Reacție Coombs directă pozitivă. Testul antiglobulinei. Reacția Coombs directă și indirectă. Cum se face analiza

Un test Coombs este un test clinic de sânge care se face pentru a vedea dacă sângele conține anumiți anticorpi care ar putea să nu fie siguri. Acești anticorpi se lipesc de celulele roșii din sânge și pot invada sistemul imunitar și pot dăuna în alte moduri. În terminologia medicală, acest test se mai numește și test antiglobulină (AGT).

Tipuri de teste Coombs

Există două tipuri de test Coombs - direct și indirect.

Testul Coombs direct, cunoscut și sub numele de direct (DAT), detectează auto-anticorpi care se atașează la suprafața globulelor roșii. Acești anticorpi sunt uneori produși în organism din cauza anumitor boli sau atunci când iau anumite medicamente, cum ar fi procainamida, metildopa sau chinidina.

Acești anticorpi sunt periculoși, deoarece uneori provoacă anemie prin distrugerea globulelor roșii.

Acest test este uneori prescris pentru a diagnostica cauza icterului sau anemiei.

În mod normal, reacția Coombs este negativă.

Pozitiv pentru:

• boala hemolitică a nou-născutului;
• hemoliză autoimună;
• reacții hemolitice de transfuzie;
• anemie hemolitică imună indusă de medicamente.

Testul Coombs indirect, cunoscut și sub denumirea de , este utilizat pentru a detecta anticorpii la celulele roșii din sânge conținute în serul sanguin (serul este lichidul galben limpede din sânge care rămâne după excretarea globulelor roșii și coagulant).

Testul indirect Coombs este utilizat într-o transfuzie de sânge pentru a determina dacă sângele donatorului se potrivește cu cel al primitorului. Acesta se numește test de compatibilitate și ajută la prevenirea oricărei reacții adverse la sângele donatorului. Această analiză este recomandată și femeilor însărcinate. Unele femei au anticorpi IgG care pot traversa placenta în fat și pot dăuna nou-născutului, provocând o boală hemolitică cunoscută sub numele de anemie hemolitică.

Procedură

Sângele este prelevat cu ajutorul unei seringi dintr-o venă, de obicei din dosul mâinii sau în cotul cotului. Locul puncției este dezinfectat complet înainte de aceasta și, după efectuarea unui test de sânge, se aplică tifon curat sau vată.

Sângele rezultat este purificat în laborator, iar celulele roșii din sânge sunt separate. Proba este apoi examinată secvenţial utilizând diferiţi ser şi reactivi Coombs, care este contracarat. Dacă nu există aglutinare (aglomerarea globulelor roșii), aceasta înseamnă un rezultat pozitiv.

Totuși, dacă testul este negativ, înseamnă că există anticorpi în sânge care acționează împotriva globulelor roșii. Acest lucru poate indica diferite boli, cum ar fi anemia (fie naturală sau indusă de medicamente), sifilisul sau infecția cu micoplasmă. După primirea rezultatelor, medicul curant va prescrie tratamentul adecvat.

Video

Pe o farfurie sau lamă de sticlă se aplică cu pipete (diferite!) 1 picătură mare de ser O (I), A (II), B (III). Observând timpul, cu o tijă de sticlă curată sau un unghi curat al lamei de sticlă, picăturile de ser se combină cu picături de sânge. Determinarea durează 5 minute, scuturând placa, apoi se adaugă 1 picătură de soluție salină la fiecare amestec de picături și se evaluează rezultatele. Este mai bine dacă serul este în 2 serii diferite. Rezultatele grupelor de sânge trebuie să se potrivească în ambele serii de ser.

