „grubih“ defekata u ćelijskom i humoralnom imunom sistemu: hipergamaglobulinemija (povećane koncentracije IgA, IgM, IgG) ili hipogamaglobulinemija u terminalnoj fazi; povećana koncentracija cirkulirajućih imunoloških kompleksa; smanjena proizvodnja citokina; slabljenje odgovora limfocita na antigene i mitogene.

Kršenje omjera populacija u općem fondu B-limfocita je karakteristično za insuficijenciju humoralnog imuniteta. Međutim, ove promjene nisu specifične za HIV infekciju i mogu se javiti kod drugih bolesti. U sveobuhvatnoj procjeni niza drugih laboratorijskih parametara treba uzeti u obzir da HIV infekciju karakteriziraju i: anemija, limfo- i leukopenija, trombocitopenija, povišeni nivoi β2-mikroglobulina i C-reaktivnog proteina, te povećana transaminaza aktivnost u krvnom serumu.

Sindrom stečene imunodeficijencije jedan je od ključnih problema modernog društva već više od četrdeset godina. Stoga dijagnoza HIV-a sada privlači veliku pažnju i resurse. Uostalom, što se prije otkrije virus koji uništava imunološki sistem tijela, veće su šanse da se izbjegne smrt.

Suština problema

Pod skraćenicom HIV krije se definicija - jedna od najopasnijih među trenutno postojećim. Pod njegovim uticajem, sva zaštitna svojstva tela su duboko potisnuta. To, pak, dovodi do pojave raznih malignih tumora i sekundarnih infekcija.

HIV infekcija može napredovati na različite načine. Ponekad bolest uništi osobu za 3-4 godine, ali u nekim slučajevima može trajati i više od 20 godina. Vrijedi znati da je ovaj virus nestabilan i brzo umire ako je izvan tijela domaćina.

HIV se može prenijeti umjetno, putem krvnog kontakta i putem biokontaktnog mehanizma.

Ako je postojao samo jedan kontakt s nosiocem virusa, tada će rizik od infekcije biti nizak, ali uz stalnu interakciju značajno se povećava. Dijagnoza HIV infekcije je nešto što se ne smije zanemariti, posebno pri mijenjanju seksualnih partnera

Vrijedi obratiti pažnju na parenteralni put infekcije. Može se javiti prilikom transfuzije krvi kontaminirane krvi, ubrizgavanja igalama koje su kontaminirane krvlju HIV inficiranih osoba, kao i prilikom nesterilnih medicinskih zahvata (tetovaže, pirsinga, stomatoloških zahvata korištenjem instrumenata koji nisu pravilno tretirani) .

U isto vrijeme, vrijedi znati da se ne treba bojati kontakta i prijenosa virusa u domaćinstvu. Ali činjenica ostaje: osoba je vrlo podložna HIV infekciji. A ako se ispitanik stariji od 35 godina zarazi, tada se razvoj AIDS-a događa znatno brže nego kod onih koji još nisu prešli tridesetogodišnju granicu.

Glavni simptomi

Naravno, najbolji način da se identifikuje problem ili nedostatak istog je dijagnoza HIV-a. Ali koji bi razlozi mogli imati osoba koja vodi zdrav način života da ode i provjeri se na infekciju? Naravno, takva inicijativa mora biti na neki način opravdana. Stoga je važno znati koji simptomi mogu ukazivati ​​na destruktivne procese koji potiskuju imuni sistem.

Malo je vjerojatno da će biti moguće identificirati fazu inkubacije virusa bez krvnog testa, jer tijelo u ovom trenutku još ni na koji način ne reagira na neprijateljske elemente.

Druga faza (primarne manifestacije) također može proći nezapaženo bez pomoći ljekara. Ali ponekad dolazi do aktivne replikacije virusa, a tijelo počinje reagirati na to - bilježe se groznica, različiti polimorfni osip, linearni sindrom i faringitis. U drugoj fazi moguće je dodati sekundarne bolesti kao što su herpes, gljivične infekcije, upala pluća itd.

