Metode suplimentare de analiză a sângelui pentru determinarea hematocritului reticulocitelor. Cum se numără reticulocitele. Cauze ale scăderii numărului de reticulocite, tratament

… determinarea numărului de reticulocite este un indicator important al funcției măduvei osoase.

Reticulocite- sunt forme tinere de eritrocite formate din normoblaste după pierderea nucleului lor (eritrocite nenucleare, imature), a căror maturare are loc în 24-48 de ore de la intrarea în sângele periferic din măduva osoasă și reflectând capacitatea de regenerare. a măduvei osoase (adică activitatea eritropoetică a măduvei osoase).

MORFOLOGIA ȘI SEMNIFICAȚIA CLINICĂ A RETICULOCITELOR

Reticulocitele sunt de obicei mai mari decât eritrocitele mature. Citoplasma reticulocitelor conține o plasă bazofilă (reticul) sub formă de boabe mici, filamente individuale, glomeruli etc., care este un ribozom și mitocondrii agregate.

După gradul de maturitate, se disting 5 tipuri de reticulocite:
(1) reticulocite care au nucleu (eritronormoblaste), iar granularitatea lor este situată sub forma unei corole dense în jurul nucleului;
(2) reticulocite care au o substanță granulară-reticulară sub formă de minge sau de bulgăre;
(3) reticulocite, având o granularitate sub forma unei rețele dense;
(4) reticulocite, având o substanță granular-reticulată sub formă de fire individuale;
(5) reticulocite care conțin granule individuale.

Tine minte: în mod normal, conform lui G. A. Alekseev, aproape 80% dintre reticulocite aparțin grupelor IV - V.

În mod normal, sângele periferic conține 0,2 - 1% reticulocite ("%" - conținutul de reticulocite din numărul total de eritrocite). Acest indicator reflectă posibilitatea ca reticulocitelor să intre în sângele periferic și transformarea lor ulterioară în eritrocite mature (maturare), ca o variantă a normei, deja în sângele periferic (în decurs de câteva ore). ( ! ) În eritropoieza normală, majoritatea globulelor roșii trec prin stadiul de reticulocite în măduva osoasă.

Se observă o creștere a reticulocitelor lor în sângele periferic (reticulocitoză).:
cu anemie hemolitică (numărul de reticulocite poate ajunge până la 60% sau mai mult (în special în creștere în timpul crizelor hemolitice);
cu pierdere acută de sânge (3-5 zile după pierderea de sânge, apare o criză de reticulocite), inclusiv o creștere a reticulocitelor, ceea ce face posibilă suspectarea sângerării latente (de exemplu, la pacienții cu ulcer peptic al tractului gastrointestinal, febră tifoidă) ;
cu malarie;
cu policitemie;
în tratamentul anemiei feriprive cu fier (la câteva zile (3 - 10) după începerea tratamentului antianemic al anemiei pernicioase);
cu o lipsă acută de oxigen;
cu metastaze tumorale la măduva osoasă.

Ar trebui amintit că, în cazul distrugerii crescute a eritrocitelor, proporția de reticulocite poate depăși 50% din cauza creșterii artificiale a numărului de reticulocite (după cum s-a menționat mai devreme, proporția de reticulocite este calculată în% din totalul eritrocitelor). În astfel de cazuri, pentru a evalua severitatea anemiei, se utilizează „indicele reticular”, care se calculează prin formula: (% reticulocite x hematocrit) / 45 x 1,85, unde 45 este hematocritul normal, 1,85 este numărul de zile necesare pentru ca noi reticulocite să intre în sânge. Dacă index< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, atunci există o creștere a formării globulelor roșii.

Adevărata reticulocitoză: o creștere a numărului de reticulocite din sângele periferic cu o creștere simultană a numărului de reticulocite din măduva osoasă.

Falsă reticulocitoză: absența unui număr crescut de reticulocite în măduva osoasă cu creșterea numărului acestora în sângele periferic (ceea ce indică o creștere a leșierii reticulocitelor din măduva osoasă în sângele periferic).

Factorul care duce la creșterea valorii conținutului % de reticulocite poate fi administrarea următoarelor medicamente: corticotropină, medicamente antimalarice, medicamente antipiretice, furazolidonă (la copii mici), levodopa.

Tine minte: reticulocitoza, fără o reacție eritronormoblastică corespunzătoare a măduvei osoase, se observă atunci când anumite părți ale acesteia sunt iritate de metastaze canceroase sau focare inflamatorii.

Se observă scăderea numărului sau absența reticulocitelor (reticulocitopenie).:
cu anemii regenerative aplastice și hipoplazice;
cu anemie cauzată de deficit de fier, vitamina B12, acid folic (anemie microcito-hipocromă și megaloblastică);
cu talasemie;
cu anemie sideroblastică;
cu metastaze canceroase la os;
cu radiații și radioterapie;
în tratamentul citostaticelor;
cu boli autoimune ale sistemului hematopoietic;
cu boală de rinichi;
cu alcoolism;
cu recurența anemiei Addison-Birmer;
cu mixedem.

Factori care distorsionează rezultatul unui studiu de laborator al conținutului % de reticulocite:
alegerea greșită a anticoagulantului sau amestecarea insuficientă a sângelui cu anticoagulant;
strângerea prelungită a mâinii cu un garou;
luarea de sulfonamide (sunt posibile rezultate atât subestimate, cât și supraestimate);
transfuzie de sânge cu puțin timp înainte de studiu;
hemoliza unei probe de sânge.

Indicații pentru numirea unei analize pentru reticulocite:
evaluarea activității eritropoiezei în condiții însoțite de hemoliză sau pierderi de sânge;
evaluarea capacității măduvei osoase de a se regenera după terapia citotoxică și transplantul de măduvă osoasă;
evaluarea restabilirii sintezei eritropoietinei după transplantul de rinichi;
controlul dopajului la sportivi (luând eritropoietină);
diagnosticul hematopoiezei ineficiente sau producția redusă de globule roșii;
diagnosticul diferențial al anemiei;
detectarea afectarii capacitatii de regenerare a maduvei osoase in deficit de fier, vitamine B12, B6, folati, cupru si monitorizarea terapiei adecvate;
evaluarea răspunsului la terapia cu eritropoietină, eritrosupresori.

METODE DE NUMĂRARE A NUMĂRULUI DE RETICULOCITE

(1) Numărarea numărului de reticulocite dintr-un frotiu după colorarea lor cu coloranți speciali.

Aceasta metoda este cea mai folosita metoda in practica datorita faptului ca este simpla, destul de ieftina si nu necesita echipament special costisitor, prin urmare poate fi folosita in orice laborator de diagnostic clinic.

Principiul metodei se bazează pe detectarea unei substanțe cu ochiuri granulare a reticulocitelor în timpul colorării supravitale cu coloranți alcalini (soluție saturată de albastru de cresil strălucitor în alcool absolut / soluție de azur I / soluție de azur II) cu numărarea lor în continuare într-un sânge. frotiu. Colorarea reticulocitelor se efectuează fie pe sticlă, fie într-o eprubetă.

Numărarea se efectuează cu ajutorul unui microscop: frotiurile preparate prin una dintre metodele de mai sus sunt microscopate cu o lentilă de imersie; în frotiu, reticulocitele și eritrocitele sunt colorate gălbui-verzui, substanța granular-filamentoasă din reticulocite este albastră (când este colorată cu azur II și albastru cresil strălucitor) sau albăstrui-violet (când este colorată cu azur I).

(2) Numărarea numărului de reticulocite folosind microscopie fluorescentă.

Această metodă este simplă și necesită puțin timp, mai precisă decât metoda convențională, deoarece microscopia fluorescentă dezvăluie cele mai mici granule ale substanței reticulate-filamentoase, dar este posibilă numai cu un microscop luminiscent și coloranți speciali și, prin urmare, este disponibilă numai pentru câteva laboratoare.

Principiul numărării numărului de reticulocite folosind microscopia fluorescentă se bazează pe utilizarea capacității substanței reticulocitelor de a fluoresce după tratamentul sângelui cu portocaliu de acridină. Sângele este amestecat cu portocaliu de acridină într-o eprubetă sau mixer într-un raport de 1 parte de sânge și 10 părți de colorant (amestecul poate fi păstrat nu mai mult de 5 ore). Amestecul se agită timp de 2 minute, o picătură din amestec se aplică pe o lamă de sticlă și se acoperă cu o lamă. În acest caz, lichidul nu trebuie să treacă dincolo de lamelă.

Microscopic folosind un filtru de lumină ZhS-17. În preparat, eritrocitele au un contur verde închis și nu fac fluorescență, în timp ce în reticulocite, substanța granular-reticulară strălucește în roșu aprins, ceea ce facilitează numărarea reticulocitelor. În sângele stabilizat cu heparină sau citrat de sodiu nu se observă fluorescența reticulocitelor.

(3) Numărarea automată a reticulocitelor cu un analizor hematologic.

În analizoarele hematologice moderne, tehnologia de numărare a celulelor sanguine se bazează pe metoda conductometrică propusă de H. Wallace și Joseph R. Culter în 1947. Principiul metodei este de a număra numărul și de a determina natura impulsurilor care apar atunci când un celula trece printr-un orificiu de diametru mic (deschidere), pe ambele părți ale căruia există doi electrozi izolați unul de celălalt. Fiecare trecere a unei celule prin deschidere este însoțită de apariția unui impuls electric, care este înregistrat de un senzor electronic. Împărțirea celulelor în categorii (eritrocite, leucocite, trombocite, sediment) este efectuată de dispozitiv pe baza analizei amplitudinii impulsurilor primite.Pentru a determina concentrația de celule, este suficient să treceți un anumit volum al eșantionați prin canal și numărați numărul de impulsuri care sunt generate.

Trebuie remarcat faptul că, pe lângă parametrul clasic al reticulocitelor - conținutul relativ (%) al reticulocitelor (RET%, procent din reticulocite), determinat folosind metodele 1 și 2 de diagnostic de laborator, ca urmare a apariției hematologice de înaltă tehnologie. analizoare (metoda 3), a devenit posibilă obținerea (de exemplu, folosind un colorant fluorescent patentat pentru analizorul Sysmex-XT-2000i) parametrii informativi suplimentari pentru reticulocite:
reticulocite cu conținut scăzut de ARN, cel mai matur (LFR%, fracțiuni de reticulocite cu fluorescență scăzută, fracție de reticulocite cu fluorescență scăzută);
reticulocite cu un continut mediu de ARN(MFR%, fracțiuni de reticulocite cu fluorescență medie) - fracțiune de reticulocite cu fluorescență medie);
reticulocite cu un continut ridicat de ARN(HFR%, fracții reticulocite cu fluorescență ridicată) - fracțiune reticulocite cu fluorescență ridicată);
fracțiunea imatură a reticulocitelor(IRF%, fracția de reticulocite imature).

Diferențierea reticulocitelor, pe baza gradului de maturitate și, în consecință, a conținutului de acizi nucleici, este o reflectare a activității hematopoietice a măduvei osoase.

Metoda (analizor Sysmex-XT-2000i). În celula de flux, celulele traversează fasciculul unui laser semiconductor, în timp ce fasciculul este împrăștiat la unghiuri mari și mici, iar colorantul fluorescent este excitat. Acest lucru face posibilă determinarea diferitelor stadii de maturitate ale reticulocitelor prin conținutul de ARN din celule și intensitatea luminiscenței acestora. Numărarea automată a reticulocitelor este foarte precisă (se numără mai mult de 30.000 de globule roșii) și reproductibilă (coeficientul de variație este de aproximativ 6%). Această tehnologie oferă o numărare precisă a reticulocitelor chiar și la concentrații extrem de scăzute.