Evaluarea rezultatelor izohemaglutinării:

izohemaglutinare. Cu o reacție pozitivă, în amestec apar mici granule roșii de globule roșii lipite. Boabele se contopesc în boabe mai mari, iar acestea din urmă în fulgi. Serul este aproape decolorat;

cu o reacție negativă, amestecul rămâne uniform colorat roz timp de 5 minute și nu sunt detectate boabe;

când se lucrează cu 3 seruri din grupele O(I), A(II), B(III), sunt posibile 4 combinații de reacții:

1. dacă toate cele 3 seruri au dat o reacție negativă, adică amestecul este colorat uniform în roz - acesta este grupa sanguină O (I);

   dacă numai serul grupului A (II) a dat o reacție negativă, iar serurile O (I) și B (III) au dat o reacție pozitivă, adică au apărut boabe - aceasta este grupa sanguină A (II);

   serul grupului B(II) a dat o reacție negativă, iar serurile grupelor O(I) și A(II) au dat o reacție pozitivă - aceasta este grupa sanguină B(III).

toate cele 3 seruri au dat reacții pozitive - sângele testat din grupul AB (IV). În acest caz, se efectuează un studiu cu serul grupului AB (IV).

Notă! Picăturile de sânge studiat trebuie să fie de 5-10 ori mai mici decât picăturile de ser.

Erori de izohemaglutinare.

Neaglutinarea unde ar trebui să fie și având aglutinarea acolo unde nu ar trebui. Acest lucru se poate datora titrului seric scăzut plus aglutinarea slabă a eritrocitelor.

Prezența aglutinarii acolo unde nu ar trebui să fie- aceasta este pseudoaglutinarea, când grămezi de globule roșii formează „coloane de monede”. Legănarea farfurii sau adăugarea de soluție salină le distruge.

Panaglutinare, când serul lipește toate celulele roșii din sânge, inclusiv propria sa grupă de sânge. Până în minutul 5, semnele de aglutinare dispar.

Există și așa-numita panaglutinare la rece, când eritrocitele se lipesc împreună din cauza temperaturii scăzute a aerului (sub 15 ° C) din cameră.

În toate aceste cazuri, fie se efectuează o reacție repetată, fie conform eritrocitelor standard.

Determinarea afilierii Rh a sângelui

Pentru a determina afilierea Rh, adică pentru a detecta prezența sau absența antigenelor sistemului Rh în sângele oamenilor, se folosesc seruri (reactivi) standard anti-Rhesus, care sunt diferite ca specificitate, adică conțin anticorpi în raport cu diverși antigeni ai acestui sistem. Pentru a determina antigenul Rh 0 (D), serul anti-Rhesus este utilizat cel mai adesea cu adăugarea unei soluții de gelatină 10% sau se folosește un reactiv anti-Rhesus standard preparat în prealabil cu o soluție de poliglucină 33%. Pentru a obține rezultate mai precise ale studiului, precum și pentru a detecta antigenele altor sisteme serologice, se folosește testul Coombs (este și foarte sensibil în determinarea compatibilității sângelui transfuzat). Pentru studiu se folosește sânge nativ sau preparat cu un fel de conservant. În acest caz, sângele trebuie spălat din conservant cu un volum de zece ori soluție izotonică de clorură de sodiu. La determinarea afilierii Rh- Rh 0 (D) trebuie utilizate două probe de ser sau reactiv anti-Rhesus din două serii diferite și, în același timp, se folosesc eritrocite standard obținute din sânge din sânge de la indivizi Rh-pozitiv (Rh +) și Rh-negativ (Rh -). La determinarea altor izoantigene, trebuie utilizate în mod corespunzător eritrocitele de control, care conțin sau nu au antigenul împotriva căruia anticorpii sunt direcționați în serul standard.

Aglutininele de căldură incomplete sunt cel mai frecvent tip de anticorp care poate provoca dezvoltarea anemiei hemolitice autoimune. Acești anticorpi aparțin IgG, rar - IgM, IgA.

TEST COOMBS

Testul lui Coombs: o introducere. Testul Coombs este o metodă de diagnostic de laborator bazată pe reacția de hemaglutinare.

Principala metodă de diagnosticare a anemiei hemolitice autoimune este testul Coombs. Se bazează pe capacitatea anticorpilor specifici imunoglobulinelor (în special IgG) sau componentelor complementului (în special C3) de a aglutina eritrocitele acoperite cu IgG sau C3.