Treću karakterizira postupno povećanje imunodeficijencije. Zbog činjenice da ćelije zaštitnog sistema umiru, dinamika njihove proizvodnje se povećava, a to omogućava kompenzaciju značajnih gubitaka. U ovoj fazi može doći do upale nekoliko limfnih čvorova koji pripadaju različitim sistemima. Ali jake bolne senzacije se ne primjećuju. U prosjeku, latentni period traje od 6 do 7 godina, ali može trajati i do 20.

U stadijumu sekundarnih bolesti, koji je četvrti, javljaju se prateće infekcije gljivičnog, bakterijskog protozoalnog, virusnog porekla, kao i maligne formacije. Sve se to događa u pozadini teške imunodeficijencije.

Metode za dijagnosticiranje HIV infekcije

Govoreći o dubokoj supresiji obrambenih mehanizama tijela zbog izloženosti virusu, vrijedi napomenuti da budućnost pacijenta u ovom slučaju izravno ovisi o pravovremenoj i točnoj dijagnozi.

U tu svrhu moderna medicina koristi različite test sisteme, koji se zasnivaju na imunohemiluminiscentnim i enzimski vezanim imunosorbentnim testovima krvi. Ove tehnike omogućavaju određivanje prisutnosti antitijela koja pripadaju različitim klasama. Ovaj rezultat pomaže da se značajno poveća informativnost metoda analitičke, kliničke specifičnosti i osjetljivosti pri radu sa zaraznim bolestima.

Zanimljiva je i činjenica da je upravo metoda lančane reakcije polimerazom omogućila da se dijagnoza HIV-a podigne na fundamentalno novi nivo. Za istraživanje su pogodni različiti biološki materijali: krvna plazma, biopsija, struganje, serum, cerebrospinalna ili pleuralna tečnost.

Ako govorimo o laboratorijskim metodama istraživanja, one su prvenstveno usmjerene na identifikaciju nekoliko ključnih bolesti. Riječ je o HIV infekciji, tuberkulozi, svim polno prenosivim infekcijama i virusnom hepatitisu.

Za identifikaciju virusa imunodeficijencije koriste se i molekularni genetski i serološki testovi. U prvom slučaju se određuju RNA virusa i DNK provirusa, u drugom slučaju se analiziraju antitijela na HIV i detektuje se antigen P24.

U klinikama koje koriste, da tako kažem, klasične dijagnostičke metode, uglavnom se koriste standardnim serološkim protokolom testiranja.

Rana dijagnoza HIV-a

Ova vrsta utvrđivanja činjenice infekcije neophodna je kako bi se što ranije identifikovala opasnost od oštećenja imunološkog sistema. Ovo, prvo, omogućava vam da izbjegnete širenje infekcije, a drugo, utičete na bolest u početnoj fazi.

Ako uzmemo u obzir primjer Rusije, klinička klasifikacija HIV infekcije uvedena je u vojsci i mornarici Ruske Federacije. To je dalo pozitivne rezultate: proces rane kliničke dijagnoze postao je mnogo lakši.

Uobičajeni simptomi koji ukazuju na moguće oštećenje imunološkog sistema uključuju glavobolju, noćno znojenje i nemotivisani umor. Također je moguće razviti temperaturu praćenu znacima upale krajnika. To znači da temperatura raste do 38 stepeni ili više, a istovremeno se povećavaju krajnici i javlja se bol prilikom gutanja. Sve to upotpunjuje brzi gubitak težine. Štaviše, ovi simptomi su često složeni.

U nekim slučajevima, HIV infekcija u ranim fazama može se manifestirati u obliku različitih promjena u stanju kože. Riječ je o pegama, rozeoli, pustulama, furunkulozi itd. Rana dijagnoza HIV-a uključuje i rad sa simptomima kao što su generalizirano ili ograničeno povećanje perifernih limfnih čvorova.

Ako postoji istovremeni rast više limfnih čvorova, koji traje tri mjeseca ili više, i to u različitim grupama, izuzev područja prepona, onda postoje svi razlozi za sumnju na virus ljudskog imunološkog sistema.

