Diagnosticum eritrocitna salmonela o. Set reagensa "diagnosticum eritrocitna salmonela vi-antigen za rpg" (sed-vi) Antiglobulinski serum označen peroksidazom

Diagnosticum komplet reagensa Salmonella VI-antigen namijenjen je za otkrivanje u ljudskom krvnom serumu specifičnih antitijela na Salmonella typhus VI-antigen u reakciji pasivne hemaglutinacije (RPHA).

1. SET KARAKTERISTIKE

2.1. Princip metode.

Aktivni princip Diagnosticum Salmonella VI-antigena je Vi-antigen fiksiran na površini crvenih krvnih zrnaca. Prilikom interakcije sa serumima koji sadrže antitijela na Vi-antigen, uočava se fenomen aglutinacije eritrocita.

2.2. POSTAVI SADRŽAJ

Reagensi	Količina
Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigenska tečnost- je 1% suspenzija formaliniziranih i senzibiliziranih eritrocita salmonele tifusa ovaca sa B-antigenom u otopini fosfatnog pufera (pH 7,2 + 0,2; koncentracija 0,06 mol/l). Homogena suspenzija smeđe boje bez ljuskica; nakon taloženja formiraju se 2 sloja: gusti smeđi sediment eritrocita i providna žućkasta supernatantna tekućina	1 boca - 3 ml
Dijagnostički serum za salmonelu adsorbiran B receptor suvi - homogena masa od bijele sa smeđom nijansom do bež	1 boca – 0,1 ml
1% suspenzija formalinizovanih, nesenzibilizovanih eritrocita ovaca— homogena suspenzija smeđe boje bez ljuskica; nakon taloženja formiraju se 2 sloja: gusti smeđi sediment eritrocita i providna žućkasta supernatantna tekućina	1 boca –
Otopina za razrjeđivanje seruma i postavljanje RPGA - 0,9% rastvor natrijum hlorida - prozirna bezbojna tečnost, pH od 6,5 do 7,5	2 bočice – po 8 ml
Ploča sa okruglim dnom za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije - sastoji se od 8 redova, od kojih svaki ima 12 rupa sa providnim, bezbojnim, okruglim dnom	1 PC

1. ANALITIČKE I DIJAGNOSTIČKE KARAKTERISTIKE.

3.1. Dijagnostikum se mora aglutinirati u RPHA dijagnostičkim serumom Salmonella adsorbiranim od suvog B receptora u razrjeđenju ne manjem od 1:160.

Uslovnim nivoom dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđenje seruma ne veće od 1:20.

3.2. Vrijeme analize: 2 sata.

3.3. Set sadrži 8 definicija.

1. MJERE PREDOSTROŽNOSTI

Kada radite s kompletom, trebali biste se pridržavati „Pravila dizajna, sigurnosnih mjera predostrožnosti, industrijske sanitacije, protivepidemijskog režima i lične higijene kada radite u laboratorijama (odjelima, odjelima) sanitarnih i epidemioloških ustanova Ministarstva zdravlja SSSR-a ( M., 1981).

Analizirane serume, kao i reagense u kontaktu s njima, treba smatrati potencijalno inficiranim, sposobnim za dugotrajno očuvanje ili prijenos HIV-a, virusa hepatitisa ili bilo kojeg drugog uzročnika virusne infekcije – s njima treba postupati pažljivo:

• rad sa gumenim rukavicama;
• prilikom pipetiranja potrebno je koristiti automatske dozatore;
• po završetku rada analizirane serume i reagense i instrumente u kontaktu sa njima tretirati dezinfekcionim rastvorom
• Pre i posle upotrebe obrišite opremu sa 70% etil alkoholom.

Analizirani serumi moraju biti inaktivirani na temperaturi od 56 0 C tokom 30 minuta.

Dijagnostički serum salmonele adsorbiran od strane B receptora, uključen u komplet, suv je i inaktiviran.

Rezultati objektivne analize su zagarantovani ako su ispunjeni sledeći uslovi:

• Sve kit reagense treba čuvati na temperaturama od 2 do 8 0 C;
• ne koristite reagense kojima je istekao rok trajanja;
• nemojte koristiti komplet reagense ako na ambalaži nema odgovarajuće oznake;
• Za izvođenje RPHA koristite reagense uključene samo u ovaj komplet.