Legarea IgG și C3b la eritrocite este observată în anemia hemolitică autoimună și anemia hemolitică imună indusă de medicamente. Testul Coombs direct. Testul Coombs direct este utilizat pentru a detecta anticorpii sau componentele complementului fixate pe suprafața globulelor roșii. Se realizează astfel:

Pentru a obține anticorpi la imunoglobulinele umane (ser antiglobuline) sau complement (ser anticomplementar), animalul este imunizat cu ser uman, imunoglobuline sau complement uman. Serul obtinut de la animal este purificat de anticorpi la alte proteine.

Eritrocitele pacientului sunt spălate cu ser fiziologic pentru a elimina complet serul, care neutralizează anticorpii la imunoglobuline și complement și poate provoca un rezultat fals negativ.

Dacă anticorpii sau componentele complementului sunt fixați pe suprafața eritrocitelor, adăugarea de antiglobuline sau de ser anticomplementar determină aglutinarea eritrocitelor.

Testul Direct Coombs este utilizat în următoarele cazuri:

hemoliză autoimună.

Boala hemolitică a nou-născutului.

Anemia hemolitică imună indusă de medicamente.

Reacții hemolitice de transfuzie. Testul Coombs indirect. Testul indirect Coombs detectează anticorpi la eritrocite din ser. Pentru a face acest lucru, serul pacientului este incubat cu eritrocite donatoare de grup 0, apoi se efectuează un test Coombs direct.

Testul Coombs indirect este utilizat în următoarele cazuri:

Determinarea compatibilității individuale a sângelui donatorului și al primitorului.

Detectarea aloanticorpilor, inclusiv a anticorpilor care provoacă reacții hemolitice de transfuzie.

Determinarea antigenelor eritrocitare de suprafață în genetica medicală și medicina legală.

Confirmarea gemenilor identici în transplant de măduvă osoasă.

Pentru a efectua un test biologic, sângele este transfuzat cât mai repede posibil (de preferință într-un jet). După transfuzia a 25 ml de sânge, tubul sistemului este prins cu o clemă. Apoi se face o pauză de 3 minute, timp în care se monitorizează starea destinatarului. Pentru a stabili o probă biologică, se injectează de trei ori 25 ml de sânge. La sfârșitul testului (după transfuzia primilor 75 ml de sânge în doze fracționate de 25 ml la intervale de 3 minute), sistemul este ajustat la viteza de transfuzie necesară. Când transfuzi un pacient cu mai mult de un flacon de sânge, este necesar să scoți acul din venă. În acest caz, acul este scos din eprubeta flaconului în care s-a scurs sângele și este introdus în următorul flacon. Tubul de sistem (cauciuc sau plastic) este prins în acest moment cu o clemă. Dacă în timpul unei transfuzii de sânge este nevoie de administrarea intravenoasă a oricărui alt medicament către primitor, aceasta se face prin străpungerea tubului de cauciuc al sistemului. Puncturile unui tub de plastic sunt inacceptabile, deoarece nu cad. După fiecare transfuzie de sânge, pacientul trebuie monitorizat pentru a identifica și a elimina în timp util posibilele complicații, inclusiv reacțiile alergice. Temperatura corpului trebuie măsurată la 2 ore după terminarea transfuziei de sânge. Odată cu creșterea măsurării sale, trebuie repetată în următoarele 4 ore la fiecare oră. La fel de importantă este monitorizarea urinării și a compoziției urinei, ceea ce face posibilă stabilirea prezenței unei reacții toxice post-transfuzie. Debutul oliguriei și anuriei după transfuzia de sânge, prezența celulelor sanguine și a proteinelor în urină sunt un indiciu direct al dezvoltării hemolizei post-transfuzie.

Anemie hemolitică, cauzate de corpurile autoimune care sunt îndreptate împotriva propriilor lor celule roșii din sânge, nu au fost elucidate cu precizie. Cu toate acestea, se presupune că unii factori (de exemplu, un virus, o proteină anormală) modifică eritrocitele în așa fel încât organismul le percepe deja ca „ceva străin” și ajunge să le rezolve cu ajutorul anticorpilor. Potrivit unei alte teorii, anticorpii direcționați împotriva eritrocitelor apar aproape întâmplător în timpul formării de corpuri anormale de proteine ​​​​plasmatice în anumite boli. Astfel de corpuri proteice, la fel de „accidental”, pot da reacții care pot fi folosite pentru a stabili un diagnostic (de exemplu, pneumonia virală este cunoscută pentru a da o reacție Wassermann pozitivă, o reacție Paul-Bunnel pozitivă și o reacție de aglutinare la rece).

