Positiv direkt Coombs-reaktion. Antiglobulintest. Direkt och indirekt Coombs reaktion. Hur analysen går till

Ett Coombs-test är ett kliniskt blodprov som görs för att se om blodet innehåller vissa antikroppar som kanske inte är säkra. Dessa antikroppar fastnar på röda blodkroppar och kan invadera immunförsvaret och skada på andra sätt. I medicinsk terminologi kallas detta test även för ett antiglobulintest (AGT).

Typer av Coombs-tester

Det finns två typer av Coombs-test - direkt och indirekt.

Direkt Coombs test, även känd som direkt (DAT), upptäcker autoantikroppar som fäster vid ytan av röda blodkroppar. Dessa antikroppar produceras ibland i kroppen på grund av vissa sjukdomar eller när man tar vissa mediciner, såsom prokainamid, metyldopa eller kinidin.

Dessa antikroppar är farliga eftersom de ibland orsakar anemi genom att förstöra röda blodkroppar.

Detta test ordineras ibland för att diagnostisera orsaken till gulsot eller anemi.

Normalt är Coombs reaktion negativ.

Positivt för:

• hemolytisk sjukdom hos det nyfödda;
• autoimmun hemolys;
• hemolytiska transfusionsreaktioner;
• läkemedelsinducerad immun hemolytisk anemi.

Indirekt Coombs-test, även känd som , används för att upptäcka antikroppar mot röda blodkroppar som finns i blodserum (serum är den klara gula blodvätskan som finns kvar efter att de röda blodkropparna och koagulanten har utsöndrats).

Det indirekta Coombs-testet används i en blodtransfusion för att avgöra om donatorns blod matchar mottagarens. Detta kallas ett kompatibilitetstest och hjälper till att förhindra alla negativa reaktioner på givarens blod. Denna analys rekommenderas även för gravida kvinnor. Vissa kvinnor har IgG-antikroppar som kan passera placentan in i fostret och skada det nyfödda barnet, vilket orsakar en hemolytisk sjukdom som kallas hemolytisk anemi.

Procedur

Blod tas med hjälp av en spruta från en ven, vanligtvis från baksidan av handen eller i armbågskroken. Punkteringsstället desinficeras noggrant innan detta, och efter att ha tagit ett blodprov appliceras ren gasväv eller bomullsull.

Det resulterande blodet renas i laboratoriet och de röda blodkropparna separeras. Provet undersöks sedan sekventiellt med olika serum- och Coombs-reagenser, vilket motverkas. Om det inte finns någon agglutination (klumpning av röda blodkroppar) innebär detta ett positivt resultat.

Men om testet är negativt betyder det att det finns antikroppar i blodet som verkar mot röda blodkroppar. Detta kan indikera olika sjukdomar som anemi (antingen naturlig eller läkemedelsinducerad), syfilis eller mykoplasmainfektion. Efter att ha mottagit resultaten kommer den behandlande läkaren att ordinera lämplig behandling.

Video

På en platta eller objektglas appliceras med pipetter (olika!) 1 stor droppe O (I), A (II), B (III) serum. Lägg märke till tiden, med en ren glasstav eller en ren vinkel på glasskivan, kombineras serumdropparna med bloddroppar. Bestämningen varar i 5 minuter, skaka plattan, sedan tillsätts 1 droppe saltlösning till varje blandning av droppar och resultaten utvärderas. Det är bättre om serumet är 2 olika serier. Blodgruppsresultat måste matcha i båda serumserierna.