2.diagnosticum

4.od uništenih mikroba (izolacija specifičnog Ag)

Erythrocyte HBs diagnosticum

2.diagnosticum

4. suspenzija vazdušnih ovaca tretiranih taninom i istaloženim a\g HBs

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu

Diagnosticum gp120

2.diagnosticum

4.odvojiti a\g pr. HIV

5. za otkrivanje HIV-a

Dijagnostikum eritrocita tetanusa

2.diagnosticum

4. suspenzija er.ram, tretirana taninom i a\g tetanusom

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu (na tetanus

Kardiolipin antigen za mikroprecipitaciju

2.diagnosticum

4. ekstrahovane lipidne frakcije iz srca zdravog bika

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu

Ultrazvučni treponemski antigen

2.diagnosticum

4. ubijenih izl. sifilis

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu

Corpuscular tularemia diagnosticum

2.diagnosticum

4.od pojedinačnih čestica patogena

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu

Dijagnostikum dizenterije

2.diagnosticum

4. suspenzija od ubijenih životinja

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu pacijenta

Erythrocyte diagnosticum iz Shigella Sonne

2.diagnosticum

4. suspenzija er.ram-a tretirana toninom

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu

Diagnosticum iz Salmonella typhimurium

2.diagnosticum

4. ubijenih izl. salmonela

5. za otkrivanje specifičnih antitijela u krvnom serumu

Serumi

Konjski serum protiv gangrene 5000 IU

2.serum

4. iz krvnog seruma konja hiperimmije sa toksoidom ekscitatorne gasne gangrene

6.parenteralno, nakon testa sa globulinom 1:100

Normalan ljudski imunoglobulin

2.serum

4.iz donorskog krvnog seruma

5. form-e pass. specifično kupljeno umjetnosti imm

6.parenteralno

Precipitirajući serum antraksa

2.serum

4. iz krvnog seruma hiperimuniziranih životinja a\g exc.sib. čirevi

6.reakcija precipitacije (RP)

Tip botulinum seruma – A 400 IU

2.serum

5. za otkrivanje specifičnog antigena u test materijalu

6.reakcija neutralizacije (RN)

Anti-antraks globulin

2.serum

4.iz krvnog seruma hiperimuniziranih životinja i/ili antraksa

5. form-e pass. specifično kupljeno umjetnosti imm

6.parenteralno

Hemolitički serum

2.serum

4. iz seruma hiperimuniziranih životinja sa eritrocitima životinja druge vrste

5. za otkrivanje specifičnog antigena u test materijalu

Ogawa serum za aglutiniranje kolere

2.serum

4.iz krvnog seruma hiperimuniziranih životinja

5. za otkrivanje specifičnog antigena u test materijalu

Luminescentni serum protiv tularemije

2.serum

4.iz krvnog seruma hiperimuniziranih životinja a\g exc.tular.

5. za otkrivanje specifičnog antigena u test materijalu

Imunoglobulin protiv humanog krpeljnog encefalitisa

2.serum

4.iz donorskog krvnog seruma

5. form-e pass. specifično kupljeno umjetnosti imm

6.parenteralno

ESNO dijagnostički serum

2.serum

4.iz krvnog seruma životinja hiperimuniziranih ESNO virusima

5. za otkrivanje specifičnog antigena u test materijalu

Ljudski imunoglobulin protiv hepatitisa B

2.serum

4.iz krvnog seruma davaoca vakcinisanog protiv hepatitisa B

5. form-e pass. specifično kupljeno umjetnosti imm

6.parenteralno

Antiglobulinski serum označen peroksidazom

2.serum

4.iz krvnog seruma hiperimuniziranih životinja

5. za otkrivanje specifičnog antigena u test materijalu (HIV)

Imunoglobulin protiv bjesnila

2.serum

4.iz donorskog krvnog seruma

5. form-e pass. specifično kupljeno umjetnosti imm

Potvrda o registraciji br. RZN 2016/3905 od 04.04.2016.

Svrha

Set reagensa "Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigen za RPHA" (SED-Vi) namijenjen je za detekciju antitijela na Vi-antigen uzročnika tifusne groznice u ljudskom krvnom serumu reakcijom pasivne hemaglutinacije (RPHA). ).

Karakteristike kompleta

Princip rada

U prisustvu antitijela na uzročnika trbušnog tifusa, uočava se hemaglutinacija pilećih eritrocita senzibiliziranih Vi antigenom, što dovodi do stvaranja "kišobrana" staloženih eritrocita na dnu udubljenja u obliku slova U. . U nedostatku antitijela na uzročnika trbušnog tifusa, staložena crvena krvna zrnca formiraju „tačku“.

Postavite sadržaj

Naziv reagensa	Opis	Količina u setu
Diagnosticum Vi-antigen salmonele eritrocita, suvi 6% (EDS)	Formalizirani pileći eritrociti senzibilizirani antigenom S. typhi Vi. Suva higroskopna masa smeđe boje. Nakon rastvaranja, suspenzija je crveno-braon boje.	1 sp., od 0,6 ml
Dijagnostički serum salmonele adsorbovan, Vi receptor, suv (razblažen 1:20, (K+))	Zečji serum Salmonela adsorbirana, Vi receptor, razrijeđen 1:20. Suva higroskopna porozna masa bijele boje. Nakon rastvaranja, to je providna žućkasta ili bezbojna tečnost.	1 sp., od 0,3 ml
Razblaživač testnog uzorka (RSD)	Prozirna tečnost plavo-ljubičaste boje.	1 sp., 10 ml
Rastvor fosfatnog pufera (PBS)	Prozirna bezbojna tečnost.	1 sp., 10 ml
Polimer tableta za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije	Jednokratna polimerna tableta za imunološke reakcije od prozirnog bezbojnog polistirena.	1 PC.