Pentru a efectua aceste studii, sunt necesare următoarele echipamente la locul de muncă:

1. Ochelari subiect.
2. Sticlă șlefuită.
3. Cameră umedă.
4. Mixere pentru globule albe și roșii.
5. Ochelari cu lună.
6. Microscop.
7. Albastru cresyl strălucitor.
8. Alcool etilic absolut.
9. Alcool metilic sau un amestec de Nikiforov (părți egale de alcool etilic 96 ° și eter).
10. Reactiv Guyem sau soluție salină 3%.
11. Ulei de imersie.
12. Set de instrumente pentru înțepare cu degetul.

În funcție de structura substanței granulare-reticulate, se disting cinci tipuri de reticulocite: în formă de praf, în formă de corolă, incomplet reticulate, complet reticulate și bile (vezi Fig.).

Prelevarea de sânge în scopul numărării reticulocitelor din acesta se efectuează conform instrucțiunilor medicului. Pentru a număra numărul de reticulocite, acestea sunt colorate. În acest scop, utilizați:

1. Metoda de colorare intravitală (supravitală) a reticulocitelor.
2. Metoda de colorare supravitală simultană a trombocitelor și reticulocitelor conform lui Alekseev.

Să luăm în considerare aceste metode mai detaliat.

Colorarea intravitală (supravitală) a reticulocitelor

Această metodă necesită următorii reactivi:

1. Alcool etilic absolut: sulfatul de cupru anhidru (alb) calcinat se pune într-un vas uscat de sticlă cu plută și se toarnă 1/4 din alcool absolut. Conținutul este agitat. Alcoolul absolut (alcool care nu contine apa) se poate obtine prin deshidratarea alcoolului cu sulfat de cupru, calcinat in prealabil. Deshidratarea este oprită când sulfatul de cupru încetează să devină albastru.
2. Soluție saturată de albastru de cresil-brilliant în alcool absolut: la 80 ml de alcool absolut se adaugă 1 g de albastru-cresil-brilliant.
3. Azur I.

Tehnica de colorare în viu și de numărare a reticulocitelor

Lamele sunt pre-acoperite cu o soluție saturată de diamant-cresyl blue. O picătură proaspătă de sânge este întinsă pe o lamă cu vopsea, ca în prepararea unui frotiu de sânge. Preparatul se pune imediat timp de 6-8 minute intr-o camera umeda, dupa care se usuca la aer si se microscopeaza (ocular 7X, obiectiv 90X cu condensator ridicat). Reticulocitele sunt numărate exact în același mod ca și cu un limitator de câmp vizual. Reticulocitele colorate cu albastru-cresil strălucitor sunt de culoare verde pal, cu o plasă albastră sau albastră (vezi Fig.).

În loc de albastru-crezil strălucitor pentru colorarea reticulocitelor, se poate folosi vopsea azur I (1 g azur I la 40 ml alcool absolut; ținut la temperatura camerei 2 zile), conform prescripției Magina.

Colorarea supravitală simultană a trombocitelor și reticulocitelor conform lui Alekseev

Pentru această metodă, se folosește vopseaua lui Alekseev. Se toarnă 1 g de vopsea azure II într-un balon cu o capacitate de 100 ml și se adaugă un reactiv preparat într-un balon separat cu următoarea compoziție: 5 g citrat de sodiu, 4 g clorură de sodiu și 45 ml apă distilată. Conținutul balonului se încălzește lent pe o grilă de azbest cu agitare constantă, fără a fi adus la fierbere. Se răcește, filtrează. Filtratul este folosit ca soluție de vopsea de lucru.

Tehnica de colorare și numărare simultană a trombocitelor și reticulocitelor

Vopseaua lui Alekseev este trasă în mixer pentru leucocite până la semnul de 1,0, vârful este șters de pe vopsea și așezat pe masă. Produceți o injecție mai adâncă decât de obicei în deget. Sângele este extras până la 4/5 din volumul părții extinse a mixerului, asigurându-vă că nu pătrund bule de aer în el. Sângele este suflat rapid din partea capilară a mixerului pe un tampon de bumbac, iar restul conținutului în orificiul lamei de sticlă. Din puț, lichidul este din nou tras în mixer. Repetând această manipulare de două sau trei ori, sângele este amestecat cu reactivul. După ce a introdus lichidul în mixer pentru ultima dată, acesta este lăsat în poziție orizontală timp de 15-30 de minute pentru a colora reticulocitele și trombocitele. Apoi mixerul este agitat timp de un minut și se eliberează 1-2 picături. Frotiurile subțiri sunt preparate din picăturile ulterioare. Preparatele se usucă la aer, se fixează cu alcool metilic și se colorează cu vopsea Romanovsky la o diluție de 1-2 picături la 1 ml de apă timp de 35-45 de minute. Vopseaua este spălată cu apă, iar petele sunt uscate și microscopic. Într-un frotiu colorat conform lui Alekseev, reticulocitele sunt roz cu o plasă albastră (vezi fig.), iar trombocitele sunt albăstrui-liliac.

Reticulocitele și trombocitele sunt numărate simultan pentru 1000 de eritrocite, în același mod cum este descris în subiectul „Plachete”. Rezultatele pentru reticulocite sunt exprimate în ppm; trombocitele sunt calculate la 1 mm3 de sânge (numărul de eritrocite numărate la un anumit pacient este luat în considerare pentru calcul).

În sângele indivizilor sănătoși, există 5-10% reticulocite.

Recenziile postate pe acest site sunt opiniile personale ale persoanelor care le-au scris. Nu vă automedicați!

Reticulocite (semnificație clinică și diagnostic de laborator)

(1) reticulocite care au nucleu (eritronormoblaste), iar granularitatea lor este situată sub forma unei corole dense în jurul nucleului;

(2) reticulocite care au o substanță granulară-reticulară sub formă de minge sau de bulgăre;

(3) reticulocite, având o granularitate sub forma unei rețele dense;

(4) reticulocite, având o substanță granular-reticulată sub formă de fire individuale;

(5) reticulocite care conțin granule individuale.

Cu anemie hemolitică (numărul de reticulocite poate ajunge până la 60% sau mai mult (în special în creștere în timpul crizelor hemolitice);

În cazul pierderii acute de sânge (timp de 3-5 zile după pierderea de sânge, apare o criză de reticulocite), inclusiv o creștere a reticulocitelor, face posibilă suspectarea sângerării latente (de exemplu, la pacienții cu ulcer peptic al tractului gastrointestinal, febră tifoidă);

În tratamentul anemiei feriprive cu fier (la câteva zile (3 - 10) după începerea tratamentului antianemic al anemiei pernicioase);

Cu o lipsă acută de oxigen;

Cu metastaze ale tumorilor în măduva osoasă.

formă anormală de hemoglobină;

Cu anemii regenerative aplastice și hipoplazice;

Cu anemie cauzată de lipsa de fier, vitamina B12, acid folic (anemie microcito-hipocromă și megaloblastică);

Cu anemie sideroblastică;

Cu metastaze canceroase la os;

Cu boala de radiații și radioterapie;

În tratamentul citostaticelor;

Cu boli autoimune ale sistemului hematopoietic;

Cu boli de rinichi;

Cu recurența anemiei Addison-Birmer;

Alegerea greșită a anticoagulantului sau amestecarea insuficientă a sângelui cu anticoagulant;

Strângerea prelungită a mâinii cu un garou;

Recepția sulfonamidelor (sunt posibile rezultate atât subestimate, cât și supraestimate);

transfuzie de sânge cu puțin timp înainte de studiu;

Hemoliza unei probe de sânge.

Evaluarea activității eritropoiezei în condiții însoțite de hemoliză sau pierderi de sânge;

Evaluarea capacității măduvei osoase de a se regenera după terapia citotoxică și transplantul de măduvă osoasă;

Evaluarea restabilirii sintezei eritropoietinei după transplantul de rinichi;

Controlul dopajului la sportivi (luând eritropoietină);

Diagnosticul hematopoiezei ineficiente sau producția redusă de globule roșii;

Diagnosticul diferențial al anemiei;

Detectarea unei încălcări a capacității de regenerare a măduvei osoase cu o deficiență de fier, vitamine B12, B6, folat, cupru și monitorizarea terapiei adecvate;

Evaluarea răspunsului la terapia cu eritropoietină, eritrosupresori.

Reticulocite cu conținut scăzut de ARN, cele mai mature (LFR%, fracțiuni de reticulocite cu fluorescență scăzută, fracție de reticulocite cu fluorescență scăzută);

Reticulocite cu un conținut mediu de ARN (MFR%, fracțiuni de reticulocite cu fluorescență medie) - o fracțiune de reticulocite cu fluorescență medie);

Reticulocite cu un conținut ridicat de ARN (HFR%, fracții de reticulocite cu fluorescență ridicată) - o fracțiune de reticulocite cu fluorescență ridicată);

Fracția de reticulocite imature (IRF%, Fracția de reticulocite imature).

Numărarea reticulocitelor într-un frotiu după colorarea lor cu coloranți speciali

Numărarea reticulocitelor într-un frotiu după colorarea lor cu coloranți speciali este în practică cea mai utilizată metodă de numărare a numărului de reticulocite. Acest lucru se datorează faptului că metoda este simplă, destul de ieftină și nu necesită echipament special costisitor și, prin urmare, poate fi utilizată în orice laborator de diagnostic clinic.

Principiul metodei

Identificarea substanței cu ochiuri granulare a reticulocitelor cu colorare supravitală cu coloranți alcalini cu numărarea ulterioară a acestora într-un frotiu de sânge.

Reactivi

Puteți folosi unul dintre următorii coloranți:

1. Soluție saturată de albastru de cresil strălucitor în alcool absolut (pentru a prepara alcool absolut, este necesar să reziste etanol 96% în mai multe schimbări de pulbere de sulfat de cupru calcinat). Pentru 100 ml de alcool absolut se iau 1,2 g de vopsea.
2. Soluție Azure I: Azur I - 1 g, oxalat de amoniu - 0,4 g, clorură de sodiu - 0,8 g, alcool etilic 96% - 10 ml, apă distilată - 90 ml. Soluția de vopsea într-o sticlă închisă se pune timp de 2-3 zile într-un termostat la 37 ° C și se agită periodic puternic. Apoi se răcește la temperatura camerei și se filtrează prin hârtie de filtru. Soluția se păstrează într-un recipient de sticlă de culoare închisă. Dacă apare un precipitat, vopseaua trebuie filtrată din nou.
3. Soluție Azure II: Azur II - 1 g, citrat de sodiu - 5 g, clorură de sodiu - 0,4 g, apă distilată - 45 ml. Soluția se lasă într-un termostat la 37 ° C timp de 2 zile, amestecând ocazional. Pentru a accelera dizolvarea, vopseaua poate fi încălzită la foc mic timp de 15 până la 20 de minute, fără a fi adusă la fierbere. Se răcește la temperatura camerei și se filtrează. A se păstra într-un recipient de sticlă închisă la culoare.

Echipament special

Progresul definirii

Colorarea reticulocitelor se efectuează fie pe sticlă, fie într-o eprubetă.