Sunt două tipuri majore de autoanticorpi cu anemie hemolitică și anume: anticorpi caldi (reacționează la 37 °) și anticorpi reci (a căror reactivitate crește pe măsură ce temperatura se apropie de zero). Anticorpii caldi sunt mai frecventi decât cei reci. Dacie a descoperit că hemolizinele calde sunt de două ori mai frecvente decât hemolizinele reci. Hemolizinele și aglutininele nu sunt anticorpi fundamental diferiți: diferă doar prin natura acțiunii lor. Aglutininele aglutinează celulele roșii din sânge, iar hemolizinele le fac mai susceptibile la procesul complex de hemoliză (complement!). Autoanticorpii, fixându-se pe eritrocite, formează un complex eritrocit-globină. Acest complex este detectat folosind testul Coombs antiglobină.

Testul Coombs efectuat cu ser Coombs, pentru prepararea căruia iepurele este sensibilizat cu ser uman, împotriva căruia se formează anticorpi în serul iepurelui. Sub acțiunea unui astfel de ser sensibilizat asupra eritrocitelor umane, aglutinarea acestora are loc dacă receptorii eritrocitari sunt ocupați de anticorpi de blocare. Deoarece acești anticorpi de blocare sunt derivați din ser uman, ei se aglutinează cu ser de iepure sensibilizat la plasma umană și care conține precipitine. Această reacție se numește testul Coombs; pentru anemia hemolitică pe bază de corpuri autoimune (Lo tit) este aproape specifică (pentru detalii, vezi Maier).

În general, cu anemie hemolitică cu o încălcare primară a eritrocitelor, testul Coombs este negativ, iar cu cele dobândite, este pozitiv. Cu toate acestea, există câteva excepții de la această regulă: un test Coombs fals pozitiv a fost găsit în timpul crizelor de anemie hemolitică constituțională, și într-o măsură mai mică - și uneori după splenectomie, cu poliartrita reumatică, sarcoidoză, după transfuzii de sânge frecvente și cu lupus eritematos sistemic. Desigur, cu anemie hemolitică dobândită fără formarea de corpuri autoimune, este negativă.

Anemie hemolitică cauzate de corpurile autoimune pot fi împărțite în:
a) formele acute, subacute și cronice, precum și pe
b) idiopatică cu etiologie necunoscută și c) simptomatică [pneumonie virală (doar aglutinine reci), leucemie limfatică cronică, reticulosarcom, limfosarcom, lupus eritematos sistemic (predominant cald, mai rar aglutinine reci), sifilis (aglutinine rece), sifilis (aglutinine rece) (agglutinine ovariene).
c) simptomatice [pneumonie virală (numai aglutinine reci), leucemie limfatică cronică, reticulosarcom, limfosarcom, lupus eritematos sistemic (predominant cald, mai rar aglutinine reci), sifilis (aglutinine reci), tumori ovariene (Miescher et al.)).

Clinica de anemie hemolitică, care se dezvoltă sub influența organismelor autoimune, este foarte diversă și, prin urmare, este greu de realizat tabloul clinic general al acestora. Persoanele de toate vârstele și ambele sexe sunt afectate în mod egal. Cu toate acestea, formele idiopatice par să fie mai frecvente la femei (Sacks și Workman).

Tabloul clinic al formei idiopatice variază în funcție de severitatea bolii. În cazurile cronice, debutul este gradual, boala durează mulți ani cu exacerbări frecvente. Severitatea anemiei variază în funcție de gradul de hemoliză. Se observă picături de hemoglobină de până la 10%, în alte cazuri hemoglobina este reținută pentru o perioadă lungă de timp cu 50-60%. Intensitatea reticulocitozei și a colorării icterice a pielii și a serului corespunde gradului de hemoliză. Bilirubina se găsește foarte rar în urină, deoarece nu trece prin rinichi, dar se observă hemoglobinurie. Splina în cazurile cronice este adesea mărită și poate ajunge chiar la dimensiuni foarte semnificative, în timp ce în alte cazuri este încă palpabilă. Ficatul este rar mărit.