Dijagnostičke karakteristike

Dijagnostikum se mora aglutinirati u RPHA sa adsorbiranim dijagnostičkim serumom salmonele, Vi receptorom, suh (1:20 razrjeđenje), do titra naznačenog na etiketi seruma. Uslovnim nivoom dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđenje seruma ne veće od 1:20. Vrijeme analize je 3040 minuta. Komplet je dizajniran za testiranje 42 krvna seruma u opciji skrininga ili 10 krvnih seruma u opciji titracije.

Mere predostrožnosti

Komplet je namijenjen samo za in vitro dijagnostičku upotrebu. Supstance uključene u komplet su inaktivirane i sigurne. Kada radite s kompletom, trebali biste se pridržavati SP 1.3.2322-08 i SanPiN 2.1.7.2790-10.

Dodatna oprema i materijali

Oprema, materijali, rješenja:

• 1-kanalni dozatori za pipete s promjenjivim volumenom doziranja 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl i 1000 - 5000 µl;
• 8- ili 12-kanalni dozatori za pipete s promjenjivim volumenima doziranja od 5 - 40 µl i 40 - 200 µl;
• destilovana voda (GOST 6709-72).

Analizirani uzorci

Ispitani uzorci krvnog seruma čuvaju se na temperaturi od 2 do 8 °C ne duže od 3 dana od trenutka uzimanja krvi. Sirutka se može čuvati zamrznuta na temperaturi koja ne prelazi minus 18 °C ne duže od 1 godine. Prije upotrebe uzorci se odmrzavaju na temperaturi od 16 do 25 °C i miješaju mućkanjem. Ponovno zamrzavanje nije dozvoljeno. Ne treba koristiti uzorke s bakterijskim rastom i hemolizom. Prije izvođenja reakcije, test serumi se zagrijavaju na 56 °C 30 minuta.

Sprovođenje analize

Priprema kontrolnog dijagnostičkog seruma (K+)

Pripremiti radni rastvor adsorbovanog dijagnostičkog seruma salmonele, Vi receptor, suv (razblažen 1:20) od 0,3 ml (K+). Da biste to učinili, dodajte 0,3 ml rastvora fosfatnog pufera (PBS) u sadržaj boce sa K+. Preostala količina seruma može se podijeliti na alikvote i čuvati zamrznuta na temperaturi koja ne prelazi minus 18 °C ne duže od 6 mjeseci.

Priprema Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)

Za pripremu radnog razblaženja suspenzije Salmonella erythrocyte diagnosticum, sadržaju boce sa suvim 6% SED doda se 0,6 ml destilovane vode i ostavi da se hidrira 2 sata na temperaturi od 16 do 25 °C. Zatim se otopini doda 2,4 ml otopine fosfatnog pufera (PBS). Radni rastvor se čuva na temperaturi od 2 do 8 °C ne duže od 1 meseca. Zamrzavanje nije dozvoljeno.

Izjava RPGA tokom skrininga krvnih seruma

Krvni serumi za skrining studije razrjeđuju se u jamicama tablete na sljedeći način:

• preliminarna razblaženja 1:20 pripremaju se u prvim jažicama ploče, u koje se prvo dodaje 190 μl RIP rastvora, zatim 10 μl test seruma. Svaki serum se dodaje posebnim vrhom i pažljivo pipetira (boja rastvora u jamicama nakon dodavanja seruma treba da se promeni od plavoljubičaste do zelene);
• Skrining razblaženja 1:40 pripremaju se u drugim bunarčićima tako što se u njih prvo dodaje 25 μl rastvora PBS, a zatim 25 μl prethodno razblaženih seruma i pažljivo pipetiranjem.

Svaki put kada se radi RPGA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K+ titra. Da biste to učinili, dodajte 50 μl otopine PBS u 8 jažica u dugom redu. Zatim dodajte 50 μl K+ radnog rastvora (1:20) u prvu jažicu, pažljivo pipetirajte i prenesite 50 μl u sledeće jažice, dobijajući 2-struka razblaženja od 1:40 do 1:5120. 50 μl PBS rastvora se dodaje u još 4 jažice da se prati EDS za odsustvo spontane hemaglutinacije.

25 μl SED se dodaje u sve jažice ploče sa skrining razblaženjima test seruma (osim prvih koji sadrže RIP) i kontrolama. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u boci ili kadi! Tableta se dobro promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25°C 30 - 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.

Izjava RPGA tokom titracije seruma test krvi

Titracija test seruma i K+ radnog rastvora se vrši u kratkim redovima ploče. Drugi kratki red se koristi za praćenje odsustva spontane hemaglutinacije EDS-a.