Govoreći o dijagnozi u kasnijem periodu, potrebno je obratiti pažnju na manifestaciju sekundarne imunodeficijencije, koja se često javlja pod krinkom različitih kliničkih simptoma. Riječ je o sljedećim manifestacijama:

• nemotivirana generalizirana periferna limfadenopatija;
• artralgija nepoznate etiologije, koja ima valovit tok;
• ARVI (ARI), upalne lezije pluća i respiratornog trakta, koje se često osjećaju;
• groznica nepoznatog porijekla i produžena niska temperatura;
• opća intoksikacija, koja se manifestira nemotiviranom slabošću, umorom, letargijom itd.

Dijagnoza HIV-a u kasnoj fazi uključuje pregled bolesti kao što je Kaposijev sarkom, koji se manifestuje pojavom višestrukih neoplazmi, često u gornjem dijelu tijela kod mladih osoba, praćene dinamičkim razvojem i metastazama.

Lančana reakcija polimeraze

Prilikom razmatranja različitih metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije, na to vrijedi obratiti posebnu pažnju. Odmah treba napomenuti da ovaj test krvi može biti usmjeren na kvantitativne i kvalitativne karakteristike.

Svrha ove metode otkrivanja virusa može se definirati na sljedeći način:

• rano otkrivanje HIV infekcije;
• razjašnjavanje prisustva upitnih rezultata kao rezultat imunobloting studije;
• identifikacija specifične faze bolesti;
• praćenje efikasnosti liječenja usmjerenog na suzbijanje virusa.

Ako govorimo o primarnoj infekciji, treba napomenuti da ova tehnika omogućava određivanje HIV RNK u krvi pacijenta nakon 14 dana od trenutka infekcije. Ovo je veoma dobar rezultat. U ovom slučaju, rezultat same studije imat će kvalitativni izraz: ili pozitivan (virus je prisutan) ili negativan.

Kvantitativna PCR ekspresija

Ovaj tip se koristi za određivanje moguće stope razvoja AIDS-a i za predviđanje životnog vijeka pacijenta.

Kvantitativno određivanje HIV RNK ćelija u krvi omogućava da se razume kada bolest ulazi u kliničku fazu.

Vrijedno je obratiti pažnju na činjenicu da laboratorijske dijagnostičke metode za HIV daju preciznije rezultate ako je biomaterijal potreban za analizu ispravno određen i njegovo prikupljanje se provodi kompetentno.

Za kvalitetno praćenje zaraženih osoba potrebno je (ako je moguće) koristiti integrirani pristup proučavanju imunološkog statusa pacijenta. Riječ je o kvantitativnom i funkcionalnom određenju svih dijelova odbrambenog sistema: ćelijskog, humoralnog imuniteta i nespecifične rezistencije kao takve.

Laboratorijska dijagnostika

U savremenim laboratorijskim uslovima sve više se koristi višestepena metoda za procenu stanja imunog sistema. Ova tehnika često uključuje određivanje subpopulacije imunoglobulina i limfocita u krvi. To znači da je omjer uzet u obzir.Ako rezultat pokaže manji od 1,0, onda postoji razlog za sumnju na imunodeficijenciju.

Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije mora uključiti ovaj test, jer ovaj virus karakterizira selektivno oštećenje CD4 limfocita, što dovodi do primjetnog kršenja gore navedenog omjera (manje od 1,0).

Za procjenu imunološkog statusa, ljekari mogu provesti test na prisustvo „grubih“ ili općih defekata u sistemu humoralnog i ćelijskog imuniteta. Riječ je o hipogamaglobulinemiji ili hipergamaglobulinemiji, kao i smanjenju proizvodnje citokina, povećanju koncentracije cirkulirajućih imunoloških kompleksa i slabljenju odgovora limfocita na mitogene i antigene.