În sânge în majoritatea cazurilor se observă macrocitoză, în stadiile acute există și multe microcite, normoblastoza și policromazia sunt rareori absente, leucocitoza poate ajunge la 30.000, trombocitele sunt normale. În unele cazuri, totuși, există trombocitopenie marcată. Evans explică aceste cazuri prin prezența simultană a anticorpilor împotriva trombocitelor, astfel încât există atât anemie hemolitică, cât și trombocitopenie datorită acțiunii corpurilor autoimune – sindromul Evans (Evans). Rezistența osmotică este ușor redusă, dar nu în aceeași măsură și nu la fel de permanent ca în anemia cu celule sferice constituționale. Testul de rezistență la căldură (Hegglin-Maier) după 6 ore poate da și o ușoară hemoliză (observare proprie), dar într-o măsură mai mică decât în ​​anemia Marchiafava. Hemosiderina se găsește și în urină (observare proprie).

Anticorpi situat pe suprafața eritrocitelor, poate fi atât în ​​stare statică, cât și în stare liberă în plasma din sânge. În funcție de starea anticorpilor, se realizează o reacție Coombs directă sau indirectă. Dacă există motive să credem că anticorpii sunt fixați pe suprafața globulelor roșii, se efectuează un test Coombs direct. În acest caz, testul trece într-o singură etapă - se adaugă ser antiglobulinic. Dacă pe suprafața globulelor roșii sunt prezenți anticorpi incompleti, aglutinare eritrocite.

Reacție indirectă

Reacția indirectă Coombs are loc în 2 pași. În primul rând, este necesar să se implementeze artificial sensibilizare eritrocite. Pentru a face acest lucru, se incubează eritrocitele și serul sanguin studiat, ceea ce determină fixarea anticorpilor pe suprafața eritrocitelor. După aceea, se efectuează a doua etapă a testului Coombs - adăugarea de ser antiglobulină.

reacție de precipitare - RP (din Lat praecipilo to precipitate) este formarea si precipitarea unui complex de antigen molecular solubil cu anticorpi sub forma de turbiditate, numit precipitat. Se formează prin amestecarea antigenelor și anticorpilor în cantități echivalente, un exces al unuia dintre aceștia reduce nivelul de formare a complexului imun. Reacția de precipitare se pune în eprubete (reacție de precipitare inelară), în geluri, medii nutritive etc. Sunt utilizate pe scară largă varietati ale reacției de precipitare într-un gel semi-lichid de agar sau agaroză, imunodifuziune dublă conform Ouchterlony, imunodifuzie de radiu, imunoelectroforeză si etc.

Tastarea HLA- studiul complexului principal de histocompatibilitate umană - complexul HLA. Această formațiune include o regiune de gene de pe cromozomul 6 care codifică antigenele HLA implicate în diferite răspunsuri imune.

Sarcini la Tastarea HLA pot fi foarte diferite - identificarea biologică (tipul HLA se moștenește împreună cu genele parentale), determinarea predispoziției la diferite boli, selecția donatorilor pentru transplantul de organe - în acest caz, se compară rezultatele tipării HLA a țesuturilor donatorului și primitorului. Cu ajutorul tipării HLA se determină cât de asemănători sau diferiți sunt soții în ceea ce privește antigenele de compatibilitate tisulară pentru a diagnostica cazurile de infertilitate.

Tastarea HLA sugerează Analiza polimorfismului HLAși se realizează prin două metode - serologică și genetică moleculară. Metoda serologică clasică de tipare HLA se bazează pe testul microlimfocitotoxic, în timp ce metoda moleculară utilizează PCR (reacția în lanț a polimerazei).