180 μl RIP rastvora se dodaje u prve jažice kratkih redova za titraciju test seruma. Dodajte 50 µl otopine PBS u sve ostale jažice.

20 μl test seruma se dodaje u jažice sa RIP rastvorom (dobije se razrjeđenje 1:10). Svaki serum se dodaje sa svojim vrhom i pažljivo pipetira (boja rastvora u jamicama treba da se promeni od plavo-ljubičaste do zelene). Zatim, 50 μl se prenosi iz prvih jažica u naredne jažice u redovima, čime se dobijaju dvostruka razblaženja od 1:20 do 1:1280. Na kraju titracije, rastvori u zapremini od 50 μl se uklanjaju iz poslednjih jažica.

Svaki put kada se radi RPGA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K+ titra. Da biste to učinili, dodajte 50 μl otopine PBS u 8 jažica u dugom redu. Zatim dodajte 50 μl radne otopine K+ (1:20) u prvu jažicu, pažljivo pipetirajte i prenesite 50 μl u sljedeće jažice, postižući 2-struka razrjeđenja od 1:40 do 1:5120.

Za kontrolu dijagnostikuma za odsustvo spontane hemaglutinacije, u sve jažice kratkog reda dodaje se 50 μl PBS rastvora.

25 μl SED se dodaje u sve jažice (osim u prve jažice svakog reda za test serume koji sadrže RIP). Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u boci ili kadi! Tableta se dobro promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25°C 30 - 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.

Računovodstvo i interpretacija rezultata

Obračunavanje rezultata pri skriningu krvnog seruma

Rezultati se uzimaju u obzir na konvencionalnoj skali od četiri križa. Titar seruma se smatra njegovim razblaženjem koje daje hemaglutinaciju za najmanje 3 (+++) ukrštanja.

• ++++ (4+) - aglutinirani eritrociti formiraju obrnuti "kišobran" na dnu rupe, njegovi rubovi otpadaju;
• +++ (3+) - aglutinirani eritrociti formiraju obrnuti "kišobran" na dnu rupe, njegovi rubovi su glatki;
• ++ (2+) - uz aglutinirane eritrocite, na dnu bunara nalazi se sediment u obliku malog „prstena“ neaglutiniranih eritrocita;
• + (1+) - većina crvenih krvnih zrnaca nije aglutinirana i taloži se u obliku malog „prstena“;
• (-) - neaglutinirana crvena krvna zrnca formiraju “tačku” na dnu bunara.

Pozitivnim rezultatom smatra se hemaglutinacija eritrocita napunjenih Vi-antigenom za najmanje 3 ukrštanja (+++).

Kontrolu kvaliteta dijagnostikuma obezbeđuju 4 jažice kontrolnog reda u koje su dodavani samo PBS i SED rastvor. U ovim jamicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi nakon ponovnog postavljanja, lijek se ne koristi.

Treba smatrati da serumi s negativnim rezultatom ne sadrže antitijela na Vi antigen sa dijagnostičkim titrom 1:40 ili nižim.

Serume koji daju pozitivan rezultat u razrjeđenju 1:40 treba ponovo testirati uz titraciju seruma kako bi se utvrdio njegov titar.

Obračun rezultata pri titriranju krvnog seruma

Titar seruma se smatra njegovim razblaženjem koje daje hemaglutinaciju od najmanje 3 (+++) ukrštanja.

Kontrolu kvaliteta dijagnostikuma obezbeđuju bunari reda za praćenje EDS. U ovim jamicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi nakon ponovnog postavljanja, lijek se ne koristi.

Pravilno provedena analiza krvi pomaže u otkrivanju uzročnika različitih složenih bolesti u tijelu u ranim fazama njihovog razvoja, a ponekad i prije pojave kliničkih simptoma bolesti. Vrlo često liječnici pacijentima propisuju test reakcije aglutinacije. Zatim ćemo shvatiti šta je to - RPGA test krvi, kada se koristi i šta nam može reći?

Princip rada

Reakcija indirektne hemaglutinacije (koja se naziva i reakcija pasivne hemaglutinacije, poznata i kao RPHA, RNGA) nastaje kada su crvena krvna zrnca koja su adsorbirala antigen izložena imunološkom serumu koji odgovara datom antigenu.

Istraživanja su pokazala da je ova metoda značajno superiornija od ostalih seroloških testova u pogledu specifičnosti i osjetljivosti. Stoga se često koristi za otkrivanje bolesti uzrokovanih bakterijama ili rikecijama. Antigeni za takvu analizu mogu biti bakterijski ekstrakti, pročišćeni antigeni raznih mikroba i komponente bakterijskih vakcina.

