Dodatkowe metody analizy krwi oznaczanie hematokrytu retikulocytów. Jak liczyć retikulocyty. Przyczyny zmniejszenia liczby retikulocytów, leczenie

… określenie liczby retikulocytów jest ważnym wskaźnikiem funkcji szpiku kostnego.

Retikulocyty- są to młode formy erytrocytów powstałe z normoblastów po utracie jądra (niejądrowe, niedojrzałe erytrocyty), których dojrzewanie następuje w ciągu 24-48 godzin po wejściu do krwi obwodowej ze szpiku kostnego i odzwierciedlające zdolność regeneracyjną szpiku kostnego (tj. erytropoetycznej aktywności szpiku kostnego).

MORFOLOGIA I ZNACZENIE KLINICZNE RETIKULOCYTÓW

Retikulocyty są zwykle większe niż dojrzałe erytrocyty. Cytoplazma retikulocytów zawiera zasadochłonną siatkę (retikulum) w postaci drobnych ziaren, pojedynczych włókien, kłębuszków nerkowych itp., która jest zagregowanym rybosomem i mitochondriami.

W zależności od stopnia dojrzałości wyróżnia się 5 typów retikulocytów:
(1) retikulocyty, które mają jądro (erytronormoblasty), a ich ziarnistość jest zlokalizowana w postaci gęstej korony wokół jądra;
(2) retikulocyty mające substancję ziarnisto-siatkowatą w postaci kulki lub grudki;
(3) retikulocyty, mające ziarnistość w postaci gęstej sieci;
(4) retikulocyty, mające substancję ziarnisto-siatkowatą w postaci pojedynczych nitek;
(5) retikulocyty zawierające pojedyncze granulki.

Pamiętać: normalnie, według G. A. Aleksiejewa, prawie 80% retikulocytów należy do grup IV - V.

Normalnie krew obwodowa zawiera 0,2 - 1% retikulocytów („%” - zawartość retikulocytów z ogólnej liczby erytrocytów). Wskaźnik ten odzwierciedla możliwość przedostania się retikulocytów do krwi obwodowej i ich dalszej transformacji w dojrzałe erytrocyty (dojrzewanie), jako wariant normy, już we krwi obwodowej (w ciągu kilku godzin). ( ! ) W normalnej erytropoezie większość czerwonych krwinek przechodzi przez stadium retikulocytów w szpiku kostnym.

Obserwuje się wzrost ich retikulocytów we krwi obwodowej (retikulocytoza).:
z niedokrwistością hemolityczną (liczba retikulocytów może dochodzić do 60% lub więcej (szczególnie wzrasta podczas kryzysów hemolitycznych);
z ostrą utratą krwi (3-5 dni po utracie krwi dochodzi do przełomu retikulocytarnego), w tym ze wzrostem liczby retikulocytów, co pozwala podejrzewać utajone krwawienie (np. u pacjentów z chorobą wrzodową przewodu pokarmowego, durem brzusznym) ;
z malarią;
z policytemią;
w leczeniu niedokrwistości z niedoboru żelaza żelazem (kilka dni (3 - 10) po rozpoczęciu leczenia przeciwniedokrwistości niedokrwistości złośliwej);
z ostrym brakiem tlenu;
z przerzutami nowotworu do szpiku kostnego.

Należy pamiętaćże w przypadku zwiększonego niszczenia erytrocytów udział retikulocytów może przekroczyć 50% z powodu sztucznego wzrostu liczby retikulocytów (jak wspomniano wcześniej, udział retikulocytów oblicza się w % wszystkich erytrocytów). W takich przypadkach do oceny stopnia zaawansowania niedokrwistości stosuje się „wskaźnik siatkowaty”, który oblicza się ze wzoru: (% retikulocytów x hematokryt) / 45 x 1,85, gdzie 45 to prawidłowy hematokryt, 1,85 to wymagana liczba dni aby nowe retikulocyty dostały się do krwi. Jeśli indeks< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, następuje wzrost tworzenia czerwonych krwinek.

Prawdziwa retikulocytoza: wzrost liczby retikulocytów we krwi obwodowej z jednoczesnym wzrostem liczby retikulocytów w szpiku kostnym.