Serologic Tastarea HLA efectuate pe populații de celule izolate. Antigenele complexe majore de histocompatibilitate sunt transportate în principal de limfocite. Prin urmare, o suspensie de limfocite T este utilizată ca purtători principali ai antigenelor de clasa I și o suspensie de limfocite B pentru determinarea antigenelor HLA clasa II. Se utilizează fie centrifugarea, fie separarea imunomagnetică pentru a izola populațiile de celule dorite din sângele integral. Se crede că prima metodă poate duce la date fals pozitive, deoarece unele dintre celule mor în acest caz. A doua metodă este recunoscută ca fiind mai specifică - în timp ce mai mult de 95% din celule rămân viabile.

Dar baza pentru stabilirea unui test limfocitotoxic Tastarea HLA este un ser specific care conține anticorpi la diferite variante alelice ale antigenelor HLA clase I și II. Testul serologic vă permite să determinați tipul HLA examinând care dintre seruri reacționează cu limfocitele și care nu.

Dacă are loc o reacție între celule și ser, pe suprafața celulei se formează un complex antigen-anticorp. După adăugarea unei soluții care conține complement, au loc liza și moartea celulară. Testul serologic de tipare HLA este evaluat folosind microscopia cu fluorescență pentru a evalua reacțiile pozitive (fluorescență roșie) și negative (fluorescență verde), sau microscopia cu contrast de fază pentru a colora nucleele celulelor moarte. Rezultatul tipării HLA este derivat ținând cont de specificitatea serurilor reacționate și a grupurilor de antigene cu reacție încrucișată, de intensitatea reacției de citotoxicitate.

Dezavantajele serologice Tastarea HLA sunt prezența reacțiilor încrucișate, afinitatea slabă a anticorpilor sau expresia scăzută a antigenelor HLA, absența produselor proteice într-un număr de gene HLA.

Metode moleculare mai moderne Tastarea HLA se folosesc probe sintetice deja standardizate, care nu reacţionează cu antigenele de pe suprafaţa leucocitelor, ci cu ADN-ul şi indică direct ce antigene sunt prezente în probă. Metodele moleculare nu necesită leucocite vii, orice celulă umană poate fi studiată și câțiva microlitri de sânge sunt suficienți pentru a funcționa sau se poate limita la răzuirea mucoasei bucale.

Genetică moleculară Tastarea HLA folosește metoda PCR, al cărei prim pas este obținerea ADN-ului genomic pur (din sânge integral, suspensie de leucocite, țesuturi).

Apoi proba de ADN este copiată - amplificată într-o eprubetă folosind primeri (ADN monocatenar scurt) specifici unui locus HLA specific. Capetele fiecărei perechi de primeri trebuie să fie strict complementare unei secvențe unice corespunzătoare unei anumite alele, altfel nu are loc amplificarea.

După PCR, în timpul copierii repetate, se obține un număr mare de fragmente de ADN, care pot fi evaluate vizual. Pentru a face acest lucru, amestecurile de reacție sunt supuse electrolizei sau hibridizării și se determină dacă a avut loc o amplificare specifică folosind un program sau un tabel. Rezultatul tipării HLA este prezentat sub forma unui raport cuprinzător la nivel de genă și alelic. Datorită standardizării probelor utilizate, molecular Tastarea HLA mai precis serologic. În plus, oferă mai multe informații (mai multe alele ADN noi) și un nivel mai ridicat de detaliu, deoarece vă permite să identificați nu numai antigenele, ci și alelele în sine, care determină ce antigen este prezent pe celulă.

reacție de liză imună. Reacția se bazează pe capacitatea anticorpilor specifici de a forma complexe imune cu celulele, inclusiv eritrocite, bacterii, ceea ce duce la activarea sistemului complementului de-a lungul căii clasice și la liza celulară. Dintre reacțiile de liză imună, cel mai des este utilizată reacția de hemoliză și rar reacția de bacterioliză (în principal în diferențierea holerei și vibrioanele asemănătoare holerei).

reacție de hemoliză. Sub influența reacției cu anticorpi în prezența complementului, suspensia tulbure de eritrocite se transformă într-un lichid transparent roșu strălucitor - „sânge lac” datorită eliberării hemoglobinei. La stabilirea unei reacții de diagnostic de fixare a complementului (RCC), reacția de hemoliză este utilizată ca indicator: pentru a testa prezența sau absența (legarea) complementului liber.