Nakon što patogena bakterija uđe u ljudsko tijelo, počinje proizvoditi specifična i nespecifična antitijela, formirajući specifičan imuni odgovor. U slučaju sifilisa, čiji je uzročnik Treponema pallidum, koja pripada gram-negativnim spirohetama, u ljudskoj krvi se stvaraju netreponemska ili treponemska antitijela. Laboratorijski dijagnostički testovi zasnivaju se na njihovoj identifikaciji, koja treba da potvrdi ili opovrgne prisustvo uzročnika virusa u organizmu.

Kod RPHA se crvena krvna zrnca, čija površina ima adsorbirane antigene treponema pallidum, kada se doda serum s antitijelima na treponemu iz materijala osobe zaražene sifilisom, lijepe jedna za drugu, odnosno aglutiniraju.

Pouzdanost studije

Važno je zapamtiti da se antitijela na blijedu spirohetu počinju pojavljivati ​​u tijelu zaraženih osoba 2-4 sedmice nakon infekcije, au nekim slučajevima ovaj period može trajati i do 6 sedmica.

Iz tog razloga, osjetljivost analize na RPHA u primarnom stadijumu bolesti je oko 86%, što je značajno inferiorno u odnosu na tačnost dijagnosticiranja pacijenata u naredna dva stadijuma. Osjetljivost analize za takve pacijente, kao i za nosioce latentnog sifilisa, doseže 99-100%.

Međutim, reakcija pasivne hemaglutinacije ima vrlo visoku specifičnost, koja dostiže nivo od 96-100%.

To omogućava korištenje ovog pregleda za potvrdu dijagnoze u slučaju pozitivne reakcije iz preliminarne netreponemske studije, na primjer, mikroprecipitacijske reakcije raka mokraćnog mjehura.

S obzirom da je osjetljivost treponemskih testova, uključujući RPGA, značajno veća od osjetljivosti netreponemskih metoda, ovakvi pregledi se sve češće propisuju prilikom provođenja skrining testova na sifilis. Međutim, ako se dobije pozitivna reakcija skrining testa, potrebna je druga specifična (treponemska) analiza, ali ne RPGA, da bi se razjasnila dijagnoza.

Transkript analize

Kada se serum s antitijelima na treponemu iz materijala osobe zaražene sifilisom doda reagensu s kojim se studija provodi, crvena krvna zrnca aglutiniraju, zbog čega se talože.

Na broj lepljivih crvenih krvnih zrnaca utiče nivo antitela u serumu. Stoga pasivna hemaglutinacija ne samo da pokazuje prisustvo antitijela, već vam također omogućava da odredite njihovu količinu. Rezultat studije predstavljen je nivoom titra antitela.

Pozitivna reakcija ukazuje na prisutnost patogena u tijelu pacijenta. Međutim, tokom dijagnostičkog procesa može doći do lažno pozitivnih reakcija, čiji broj statistički ne prelazi nivo od 0,05-2,5% od ukupnog broja studija.

Pozitivna RPHA reakcija kod ljudi koji nisu zaraženi sifilisom može se pojaviti ako:

• sistemske bolesti vezivnog tkiva,
• u krvi pacijenta antitijela na patogene slične Treponema pallidum,
• fiziološke patologije, kao što je infarkt miokarda,
• hepatitis B ili C,
• onkološke bolesti,
• tifus, leptospiroza, tuberkuloza,
• HIV infekcije,
• borelioza krpeljne etiologije,
• opsežne povrede ili frakture,
• trudnoća,
• u slučaju ubrizgavanja opojnih droga.

U većini slučajeva lažno pozitivne reakcije su praćene niskim titrom. Visoki titri su tipični za sekundarni stadijum bolesti i prethodno latentni sifilis. Međutim, mogu se pojaviti i prilikom lažno pozitivne reakcije kod pacijenata sa malignim neoplazmama.

Kod ljudi koji su barem jednom imali sifilis, reakcija RPHA ostaje pozitivna do kraja života.

Rijetki iznimci mogu biti one situacije kada je bolest otkrivena u ranoj fazi razvoja, nakon čega se provodi intenzivna i efikasna terapija. Stoga se RPGA analiza ne može koristiti za procjenu dinamike oporavka ili uporednu dijagnozu ranih ili kasnih stadijuma bolesti.

Ukoliko se dobije pozitivna reakcija, potrebno je pregledati članove porodice oboljele osobe i osobe koje su imale seksualni kontakt sa njim.

Negativna reakcija se može dobiti u sljedećim slučajevima:

• osoba nema sifilis,
• neispravno uzeta krv za testiranje,
• Od infekcije je prošlo 2-4 sedmice, a proizvodnja antitijela još nije počela.

U svakom slučaju, rezultat studije mora se procijeniti u kombinaciji s dodatnim laboratorijskim i anamnestičkim pokazateljima.

Kome je analiza namenjena?