Utvärdering av resultaten av isohemagglutination:

isohemagglutination. Med en positiv reaktion uppträder små röda korn av röda blodkroppar som fastnar i blandningen. Kornen smälter samman till större korn, och de senare till flingor. Serumet är nästan missfärgat;

med en negativ reaktion förblir blandningen jämnt färgad rosa i 5 minuter och inga korn detekteras;

när man arbetar med 3 sera av grupperna O(I), A(II), B(III), är 4 kombinationer av reaktioner möjliga:

1. om alla 3 sera gav en negativ reaktion, det vill säga blandningen är jämnt rosa färgad - detta är O (I) blodgrupp;

   om bara serumet från grupp A (II) gav en negativ reaktion och serum O (I) och B (III) gav en positiv reaktion, det vill säga korn uppträdde - detta är A (II) blodgruppen;

   serumet från B(II)-gruppen gav en negativ reaktion, och serumet från O(I)- och A(II)-gruppen gav en positiv reaktion - detta är B(III)-blodgruppen.

alla 3 sera gav positiva reaktioner - det testade blodet från AB (IV)-gruppen. I detta fall utförs en studie med serum från AB (IV)-gruppen.

Notera! Droppar av det studerade blodet bör vara 5-10 gånger mindre än droppar av serum.

Isomagglutinationsfel.

Att inte agglutinera där det ska vara och ha agglutination där det inte borde vara. Detta kan bero på låg serumtiter plus dålig erytrocytagglutination.

Förekomsten av agglutination där det inte borde vara- detta är pseudoagglutination, när högar av erytrocyter bildar "myntkolonner". Att vagga tallriken eller tillsätta saltlösning förstör dem.

Panagglutination, när serum klistrar ihop alla röda blodkroppar, inklusive sin egen blodgrupp. Vid den 5:e minuten försvinner tecknen på agglutination.

Det finns också den så kallade kalla panagglutinationen, när erytrocyter håller ihop på grund av låg lufttemperatur (under 15 ° C) i rummet.

I alla dessa fall utförs antingen en upprepad reaktion eller enligt standarderytrocyter.

Bestämning av Rh-tillhörighet av blod

För att bestämma Rh-tillhörigheten, d.v.s. för att detektera närvaron eller frånvaron av antigener i Rh-systemet i blodet hos människor, används standard anti-Rhesus-sera (reagens), som har olika specificitet, dvs innehåller antikroppar i förhållande till olika antigener i detta system. För att bestämma Rh 0 (D)-antigenet används anti-Rhesus-serum oftast med tillsats av en 10% gelatinlösning eller ett standard anti-Rhesus-reagens som framställts i förväg med en 33% polyglucinlösning. För att få mer exakta resultat av studien, såväl som för att upptäcka antigener från andra serologiska system, används Coombs-testet (det är också mycket känsligt för att bestämma kompatibiliteten hos transfunderat blod). För studien används inhemskt blod eller berett med något slags konserveringsmedel. I detta fall ska blodet tvättas från konserveringsmedlet med en tiofaldig volym isotonisk natriumkloridlösning. Vid fastställande av Rh-tillhörighet- Rh 0 (D) två prover av serum eller anti-Rhesus reagens av två olika serier ska användas och samtidigt ska standarderytrocyter erhållna från blod från Rh-positiva (Rh +) och Rh-negativa (Rh -) individer användas för kontroll. Vid bestämning av andra isoantigener bör kontrollerytrocyter användas i enlighet därmed, som innehåller eller saknar antigenet mot vilket antikroppar är riktade i standardserum.

Ofullständiga värmeagglutininer är den vanligaste typen av antikroppar som kan orsaka utveckling av autoimmun hemolytisk anemi. Dessa antikroppar tillhör IgG, sällan - till IgM, IgA.

COOMBS TEST

Coombs test: en introduktion. Coombs test är en laboratoriediagnostisk metod baserad på hemagglutinationsreaktionen.

Den huvudsakliga metoden för att diagnostisera autoimmun hemolytisk anemi är Coombs-testet. Den är baserad på förmågan hos antikroppar specifika för immunglobuliner (särskilt IgG) eller komplementkomponenter (särskilt C3) att agglutinera erytrocyter belagda med IgG eller C3.