Colorarea reticulocitelor pe sticlă

La colorarea reticulocitelor pe sticlă, o lamă de sticlă bine spălată și degresată este încălzită peste flacăra unui arzător. O picătură dintr-unul dintre coloranții enumerați mai sus se aplică pe sticlă cu o baghetă de sticlă și se prepară un frotiu de vopsea cu sticlă șlefuită. Un grafic de sticlă este utilizat pentru a marca partea geamului pe care este aplicată o pată de vopsea. În această formă, sticla poate fi pregătită pentru utilizare ulterioară și depozitată într-un loc uscat și întunecat. O cameră umedă este pregătită înainte de analiză. De obicei, în acest scop, ei folosesc un vas Petri cu rulouri de vată umezită sau hârtie de filtru așezate de-a lungul marginilor. O picătură de sânge este aplicată pe un frotiu de vopsea, se prepară un frotiu subțire din acesta și se pune imediat într-o cameră umedă timp de 3-10 minute. Frotiurile sunt apoi uscate la aer.

Colorarea reticulocitelor in vitro

Colorarea reticulocitelor in vitro diferă atunci când se utilizează diferiți coloranți.

Metoda 1 - colorarea reticulocitelor in vitro cu albastru de cresil strălucitor.

Înainte de utilizare, pregătiți o soluție de lucru de albastru cresil strălucitor într-o eprubetă pe bază de o picătură de soluție de oxalat de potasiu 1% 4 picături de soluție de vopsea albastru cresil strălucitor. În vopsea se adaugă 0,04 ml de sânge (două pipete până la marcajul 0,02). Amestecul se amestecă bine, dar ușor și se lasă timp de 30 de minute. Apoi amestecați din nou și pregătiți frotiuri subțiri.

Metoda 2 - colorarea reticulocitelor in vitro cu azur II.

Puneți 0,05 ml de soluție de colorant azure II și 0,2 ml de sânge într-o eprubetă. Amestecul se amestecă bine și se lasă timp de 20 - 30 de minute. Se amestecă din nou și se prepară frotiuri subțiri.

Metoda 3 - colorarea reticulocitelor in vitro cu azur I.

Puneți 0,3 - 0,5 ml de soluție de vopsea azur I și 5 - 6 picături de sânge cu o pipetă din aparatul Panchenkov într-o eprubetă. Eprubeta se inchide cu dop de cauciuc, amestecul se amesteca bine dar usor si se lasa 1-1,5 ore (reticulocitele se pateaza mai bine la o expunere de 1,5-3 ore). Se amestecă și se prepară mișcări subțiri.

Coloranții gata preparati pentru reticulocite sunt în prezent disponibili comercial. Colorarea reticulocitelor cu ajutorul lor se efectuează conform instrucțiunilor atașate.

Numărul de reticulocite.

Frotiurile preparate prin una dintre metodele de mai sus sunt microscopate cu o lentilă de imersie. În frotiu, reticulocitele și eritrocitele sunt colorate cu gălbui-verzui, substanța granular-filamentoasă din reticulocite este albastră (când este colorată cu azur II și albastru cresil strălucitor) sau albăstrui-violet (când este colorată cu azur I).

Fotografii cu reticulocite:

Găsiți câmpuri vizuale în care eritrocitele sunt localizate separat. În aceste câmpuri vizuale este necesar să se numere cel puțin 1000 de eritrocite și să se noteze între ele numărul de eritrocite care conțin o substanță granular-filamentoasă. O precizie mai mare se obține la numărarea pentru 2000 - 3000 de eritrocite.

Datorită faptului că în câmpul vizual se află un număr mare de eritrocite, ceea ce îngreunează numărarea, este necesară limitarea (reducerea) câmpului vizual. Pentru a face acest lucru, puteți utiliza fie un ocular special, în care puteți reduce câmpul vizual la dimensiunea necesară, fie o „fereastră” specială (un cerc cu un diametru puțin mai mic decât este decupat din hârtie ocularul, se decupează un mic romb în centrul cercului și se introduce fereastra rezultată în ocular).

Numărul de reticulocite numărate este exprimat la 100 (în procente) sau la 1000 (în ppm) eritrocite.

Exemplu: La numărarea a 1000 de eritrocite într-un frotiu, s-a dezvăluit că 15 din 1000 de eritrocite au o substanță cu ochiuri granulare de un grad sau altul, adică sunt reticulocite. Prin urmare, numărul de reticulocite în acest caz este de 1,5% sau 15‰.

Literatură:

• Manual „Metode de laborator de cercetare în clinică” editat de Menshikov V.V. - Moscova, „Medicina”, 1987
• Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. și coautorii - „Studii clinice de laborator” - Moscova, „Medicina”, 1984

Numărarea numărului de reticulocite folosind microscopie fluorescentă

Metoda de numărare a numărului de reticulocite prin microscopia fluorescentă este simplă și necesită puțin timp, mai precisă decât metoda convențională, deoarece microscopia fluorescentă dezvăluie cele mai mici granule ale substanței reticulat-filamentoase.

Reticulocite

Reticulocitele sunt globule roșii tinere formate după pierderea nucleilor de către normoblaste. O trăsătură caracteristică a reticulocitelor este prezența în citoplasma lor a unei substanțe granular-filamentoase (reticul), reprezentând ribozomi și mitocondrii agregate.

Incluziuni patologice în eritrocite

Corpurile lui Jolly (corpurile lui Howell-Jolly) sunt mici incluziuni rotunde, violet-roșu, cu o dimensiune de µm, găsite 1 (rar 2-3) într-un eritrocit. Sunt rămășițele nucleului după îndepărtarea RES acestuia. Sunt depistați cu hemoliză intensivă și „supraîncărcare” de RES, după splenectomie, cu anemie megaloblastică.

Studiul citochimic al lipidelor

Studiul citochimic al lipidelor se bazează pe utilizarea coloranților care se dizolvă în grăsimi (Sudan III, Sudan IV, Sudan negru etc.). Pentru a identifica grăsimea neutră, se folosește Sudan III, care colorează grăsimea portocalie. Lipoizii sunt detectați mai bine cu negru Sudan (colorare neagră).

Analiza urinei conform lui Nechiporenko

Metoda Nechiporenko în diagnosticul de laborator intern este cea mai comună metodă pentru determinarea cantitativă a elementelor formate în urină. Această metodă este cea mai simplă, accesibilă oricărui laborator și convenabilă în practica ambulatorie și are, de asemenea, o serie de avantaje față de alte metode cantitative cunoscute pentru studierea sedimentului urinar. Conform metodei Nechiporenko, numărul de elemente formate (eritrocite, leucocite și cilindri) este determinat în 1 ml de urină.

©18 Diagnosticare de laborator

Reticulocite - ce este într-un test de sânge? Indicatori de normă și desemnare

Un reticulocit este un precursor al unui eritrocit, adică este un eritrocit într-o formă tânără. În sângele unei persoane sănătoase, conținutul lor este de 0,2-1,2%. Acest raport reflectă conținutul de reticulocite din sânge în raport cu eritrocite. Se coace 4-5 zile.

Noțiuni de bază

O trăsătură caracteristică a formelor tinere de eritrocite este că există o substanță granulară-filamentoasă în citoplasmă, care este un ribozom și mitocondrii agregate. Această substanță poate fi detectată folosind o metodă specială de colorare a frotiurilor de sânge. Această colorare a reticulocitelor se numește supravitală, adică este produsă fără fixarea prealabilă a celulelor.

Grupuri de reticulocite

În total, experții disting cinci grupuri principale de reticulocite. Ele diferă în reticulul reticular. Densitatea și vârsta sa sunt invers proporționale: cu cât ochiurile sunt mai groase, cu atât sunt mai tinere. Să ne dăm seama care este cel mai tânăr reticulocit.

Aceasta este o celulă care are o plasă sub formă de minge groasă. Aceste celule aparțin primului grup. Reticulocitele de o formă mai matură apar ca o substanță care are o plasă clar distinsă. În grupele a patra și a cincea, este reprezentată de fire și boabe individuale. Cel mai adesea, sângele oamenilor sănătoși conține reticulocite din ultimele grupuri, adică mai mature. De regulă, ele reprezintă aproximativ 80% din restul. Cu regenerarea îmbunătățită, care este caracteristică unor patologii, crește numărul de reticulocite din primele trei grupuri. Aceste patologii includ:

Criza reticulocitelor care însoțește anemia cu deficit de B12.

Funcții pe care le îndeplinesc reticulocitele

Un reticulocit este, de asemenea, un eritrocit. Se caracterizează prin aceeași funcție ca și pentru eritrocite. Adică, celulele transferă și molecule de oxigen către diferite țesuturi și organe, dar eficiența acestui proces este mult mai mică decât atunci când oxigenul este transferat de către eritrocitele mature. Reticulocitele pot adsorbi moleculele de fier conținute în hemoglobină. Acest lucru este posibil datorită receptorilor sensibili la transferină. De ce se efectuează un număr de reticulocite? Mai multe despre asta mai târziu.

Mecanism de prelevare a probelor de sânge

Se prelevează o probă de sânge pentru a determina acest indicator ca parte a unei analize generale. Dacă este necesar să se determine nivelul reticulocitelor, atunci medicul care a prescris analiza indică în direcție necesitatea numărării suplimentare.

Această analiză nu necesită pregătire specială, dar se ia în mod tradițional pe stomacul gol dimineața. În același timp, dacă este nevoie, atunci poate fi predat în orice moment al zilei. Sângele pentru analiză trebuie luat dintr-un deget, studiul acestuia se efectuează în laborator, în departamentul de hematologie.

Numărarea numărului de reticulocite se efectuează într-un frotiu colorat supravital. Se folosește metoda microscopică, adică numărul lor este pur și simplu numărat prin plasarea unei probe de sânge la microscop. Până în prezent, există o metodă hardware de numărare. Este folosit de laboratoarele moderne.

Denumirea reticulocitelor într-un test de sânge este RET.

Efectuarea unei analize

Există mai multe metode pentru a efectua un astfel de studiu:

• Sticla se spala, se usuca si se incalzeste cu un arzator special. Apoi, se aplică unul dintre cei trei coloranți, apoi se adaugă o picătură de sânge, după care se face un frotiu subțire. Paharul este plasat într-o cutie Petri sau altă cameră pentru un anumit timp, apoi este uscat la aer proaspăt.
• Dacă se folosește o eprubetă, atunci se pune o substanță colorantă în ea și se adaugă acolo o picătură de sânge. Amestecul trebuie amestecat. Timp de așteptare - de la 20 de minute la 3 ore, depinde de ce reactiv este utilizat. Apoi amestecați din nou lichidul care se află în eprubetă, se iau frotiuri din acesta.

Este dificil de spus care metodă determină rezultate mai precise. Amândoi sunt buni în felul lor, dar medicul poate considera necesar să efectueze analiza într-un anumit mod, apoi trebuie să o îndrepte în direcția.

Indicatori

Când se calculează nivelul reticulocitelor, diferențele de gen în normă contează abia după 12 ani. Până la această vârstă, norma la copiii de ambele sexe este aceeași. În jurul vârstei de aproximativ un an, fetele încep menstruația, care este regulată. Ca urmare a pierderii lunare de sânge, gama de fluctuații în celulele eritroide se extinde.

1. La nou-născuți, norma este în intervalul de la 0,15 la 1,5%.

2. La copiii cu vârsta de două săptămâni - de la 0,45 la 2,0%.

3. La copiii cu vârsta de una până la două luni - de la 0,25 la 0,95%.

4. La copiii cu vârsta de șase luni - de la 0,2 la 1,0%.

5. La copiii cu vârsta între doi și șase ani - de la 0,25 la 0,75%.

6. La copiii cu vârsta cuprinsă între șase și doisprezece ani - de la 0,25 la 1,3%.

7. La bărbații mai mari de doisprezece ani - de la 0,25 la 1,7%.

8. La femeile de peste doisprezece ani - de la 0,12 la 2,1%.

Ce înseamnă situația când reticulocitele sunt crescute?