Lekar može uputiti pacijente da daju krv za RPHA u sledećim slučajevima:

• u prisustvu kliničkih manifestacija sifilisa: ulcerozni osip, uvećani limfni čvorovi, difuzna alopecija i drugo,
• ako sumnjate na moguću infekciju u slučaju kontakta sa već bolesnim osobama,
• davaoci koji žele da daju krv,
• lica koja prolaze godišnje preventivne preglede ili izdaju zdravstvene potvrde,
• pacijenti s pozitivnim skrining testom,
• prije hospitalizacije u stacionarnoj bolnici,
• tokom preoperativnog pregleda,
• identificirati uzročnike salmoneloze, difterije, dizenterije RPGA metodom uz odgovarajući dijagnostikum.

Procedura za sprovođenje studije

Uzorak venske krvi koji je donirao pacijent šalje se na ispitivanje. Kako ne bi dobio pogrešan zaključak, pacijent bi trebao biti odgovoran u pripremi za analizu. Da bi rezultati testa bili pouzdani, treba se pridržavati sljedećih preporuka:

• Test treba uraditi samo na prazan želudac.
• Na dan analize možete piti mineralnu vodu bez gasa u minimalnim količinama.
• Ne biste trebali pušiti najmanje 30 minuta prije analize, ali je bolje ovo vrijeme povećati na nekoliko sati.
• Uvedena je direktna zabrana konzumacije alkoholnih pića.
• Pacijenti koji moraju redovno da koriste bilo koje lekove moraju obavestiti lekara koji ih upućuje na pregled.
• Ako se ne osjećate dobro ili se ne osjećate dobro, morate o tome obavijestiti medicinsku sestru koja uzima krv ili ljekara u ambulanti gdje treba da uradite test.

Budite odgovorni ne samo oko pitanja gdje se testirati, već i oko pripreme za pregled.

Dijagnoza drugih zaraznih bolesti

Ne treba misliti da se studija kao što je RPGA može provesti samo da bi se identificirao uzročnik sifilisa u tijelu.

Analiza salmonella diagnosticum omogućava vam da otkrijete prisustvo infekcije u probavnom sistemu - salmonelu. Počevši od četvrtog dana nakon infekcije, tijelo proizvodi antitijela na antigene Salmonella, koje RPGA metoda pomaže u identifikaciji. Negativan rezultat ukazuje na odsustvo infekcije, a pozitivan titar, koji se povećava sa 1:200 na 1:800 u akutnoj fazi, ukazuje na njeno prisustvo.

Metoda izvođenja RPGA sa markerom difterije omogućava dijagnosticiranje difterije i procjenu imuniteta nakon vakcinacije. Imuni sistem počinje da proizvodi antitela već sledećeg dana nakon infekcije i ostaju u telu nekoliko nedelja. Osetljivost ove analize je superiornija od bakteriološke metode istraživanja. Titar od 1:80 potvrđuje prisustvo difterije u organizmu.

Marker dizenterije za RPHA najpreciznije otkriva šigelozu (bakterijska dizenterija), čak i u poređenju sa laboratorijskom dijagnostičkom metodom kroz bakterijsku kulturu. Ukoliko pacijent ne dobije kvalitetan tretman, bolest se razvija u kronični proces u kojem se često javljaju recidivi. Analiza omogućuje dijagnosticiranje akutne i kronične faze proljeva, identifikaciju uzročnika dizenterije, razlikovanje bakterijske šigeloze od kolorektalnog karcinoma, endokrinih poremećaja ili upale debelog crijeva. Negativna reakcija ukazuje na odsustvo bacila, a njegovo prisustvo potvrđuje titar 1:80 za djecu ili 1:320 za odrasle.

Provođenje testa s markerom morbila omogućava vam da odredite bolest morbila. Takav pregled može postati alternativa RTGA analizi koja se često radi za dijagnosticiranje morbila.

Dakle, RPGA krvni test - šta je to? Sumirajući, možemo sa sigurnošću reći da je ovo moderna, visoko osjetljiva i pouzdana metoda za dijagnosticiranje različitih bolesti bakteriološke etiologije.

U kontaktu sa

Potvrda o registraciji br. RZN 2016/3905 od 04.04.2016.

Svrha

Set reagensa "Diagnosticum eritrocitna salmonela Vi-antigen za RPHA" (SED-Vi) namijenjen je za detekciju antitijela na Vi-antigen uzročnika tifusne groznice u ljudskom krvnom serumu reakcijom pasivne hemaglutinacije (RPHA). ).

Karakteristike kompleta

Princip rada

U prisustvu antitijela na uzročnika trbušnog tifusa, uočava se hemaglutinacija pilećih eritrocita senzibiliziranih Vi antigenom, što dovodi do stvaranja "kišobrana" staloženih eritrocita na dnu udubljenja u obliku slova U. . U nedostatku antitijela na uzročnika trbušnog tifusa, staložena crvena krvna zrnca formiraju „tačku“.