Bindning av IgG och C3b till erytrocyter observeras vid autoimmun hemolytisk anemi och läkemedelsinducerad immun hemolytisk anemi. Direkt Coombs test. Det direkta Coombs-testet används för att detektera antikroppar eller komplementkomponenter fixerade på ytan av röda blodkroppar. Det utförs enligt följande:

För att erhålla antikroppar mot humana immunglobuliner (antiglobulinserum) eller komplement (antikomplementärt serum) immuniseras djuret med humant serum, immunglobuliner eller humant komplement. Serumet som erhålls från djuret renas från antikroppar mot andra proteiner.

Patientens erytrocyter tvättas med saltlösning för att helt avlägsna serum, vilket neutraliserar antikroppar mot immunglobuliner och komplement och kan orsaka ett falskt negativt resultat.

Om antikroppar eller komplementkomponenter fixeras på ytan av erytrocyter, orsakar tillägg av antiglobulin eller antikomplementärt serum agglutination av erytrocyter.

Direct Coombs test används i följande fall:

autoimmun hemolys.

Hemolytisk sjukdom hos den nyfödda.

Läkemedelsinducerad immun hemolytisk anemi.

Hemolytiska transfusionsreaktioner. Indirekt Coombs-test. Det indirekta Coombs-testet detekterar antikroppar mot erytrocyter i serum. För att göra detta inkuberas patientens serum med grupp 0-donatorerytrocyter och sedan utförs ett direkt Coombs-test.

Indirekt Coombs-test används i följande fall:

Bestämning av den individuella kompatibiliteten hos blodgivaren och mottagaren.

Detektion av alloantikroppar, inklusive antikroppar som orsakar hemolytiska transfusionsreaktioner.

Bestämning av yterytrocytantigener inom medicinsk genetik och rättsmedicin.

Bekräftelse av enäggstvillingar vid benmärgstransplantation.

För att genomföra ett biologiskt test transfunderas blod så snabbt som möjligt (helst i en stråle). Efter transfusion av 25 ml blod kläms systemets rör med en klämma. Därefter görs en paus i 3 minuter, under vilken mottagarens tillstånd övervakas. För att sätta upp ett biologiskt prov injiceras 25 ml blod tre gånger. I slutet av testet (efter transfusion av de första 75 ml blod i fraktionerade doser om 25 ml med 3 minuters intervall) justeras systemet till den erforderliga transfusionshastigheten. Vid transfusion till en patient med mer än en injektionsflaska med blod är det nödvändigt att ta bort nålen från venen. I det här fallet tas nålen bort från provröret på flaskan där blodet har runnit ut och förs in i nästa flaska. Systemröret (gummi eller plast) kläms i detta ögonblick med en klämma. Om det under en blodtransfusion finns behov av intravenös administrering av något annat läkemedel till mottagaren, görs detta genom att sticka hål i systemets gummislang. Punkteringar av ett plaströr är oacceptabla, eftersom de inte faller av. Efter varje blodtransfusion måste patienten övervakas för att identifiera och i tid eliminera möjliga komplikationer, inklusive allergiska reaktioner. Kroppstemperaturen ska mätas 2 timmar efter slutet av blodtransfusionen. Med en ökning av dess mätning måste upprepas under de kommande 4 timmarna varje timme. Lika viktigt är övervakningen av urinering och urinsammansättning, vilket gör det möjligt att fastställa närvaron av en toxisk reaktion efter transfusion. Uppkomsten av oliguri och anuri efter blodtransfusion, närvaron av bildade element av blod och protein i urinen är en direkt indikation på utvecklingen av hemolys efter transfusion.

Hemolytisk anemi, orsakade av autoimmuna kroppar som är riktade mot sina egna röda blodkroppar, har inte belysts exakt. Det antas dock att vissa faktorer (till exempel ett virus, ett onormalt protein) förändrar erytrocyterna på ett sådant sätt att kroppen redan uppfattar dem som "något främmande" och tar tag i dem med hjälp av antikroppar. Enligt en annan teori uppstår antikroppar riktade mot erytrocyter nästan av en slump under bildandet av onormala plasmaproteinkroppar vid vissa sjukdomar. Sådana proteinkroppar kan, precis som "av misstag", ge reaktioner som kan användas för att ställa en diagnos (till exempel är viral lunginflammation känt för att ge en positiv Wassermann-reaktion, en positiv Paul-Bunnel-reaktion och en kall agglutinationsreaktion).