O creștere a numărului de reticulocite din sânge

În cazul anemiei de diverse etimologii, determinarea numărului de reticulocite joacă un rol deosebit. Dacă conținutul lor este crescut în sânge, atunci această patologie se numește reticulocitoză. Dacă creșterea este însoțită de o creștere a nivelului de hemoglobină, atunci aceasta indică faptul că măduva osoasă are o bună capacitate de regenerare. Acest lucru se poate întâmpla dacă sunt prezenți următorii factori:

Anemia hemolitică de diverse etimologii. Este o serie de boli care se caracterizează prin distrugerea globulelor roșii. Acest fenomen se numește hemoliză. În acest caz, conținutul de reticulocite din sânge poate ajunge la 60%. Dacă apare o criză hemolitică, această cifră poate fi exacerbată.

Otrăvirea cu hemotoxină care provoacă hemoliză. Hemotoxinele includ veninul de viperă și unele medicamente care sunt folosite pentru a trata eritremia. Toxinele malariei sunt, de asemenea, capabile să provoace hemoliză.

Terapia cu levodopa pentru boala Parkinson.

Utilizarea pe termen lung a anumitor medicamente antiinflamatoare și antipiretice.

Terapia cu medicamentul „Eritropoietina” boli anemice.

Metastaze ale măduvei osoase.

Perioada de recuperare după radiații sau terapie chimică.

Reticulocitoza poate fi falsă și adevărată.

De ce să faci un test de reticulocite? Această întrebare este adesea pusă.

Reticulocitoză falsă și adevărată

Reticulocitoza adevărată se caracterizează printr-o creștere a numărului de reticulocite tinere din sânge, care este însoțită de o creștere a numărului lor în măduva osoasă.

Reticulocitoza falsă se caracterizează printr-o creștere a numărului de reticulocite exclusiv în sângele periferic, în timp ce în măduva osoasă nivelul acestora rămâne normal sau ușor redus.

Tarife reduse

Procesul de reducere a numărului de reticulocite se observă cu inhibarea eritropoiezei. Apare ca urmare a următorilor factori:

Utilizarea pe termen lung a sulfonamidelor.

Luarea anumitor medicamente, cum ar fi cloramfenicol sau carbamazepina.

Boli infecțioase cronice.

Unele boli renale severe care afectează eritropoieza.

Mixedemul sau alte disfuncții tiroidiene.

Tumori în măduva osoasă.

Am examinat ce este un reticulocit. Aceasta este o globulă roșie tânără din sângele uman.

Motivele creșterii reticulocitelor, cum se determină funcționalitatea sistemului hematopoietic?

Uneori, la prescrierea unui examen clinic, un test de sânge general poate indica separat RTC sau RET - abrevieri care arată conținutul reticulocitelor. Sunt celule nenucleate care preced eritrocitele (globule roșii) în timpul formării lor. Reticulocite în testul de sânge, numărul și raportul lor cu eritrocite reflectă starea și funcționalitatea reproductivă a măduvei osoase, precum și întregul sistem hematopoietic.

Certificat medical

Puteți defini în detaliu ce sunt reticulocitele astfel: sunt celule rotunde sau în formă de stea care se formează în măduva osoasă și se transformă în globule roșii sub influența hormonului glicoproteic eritropoietina.

Culoarea reticulocitelor este de obicei roz cu o nuanță albastră. Caracteristica lor distinctivă față de forma ulterioară este prezența în structura ARN rezidual, mitocondrii și alte organite care arată ca formațiuni granulare și filamentoase, a căror pierdere indică transformarea într-o celulă matură.

Obligațiile funcționale ale reticulocitelor coincid cu eritrocite - de a transporta oxigen, dar cu mult mai puțină eficiență datorită conținutului scăzut de hemoglobină din ele. Ele sunt concentrate în principal în măduva osoasă roșie, oasele plate și tubulare și doar celulele roșii mature intră în sânge. Dar o mică fracțiune de reticulocite imature este permisă și în fluxul sanguin periferic, ceea ce indică activarea procesului de producere a eritrocitelor (eritropoieza).

Procesul de formare a sângelui

Eritropoieza începe cu transformarea unui eritroblast, o celulă care conține un nucleu, dar fără hemoglobină, într-un pronormblast. În plus, în seria eritroide se formează un eritroblast bazofil, care are deja elementele hemoglobinizării.

Pe măsură ce eritrocitele ancestrale acumulează substanța care reține oxigenul (hemoglobina), celula trece prin stadiile de normoblast policromatofil și apoi oxifil. În această perioadă, nucleul este încă conservat, a cărui involuție duce la formarea unui eritrocit direct tânăr - un reticulocit, care are deja capacitatea de a reține și de a transporta oxigenul și dioxidul de carbon.

Globulele roșii tinere rămân în locul formării lor până la 40 de ore, după care o mică parte din ele, sub influența eritropoietinei, intră în vasele de sânge, unde se mișcă liber timp de 1,5 sau 2 zile. În acest timp, celula pierde reticulul (formațiuni filamentoase reziduale) și se transformă într-un eritrocit.

Etapele dezvoltării reticulocitelor

În sânge, reticulocitele trec prin cinci etape de maturare pe măsură ce reticulul involuează:

1. stadiu zero - când substanța bazofilă (substanță intracelulară reticulata) are forma unui nucleu, adică acumularea de granularitate arată ca un fel de corolă;
2. prima etapă - substanța bazofilă (BS) capătă o structură de plasă sub formă de minge;
3. a doua etapă - rețeaua granulară este distribuită uniform pe celulă;
4. a treia etapă - BV arată ca fire separate;
5. a patra etapă – BV este distribuită sub formă de boabe mici de-a lungul periferiei celulei.

Într-un organism sănătos, reticulocitele din sânge ar trebui să apară numai în stadiile III și IV de maturare (80 la sută) și 0 - II - în copii unice. Dar moartea excesivă a globulelor roșii sau înfometarea de oxigen stimulează producția crescută de eritropoietină de către rinichi, ceea ce duce la eliberarea celulelor imature de toate etapele și chiar a normoblastelor în vase.

Test de sânge pentru reticulocite

Numărarea reticulocitelor pe un frotiu de sânge nu este obligatorie pentru examenul hematologic, dar face parte din evaluarea clinică generală. Doar atunci când apar anumite suspiciuni, medicul face o desemnare specială în analiză.

Motivele studiului

Motivele pentru testarea cantității de RTC din sânge sunt verificarea activității măduvei osoase și a rinichilor în producția de celule sanguine și eritropoietina în astfel de cazuri:

• cu suspiciune de anemie de diverse origini;
• dacă este necesar, controlul terapiei medicamentoase pentru deficit de fier, vitamina B12 și acid folic;
• pentru monitorizare la administrarea de medicamente care conțin eritropoietină, eritrosupresoare;
• cu sângerare externă severă sau suspiciune de interne;
• din cauza necesității de a lua medicamente care neutralizează toxinele ca urmare a mușcăturilor de insecte otrăvitoare sau șerpi;
• pentru a controla producția de globule roșii în timpul transplantului de măduvă osoasă sau de rinichi;
• pentru definirea cancerului.

Ultimul punct este legat de particularitățile metastazelor unor tumori canceroase în organele care formează sânge.

Metoda de detectare

Dacă nucleul este pierdut, numai coloranții acizi pot fi aplicați celulelor sanguine. Prin colorarea unui frotiu de sânge sunt indicate elemente din seria eritroide, care sunt apoi detectate cu ajutorul microscopiei cu lumină. Pentru a izola reticulocitele din masa totală a eritrocitelor, este necesar să se utilizeze preparate speciale care schimbă culoarea structurii granulare a celulelor.

Procesul de detectare în sine constă în amestecarea plasmei sanguine cu colorant strălucitor de albastru cresil sau portocaliu de acridină in vitro (in vitro) sau pe sticlă în proporții: 1 parte de sânge la 10 părți de substanță.

Metodele pe sticlă și in vitro sunt fundamental diferite. În primul caz, frotiurile de sânge amestecate cu colorant sunt scufundate într-un mediu umed timp de 10 minute, după care sunt uscate și celulele sunt numărate la microscop. In a doua varianta, compozitia amestecata in eprubeta se lasa pana la 3 ore, apoi se reamesteca, se unge si se numara.

Când celulele stelate ale reticulocitelor devin vizibile și se determină gradul de maturitate a acestora (în funcție de structura BV colorată), se pot obține informații despre starea măduvei osoase.

Indicatori admisibili

Nivelul normal al reticulocitelor corespunde procesului de formare a sângelui într-un organism sănătos. Pentru a organiza datele, se folosește un tabel special, în care intervalele normale sunt clasificate în funcție de vârsta și sexul unei persoane.

Norma reticulocitelor din sânge la copii

Norma reticulocitelor la copii variază în funcție de perioada specifică de formare a sistemului hematopoietic. Deci, la nou-născuții cu vârsta de până la 14 zile, rata acceptabilă este de la 0,15 la 1,5 la sută în raport cu celulele roșii din sânge. Valorile normale pentru bebeluși de până la două luni sunt de la 0,45 la 2,1 la sută, iar până la șase luni - 0,25 - 0,9 la sută. La un copil de la șase luni la un an, valorile de la 0,2 la 1% sunt considerate sănătoase și se stabilizează până la vârsta de șase ani. În plus, intervalul se restrânge: de la 7 la 12 ani, variază de la 0,2 la 1,3 la sută.

Reticulocite în sânge la adulți

Conținutul suplimentar admisibil de reticulocite în sânge depinde mai mult de sexul copilului decât de vârstă și corespunde indicatorilor adulților. Acest lucru se datorează debutului ciclului menstrual la fete, care implică pierderi lunare de sânge și, în consecință, o creștere a producției de celule sanguine în această perioadă. Indicatori normativi:

• nivelul acceptabil de globule roșii tinere din sângele femeilor și fetelor tinere de la vârsta de 13 ani va fi de la 0,12 la 2,05 la sută (de la 1,2 la 20 ppm, respectiv);
• numărul de reticulocite la bărbați variază în mod normal între 0,24 și 1,7 la sută din masa totală a eritroidei.

Deci, la un adult, se stabilește o gamă constantă de concentrație permisă de celule sanguine tinere, care conțin o substanță granulară. În același timp, creșterea reculocitelor sau o criză de reticulocite indică anumite tulburări în funcționarea sistemului hematopoietic.

Creșterea reticulocitelor

Reticulocitele crescute (sau altfel reticulocitoza) pot fi atât pozitive, cât și negative pentru subiect. Un număr crescut de celule sanguine imature apare în cazuri de:

• Cu rezultate pozitive ale terapiei cu preparate care conțin fier, vitamina B12 și acid folic, care apar de obicei după o săptămână.
• La completarea volumului sanguin după pierderi semnificative de sânge.
• Cu rezultate pozitive în tratamentul bolilor oncologice prin medicamente anticancerigene sau radioterapie.

Important! Reticulocitoza se observă cu deficit de oxigen la o înălțime considerabilă deasupra nivelului mării.