Postavite sadržaj

Naziv reagensa	Opis	Količina u setu
Diagnosticum Vi-antigen salmonele eritrocita, suvi 6% (EDS)	Formalizirani pileći eritrociti senzibilizirani antigenom S. typhi Vi. Suva higroskopna masa smeđe boje. Nakon rastvaranja, suspenzija je crveno-braon boje.	1 sp., od 0,6 ml
Dijagnostički serum salmonele adsorbovan, Vi receptor, suv (razblažen 1:20, (K+))	Zečji serum Salmonela adsorbirana, Vi receptor, razrijeđen 1:20. Suva higroskopna porozna masa bijele boje. Nakon rastvaranja, to je providna žućkasta ili bezbojna tečnost.	1 sp., od 0,3 ml
Razblaživač testnog uzorka (RSD)	Prozirna tečnost plavo-ljubičaste boje.	1 sp., 10 ml
Rastvor fosfatnog pufera (PBS)	Prozirna bezbojna tečnost.	1 sp., 10 ml
Polimer tableta za jednokratnu upotrebu za imunološke reakcije	Jednokratna polimerna tableta za imunološke reakcije od prozirnog bezbojnog polistirena.	1 PC.

Dijagnostičke karakteristike

Dijagnostikum se mora aglutinirati u RPHA sa adsorbiranim dijagnostičkim serumom salmonele, Vi receptorom, suh (1:20 razrjeđenje), do titra naznačenog na etiketi seruma. Uslovnim nivoom dijagnostičkih karakteristika krvnog seruma zdravih ljudi treba smatrati razrjeđenje seruma ne veće od 1:20. Vrijeme analize je 3040 minuta. Komplet je dizajniran za testiranje 42 krvna seruma u opciji skrininga ili 10 krvnih seruma u opciji titracije.

Mere predostrožnosti

Komplet je namijenjen samo za in vitro dijagnostičku upotrebu. Supstance uključene u komplet su inaktivirane i sigurne. Kada radite s kompletom, trebali biste se pridržavati SP 1.3.2322-08 i SanPiN 2.1.7.2790-10.

Dodatna oprema i materijali

Oprema, materijali, rješenja:

• 1-kanalni dozatori za pipete s promjenjivim volumenom doziranja 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl i 1000 - 5000 µl;
• 8- ili 12-kanalni dozatori za pipete s promjenjivim volumenima doziranja od 5 - 40 µl i 40 - 200 µl;
• destilovana voda (GOST 6709-72).

Analizirani uzorci

Ispitani uzorci krvnog seruma čuvaju se na temperaturi od 2 do 8 °C ne duže od 3 dana od trenutka uzimanja krvi. Sirutka se može čuvati zamrznuta na temperaturi koja ne prelazi minus 18 °C ne duže od 1 godine. Prije upotrebe uzorci se odmrzavaju na temperaturi od 16 do 25 °C i miješaju mućkanjem. Ponovno zamrzavanje nije dozvoljeno. Ne treba koristiti uzorke s bakterijskim rastom i hemolizom. Prije izvođenja reakcije, test serumi se zagrijavaju na 56 °C 30 minuta.

Sprovođenje analize

Priprema kontrolnog dijagnostičkog seruma (K+)

Pripremiti radni rastvor adsorbovanog dijagnostičkog seruma salmonele, Vi receptor, suv (razblažen 1:20) od 0,3 ml (K+). Da biste to učinili, dodajte 0,3 ml rastvora fosfatnog pufera (PBS) u sadržaj boce sa K+. Preostala količina seruma može se podijeliti na alikvote i čuvati zamrznuta na temperaturi koja ne prelazi minus 18 °C ne duže od 6 mjeseci.

Priprema Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)

Za pripremu radnog razblaženja suspenzije Salmonella erythrocyte diagnosticum, sadržaju boce sa suvim 6% SED doda se 0,6 ml destilovane vode i ostavi da se hidrira 2 sata na temperaturi od 16 do 25 °C. Zatim se otopini doda 2,4 ml otopine fosfatnog pufera (PBS). Radni rastvor se čuva na temperaturi od 2 do 8 °C ne duže od 1 meseca. Zamrzavanje nije dozvoljeno.

Izjava RPGA tokom skrininga krvnih seruma

Krvni serumi za skrining studije razrjeđuju se u jamicama tablete na sljedeći način:

• preliminarna razblaženja 1:20 pripremaju se u prvim jažicama ploče, u koje se prvo dodaje 190 μl RIP rastvora, zatim 10 μl test seruma. Svaki serum se dodaje posebnim vrhom i pažljivo pipetira (boja rastvora u jamicama nakon dodavanja seruma treba da se promeni od plavoljubičaste do zelene);
• Skrining razblaženja 1:40 pripremaju se u drugim bunarčićima tako što se u njih prvo dodaje 25 μl rastvora PBS, a zatim 25 μl prethodno razblaženih seruma i pažljivo pipetiranjem.