Det finns två huvudtyper av autoantikroppar med hemolytisk anemi, nämligen: varma antikroppar (reagerar vid 37 °) och kalla antikroppar (vars reaktivitet ökar när temperaturen närmar sig noll). Varma antikroppar är vanligare än kalla. Dacie fann att varma hemolysiner är dubbelt så vanliga som kalla hemolysiner. Hemolysiner och agglutininer är inte fundamentalt olika antikroppar: de skiljer sig endast i karaktären av deras verkan. Agglutininer agglutinerar röda blodkroppar, och hemolysiner gör dem mer mottagliga för den komplexa processen med hemolys (komplement!). Autoantikroppar, fixerande på erytrocyter, bildar ett erytrocyt-globinkomplex. Detta komplex detekteras med Coombs-antiglobintestet.

Coombs test utförs med Coombs serum, för vars beredning kaninen sensibiliseras med humant serum, mot vilket antikroppar bildas i kaninens serum. Under verkan av ett sådant sensibiliserat serum på humana erytrocyter, uppstår deras agglutination om erytrocytreceptorerna är upptagna av blockerande antikroppar. Eftersom dessa blockerande antikroppar härrör från humant serum, agglutinerar de med kaninserum som är sensibiliserat för human plasma och som innehåller precipitiner. Denna reaktion kallas Coombs test; för hemolytisk anemi på basis av autoimmuna kroppar (Lo tit) är den nästan specifik (för detaljer, se Maier).

I allmänhet med hemolytisk anemi med en primär kränkning av erytrocyter är Coombs-testet negativt, och med förvärvade är det positivt. Det finns dock några undantag från denna regel: ett falskt positivt Coombs-test hittades under kriser med konstitutionell hemolytisk anemi, och i mindre utsträckning - även ibland efter splenektomi, med reumatisk polyartrit, sarkoidos, efter frekventa blodtransfusioner och med systemisk lupus erythematosus. Naturligtvis, med förvärvad hemolytisk anemi utan bildandet av autoimmuna kroppar, är det negativt.

Hemolytisk anemi orsakad av autoimmuna kroppar kan delas in i:
a) akuta, subakuta och kroniska former, samt på
b) idiopatisk med okänd etiologi och c) symtomatisk [viral lunginflammation (endast förkylningsagglutininer), kronisk lymfatisk leukemi, retikulosarkom, lymfosarkom, systemisk lupus erythematosus (övervägande varm, sällan kalla agglutininer), syfilis (kalla agglutininer), syfilis (kall agglutinin). anställda)).
c) symptomatisk [viral lunginflammation (endast kalla agglutininer), kronisk lymfatisk leukemi, retikulosarkom, lymfosarkom, systemisk lupus erythematosus (övervägande varm, mer sällan kalla agglutininer), syfilis (kalla agglutininer), äggstockstumörer (Miescher et al.)).

Klinik för hemolytisk anemi, som utvecklas under påverkan av autoimmuna kroppar, är mycket varierande, och därför är det knappast möjligt att rita deras allmänna kliniska bild. Personer i alla åldrar och båda könen påverkas jämnt. Ändå verkar de idiopatiska formerna vara vanligare hos kvinnor (Säckar och Workman).

Klinisk bild av den idiopatiska formen varierar beroende på sjukdomens svårighetsgrad. I kroniska fall är uppkomsten gradvis, sjukdomen varar i många år med frekventa exacerbationer. Svårighetsgraden av anemin varierar beroende på graden av hemolys. Droppar av hemoglobin upp till 10% observeras, i andra fall behålls hemoglobin under lång tid med 50-60%. Intensiteten av retikulocytos och icterisk färgning av huden och serumet motsvarar graden av hemolys. Bilirubin finns mycket sällan i urinen, eftersom det inte passerar genom njurarna, men hemoglobinuri observeras. Mjälten i kroniska fall är ofta förstorad och kan till och med nå mycket betydande storlekar, medan den i andra fall fortfarande är påtaglig. Levern är sällan förstorad.