Valorile negative ale reticulocitozei includ:

• Consecințele unor boli precum febra tifoidă, care provoacă sângerări interne.
• Reticulocitele sunt crescute în timpul intoxicației cu otrăvuri chimice sau agenți străini.
• Reticulocitoza falsă arată prezența celulelor imature în sânge în absența acestora în măduva osoasă, ceea ce indică procese inflamatorii sau metastaze în organ.
• Reticulocitoza este observată în malarie, anemie hemolitică sau talasemie.

Un conținut crescut de celule sanguine imature în sânge (reticulocitoză) este plin de îngroșarea acestuia, care poate duce ulterior la tromboză, atac de cord sau accident vascular cerebral.

Reticulocite în sânge în timpul sarcinii

La femeile însărcinate, volumul total de sânge crește din cauza plasmei, prin urmare, se observă diluarea acesteia și o scădere a nivelului de globule roșii. Datorită faptului că nu există suficientă hemoglobină în sânge, se dezvoltă anemie, care activează procesul de eritropoieză. Prin urmare, la gravide se determină un procent mare de reticulocite. Clinica acestui fenomen îndeplinește norma cu adaptarea fiziologică a corpului la nașterea unui copil.

Reticulocitele sunt coborâte

Reticulocitopenia (atunci când nivelul reticulocitelor este redus) indică adesea leziuni ale rinichilor și/sau măduvei osoase. Factorii care reduc conținutul de eritrocite tinere sunt:

• Anemia cauzata de lipsa de acid folic, vitamina B12 sau fier, care duce la distrugerea globulelor rosii.
• Boli de rinichi, dar pot scădea ușor nivelul reticulocitelor.
• Abuzul de alcool, care va arăta o scădere a RTC datorită inhibării funcțiilor renale, suprimării măduvei osoase și distrugerii directe a celulelor ca urmare a intoxicației.

Important! Tumorile maligne pot, de asemenea, să scadă nivelul reticulocitelor din sânge. Depinde de zona măduvei osoase în care cancerul a metastazat.

În sine, indicatorul conținutului de reticulocite din sânge nu este un diagnostic. Cu o abatere semnificativă de la intervalul permis, stabilește direcția generală pentru diagnosticare.

Detectarea substanței cu ochiuri granulare a reticulocitelor atunci când este colorată cu albastru de cresyl strălucitor fără fixare prealabilă.

Reactivi:

Soluție 1% de albastru-cresyl-brilliant: se dizolvă 50 mg de colorant în 5 ml de soluție salină și se adaugă 20 mg de citrat de sodiu (soluția se păstrează într-un recipient de sticlă închisă la culoare, este bună pentru câteva zile).

Metodologie:

Pune 2 picături dintr-o soluție de colorant albastru cresyl 1% strălucitor și 1 picătură de sânge pe o lamă de sticlă cu un godeu. Se amestecă ușor cu o baghetă de sticlă și amestecul se pune într-o cameră umedă (vașă Petri, în care se pun tifon ușor umezit sau rulouri de bumbac în jurul marginilor) timp de 30 de minute la temperatura camerei. Apoi se fac frotiuri și se usucă.

Numărul de reticulocite:

În frotiuri, eritrocitele sunt colorate cu verde-gălbui, iar substanța granulară din reticulocite este albastră și violetă.

Frotiurile sunt microscopate cu o lentilă de imersie. Reticulocitele sunt numărate la 1000 de eritrocite (se obține o precizie mai mare la numărarea a 2000-3000 de eritrocite).

Se observă o creștere a numărului de reticulocite cu:

stimularea eritropoiezei (pierderi de sânge, hemoliză, criză reticulocitară cu tratamentul cu succes al anemiei cu deficit de B12, lipsă acută de oxigen).

O scădere a numărului de reticulocite se observă cu:

inhibarea eritropoiezei (anemie aplastică și hipoplazică, anemie cu deficit de B12 netratată, metastaze canceroase în oase),

boli de rinichi, boli endocrine.

Se observă o creștere a reticulocitelor lor în sângele periferic (reticulocitoză): cu anemie hemolitică (numărul de reticulocite poate ajunge până la 60% sau mai mult (în special în creștere în timpul crizelor hemolitice); cu pierdere acută de sânge (apare o criză de reticulocite 3- La 5 zile după pierderea de sânge), inclusiv, o creștere a reticulocitelor face posibilă suspectarea sângerării ascunse (de exemplu, la pacienții cu ulcer peptic al tractului gastrointestinal, febră tifoidă); cu malarie; cu policitemie; în tratamentul fierului anemie deficitară cu fier (la câteva zile (3 - 10) după începerea tratamentului antianemic al anemiei pernicioase); cu lipsă acută de oxigen; cu metastaze tumorale în măduva osoasă. Trebuie amintit că în cazul distrugerii crescute a eritrocite, proporția de reticulocite poate depăși 50% din cauza unei creșteri artificiale a numărului de reticulocite (după cum s-a menționat mai devreme, proporția de reticulocite este calculată în% din totalul eritrocitelor. În astfel de cazuri, pentru a evalua severitatea anemiei, „reticularul se folosește indicele”, care se calculează prin formula: (% reticulocite x hematocrit) / 45 x 1,85, unde 45 este hematocritul normal, 1,85 este numărul de zile necesare pentru sosirea de noi reticulocite în sânge. Dacă index

METODE DE NUMĂRARE A NUMĂRULUI DE RETICULOCITE

(1) Numărarea numărului de reticulocite dintr-un frotiu după colorarea lor cu coloranți speciali. Aceasta metoda este cea mai folosita metoda in practica datorita faptului ca este simpla, destul de ieftina si nu necesita echipament special costisitor, prin urmare poate fi folosita in orice laborator de diagnostic clinic. Principiul metodei se bazează pe detectarea unei substanțe cu ochiuri granulare a reticulocitelor în timpul colorării supravitale cu coloranți alcalini (soluție saturată de albastru de cresil strălucitor în alcool absolut / soluție de azur I / soluție de azur II) cu numărarea lor în continuare într-un sânge. frotiu. Colorarea reticulocitelor se efectuează fie pe sticlă, fie într-o eprubetă. Numărarea se efectuează cu ajutorul unui microscop: frotiurile preparate prin una dintre metodele de mai sus sunt microscopate cu o lentilă de imersie; în frotiu, reticulocitele și eritrocitele sunt colorate gălbui-verzui, substanța granular-filamentoasă din reticulocite este albastră (când este colorată cu azur II și albastru cresil strălucitor) sau albăstrui-violet (când este colorată cu azur I). (2) Numărarea numărului de reticulocite folosind microscopie fluorescentă. Această metodă este simplă și necesită puțin timp, mai precisă decât metoda convențională, deoarece microscopia fluorescentă dezvăluie cele mai mici granule ale substanței reticulate-filamentoase, dar este posibilă numai cu un microscop luminiscent și coloranți speciali și, prin urmare, este disponibilă numai pentru câteva laboratoare. Principiul numărării numărului de reticulocite folosind microscopia fluorescentă se bazează pe utilizarea capacității substanței reticulocitelor de a fluoresce după tratamentul sângelui cu portocaliu de acridină. Sângele este amestecat cu portocaliu de acridină într-o eprubetă sau mixer într-un raport de 1 parte de sânge și 10 părți de colorant (amestecul poate fi păstrat nu mai mult de 5 ore). Amestecul se agită timp de 2 minute, o picătură din amestec se aplică pe o lamă de sticlă și se acoperă cu o lamă. În acest caz, lichidul nu trebuie să treacă dincolo de lamelă. Microscopic folosind un filtru de lumină ZhS-17. În preparat, eritrocitele au un contur verde închis și nu fac fluorescență, în timp ce în reticulocite, substanța granular-reticulară strălucește în roșu aprins, ceea ce facilitează numărarea reticulocitelor. În sângele stabilizat cu heparină sau citrat de sodiu nu se observă fluorescența reticulocitelor. (3) Numărarea automată a reticulocitelor cu analizor hematologic. În analizoarele hematologice moderne, tehnologia de numărare a celulelor sanguine se bazează pe metoda conductometrică propusă de H. Wallace și Joseph R. Culter în 1947. Principiul metodei este de a număra numărul și de a determina natura impulsurilor care apar atunci când o celulă trece printr-un orificiu de diametru mic (apertura), pe ambele părți ale căruia sunt doi electrozi. izolate unele de altele. Fiecare trecere a unei celule prin deschidere este însoțită de apariția unui impuls electric, care este înregistrat de un senzor electronic. Împărțirea celulelor în categorii (eritrocite, leucocite, trombocite, sediment) este efectuată de dispozitiv pe baza analizei amplitudinii impulsurilor primite.Pentru a determina concentrația de celule, este suficient să treceți un anumit volum al eșantionați prin canal și numărați numărul de impulsuri care sunt generate. Trebuie remarcat faptul că, pe lângă parametrul clasic al reticulocitelor - conținutul relativ (%) al reticulocitelor (RET%, procent din reticulocite), determinat folosind metodele 1 și 2 de diagnostic de laborator, ca urmare a apariției hematologice de înaltă tehnologie. analizoare (metoda 3), a devenit posibilă obținerea (de exemplu, folosind un colorant fluorescent patentat pentru analizorul Sysmex-XT-2000i) parametri informativi suplimentari reticulocitelor: reticulocite cu conținut scăzut de ARN, cele mai mature (LFR%, fracțiuni de reticulocite cu fluorescență scăzută). , fracțiune de reticulocite cu fluorescență scăzută); reticulocite cu un conținut mediu de ARN (MFR%, fracțiuni de reticulocite cu fluorescență medie) - o fracțiune de reticulocite cu fluorescență medie); reticulocite cu un conținut ridicat de ARN (HFR%, fracții de reticulocite cu fluorescență ridicată) - o fracțiune de reticulocite cu fluorescență ridicată); fracțiunea de reticulocite imature (IRF%, Fracția de reticulocite imature). Diferențierea reticulocitelor, pe baza gradului de maturitate și, în consecință, a conținutului de acizi nucleici, este o reflectare a activității hematopoietice a măduvei osoase. Metoda (analizor Sysmex-XT-2000i). În celula de flux, celulele traversează fasciculul unui laser semiconductor, în timp ce fasciculul este împrăștiat la unghiuri mari și mici, iar colorantul fluorescent este excitat. Acest lucru face posibilă determinarea diferitelor stadii de maturitate ale reticulocitelor prin conținutul de ARN din celule și intensitatea luminiscenței acestora. Numărarea automată a reticulocitelor este foarte precisă (se numără mai mult de 30.000 de globule roșii) și reproductibilă (coeficientul de variație este de aproximativ 6%). Această tehnologie oferă o numărare precisă a reticulocitelor chiar și la concentrații extrem de scăzute.

Reticulocitopenia și reticulocitoza, cauzele dezvoltării, valoarea diagnostică a depistării lor.

studfiles.net

Reticulocite (reticulocytus)

Reticulocitele sunt globule roșii tinere care se formează după pierderea nucleilor de către normoblaste.

O trăsătură caracteristică a reticulocitelor este prezența unei substanțe cu ochiuri granulare, care apare cu colorare supravitală, adică fără fixarea prealabilă a celulelor.

Microscopic electronic a arătat că structurile granulare cu plasă sunt rămășițele reticulului endoplasmatic, ribozomii și mitocondriile care conțin ARN. În reticulocite, sinteza proteinelor (globină), hemului, purinelor, nucleotidelor pirimidinice, fosfatidelor, lipidelor se realizează într-o mică măsură, dar ARN-ul nu este sintetizat în ele. În 2 zile, reticulocitul rămâne în sânge, după care, pe măsură ce ARN-ul scade, devine un eritrocit matur.