Vrijedi obratiti pažnju na činjenicu da laboratorijska dijagnoza HIV-a ima dvije ključne faze:

1. Laboratorija za skrining. Ako se dobije pozitivan rezultat ELISA (enzimski imunosorbentni test), onda se ponavlja još dva puta u istom sistemu i bez promjene seruma. U slučaju da dva od tri pregleda dovedu do otkrivanja uticaja virusa, serum se šalje na dalje ispitivanje u referentnu laboratoriju.
2. Druga faza, koja uključuje laboratorijske dijagnostičke metode za HIV infekciju, je utvrđivanje stanja imunološkog sistema. Izvodi se u gore navedenoj referentnoj laboratoriji. Ovdje se pozitivni serum ponovo testira ELISA-om, ali pomoću drugačijeg test sistema, koji se od prethodnog razlikuje po sastavu antigena, antitijela ili formatu samih testova. Ako se utvrdi negativan rezultat, ponavlja se ispitivanje u trećem test sistemu. Ako utjecaj virusa na kraju nije otkriven, tada se evidentira odsustvo HIV infekcije. Ali ako je rezultat pozitivan, serum se ispituje linearnim ili imunoblotom.

U konačnici, takav algoritam dovodi do pozitivnih, neutralnih ili negativnih rezultata.

Svaki građanin treba da zna da mu je HIV dijagnostika dostupna. SIDA se može identifikovati u ustanovama privatnog, opštinskog ili državnog sistema zdravstvene zaštite.

Tretman

Naravno, identifikacija virusa bi bila od male koristi u nedostatku različitih metoda utjecaja na infekciju. I iako u ovom trenutku još uvijek ne postoji cjepivo koje bi moglo potpuno neutralizirati virus, kompetentna dijagnoza, liječenje HIV-a i naknadna prevencija mogu značajno poboljšati stanje pacijenta i time mu produžiti život. Ovu tezu potvrđuje i podatak da je prosječan životni vijek muškaraca koji su započeli pravovremeno liječenje HIV-a 38 godina. Žene koje se počnu boriti protiv virusa imunodeficijencije žive u prosjeku 41 godinu.

Nakon postavljanja dijagnoze, liječenje HIV-a se svodi na korištenje nekoliko tehnika. Jedna od najčešćih je aktivna antiretrovirusna terapija, poznata i kao HAART. Ako se ova vrsta liječenja primjenjuje pravovremeno i pravilno, možete značajno usporiti razvoj AIDS-a ili ga potpuno zaustaviti.

Suština HAART-a je da se istovremeno koristi više lijekova, čija je svrha da utiču na različite mehanizme razvoja virusa imunodeficijencije.

Nakon što se različitim dijagnostičkim metodama HIV-a utvrdi činjenica infekcije, mogu se koristiti lijekovi koji imaju sljedeće efekte:

• Imunološki. Imuni sistem se stabilizuje, povećava se nivo T-limfocita, obnavlja se zaštita od raznih infekcija.
• Klinički. Sprečava se razvoj AIDS-a i bilo koje njegove manifestacije, produžava život oboljelima uz očuvanje svih tjelesnih funkcija.
• Virološki. Replikacija virusa je blokirana, zbog čega se smanjuje i naknadno se fiksira na niskom nivou.

Teško je precijeniti značaj takvih mjera za uticaj na bolest kao što su dijagnoza, liječenje i prevencija HIV infekcije. Stoga, najbolja stvar koja se može učiniti nakon pozitivnog rezultata testa na infekciju je odmah započeti borbu protiv bolesti. Druga metoda koja može pomoći u tome je virološki tretman.

U ovom slučaju govorimo o upotrebi lijekova koji ne dozvoljavaju virusu da se veže za T-limfocit i uđe u tijelo. Ovi lijekovi se nazivaju inhibitori penetracije. Konkretan primjer je Celsentry.

Inhibitori virusne proteaze mogu se koristiti za suzbijanje HIV-a. Svrha ove grupe lijekova je spriječiti inficiranje novih limfocita. To su lijekovi kao što su Viracept, Reyataz, Kaletra itd.