I blodet i de flesta fall makrocytos observeras, i akuta stadier finns det också många mikrocyter, normoblastos och polykromasi är sällan frånvarande, leukocytos kan nå 30 000, blodplättar är normala. I vissa fall är det dock påtaglig trombocytopeni. Evans förklarar dessa fall med den samtidiga närvaron av antikroppar mot blodplättar, så att det finns både hemolytisk anemi och trombocytopeni på grund av verkan av autoimmuna kroppar - Evans syndrom (Evans). Osmotisk resistens minskar något, men inte i samma utsträckning och inte lika permanent som vid konstitutionell sfärisk cellanemi. Värmebeständighetstestet (Hegglin-Maier) efter 6 timmar kan också ge en lätt hemolys (egen observation), men i mindre utsträckning än vid Marchiafavas anemi. Hemosiderin finns även i urinen (egen observation).

Antikroppar lokaliserad på ytan av erytrocyter, kan vara både i ett statiskt och i ett fritt tillstånd i blodplasma. Beroende på antikropparnas tillstånd utförs en direkt eller indirekt Coombs-reaktion. Om det finns anledning att tro att antikroppar fixeras på ytan av röda blodkroppar görs ett direkt Coombs-test. I detta fall passerar testet i ett steg - läggs till antiglobulinserum. Om ofullständiga antikroppar finns på ytan av röda blodkroppar, agglutination erytrocyter.

Indirekt reaktion

Den indirekta Coombs-reaktionen fortskrider i 2 steg. Först är det nödvändigt att på konstgjord väg genomföra sensibilisering erytrocyter. För att göra detta inkuberas erytrocyterna och blodserumet som studeras, vilket orsakar fixering av antikroppar på ytan av erytrocyterna. Därefter utförs det andra steget av Coombs-testet - tillsats av antiglobulinserum.

utfällningsreaktion - RP (från Lat praecipilo till utfällning) är bildandet och utfällningen av ett komplex av ett lösligt molekylärt antigen med antikroppar i form av grumlighet, kallad fällning. Det bildas genom att blanda antigener och antikroppar i ekvivalenta mängder, ett överskott av en av dem minskar nivån av bildandet av immunkomplexet. Fällningsreaktionen sätts i provrör (ringfällningsreaktion), i geler, näringsmedia etc. Varianter av fällningsreaktionen i en halvflytande gel av agar eller agaros används i stor utsträckning, dubbel immundiffusion enl. Ouchterlony, radiumimmundiffusion, immunelektrofores och så vidare.

HLA-typning- studie av det huvudsakliga mänskliga histokompatibilitetskomplexet - HLA-komplex. Denna formation inkluderar en region av gener på kromosom 6 som kodar för HLA-antigener involverade i olika immunsvar.

Arbetsuppgifter kl HLA-typning kan vara mycket olika - biologisk identifikation (HLA-typ ärvs tillsammans med föräldrarnas gener), bestämning av anlag för olika sjukdomar, urval av donatorer för organtransplantation - i detta fall jämförs resultaten av HLA-typning av givar- och mottagarvävnader. Med hjälp av HLA-typning bestäms hur lika eller olika makar är vad gäller vävnadskompatibilitetsantigener för att diagnostisera fall av infertilitet.

HLA-typning föreslår HLA-polymorfismanalys och utförs med två metoder - serologiska och molekylärgenetiska. Den klassiska serologiska metoden för HLA-typning är baserad på det mikrolymfocytotoxiska testet, medan den molekylära metoden använder PCR (polymeraskedjereaktion).