Svaki put kada se radi RPGA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K+ titra. Da biste to učinili, dodajte 50 μl otopine PBS u 8 jažica u dugom redu. Zatim dodajte 50 μl K+ radnog rastvora (1:20) u prvu jažicu, pažljivo pipetirajte i prenesite 50 μl u sledeće jažice, dobijajući 2-struka razblaženja od 1:40 do 1:5120. 50 μl PBS rastvora se dodaje u još 4 jažice da se prati EDS za odsustvo spontane hemaglutinacije.

25 μl SED se dodaje u sve jažice ploče sa skrining razblaženjima test seruma (osim prvih koji sadrže RIP) i kontrolama. Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u boci ili kadi! Tableta se dobro promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25°C 30 - 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.

Izjava RPGA tokom titracije seruma test krvi

Titracija test seruma i K+ radnog rastvora se vrši u kratkim redovima ploče. Drugi kratki red se koristi za praćenje odsustva spontane hemaglutinacije EDS-a.

180 μl RIP rastvora se dodaje u prve jažice kratkih redova za titraciju test seruma. Dodajte 50 µl otopine PBS u sve ostale jažice.

20 μl test seruma se dodaje u jažice sa RIP rastvorom (dobije se razrjeđenje 1:10). Svaki serum se dodaje sa svojim vrhom i pažljivo pipetira (boja rastvora u jamicama treba da se promeni od plavo-ljubičaste do zelene). Zatim, 50 μl se prenosi iz prvih jažica u naredne jažice u redovima, čime se dobijaju dvostruka razblaženja od 1:20 do 1:1280. Na kraju titracije, rastvori u zapremini od 50 μl se uklanjaju iz poslednjih jažica.

Svaki put kada se radi RPGA, potrebno je izvršiti kontrolno određivanje K+ titra. Da biste to učinili, dodajte 50 μl otopine PBS u 8 jažica u dugom redu. Zatim dodajte 50 μl radne otopine K+ (1:20) u prvu jažicu, pažljivo pipetirajte i prenesite 50 μl u sljedeće jažice, postižući 2-struka razrjeđenja od 1:40 do 1:5120.

Za kontrolu dijagnostikuma za odsustvo spontane hemaglutinacije, u sve jažice kratkog reda dodaje se 50 μl PBS rastvora.

25 μl SED se dodaje u sve jažice (osim u prve jažice svakog reda za test serume koji sadrže RIP). Prije upotrebe promiješajte SED suspenziju u boci ili kadi! Tableta se dobro promućka i ostavi na temperaturi od 16 do 25°C 30 - 40 minuta dok se eritrociti u kontroli potpuno ne slegnu.

Računovodstvo i interpretacija rezultata

Obračunavanje rezultata pri skriningu krvnog seruma

Rezultati se uzimaju u obzir na konvencionalnoj skali od četiri križa. Titar seruma se smatra njegovim razblaženjem koje daje hemaglutinaciju za najmanje 3 (+++) ukrštanja.

• ++++ (4+) - aglutinirani eritrociti formiraju obrnuti "kišobran" na dnu rupe, njegovi rubovi otpadaju;
• +++ (3+) - aglutinirani eritrociti formiraju obrnuti "kišobran" na dnu rupe, njegovi rubovi su glatki;
• ++ (2+) - uz aglutinirane eritrocite, na dnu bunara nalazi se sediment u obliku malog „prstena“ neaglutiniranih eritrocita;
• + (1+) - većina crvenih krvnih zrnaca nije aglutinirana i taloži se u obliku malog „prstena“;
• (-) - neaglutinirana crvena krvna zrnca formiraju “tačku” na dnu bunara.

Pozitivnim rezultatom smatra se hemaglutinacija eritrocita napunjenih Vi-antigenom za najmanje 3 ukrštanja (+++).

Kontrolu kvaliteta dijagnostikuma obezbeđuju 4 jažice kontrolnog reda u koje su dodavani samo PBS i SED rastvor. U ovim jamicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi nakon ponovnog postavljanja, lijek se ne koristi.

Treba smatrati da serumi s negativnim rezultatom ne sadrže antitijela na Vi antigen sa dijagnostičkim titrom 1:40 ili nižim.

Serume koji daju pozitivan rezultat u razrjeđenju 1:40 treba ponovo testirati uz titraciju seruma kako bi se utvrdio njegov titar.

Obračun rezultata pri titriranju krvnog seruma

Titar seruma se smatra njegovim razblaženjem koje daje hemaglutinaciju od najmanje 3 (+++) ukrštanja.

Kontrolu kvaliteta dijagnostikuma obezbeđuju bunari reda za praćenje EDS. U ovim jamicama ne bi trebalo biti spontane hemaglutinacije - reakcija je negativna (-). U suprotnom, studiju treba ponoviti. Ako se hemaglutinacija pojavi nakon ponovnog postavljanja, lijek se ne koristi.