Treća grupa lokalnih lijekova su inhibitori reverzne transkriptaze. Potrebni su da blokiraju enzim koji omogućava RNA virusa da se umnožava u jezgri limfocita. Takve metode mogu imati značajan utjecaj na problem kao što je HIV infekcija. Dijagnoza, liječenje i prevencija AIDS-a je posao kvalifikovanih ljekara, tako da algoritam upotrebe lijekova treba da sastave oni.

Po potrebi se mogu koristiti i imunološke i kliničke intervencije.

Prevencija

Svjetska zdravstvena organizacija predlaže sljedeće metode za borbu protiv HIV infekcije:

• Prevencija seksualnog prijenosa. To uključuje zaštićeni seks, distribuciju kondoma, tretman spolno prenosivih bolesti i obrazovne programe.
• Za trudnice kod kojih je dijagnosticirana HIV infekcija - dijagnostika, prevencija upotrebom odgovarajućih hemikalija, kao i stručno savjetovanje i liječenje.
• Organizacija prevencije putem krvnih pripravaka. U ovom slučaju govorimo o antivirusnoj obradi i skriningu donatora.
• Socijalna i medicinska pomoć pacijentima i njihovim porodicama.

Kako bi se osiguralo da dijagnoza HIV-a ne otkrije prisutnost virusa, morate slijediti jednostavna sigurnosna pravila:

• ako krv zaražene osobe dospije na kožu, treba je odmah isprati sapunom i vodom, a zatim tretirati područje kontakta alkoholom;
• ako je oštećenje uzrokovano predmetom koji sadrži elemente virusa, tada se rana mora komprimirati, krv istisnuti, područje tretirati vodikovim peroksidom, a rubovi kauterizirati jodom;
• nikada ne koristite špriceve čija je sterilnost ugrožena;
• Tokom seksualnog odnosa koristite kondom, a bolje je prvo provjeriti partnera na infekciju.

Rezultati

Zahvaljujući činjenici da dijagnoza HIV-a ne miruje, hiljade ljudi ima priliku da započne liječenje na vrijeme i značajno produži svoj životni vijek. Glavna stvar je ne zanemariti očigledne simptome i ne plašiti se ići kod doktora.

Proizvedeno na nekoliko različitih metoda. Čini se da nema ničeg lakšeg nego identificirati ovu bolest kroz vađenje krvi. Ali nije tako. Dijagnoza HIV-a se zaista može otkriti na ovaj način, ali se daljnja istraživanja provode različitim metodama. Oni u velikoj mjeri određuju kakav će tretman biti propisan pacijentu i koje će se mjere naknadno poduzeti. Među najčešćim i vrlo efikasnim metodama su skrining analiza i imunobloting. Svaki od njih treba detaljnije razmotriti.

Dijagnoza AIDS-a: skrining analiza

U početnoj fazi dijagnostikovanja HIV infekcije koristi se skrining test ili ELISA metoda. Prilikom razvoja ove metode, virusni proteini su umjetno stvoreni u laboratoriju. Na antitela reaguju na poseban način. Potonji se proizvode u tijelu kada se u njemu pojave stanice zaražene strašnom bolešću. Laboratorijska dijagnoza HIV-a u ovom slučaju se vrši korištenjem umjetnih enzima. Kada stupe u interakciju s antitijelima, dobijaju određenu boju. Traka s indikatorom, nakon što krv dospije na nju, stavlja se ispod posebnog uređaja, uz pomoć kojeg se može utvrditi ima li osoba ovu bolest ili ne. Savremene metode za dijagnosticiranje HIV-a, uključujući ELISA, omogućavaju utvrđivanje činjenice infekcije ili njenog odsustva s velikom preciznošću. Ali, kao i sva oprema, aparat za analizu skrininga ima grešku. Zbog toga, ukoliko je potrebno, pacijent ponovo polaže test.