În frotiurile colorate prin metode hematologice convenționale, reticulocitele gri-roz sunt policromatofile, adică. vopsite cu diferiți coloranți.

În prezent, se utilizează o metodă unificată de numărare a numărului de reticulocite după colorarea acestora.

• albastru cresyl strălucitor,
• Azur I sau
• Azur II direct pe sticlă sau într-o eprubetă.

1. Principiul metodei

Identificarea substanței cu ochiuri granulare a eritrocitelor atunci când sunt colorate cu vopsele alcaline cu numărarea lor în continuare într-un frotiu de sânge.

2. Reactivi:

a) o soluție saturată de albastru de cresil strălucitor în alcool absolut (pentru prepararea alcoolului absolut, etanol 96% trebuie păstrat în mai multe schimburi de pulbere de sulfat de cupru calcinat): 1,2 g vopsea la 100 ml alcool;

b) soluție azur I: azur I - 1 g, oxalat de amoniu - 0,4 g, clorură de sodiu - 0,8 g, alcool etilic 96% - 10 ml, apă distilată - 90 ml. Soluția de vopsea într-un flacon închis se pune timp de 2-3 zile într-un termostat la 37 °C și se agită periodic puternic. Apoi se răcește la temperatura camerei și se filtrează prin hârtie de filtru. Soluția se păstrează într-un recipient de sticlă de culoare închisă. Dacă apare un precipitat, vopseaua trebuie filtrată din nou;

c) Soluție Azur II: Azur II - 1 g, citrat de sodiu - 5 g, clorură de sodiu - 0,4 g, apă distilată - 45 ml. Soluția se lasă într-un termostat la 37 °C timp de 2 zile, amestecând ocazional. Pentru a accelera dizolvarea, vopseaua poate fi încălzită la foc mic timp de 15-20 de minute fără să fiarbă. Se răcește la temperatura camerei și se filtrează. A se păstra într-un recipient de sticlă închisă la culoare.

3. Colorare

Colorare pe sticla:

• o lamă de sticlă bine spălată și degresată se încălzește peste flacăra unui arzător. Cu o baghetă de sticlă se aplică pe sticlă o picătură din unul dintre coloranți și se prepară un frotiu de vopsea cu sticlă lustruită. Marcați partea sticlei pe care este aplicată pata de vopsea cu un stilou din sticlă. În această formă, sticla poate fi pregătită pentru utilizare ulterioară și depozitată într-un loc uscat și întunecat;
• pe paharele astfel pregătite se aplică o picătură de sânge, se face un frotiu subțire, iar paharul se pune imediat într-o cameră umedă. Pentru a face acest lucru, utilizați un vas Petri cu un capac, în care sunt plasate tifon sau rulouri de bumbac ușor umezite de-a lungul marginilor;
• frotiurile se păstrează într-o cameră umedă timp de 3-5 minute, apoi se usucă la aer. Substanța granulară a reticulocitelor devine violet-albastru, ieșind în evidență pe fundalul verzui-albăstrui al eritrocitelor.

Colorare in vitro:

• metoda 1: înainte de utilizare, pregătiți o soluție de lucru de albastru cresyl strălucitor într-o eprubetă per picătură de soluție de oxalat de potasiu 1% 4 picături de soluție de colorant 1. Adăugați 40 µl de sânge în colorant (două pipete până la marcajul 0,02). Se amestecă bine, dar ușor și se lasă timp de 30 de minute. Se amestecă și se prepară mișcări subțiri;
• metoda 2: într-o eprubetă se pun 0,05 ml soluție de colorant 3 și 0,2 ml sânge. Amestecul se amestecă bine și se lasă timp de 20-30 de minute. Se amestecă și se prepară mișcări subțiri;
• metoda 3: se pun 0,3-0,5 ml soluție de colorant 2 și 5-6 picături de sânge într-o eprubetă cu o pipetă din aparatul Panchenkov. Tubul este închis cu un dop de cauciuc, amestecul este bine, dar ușor amestecat și lăsat timp de 1-1½ oră (reticulocitele se colorează mai bine când sunt expuse timp de 1½ ore-3 ore). Se amestecă și se prepară mișcări subțiri.

4. Numărarea reticulocitelor

În frotiuri, eritrocitele sunt colorate gălbui-verzui, substanță granulară-filamentoasă - albastru sau albăstrui-violet.

• Frotiurile preparate prin una dintre metodele de mai sus sunt microscopate cu o lentilă de imersie;
• este necesar să se numere cel puțin 1000 de eritrocite și să se noteze între ele numărul de eritrocite care conțin o substanță granular-filamentoasă. Cu frotiuri subțiri uniforme, în care eritrocitele sunt aranjate pe un rând, se selectează un astfel de câmp de vedere, în care există, de exemplu, 50 de eritrocite, apoi se calculează 20 de astfel de câmpuri de vedere;
• in practica, pentru o mai mare acuratete, se foloseste un ocular special, in care campul vizual poate fi redus la dimensiunea ceruta. În absența unui ocular gata făcut, acesta poate fi pregătit cu ușurință prin deșurubarea ocularului ×7, punând o bucată de hârtie cu un pătrat mic decupat în ea și înșurubând-o. Numărul de reticulocite numărate este exprimat la 1000 sau la 100 de eritrocite.

RATE: 0,5–1,2% (30–70 × 109/l)

Se observă o creștere a numărului de reticulocite cu:

• pierderi de sânge (în special acute);
• anemie hemolitică, în special în timpul unei crize (până la 20-30%);
• pe fondul tratamentului anemiei megaloblastice cu vitamina B12 (criza reticulocitelor - o creștere a numărului de reticulocite în a 4-a-8-a zi de tratament).

O scădere a numărului de reticulocite este tipică pentru:

• anemii aplastice și hipoplazice;
• anemie megaloblastică netratată;
• boala de radiații;
• luând medicamente citotoxice.

Este Hristos în viață? A înviat Hristos din morți? Cercetătorii studiază faptele

diagnostic.ru

Reticulocite normale și numărarea numărului lor

Reticulocitele, a căror normă variază din cauza multor factori, sunt forme neformate de globule roșii și pot fi găsite în măduva osoasă și în sângele periferic. De regulă, reticulocitele din sânge se maturizează în trei până la cinci zile, iar apoi aceste celule se transformă în globule roșii deja mature. În plus, numărul de eritrocite neformate la nou-născuți este semnificativ mai mare decât la adulți.

Detectarea reticulocitelor:

La identificarea reticulocitelor, a căror normă este determinată folosind un tabel special, este necesar să se țină seama de diferențele lor față de eritrocitele mature. Această varietate de celule sanguine fie conține un nucleu întreg, fie rămășițele sale sunt observate ca parte a unei substanțe granulare-filamentoase. Pentru a determina numărul de astfel de celule, este necesar să se studieze culoarea unui frotiu de sânge în laborator. Pentru aceasta, se folosește o soluție de diamant albastru, care se aplică pe un pahar degresat și prespălat și abia apoi se face un frotiu.

Când sunt detectate reticulocite, a căror normă este diferită, imediat după frotiu, sticla utilizată trebuie plasată într-o cutie Petri - o cameră umedă specială, apoi ținută timp de cinci minute, uscată bine la aer proaspăt și apoi microscopic. Mai mult decât atât, substanța de tip granular-filamentos din interiorul reticulocitelor este de obicei colorată într-o nuanță violet-albastru, iar fundalul eritrocitelor iese în evidență datorită unei nuanțe verde-albăstrui.

Dacă se folosește metoda Gel-Meyer, colorarea celulelor sanguine imature poate fi văzută mult mai bine, dar aceasta necesită un tub Vidal. În acest vas, câteva picături de sânge sunt amestecate cu o soluție strălucitoare și clorură de sodiu, apoi tubul este închis cu un capac, iar frotiul în sine este efectuat într-o oră.

Numărul de reticulocite:

Când calculați numărul de celule sanguine imature, trebuie să luați ca bază 1000 de globule roșii și apoi să luați în considerare reticulocite, a căror rată variază de obicei la nivelul de 0,2% -1,2% din numărul de globule roșii adulte. În medie, la majoritatea oamenilor, numărul de globule roșii imature este de obicei de 0,7% din numărul total de celule sanguine complet mature. Dacă numărul de reticulocite este mai mare decât norma maximă admisă cu 10% sau mai mult, o persoană dezvoltă reticulocitoză, o boală însoțită de sângerare acută regulată și anemie hemolitică.

La numărarea reticulocitelor (norma la copii este de obicei ridicată), merită să urmăriți faptul că numărul acestora nu depășește valorile limită tipice pentru adulți. Standardele depind și de sex, deoarece la femei 2,07% din eritrocitele imature sunt încă considerate un parametru acceptabil, iar la bărbați această cifră nu trebuie să depășească 1,92%.

În cazurile în care nivelul reticulocitelor este semnificativ crescut, acest lucru indică prezența unor astfel de tulburări în organism, cum ar fi malarie și talasemie, policitemie și hipoxie, anemie, tot felul de sindroame hemolitice, dar astfel de indicatori sunt posibili și cu tratamentul cu cianocobalamină. Dacă nivelul eritrocitelor imature este scăzut, o persoană poate prezenta anemie aplastică și hipoplazică, tot felul de boli ale rinichilor și mixedem, precum și răspândirea metastazelor tumorale la oase.

Pentru a diagnostica severitatea anemiei, este necesar să se calculeze „indicele reticulocitelor”, care se calculează ca raport dintre procentul de reticulocite și valorile normale ale hematocritului, înmulțit cu numărul de zile necesare pentru ca celulele imature să intre în sângele periferic. Dacă indicele rezultat nu depășește doi, indicatorul indică o componentă hipoproliferativă a anemiei, iar dacă depășește doi, arată probabilitatea formării crescute a globulelor roșii.

fb.ru

Studiu de sânge. Analize de sânge

Determinarea concentrației hemoglobinei

Dintre metodele de determinare a hemoglobinei, metodele bazate pe colorimetrie, adică determinarea intensității culorii, sunt cele mai utilizate.există tuburi de sticlă sigilate cu un standard de culoare (hematină clorhidică în glicerină).O soluție de acid clorhidric 0,1% este se toarnă mai întâi în eprubeta centrală până la semnul corespunzător la 2 sau 3 g%, apoi se adaugă cu grijă (exact!) 0,02 ml de sânge prelevat de la un deget cu o pipetă specială atașată la un hemometru. Stratul de suprafață de acid se spală cu o pipetă și, după ce s-a amestecat sângele și acidul cu o baghetă de sticlă, se lasă timp de 5 minute pentru a forma clorhidrat de hematină. Apoi, adăugând apă distilată și amestecând constant cu un băț, culoarea lichidului din tubul central se potrivește complet cu standardele. Concentrația hemoglobinei corespunde marcajului nivelului soluției de pe meniscul inferior. Concentrația de hemoglobină poate fi exprimată fie în g% de hemoglobină, fie în unități convenționale. 16,67 g de hemoglobină sunt luate ca 100 de unități.

Concentrația de hemoglobină în sânge la femei este de la 11,7 la 15,8 g ° / o sau de la 117 la 158 g / l, la bărbați - de la 13,3 la 18 g% sau de la 133 la 180 g / l.