Serologiska HLA-typning utförs på isolerade cellpopulationer. Större histbärs huvudsakligen av lymfocyter. Därför används en suspension av T-lymfocyter som huvudbärare av klass I-antigener och en suspension av B-lymfocyter för bestämning av HLA klass II-antigener. Antingen centrifugering eller immunomagnetisk separation används för att isolera de önskade cellpopulationerna från helblod. Man tror att den första metoden kan leda till falskt positiva data, eftersom några av cellerna dör i detta fall. Den andra metoden anses vara mer specifik - medan mer än 95% av cellerna förblir livskraftiga.

Men grunden för att iscensätta ett lymfocytotoxiskt test HLA-typningär ett specifikt serum som innehåller antikroppar mot olika allelvarianter av HLA-antigener I och II klasser. Det serologiska testet låter dig bestämma HLA-typen genom att undersöka vilka av serum som reagerar med lymfocyter och vilka som inte gör det.

Om en reaktion sker mellan celler och serum bildas ett antigen-antikroppskomplex på cellens yta. Efter tillsats av en lösning innehållande komplement inträffar lys och celldöd. Det serologiska testet av HLA-typning utvärderas med hjälp av fluorescensmikroskopi för att bedöma positiva (röd fluorescens) och negativa (grön fluorescens) reaktioner, eller faskontrastmikroskopi för att färga kärnorna i döda celler. Resultatet av HLA-typning härleds med hänsyn till specificiteten hos de reagerade serumen och korsreagerande grupper av antigener, intensiteten av cytotoxicitetsreaktionen.

Nackdelarna med serologiska HLA-typningär närvaron av korsreaktioner, svag antikroppsaffinitet eller lågt uttryck av HLA-antigener, frånvaron av proteinprodukter i ett antal HLA-gener.

Modernare, molekylära metoder HLA-typning redan standardiserade syntetiska prover används, som inte reagerar med antigener på ytan av leukocyter, utan med DNA och direkt indikerar vilka antigener som finns i provet. Molekylära metoder kräver inte levande leukocyter, vilken mänsklig cell som helst kan studeras och några mikroliter blod räcker för att fungera, eller så kan det begränsas till att skrapa från munslemhinnan.

Molekylär genetisk HLA-typning använder PCR-metoden, vars första steg är att erhålla rent genomiskt DNA (från helblod, leukocytsuspension, vävnader).

Därefter kopieras DNA-provet - amplifieras i ett provrör med primers (kort enkelsträngat DNA) specifikt för ett specifikt HLA-lokus. Ändarna av var och en av primerparen måste vara strikt komplementära till en unik sekvens som motsvarar en viss allel, annars sker ingen amplifiering.

Efter PCR, vid upprepad kopiering, erhålls ett stort antal DNA-fragment som kan bedömas visuellt. För att göra detta utsätts reaktionsblandningarna för elektrolys eller hybridisering, och det bestäms om en specifik amplifiering har skett med hjälp av ett program eller en tabell. Resultatet av HLA-typning presenteras i form av en omfattande rapport på gen- och allelnivå. På grund av standardiseringen av de prover som används kan molekylen HLA-typning mer exakt serologiskt. Dessutom ger det mer information (fler nya DNA-alleler) och en högre detaljnivå, eftersom det låter dig identifiera inte bara antigener utan även allelerna själva, som avgör vilket antigen som finns i cellen.

immunlysreaktion. Reaktionen är baserad på specifika antikroppars förmåga att bilda immunkomplex med celler, inklusive erytrocyter, bakterier, vilket leder till aktivering av komplementsystemet längs den klassiska vägen och celllys. Av immunlysreaktionerna används hemolysreaktionen oftast och sällan bakteriolysreaktionen (främst vid differentiering av kolera och koleraliknande vibrios).

hemolysreaktion. Under påverkan av reaktionen med antikroppar i närvaro av komplement förvandlas den grumliga suspensionen av erytrocyter till en ljusröd transparent vätska - "lackblod" på grund av frisättningen av hemoglobin. Vid inställning av en diagnostisk reaktion av komplementfixering (RCC) används hemolysreaktionen som en indikator: för att testa närvaron eller frånvaron (bindningen) av fritt komplement.