Reacție locală de hemoliză în gel(reacția Jerne) este una dintre variantele reacției de hemoliză. Vă permite să determinați numărul de celule care formează anticorpi. Numărul de celule care secretă anticorpi - hemolizine, este determinat de numărul de plăci de hemoliză care apar într-un gel de agar ce conține eritrocite, o suspensie celulară a țesutului limfoid studiat și complement.

Metoda imunofluorescenței

(RIF, reacție de imunofluorescență) - o metodă pentru detectarea Ag specific (Ab) folosind Ab (Ag) conjugat cu fluorocrom. Are sensibilitate și specificitate ridicate. Este folosit pentru infecții expres d-ki. boli (identificarea agentului cauzal în materialul de cercetare), precum și pentru determinarea anticorpilor și a receptorilor de suprafață și a markerilor leucocitelor (imunofenotiparea) și a altor celule. Direct I. m. constă în prelucrarea unei secțiuni de țesut sau frotiu din material patologic sau to-ry microbian cu coy care conține anticorpi specifici conjugați cu fluorocrom; medicamentul este spălat pentru a elimina anticorpii nelegați și examinat la microscop fluorescent. În cazuri pozitive, la periferia obiectului apare un complex imunitar luminos. Controlul este necesar pentru a exclude luminiscența nespecifică. La indirect. Lor.în prima etapă, o secțiune de țesut sau frotiu este tratată cu un agent specific nefluorescent, în a doua etapă, cu un agent luminiscent împotriva -globulinelor acelui animal, care a fost aplicat în prima etapă. Într-un caz pozitiv, se formează un complex luminos, format din Ar, Am to it și Am contra At (metoda sandwich). În plus față de un microscop luminiscent, pentru a ține cont de RIF în timpul fenotipării celulare, sortator de celule laser .

citometrie în flux- o metodă de măsurare optică a parametrilor unei celule, ai organelelor acesteia și a proceselor care au loc în ea.

Tehnica constă în detectarea împrăștierii luminii dintr-un fascicul laser atunci când o celulă trece printr-un jet de lichid, iar gradul de dispersie a luminii permite să ne facem o idee despre dimensiunea și structura celulei. În plus, analiza ține cont de nivelul de fluorescență al compușilor chimici care alcătuiesc celula (autofluorescență) sau introduși în probă înainte de citometria în flux.

Suspensia celulară, marcată anterior cu anticorpi monoclonali fluorescenți sau coloranți fluorescenți, intră în fluxul de lichid care trece prin celula de curgere. Condițiile sunt selectate în așa fel încât celulele să se alinieze una după alta datorită așa-numitelor. focalizarea hidrodinamică a unui jet într-un jet. În momentul în care celula traversează fasciculul laser, detectoarele înregistrează:

împrăștierea luminii la unghiuri mici (de la 1° la 10°) (această caracteristică este folosită pentru a determina dimensiunea celulelor).

împrăștierea luminii la un unghi de 90° (vă permite să judecați raportul dintre nucleu / citoplasmă, precum și eterogenitatea și granularitatea celulelor).

intensitatea fluorescenței în mai multe canale de fluorescență (de la 2 la 18-20) - vă permite să determinați compoziția subpopulației suspensiei celulare etc.

- un studiu care ajută la determinarea conținutului de anticorpi antieritrocitari incompleti din sânge. Un astfel de test antiglobulină vă permite să detectați anticorpii la femeile însărcinate.

În plus, permite diagnosticarea anemiei hemolitice la nou-născuții cu conflict Rhesus în stadiile inițiale. Acest lucru ajută la prevenirea distrugerii celulelor roșii din sânge necesare formării normale a sângelui. Acest test a fost creat în 1945 de Robert Coombs, motiv pentru care și-a primit numele.

Testul Coombs este un studiu versatil care permite diagnosticarea în timp util a tulburărilor hematopoietice atât la adulți, cât și la copii.