Važno je znati da je ELISA test jedna od najranijih metoda za utvrđivanje prisustva virusa imunodeficijencije u organizmu. HIV infekcija je dijagnoza koja se može otkriti tek nekoliko sedmica nakon infekcije. Kada zaražene ćelije uđu u krvotok, imunološki sistem tijela počinje aktivno da se opire. Stvaraju se antitijela, koja se laboratorijskim ispitivanjem otkrivaju nakon dvije ili tri sedmice. Rana dijagnoza HIV infekcije pomoću ELISA testa omogućava otkrivanje antitijela na virus imunodeficijencije u krvi osobe. To je njegova glavna razlika od ostalih modernih metoda.

Vrijedi napomenuti da neki ljudi kasnije počinju razvijati antitijela na ovu bolest. Od trenutka infekcije do početka ovog procesa može proći tri do šest sedmica. Zbog toga medicinski stručnjaci preporučuju podvrgavanje skrining testu četiri do pet sedmica nakon nezaštićenog seksualnog odnosa ili drugog razloga za sumnju na slučajnu infekciju.

Metode za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije pomoću ELISA-e razvijane su tokom dugog vremenskog perioda. Do danas postoje četiri generacije testova. Najprecizniji i najefikasniji od njih su oni koji su nedavno razvijeni. Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije i AIDS-a pomoću treće i četvrte generacije ELISA testova provodi se pomoću rekombinantnih proteina i peptida. Osetljivost ovih testova na antitela koja proizvodi organizam je 92 - 93%. Govorimo o ruskim istraživačkim metodama. Evropljani su naučili da rade slične testove sa osjetljivošću od 99%.

Savremene metode laboratorijske dijagnostike HIV infekcije zasnovane na ELISA testu koriste se ne samo za otkrivanje prisustva bolesti. Koristeći skrining analizu moguće je pratiti širenje virusa imunodeficijencije, kao i prikupljati testni materijal prije uzimanja krvi od davaoca.

ELISA je standardna metoda za dijagnosticiranje HIV infekcije: kako se radi, zašto daje lažan rezultat?

Dijagnoza HIV-a i AIDS-a pomoću ELISA-e je standardna procedura. Krv pacijenta se uzima iz vene. Za analizu je dovoljno pet mililitara materijala. Klinički HIV tipovi 2 i 1 dijagnostikuju se najmanje osam sati nakon ingestije. Lekari preporučuju da se to radi ujutro na prazan želudac. Rezultati kompletne studije poznati su za dva-tri dana. Ekspresni skrining se obavlja za kraće vreme. To po pravilu traje samo nekoliko sati. Međutim, greška se u ovom slučaju povećava. Ekspresna dijagnoza HIV-a neophodna je u hitnim slučajevima, na primjer, kada je pacijentu potrebna hitna operacija. Takva analiza se mora obaviti prije neplaniranih hirurških intervencija, jer ako pacijent ima virus imunodeficijencije, liječnici primjenjuju povećane sigurnosne mjere. Klinička dijagnoza HIV infekcije u kratkom vremenskom periodu neophodna je i u slučajevima kada se darovana krv mora brzo prikupiti da bi se spasio drugi pacijent.

Postoje slučajevi kada je nekoj osobi dijagnosticirana AIDS ili HIV, ali kao rezultat nije potvrđena, ili obrnuto. Zašto se to dešava u slučaju ELISA testa? Lažno negativan rezultat može biti posljedica činjenice da krv nije pravilno pripremljena za test. Ponekad je razlog tome nepravilno izvršenje njegovog prikupljanja. Lažno negativan rezultat prilikom verifikacije dijagnoze HIV infekcije nije potvrđen čak i ako su materijali za studiju uzeti prerano. Na kraju krajeva, mora da je prošlo najmanje tri nedelje nakon infekcije. Postoje slučajevi kada je rezultat detekcije virusa imunodeficijencije lažno pozitivan. To je zbog opšteg stanja imunološkog i hormonskog sistema ljudskog tijela. U većini slučajeva pacijent ima bolesti koje su rezultat lažno pozitivnog rezultata. Riječ je o alkoholnom hepatitisu, kod kojeg jetra proizvodi posebne enzime, koji mogu uzrokovati pogrešnu dijagnozu HIV-a. Trudnoća i neke autoimune bolesti, uz multipli mijelom, također mogu uzrokovati lažno pozitivan rezultat. Ova lista može uključiti pacijente na dijalizi i osobe koje su vakcinisane neposredno prije diferencijalne dijagnoze HIV-a.