Fałszywa retikulocytoza: brak zwiększonej liczby retikulocytów w szpiku kostnym ze wzrostem ich liczby we krwi obwodowej (co wskazuje na wzrost wypłukiwania retikulocytów ze szpiku kostnego do krwi obwodowej).

Czynnikiem prowadzącym do wzrostu wartości procentowej zawartości retikulocytów może być przyjmowanie następujących leków: kortykotropina, leki przeciwmalaryczne, leki przeciwgorączkowe, furazolidon (u małych dzieci), lewodopa.

Pamiętać: retikulocytozę, bez odpowiadającej jej reakcji erytronormoblastycznej szpiku kostnego, obserwuje się, gdy pewne jego części są podrażnione przez przerzuty nowotworowe lub ogniska zapalne.

Obserwuje się zmniejszenie liczby lub brak retikulocytów (retikulocytopenia).:
z regeneracyjnymi niedokrwistościami aplastycznymi i hipoplastycznymi;
z niedokrwistością spowodowaną niedoborem żelaza, witaminy B12, kwasu foliowego (niedokrwistość mikrocytarno-hipochromowa i megaloblastyczna);
z talasemią;
z niedokrwistością syderoblastyczną;
z przerzutami raka do kości;
z chorobą popromienną i radioterapią;
w leczeniu cytostatyków;
z chorobami autoimmunologicznymi układu krwiotwórczego;
z chorobą nerek;
z alkoholizmem;
z nawrotem niedokrwistości Addisona-Birmera;
z obrzękiem śluzowatym.

Czynniki zniekształcające wynik badania laboratoryjnego procentowej zawartości retikulocytów:
niewłaściwy dobór antykoagulantu lub niedostateczne wymieszanie krwi z antykoagulantem;
przedłużone ściskanie ręki opaską uciskową;
przyjmowanie sulfonamidów (możliwe są zarówno niedoszacowane, jak i przeszacowane wyniki);
transfuzja krwi na krótko przed badaniem;
hemoliza próbki krwi.

Wskazania do wyznaczenia analizy retikulocytów:
ocena aktywności erytropoezy w stanach, którym towarzyszy hemoliza lub utrata krwi;
ocena zdolności regeneracji szpiku kostnego po terapii cytotoksycznej i przeszczepie szpiku kostnego;
ocena przywrócenia syntezy erytropoetyny po przeszczepieniu nerki;
kontrola antydopingowa u sportowców (przyjmowanie erytropoetyny);
rozpoznanie nieefektywnej hematopoezy lub zmniejszonej produkcji krwinek czerwonych;
diagnostyka różnicowa niedokrwistości;
wykrywanie upośledzonej zdolności regeneracyjnej szpiku kostnego przy niedoborze żelaza, witamin B12, B6, folianów, miedzi i monitorowanie odpowiedniej terapii;
ocena odpowiedzi na terapię erytropoetyną, erytrosupresorami.

METODY ZLICZANIA LICZBY RETIKULOCYTÓW

(1) Zliczanie liczby retikulocytów w rozmazie po zabarwieniu ich specjalnymi barwnikami.

Metoda ta jest metodą najczęściej stosowaną w praktyce ze względu na to, że jest prosta, dość tania i nie wymaga specjalnego drogiego sprzętu, dzięki czemu może być stosowana w każdym klinicznym laboratorium diagnostycznym.

Zasada metody opiera się na wykrywaniu ziarnistej substancji retikulocytów podczas barwienia nadżyciowego barwnikami alkalicznymi (nasycony roztwór błękitu krezylowego w absolutnym alkoholu / roztwór lazurowy I / roztwór lazurowy II) z ich dalszym liczeniem we krwi rozmaz. Barwienie retikulocytów przeprowadza się na szkle lub w probówce.

Liczenie przeprowadza się za pomocą mikroskopu: rozmazy przygotowane jedną z powyższych metod są mikroskopowane za pomocą soczewki zanurzeniowej; w rozmazie retikulocyty i erytrocyty są zabarwione na żółtawo-zielonkawy, ziarnista nitkowata substancja w retikulocytach jest niebieska (przy barwieniu lazurem II i brylantowym błękitem krezylowym) lub niebieskawo-fioletowym (przy barwieniu lazurem I).