Lokal hemolysreaktion i gel(Jerne-reaktion) är en av varianterna av hemolysreaktionen. Det låter dig bestämma antalet antikroppsbildande celler. Antalet celler som utsöndrar antikroppar - hemolysiner, bestäms av antalet hemolysplack som uppträder i en agargel som innehåller erytrocyter, en cellsuspension av den studerade lymfoida vävnaden och komplement.

Immunfluorescensmetod

(RIF, immunofluorescensreaktion) - en metod för att detektera specifik Ag (Ab) med användning av Ab (Ag) konjugerad med fluorokrom. Den har hög känslighet och specificitet. Det används för uttryckliga d-ki-infektioner. sjukdomar (identifiering av det orsakande medlet i forskningsmaterialet), samt för bestämning av antikroppar och ytreceptorer och markörer för leukocyter (immunfenotypning) och andra celler. Direkt I. m. består av bearbetning av ett vävnadssnitt eller utstryk från patologiskt material eller mikrobiellt to-ry with-coy innehållande specifika antikroppar konjugerade med fluorokrom; läkemedlet tvättas för att avlägsna obundna antikroppar och undersöks under ett fluorescerande mikroskop. I positiva fall uppträder ett lysande immunkomplex runt objektets periferi. Kontroll är nödvändig för att utesluta ospecifik luminescens. På indirekt. Dem. i det första steget behandlas ett vävnadssnitt eller utstryk med ett icke-fluorescerande specifikt medel, i det andra steget med ett självlysande medel mot -globuliner från det djuret, som applicerades i det första steget. I ett positivt fall bildas ett lysande komplex bestående av Ar, Am till det och Am mot At (sandwichmetoden). Förutom ett självlysande mikroskop, för att ta hänsyn till RIF under cellfenotypning, lasercellsorterare .

flödescytometri- en metod för optisk mätning av parametrarna för en cell, dess organeller och de processer som sker i den.

Tekniken består i att detektera spridningen av ljus från en laserstråle när en cell passerar genom den i en vätskestråle, och graden av ljusspridning gör att man kan få en uppfattning om cellens storlek och struktur. Dessutom tar analysen hänsyn till nivån av fluorescens av kemiska föreningar som utgör cellen (autofluorescens) eller införs i provet före flödescytometri.

Cellsuspensionen, tidigare märkt med fluorescerande monoklonala antikroppar eller fluorescerande färgämnen, kommer in i vätskeströmmen som passerar genom flödescellen. Villkoren är valda på ett sådant sätt att cellerna radas upp efter varandra på grund av den sk. hydrodynamisk fokusering av en stråle i en stråle. I det ögonblick cellen korsar laserstrålen registrerar detektorerna:

ljusspridning i små vinklar (från 1° till 10°) (denna egenskap används för att bestämma storleken på cellerna).

ljusspridning i en vinkel på 90° (låter dig bedöma förhållandet mellan kärnan / cytoplasman, såväl som cellernas heterogenitet och granularitet).

fluorescensintensitet i flera fluorescenskanaler (från 2 till 18-20) - låter dig bestämma subpopulationssammansättningen av cellsuspensionen, etc.

- en studie som hjälper till att fastställa innehållet av ofullständiga antierytrocytantikroppar i blodet. Ett sådant antiglobulintest låter dig upptäcka antikroppar mot hos gravida kvinnor.

Dessutom tillåter det diagnostisering av hemolytisk anemi hos nyfödda med Rhesus-konflikt i de inledande stadierna. Detta hjälper till att förhindra förstörelsen av röda blodkroppar som är nödvändiga för normal blodbildning. Detta test skapades 1945 av Robert Coombs, varför det fick sitt namn.

Coombs test är en mångsidig studie som möjliggör snabb diagnos av hematopoetiska störningar hos både vuxna och barn.