Există următoarele tipuri de astfel de teste:

1. Testul Coombs direct- vă permite să determinați anticorpii localizați pe suprafața globulelor roșii. De obicei, un astfel de studiu este prescris pentru suspiciunea de hemoliză, anemie hemolitică autoimună și alte boli autoimune. În plus, se efectuează după terapia medicamentoasă cu medicamente pe bază de chinină, penicilină sau metildopa sau după o transfuzie de sânge. Pentru a obține rezultate mai precise, înainte de studiu, este necesar să opriți complet administrarea medicamentelor cu cel puțin 1 săptămână înainte.
2. Testul Coombs indirect- un test care poate detecta anticorpii antieritrocitari din plasmă. De obicei, se efectuează în timpul sarcinii și înainte de o transfuzie de sânge. Anticorpii anti-eritrocitari apar în sângele uman în timpul imunității reactive sau ca reacție la anumite medicamente. Pentru un studiu mai precis, se efectuează mai multe prelevări simultan la un interval de 2 ore.

Indicatii de realizare

Testul Coombs se efectuează numai în prezența unor indicații serioase. Acesta este un studiu costisitor și lung, care este un test specific.

De obicei, următoarele situații sunt considerate indicații pentru implementarea sa:

1. În timpul transfuziei de sânge. Testul vă permite să determinați dacă sângele primitorului va prinde rădăcini în corpul uman și dacă donarea este posibilă. În acest caz, este necesar să se examineze materialul atât al donatorului, cât și al primitorului. Este important să se determine natura anticorpilor, deoarece dacă aceștia sunt incompatibili în organism pe fondul conflictului Rhesus, sistemul imunitar este distrus. Acest lucru duce la dezvoltarea unor boli grave și, în cazuri rare, chiar la moarte.
2. Înainte de operație, când există riscul pierderii de sânge. Acest lucru se face astfel încât medicul să poată injecta imediat sânge adecvat pentru a restabili corpul.
3. Pentru a detecta sensibilizarea Rh. Rhesus este un antigen specific care apare în corpul fiecărei femei în timpul sarcinii. Dacă mama are Rh pozitiv, iar tatăl negativ, sau invers, nu există dependență pentru copil, acesta poate moșteni pe oricine. Dacă copilul primește Rh matern opus, riscul de sensibilizare este mare. Acest fenomen se caracterizează prin amestecarea sângelui mamei cu copilul. Acest lucru se poate întâmpla atât în ​​timpul gestației, cât și în timpul nașterii.

Dacă un conflict Rhesus are loc în corpul unei femei însărcinate, atunci imunitatea mamei începe să-și perceapă fătul ca pe un corp străin. Din această cauză, există un risc mare ca el să înceapă să-l atace.

Ca urmare a unor astfel de acțiuni, copilul poate dezvolta patologii grave. Cel mai adesea, apare eritroblastoza - un fenomen în care corpul copilului nu poate produce un număr suficient de globule roșii.

În plus, din cauza conflictului Rh, poate apărea moartea fătului în uter sau imediat după naștere. Cu o abordare corectă a tratamentului, astfel de consecințe grave pot fi evitate cu ușurință.

Abateri de la norma

Cu un rezultat pozitiv pentru reacția Coombs, medicul ajunge la concluzia că în serul sanguin există anticorpi împotriva globulelor roșii. Acest lucru sugerează că sângele donatorului ar putea să nu fie compatibil cu sângele pacientului.

Dacă un rezultat pozitiv este diagnosticat în corpul unei femei însărcinate cu sânge Rh negativ, atunci corpul ei conține anticorpi la sângele fătului.

Acest lucru indică un conflict Rh, care necesită o abordare extrem de atentă a managementului sarcinii de către medic, precum și implementarea tuturor instrucțiunilor și recomandărilor de la femeie.

Dacă în sângele copilului sunt prezenți anticorpi, este diagnosticată boala hemolitică a nou-născutului. În acest caz, se efectuează un al doilea studiu pentru a determina dacă există sau nu o creștere a citarului de anticorpi în sângele viitoarei mame.

Posibile complicații de la testul Coombs

Testul Coombs este un studiu destul de sigur care vă permite să diagnosticați o serie de boli autoimune în stadiile inițiale. Rareori provoacă complicații, de obicei consecințele negative sunt asociate cu prelevarea de sânge.

Ele constau in:

• Sângerare dacă hemoragii sub piele
• Amețeli și leșin
• Infecție infecțioasă

7 295