Prelevarea de sânge pentru numărarea elementelor formate

Pentru a număra elementele formate, sângele este diluat în mixere (melangeri) sau eprubete, care a devenit recent mai utilizat.Pentru numărarea globulelor roșii, sângele se diluează de 200 de ori cu o soluție de clorură de sodiu 3%; dacă folosim o pipetă hemometru pentru a preleva sânge, al cărui volum este de 0,02 ml, atunci trebuie să luăm 4 ml de soluție de clorură de sodiu.Pentru a număra leucocite, sângele se diluează de 20 de ori, deci 0,02 ml de sânge și 0,38 ml de 3% sunt luate o soluție colorată de albastru de metilen de acid acetic, care este necesară pentru a provoca distrugerea globulelor roșii.Prelevarea de sânge trebuie efectuată cu mare precizie, deoarece cu volume atât de mici, pătrunderea unei bule de aer sau a reziduurilor de sânge pe exteriorul pipetei duce la o creștere a erorii de determinare.Înainte de umplerea camerei este necesar să ștergeți sticla lustruită din cameră astfel încât să apară inele irizate.Înainte de umplerea camerei, sângele diluat este bine amestecat, deoarece celulele se aseaza pe peretii eprubetei sau fiolelor mixerului, dupa aceea se pune o picatura de sange sub sticla lustruita macinata a camerei si se lasa 1 min in repaus pentru ca celulele sa se aseze.

Numărarea elementelor formate se efectuează la o mărire mică a microscopului (obiectiv 8X, ocular 15X sau 10X) într-un câmp vizual întunecat.

Eritrocitele se numără în 5 pătrate mari (16x5 = 80 pătrate mici) situate în diferite părți ale camerei, se pot lua pătrate situate în diagonală.Se numără eritrocitele care se află în interiorul pătratului și cele care se află pe laturile lui superioare și stânga; eritrocitele situate pe părțile inferioare și drepte nu sunt numărate, deoarece aparțin deja altor pătrate.

După ce au numărat numărul de eritrocite (A) în 5 pătrate mari, ei găsesc numărul mediu aritmetic de eritrocite într-un pătrat mic A / 80, adică în 1/4000 μl. Prin urmare, pentru a găsi numărul de globule roșii în 1 µl, trebuie să înmulțim numărul obținut din divizare cu 4000 și cu 200 (diluție).

Astfel, obținem următoarea formulă:

X=A*4000*200/80,

unde X este numărul de eritrocite în 1 µl și A este numărul de eritrocite în 5 pătrate mari. Dacă am numărat eritrocitele în 5 pătrate mari și am diluat sângele de 200 de ori, atunci factorul total pentru numărul A va fi de 10.000.

Conținutul normal de globule roșii din sângele femeilor este de 4-5 * 106, bărbați - 4,5-5,5 * 106.

Leucocitele sunt numărate în 100 de pătrate mari, neîmpărțite în mici, ceea ce corespunde la 1600 de pătrate mici. Astfel, numărul de leucocite găsite în 100 de pătrate este împărțit la 1600, înmulțit cu 4000 și 20 (diluție). În acest caz, pentru a obține rezultatul, este suficient să înmulțiți numărul de leucocite numărate cu 50. Conținutul normal de leucocite din sânge este de 5 * 103 - 8 * 103 în 1 μl.

Indicator de culoare al sângelui. Indicatorul de culoare al sângelui este un număr care arată saturația medie a hemoglobinei unui eritrocit individual dintr-un anumit sânge în comparație cu saturația unui eritrocit individual din sânge normal. Se iau 100 de unități pentru conținutul normal de hemoglobină și numărul normal de eritrocite este de 5.000.000.Valoarea indicelui de culoare al persoanelor sănătoase variază de la 0,9 la 1,1.Studiul frotiului de sânge periferic. În frotiurile de sânge se studiază morfologia eritrocitelor și se ia în considerare formula leucocitară, adică raportul procentual dintre diferitele tipuri de leucocite.Pentru ca studiul să aibă succes, trebuie efectuată pregătirea, fixarea și colorarea frotiurilor de sânge. Pentru a pregăti un frotiu, suprafața unui pahar curat, fără grăsimi, la o distanță de 0,5 cm de marginea lamei, ating o picătură de sânge la locul puncției de pe deget și apoi lamela lustruită este așezată la un unghi de 45 ° față de lamă și prima este adusă la picătura de sânge, astfel încât să se răspândească de-a lungul marginii din spate a lamei și mișcarea plămânilor, fără presiune puternică să facă un frotiu. Frotiul trebuie să se termine pe lama de sticlă cu o „paniculă”. Frotiul se usucă la aer, când este uscat, un frotiu bun, subțire are o culoare galbenă.

Cu un creion simplu, ascuțit, în mijlocul frotiului, se înscrie numele pacientului și data studiului, după care frotiurile se fixează în alcool metilic timp de cel puțin 5 minute și se colorează după metoda Romanovsky-Giemsa.

Vopseaua constă dintr-un amestec de coloranți acizi (eozină) și bazici (Azur II). Această metodă de colorare face posibilă diferențierea celulelor. Primul pas în lucrul cu un frotiu este evaluarea morfologiei globulelor roșii. Pentru a face acest lucru, alegeți un loc subțire unde celulele se află separat, și nu sub formă de coloane de monede. Eritrocitele normale sunt celule fără nucleu, de culoare roz, rotunjite, aproximativ de același diametru - 7,5 microni, eritrocitele au forma unui disc biconcav, prin urmare, în frotiu au iluminare în centru și o periferie mai intens colorată.

(modul direct4)

Se prepară o picătură groasă

Pentru a testa sângele pentru malaria Plasmodium, se face o picătură groasă. Sângele este luat în mod obișnuit din pulpa degetului. O picătură de sânge care iese din locul injectării este atinsă cu suprafața unei lame de sticlă. 2-3 picaturi aplicate separat se ung cu coltul altui pahar. Se toarnă un frotiu uscat (fără fixare) cu vopsea Romanovsky timp de 30-40 de minute, apoi picătura colorată se clătește cu grijă cu apă și preparatul este uscat în poziție verticală.

Date de analiză a probelor

Un număr crescut de eritrocite și hemoglobină în sânge poate fi cu o boală a celulelor roșii din sânge - eritremie, apoi numărul de eritrocite ajunge până la 9-106 sau mai mult, iar numărul de globule roșii crește ca urmare a bolilor de alte organe și sisteme (cu pneumoscleroză difuză decompensată, emfizem, unele tipuri de malformații cardiace congenitale, scleroză vasculară a sistemului arterei pulmonare, defecte ale inimii drepte, insuficiență circulatorie gradul III etc.). Acest simptom se numește eritrocitoză.

Eritrocitele alterate morfologic apar în anemia hipercromă (megaloblastică). În același timp, în sânge se găsesc eritrocite mari cu un conținut ridicat de hemoglobină (macrocite), eritrocite embrionare (megaloblaste), care de obicei nu se găsesc în sângele periferic. Morfologia eritrocitelor se modifică și cu anemie hipocromă: apar eritrocite mici (microcite), cu formă alterată (poikilocite) și eritrocite cu conținut scăzut de hemoglobină (eritrocite hipocrome).

Numărul de leucocite

La calcularea formulei leucocitelor, este necesar să se determine caracteristicile structurale ale citoplasmei și nucleelor ​​celulare. Apartenența unei celule la un anumit grup este determinată pe baza totalității tuturor semnelor citoplasmei și nucleului.La calcularea formulei, trebuie să respectați aceeași metodă de mișcare a sticlei la microscop. Cel mai adesea, metoda microscopiei este utilizată în 4 locuri ale frotiului. Se știe că leucocitele sunt distribuite neuniform în frotiu: există mai puține limfocite la margini decât la mijloc și sunt mai multe monocite la sfârșitul frotiului decât la început. Prin urmare, la calcularea formulei leucocitelor, cel mai bine este să vă deplasați pe o linie întreruptă, numărând toate celulele întâlnite.Numărarea a 200 de celule este un minim practic pentru studiile clinice de rutină.Leucocite din sângele periferic, în funcție de prezența sau absența granularității în citoplasma, sunt împărțite în granulocite (neutrofile, eozinofile, bazofile) și agranulocite (monocite și limfocite).

Neutrofile. Dimensiunea celulei este de 10-12 microni. Citoplasma celulelor este de culoare roz pal, cu granularitate fină, abundentă, violet. În mod normal, în sânge se găsesc neutrofile înjunghiate (2-4%) și segmentate (60-65%).

Eozinofile. Celulele au aceeași dimensiune ca și neutrofilele, uneori puțin mai mari, citoplasma este umplută cu granule mari roșii gălbui, nucleul are de obicei două segmente de aceeași dimensiune. Eozinofilele sunt normale 2-4%.Bazofile. Este cel mai mic granulocit ca dimensiune. Nucleul este neregulat, multilobat, ocupă aproape întreaga celulă, citoplasma roz pal conține granule mari violet închis. Granulele bazofile se dizolvă în apă și, uneori, ca urmare a spălării la colorarea preparatului, celulele incolore rămân în locul granulelor. In mod normal, bazofilele sunt 0,1%.Limfocite. Dimensiunea celulei variază de la 7 la 10 µm. Nucleul este compact, rotunjit sau în formă de fasole. Citoplasma celulelor este albastru pal cu o zonă de iluminare în jurul nucleului (perinuclear), uneori în citoplasmă există granule azurofile separate de culoare roșu-violet. În sângele periferic 20-35% din limfocite sunt normale.Monocite. Dimensiunea celulei variază de la 12 la 20 µm. Nucleul este adesea în formă de potcoavă, uneori de formă neregulată. Citoplasma este mai extinsă decât cea a limfocitelor, de culoare albastru cenușă cu granularitate fină, delicată, roșiatică.Monocitele sunt normale 6-8%.

Un conținut crescut de leucocite în sânge se numește leucocitoză, iar un conținut scăzut se numește leucopenie.

Colorarea și numărarea reticulocitelor

Reticulocitele sunt globule roșii tinere cu o retină subțire albastră sau granularitate în citoplasmă. Aceste celule caracterizează activitatea hematopoiezei roșii.Pentru detectarea numărului de reticulocite se utilizează metoda colorării supravitale (pe durata de viață). Pe lamele de sticlă în alcool absolut se fac pete de vopsea albastru cresil strălucitor, apoi se face un frotiu de sânge pe vitraliu în mod obișnuit și se pune într-o cameră umedă timp de 3-5 minute, după care se usucă și se microscopează cu un lentila de imersiune. În mod normal se găsesc 8-10 reticulocite la 1000 de eritrocite, numărul acestora fiind de obicei exprimat în procente (0,8-1%) sau în ppm (8-10% o) în raport cu eritrocitele.Reticulocitele sunt celule care caracterizează o producție crescută de eritrocite din măduva osoasă.

Ele apar într-un procent mare în sângele periferic cu anemie hipocromă („anemie malignă”), cu anemie hemolitică și alte boli. Un conținut redus de reticulocite și dispariția lor completă în sângele periferic sunt observate în timpul exacerbării anemiei hipercrome.

Pentru a preveni agregarea (lipirea) trombocitelor, se face o puncție cutanată printr-o picătură de soluție de sulfat de magneziu 14% aplicată pe deget. Sângele se amestecă cu magnezie și se prepară frotiuri subțiri pe lame de sticlă, care apoi se fixează și se colorează conform Romanovsky timp de 2 ore.Se determină numărul de trombocite la 1000 de eritrocite și cunoscând numărul de eritrocite în 1 μl, numărul se numără trombocitele în 1 μl de sânge. Trombocitele normale conțin între 250.000 și 400.000.