Govoreći o skrining analizi, važno je napomenuti da ova metoda istraživanja zahtijeva potvrdu. Doktori, prije postavljanja dijagnoze HIV-a na osnovu toga, uvijek pošalju pacijenta na imunoblotiranje.

Osnovne metode laboratorijske dijagnostike HIV infekcije: imunobloting

AIDS, čija su dijagnoza i liječenje usko povezani, otkriva se na nekoliko načina. Kao što je već spomenuto, jedan ELISA test nije dovoljan da se konačno utvrdi dijagnoza. Diferencijalna dijagnoza HIV infekcije u ovom slučaju je dopunjena imunoblotingom. U modernoj medicini naziva se konačna potvrdna metoda dijagnoze. U ovom slučaju, za istraživanje se koriste proteini sadržani u krvi pacijenta. Odvajaju se u posebnom gelu, nakon čega laboratorijski radnici imaju priliku proučavati molekularni sastav krvi.

Vrijeme potrebno za dijagnosticiranje HIV-a ovom metodom kreće se od jednog do tri dana. Za ispitivanje se uzima krv iz vene subjekta i stavlja na tester s gelom. Rezultat, koji se dovodi u pitanje, može nastati tokom trudnoće, prisustva onkoloških procesa ili tuberkuloze. Lažno negativna reakcija na test može se javiti ako se test izvrši nepravilno ili ako se izvrši prerano. Od trenutka infekcije moraju proći najmanje tri sedmice. Na kraju krajeva, vrijeme nakon kojeg se HIV dijagnosticira direktno ovisi o stanju imunološkog sistema.

Druge metode za dijagnosticiranje AIDS-a i HIV-a

Metode radijacijske dijagnostike za AIDS se u pravilu koriste u terminalnoj ili sekundarnoj fazi. Uz njihovu pomoć moguće je identificirati promjene koje se javljaju u tijelu zbog sekundarnih bolesti ili oportunističkih infekcija.

Biorezonantna dijagnostika HIV-a, koja se naziva i nelinearno skeniranje, koristi se uglavnom u privatnim klinikama za otkrivanje virusa imunodeficijencije. Službena medicina ovu metodu smatra nedovoljno preciznom i efikasnom. Možda će unapređenje nelinearne dijagnostike u budućnosti omogućiti da se ova strašna dijagnoza identificira već u periodu inkubacije.

Dijagnoza HIV infekcije: serološka metoda i njene karakteristike

Ovo je relativno nova tehnika u kojoj se laboratorijski kriteriji za dijagnosticiranje HIV infekcije zasnivaju na principu antigen-antitijelo. U slučaju virusa imunodeficijencije, u ljudskom tijelu dolazi do traženja antitijela na virus. Da bi se to postiglo, koristi se umjetno dobiven antigen na koji antitijela moraju reagirati. Specifični serološki markeri HIV infekcije uzrokuju specifične promjene u sastavu krvi. Vrijedi napomenuti da je ova metoda istraživanja najefikasnija u akutnoj fazi, koja se završava serokonverzijom. Nakon toga slijedi asimptomatski latentni period, tokom kojeg nije lako pronaći antigen.

Referentna dijagnostika HIV infekcije: opis i karakteristike

Referentne vrijednosti HIV-a smatraju se najtačnijim u identifikaciji dijagnoze. Ova metoda istraživanja kombinuje ELISA test i imunobloting. Referentna laboratorija za dijagnostiku HIV-a omogućava prikupljanje uzoraka i naknadnu obradu na dva načina. Ovo vam omogućava da dobijete najprecizniji rezultat u roku od 24 sata. Ponovna provjera analize dobivene u referentnoj laboratoriji neophodna je samo ako su podaci ELISA testa i imunoblotinga u suprotnosti. Ovo je prilično rijedak fenomen koji se najčešće javlja kod osoba s gore opisanim popratnim bolestima.