Det finns följande typer av sådana tester:

1. Direkt Coombs test- låter dig bestämma antikropparna som finns på ytan av röda blodkroppar. Vanligtvis föreskrivs en sådan studie för misstänkt hemolys, autoimmun hemolytisk anemi och andra autoimmuna sjukdomar. Dessutom utförs det efter läkemedelsbehandling med läkemedel baserade på kinin, penicillin eller metyldopa, eller efter en blodtransfusion. För att få mer exakta resultat, innan studien, är det nödvändigt att helt sluta ta mediciner minst 1 vecka i förväg.
2. Indirekt Coombs-test- ett test som kan detektera anti-erytrocytantikroppar i plasma. Det utförs vanligtvis under graviditeten och före en blodtransfusion. Anti-erytrocytantikroppar uppträder i mänskligt blod under reaktiv immunitet eller som en reaktion på vissa läkemedel. För en mer exakt studie utförs flera provtagningar på en gång med ett intervall på 2 timmar.

Indikationer för att utföra

Coombs-testet utförs endast i närvaro av allvarliga indikationer. Detta är en dyr och lång studie, som är ett specifikt test.

Vanligtvis anses följande situationer vara indikationer för dess implementering:

1. Under blodtransfusion. Testet låter dig avgöra om mottagarens blod kommer att slå rot i människokroppen och om donation är möjlig. I det här fallet är det nödvändigt att undersöka materialet från både givaren och mottagaren. Det är viktigt att bestämma antikropparnas natur, för om de är oförenliga i kroppen mot bakgrund av Rhesus-konflikten, förstörs immunsystemet. Detta leder till utvecklingen av allvarliga sjukdomar, och i sällsynta fall till och med döden.
2. Före operation, när det finns risk för blodförlust. Detta görs så att läkaren omedelbart kan injicera lämpligt blod för att återställa kroppen.
3. För att upptäcka Rh-sensibilisering. Rhesus är ett specifikt antigen som förekommer i varje kvinnas kropp under graviditeten. Om mamman har ett positivt Rh, och pappan är negativ, eller vice versa, finns det inget beroende för barnet, han kan ärva vem som helst. Om barnet får motsatt moderns Rh är risken för sensibilisering stor. Detta fenomen kännetecknas av blandningen av mors och barns blod. Detta kan hända både under graviditeten och under förlossningen.

Om en Rhesus-konflikt uppstår i en gravid kvinnas kropp, börjar moderns immunitet att uppfatta hennes foster som en främmande kropp. På grund av detta är risken stor att han börjar attackera honom.

Som ett resultat av sådana handlingar kan barnet utveckla allvarliga patologier. Oftast uppstår erytroblastos - ett fenomen där barnets kropp inte kan producera ett tillräckligt antal röda blodkroppar.

På grund av Rh-konflikten kan dessutom fosterdöd i livmodern eller omedelbart efter födseln inträffa. Med rätt inställning till behandling kan sådana allvarliga konsekvenser lätt undvikas.

Avvikelser från normen

Med ett positivt resultat för Coombs-reaktionen drar läkaren slutsatsen att det finns antikroppar mot röda blodkroppar i blodserumet. Detta tyder på att givarens blod kanske inte är kompatibelt med patientens blod.

Om ett positivt resultat diagnostiseras i en gravid kvinnas kropp med Rh-negativt blod, innehåller hennes kropp antikroppar mot fostrets blod.

Detta indikerar en Rh-konflikt, vilket kräver en extremt noggrann inställning till graviditetshantering av läkaren, såväl som genomförandet av alla instruktioner och rekommendationer från kvinnan.

Om antikroppar finns i barnets blod, diagnostiseras hemolytisk sjukdom hos det nyfödda barnet. I det här fallet utförs en andra studie för att avgöra om det finns en ökning av cittran av antikroppar i blodet hos den blivande mamman eller inte.

Möjliga komplikationer från Coombs test

Coombs test är en ganska säker studie som låter dig diagnostisera ett antal autoimmuna sjukdomar i de inledande stadierna. Det orsakar sällan komplikationer, vanligtvis är negativa konsekvenser förknippade med blodprovstagning.

De består av:

• Blödning om blödningar under huden
• Yrsel och svimning
• Infektiös infektion

7 295