(2) Zliczanie liczby retikulocytów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Ta metoda jest prosta i zajmuje trochę czasu, dokładniejsza niż metoda konwencjonalna, ponieważ mikroskopia fluorescencyjna ujawnia najmniejsze ziarna substancji siatkowato-włóknistej, ale jest to możliwe tylko za pomocą mikroskopu luminescencyjnego i specjalnych barwników, a zatem jest dostępna tylko dla kilka laboratoriów.

Zasada zliczania liczby retikulocytów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej opiera się na wykorzystaniu zdolności substancji retikulocytów do fluorescencji po potraktowaniu krwi oranżem akrydynowym. Krew miesza się z oranżem akrydynowym w probówce lub mikserze w stosunku 1 część krwi i 10 części barwnika (mieszaninę można przechowywać nie dłużej niż 5 godzin). Mieszaninę miesza się przez 2 minuty, kroplę mieszaniny nanosi się na szkiełko i przykrywa szkiełkiem nakrywkowym. W takim przypadku płyn nie powinien wychodzić poza szkiełko nakrywkowe.

Mikroskopowo przy użyciu filtra światła ZhS-17. W preparacie erytrocyty mają ciemnozielony obrys i nie fluoryzują, natomiast w retikulocytach substancja ziarnisto-siatkowata świeci jaskrawoczerwonym światłem, co ułatwia liczenie retikulocytów. We krwi stabilizowanej heparyną lub cytrynianem sodu nie obserwuje się fluorescencji retikulocytów.

(3) Automatyczne zliczanie retikulocytów za pomocą analizatora hematologicznego.

We współczesnych analizatorach hematologicznych technologia zliczania krwinek oparta jest na metodzie konduktometrycznej zaproponowanej przez H. Wallace'a i Josepha R. Cultera w 1947 roku. Zasada metody polega na zliczeniu liczby i określeniu charakteru impulsów, które pojawiają się, gdy ogniwo przechodzi przez otwór (aperturę) o małej średnicy, po obu stronach którego znajdują się dwie odizolowane od siebie elektrody. Każdemu przejściu komórki przez otwór towarzyszy pojawienie się impulsu elektrycznego, który jest rejestrowany przez czujnik elektroniczny. Podziału komórek na kategorie (erytrocyty, leukocyty, płytki krwi, osad) dokonuje urządzenie na podstawie analizy amplitudy odbieranych impulsów.Aby określić stężenie komórek wystarczy przejść określoną objętość pobrać próbkę przez kanał i policzyć liczbę generowanych impulsów.

Należy zauważyć, że oprócz klasycznego parametru retikulocytów – względnej (%) zawartości retikulocytów (RET%, procent retikulocytów), określanej metodami 1 i 2 diagnostyki laboratoryjnej, w związku z pojawieniem się najnowocześniejszych technik hematologicznych analizatorów (metoda 3), możliwe stało się uzyskanie (na przykład przy użyciu opatentowanego barwnika fluorescencyjnego do analizatora Sysmex-XT-2000i) dodatkowych informacyjnych parametrów retikulocytów:
retikulocyty o niskiej zawartości RNA, najbardziej dojrzałe (LFR%, frakcje retikulocytów o niskiej fluorescencji, frakcja retikulocytów o niskiej fluorescencji);
retikulocyty o średniej zawartości RNA(MFR%, frakcje retikulocytów o średniej fluorescencji) - frakcja retikulocytów o średniej fluorescencji);
retikulocyty o wysokiej zawartości RNA(HFR%, frakcje retikulocytów o wysokiej fluorescencji) - frakcja retikulocytów o wysokiej fluorescencji);
niedojrzała frakcja retikulocytów(% IRF, frakcja niedojrzałych retikulocytów).

Zróżnicowanie retikulocytów na podstawie stopnia dojrzałości i odpowiednio zawartości kwasów nukleinowych jest odzwierciedleniem aktywności hematopoetycznej szpiku kostnego.

Metoda (analizator Sysmex-XT-2000i). W komorze przepływowej komórki przecinają wiązkę lasera półprzewodnikowego, podczas gdy wiązka jest rozpraszana pod dużymi i małymi kątami, a barwnik fluorescencyjny jest wzbudzany. Umożliwia to określenie różnych stadiów dojrzałości retikulocytów na podstawie zawartości RNA w komórkach oraz intensywności ich luminescencji. Zautomatyzowane zliczanie retikulocytów jest bardzo dokładne (zlicza się ponad 30 000 czerwonych krwinek) i powtarzalne (współczynnik zmienności wynosi około 6%). Technologia ta zapewnia dokładne zliczanie retikulocytów nawet przy bardzo niskich stężeniach.