Definiţia ESR

Viteza de sedimentare a eritrocitelor se determină în sânge amestecat în raport de 4: 1 cu citrat de sodiu.Reacția se stabilește în aparatul Panchenkov. Capilarul lui Panchenkov este spălat cu citrat de sodiu, apoi citratul este tras până la marcajul 50, unde se află litera R (reactiv) și suflat într-o eprubetă Vidalevsky. Același capilar este utilizat pentru a lua sânge de două ori până la marcajul K (sânge) și pentru a-l amesteca cu citrat. Același capilar este umplut cu sânge amestecat cu citrat până la diviziunea 0 și plasat vertical într-un trepied timp de o oră. O oră mai târziu, în milimetri, se notează valoarea coloanei de plasmă formată deasupra eritrocitelor sedimentate, care este o măsură a vitezei de sedimentare a eritrocitelor. ESR normal la bărbați este de 10 mm / h, la femei - 14 mm / h.

Viteza de sedimentare a eritrocitelor crește în bolile inflamatorii, acute și cronice, tumorile maligne și alte boli.

Test de compatibilitate cu factorul Rh

Se iau 2-3 ml din sângele primitorului într-o eprubetă fără citrat, după coagularea sângelui, cheagul este încercuit cu o baghetă de sticlă și sângele este centrifugat. Două picături de ser din acest tub sunt aplicate pe o cutie Petri, se adaugă o jumătate de picătură din sângele donatorului, se amestecă, iar cana este pusă într-o baie de apă (42-45 °). După 10 minute, cupa este îndepărtată și privită la lumină, cu ușoară balansare. Apariția aglutinarii va indica inadmisibilitatea acestei transfuzii de sânge.

Determinarea numărului de reticulocite- un test clinic de sânge, în care sunt numărate globulele roșii tinere produse de măduva osoasă. Studiul completează testul general de sânge. Numărarea reticulocitelor se efectuează pentru diagnosticul diferențial al diferitelor tipuri de anemie, evaluarea funcționării măduvei osoase și a splinei, monitorizarea stării pacienților cu deficit de fier, deficit de vitamina B12 sau acid folic, insuficiență renală și cancer. Prelevarea de sânge pentru cercetare se face dintr-o venă sau capilare. Numărul de reticulocite este determinat prin metoda citometriei în flux. Valorile de referință pentru bărbați sunt 23-70 mii / μl, pentru femei - 17-63,8 mii / μl. Termenii analizei nu depășesc 1 zi lucrătoare.

Reticulocitele sunt precursorii eritrocitelor. Sunt produse de măduva osoasă în timpul diferențierii și diviziunii celulelor stem. Majoritatea reticulocitelor sunt localizate în măduva osoasă; eritrocitele deja mature intră în principal în fluxul sanguin. Proporția de reticulocite în sânge este de aproximativ 0,5-2%. La efectuarea analizei se determină numărul de celule de acest tip și procentul acestora din numărul total de globule roșii. Rezultatele ne permit să evaluăm producția de globule roșii din măduva osoasă, pentru a identifica gradul de activitate al acestui proces.

Organismul menține un nivel stabil de globule roșii în sânge. Odată cu scăderea numărului lor ca urmare a hemolizei, sintezei afectate și sângerării, sunt activate mecanismele compensatorii pentru restabilirea concentrațiilor normale. Prin modificarea nivelului și procentului de reticulocite se poate stabili o creștere a producției de globule roșii în măduva osoasă sau o inhibare a acestui proces. Dacă măduva osoasă funcționează normal, atunci pierderea globulelor roșii duce la o creștere ulterioară a numărului acestora și a numărului de reticulocite. O scădere a nivelului acestor tipuri de celule apare atunci când măduva osoasă roșie este deteriorată de o tumoare, metastaze, radioterapie și chimioterapie. Pentru analiza reticulocitelor, biomaterialul este sângele capilar sau venos. Studiul se realizează cu ajutorul unui analizor hematologic prin citometrie în flux. Rezultatele sunt utilizate în practica terapeutică generală, în hematologie, pediatrie, boli infecțioase și chirurgie.

Indicatii

Testul reticulocitelor este utilizat pentru a evalua producția de celule roșii din sânge de către măduva osoasă. Rezultatele studiului ne permit să diferențiem diferite tipuri de anemie. În funcție de nivelul reticulocitelor, acestea sunt împărțite în hiporegenerative și regenerative. În primul caz, parametrii de testare sunt redusi, producția de globule roșii este insuficientă, iar funcțiile măduvei osoase sunt deprimate. Acest grup include anemia hemolitică în bolile cronice, intoxicația generală, cașexia, deficitul de proteine, fier, vitamine. Anemia regenerativă este însoțită de o creștere compensatorie a nivelului reticulocitelor pe fondul distrugerii crescute sau pierderii eritrocitelor. Acest grup include anemiile posthemoragice și unele hemolitice. Analiza reticulocitelor poate fi utilizată pentru a determina severitatea anemiei, apoi rezultatele acesteia sunt completate de indicatori ai nivelului de eritrocite, hemoglobină și indici de eritrocite.

Determinarea nivelului reticulocitelor este indicată cu un nivel redus de globule roșii, hemoglobină, cu plângeri de oboseală frecventă, dureri de cap, dificultăți de respirație, sânge în urină sau scaun. Cu un diagnostic stabilit de anemie, este prescrisă o analiză pentru a evalua eficacitatea tratamentului. Mai ales des este folosit pentru monitorizarea anemiei cauzate de deficit de fier, vitamina B12 sau acid folic, precum și dezvoltarea pe fondul insuficienței renale, boli cronice. Pentru a evalua funcția măduvei osoase, este indicat un test de reticulocite pentru un număr crescut de celule roșii din sânge pentru a determina cauza policitemiei.

Un test de reticulocite din sânge nu este utilizat pentru a stabili un diagnostic. Scopul său principal în practica clinică este de a planifica proceduri de diagnostic ulterioare și de a monitoriza succesul terapiei. Numărul de reticulocite din sânge este relativ stabil, prin urmare, odată cu scăderea nivelului de eritrocite și a hematocritului, indicatorii de analiză devin artificial mari. Acest lucru poate fi evitat prin calcularea indicelui de reticulocite - numărul absolut de reticulocite (procentul de reticulocite înmulțit cu indicele de hematocrit). O altă caracteristică a acestui studiu este că rezultatele indică activitatea recentă a măduvei osoase, deoarece celulele roșii imature circulă în sânge timp de 2 zile.

Pregatirea pentru analiza si colectarea materialului

Se recomandă luarea sângelui pentru analize pentru reticulocite dimineața, pe stomacul gol. Intervalul minim dintre o masă și procedură este de 3-4 ore. Cu cel puțin o zi înainte, este necesar să se abandoneze efortul fizic intens, consumul de alcool și să se evite expunerea la factorii de stres. Când prescrieți o analiză, merită să informați medicul despre medicamentele utilizate, deoarece unele medicamente afectează nivelul reticulocitelor din sânge. Cu 30 de minute înainte de procedura de eșantionare, trebuie să renunțați la fumat, să excludeți stresul fizic și emoțional.

Nivelul reticulocitelor este determinat în sângele capilar sau venos. În consecință, gardul este realizat din degetul inelar sau din vena cubitală. Sângele este plasat într-o eprubetă cu un anticoagulant și trimis la laborator. În prezent, analizoarele de hematologie sunt folosite aproape peste tot pentru a număra reticulocite. Studiul este realizat prin citometrie în flux - celulele dintr-un flux de fluid se deplasează printr-un capilar foarte îngust și sunt luate în considerare în timpul iradierii cu laser. Termeni de realizare a analizei - 1 zi.

Valori normale

Rezultatele analizei pentru reticulocite afișează numărul absolut de celule pe unitatea de volum de sânge și procentul din numărul total de eritrocite. În mod normal, la pacienții de sex feminin, nivelul reticulocitelor variază de la 17 * 109 la 63,8 * 109 celule / l, la pacienții de sex masculin - de la 23 * 109 la 70 * 109 celule / l. Proporția celulelor de acest tip în numărul total de eritrocite se modifică odată cu vârsta:

• de la naștere până la 2 săptămâni - de la 0,15 la 1,5%;
• de la 2 săptămâni la 1 lună - de la 0,45 la 1,4%;
• de la 2 la 6 luni - de la 0,25 la 0,9%;
• de la 6 luni la 2 ani - de la 0,2 la 1%;
• de la 2 la 6 ani - de la 0,2 la 0,7%;
• de la 6 la 12 ani - de la 0,2 la 1,3%;
• de la 12 la 18 ani - de la 0,12 la 2,05% la fete, de la 0,24 la 1,7% la băieți;
• de la 18 ani - de la 0,59 la 2,07% la femei, de la 0,67 la 1,92% la bărbați.

O creștere fiziologică a nivelului reticulocitelor din sânge are loc în timpul lipsei de oxigen cauzată de urcarea la o înălțime mare sau coborârea sub apă, șederea prelungită într-o cameră neventilata, fumatul și consumul de alcool. În plus, o creștere a concentrației acestor celule este determinată uneori la femeile însărcinate și este considerată o variantă a normei.

Creșteți nivelul

Cauza creșterii nivelului reticulocitelor din sânge poate fi sângerarea. Concentrația de eritrocite scade pentru a o reface, măduva osoasă crește producția de precursori ai acestora. În sângerările acute, numărul de reticulocite crește în a 3-a sau a 4-a zi, în sângerarea cronică rămâne constant crescută tot timpul. În bolile însoțite de hemoliză (distrugerea globulelor roșii), numărul de reticulocite depășește semnificativ norma, uneori abaterile ajung la 300%. Cele mai frecvente patologii ale acestui grup sunt defecte ereditare ale eritrocitelor, distrugerea lor autoimună și deteriorarea toxică a malariei. Alte motive pentru creșterea nivelului reticulocitelor pot fi policitemia, procesele inflamatorii, cancerul măduvei osoase sau răspândirea metastazelor la acesta, restabilirea funcției măduvei osoase după radiații și chimioterapie. În tratamentul anemiei, normalizarea concentrației reticulocitelor indică succesul măsurilor terapeutice.

Reducerea nivelului

Motivul scăderii nivelului reticulocitelor din sânge poate fi anemia cauzată de o deficiență de fier, vitamina B12 sau acid folic. În astfel de cazuri, producția de celule sanguine este redusă din cauza lipsei de „material de construcție”. Un alt motiv pentru scăderea nivelului reticulocitelor este anemia care se dezvoltă pe fondul leziunilor măduvei osoase sau inhibarea funcțiilor acesteia. Modificările de acest tip sunt determinate de intoxicație cu alcool, scăderea activității glandei tiroide, infecții cronice, patologii autoimune, boli de rinichi, expunere la substanțe toxice, inclusiv medicamente, radiații.

Tratarea abaterilor de la normă

În practica clinică, un test de reticulocite este prescris cel mai adesea după o hemoleucogramă completă cu o scădere a globulelor roșii și a hemoglobinei. Nivelul reticulocitelor vă permite să evaluați funcțiile măduvei osoase, sinteza globulelor roșii, să determinați tipul de anemie și să monitorizați eficacitatea tratamentului acesteia. Dacă rezultatele studiului deviază de la normal, ar trebui să solicitați sfatul medicului dumneavoastră - un medic generalist, pediatru, hematolog, chirurg. Pentru a preveni influența factorilor fiziologici asupra numărului de reticulocite, este necesar să se excludă situațiile care provoacă foamete de oxigen - urcarea la înălțime sau coborârea sub apă, expunerea prelungită într-o cameră gazată sau înfundată, fumatul, consumul de alcool.