Do przeprowadzenia tych badań wymagane jest następujące wyposażenie stanowiska pracy:

1. Okulary tematyczne.
2. Zjeżdżalnie ze szlifowanego szkła.
3. Mokra komora.
4. Mieszalniki do krwinek białych i czerwonych.
5. Okulary z księżycem.
6. Mikroskop.
7. Błyszczący błękit krezylowy.
8. Absolutny alkohol etylowy.
9. Alkohol metylowy lub mieszanina Nikiforowa (równe części alkoholu etylowego 96 ° i eteru).
10. odczynnik Guyema lub 3% roztwór soli fizjologicznej.
11. Olejek immersyjny.
12. Zestaw narzędzi do nakłuwania palca.

W zależności od budowy substancji ziarnisto-siatkowatej wyróżnia się pięć rodzajów retikulocytów: pyłopodobne, w kształcie korony, niecałkowicie usieciowane, w pełni usieciowane i w kształcie kuli (patrz ryc.).

Pobieranie krwi w celu zliczenia w niej retikulocytów odbywa się zgodnie z zaleceniami lekarza. Aby policzyć liczbę retikulocytów, są one barwione. W tym celu użyj:

1. Metoda przyżyciowego (nadżyciowego) barwienia retikulocytów.
2. Metoda równoczesnego barwienia nadżyciowego płytek krwi i retikulocytów według Aleksiejewa.

Rozważmy te metody bardziej szczegółowo.

Przyżyciowe (nadżyciowe) barwienie retikulocytów

Ta metoda wymaga następujących odczynników:

1. Bezwodny alkohol etylowy: kalcynowany bezwodny (biały) siarczan miedzi umieszcza się w suchym, zakorkowanym szklanym naczyniu i wlewa 1/4 absolutnego alkoholu. Zawartość jest wstrząśnięta. Alkohol absolutny (alkohol niezawierający wody) można otrzymać przez odwodnienie alkoholu uprzednio kalcynowanym siarczanem miedzi. Odwodnienie zostaje zatrzymane, gdy siarczan miedzi przestaje zabarwiać się na niebiesko.
2. Nasycony roztwór błękitu brylantowo-krezylowego w alkoholu absolutnym: 1 g błękitu krezylowo-brylantowego dodaje się do 80 ml alkoholu absolutnego.
3. Azur I.

Technika barwienia na żywo i liczenia retikulocytów

Szkiełka są wstępnie powlekane nasyconym roztworem błękitu diamentowo-krezylowego. Świeżą kroplę krwi rozprowadza się na szkiełku z farbą, tak jak przy przygotowywaniu rozmazu krwi. Preparat natychmiast umieszcza się na 6-8 minut w wilgotnej komorze, po czym suszy na powietrzu i poddaje mikroskopii (okular 7X, obiektyw 90X z podniesionym kondensorem). Retikulocyty są liczone dokładnie tak samo, jak w przypadku ogranicznika pola widzenia. Retikulocyty wybarwione błękitem brylantowo-krezylowym są bladozielone z niebieską lub niebieską siatką (patrz ryc.).

Zamiast błękitu brylantowo-krezylowego do barwienia retikulocytów można zastosować farbę lazurową I (1 g lazuru I na 40 ml alkoholu absolutnego; przechowywana w temperaturze pokojowej przez 2 dni) zgodnie z zaleceniami Magina.

Jednoczesne barwienie nadżyciowe płytek krwi i retikulocytów według Aleksiejewa

Do tej metody używana jest farba Aleksiejewa. Do kolby o pojemności 100 ml wlewa się 1 g farby lazur II i dodaje przygotowany w osobnej kolbie odczynnik o następującym składzie: 5 g cytrynianu sodu, 4 g chlorku sodu i 45 ml wody destylowanej. Zawartość kolby powoli ogrzewa się na ruszcie azbestowym przy ciągłym mieszaniu, nie doprowadzając do wrzenia. Schłodzić, przefiltrować. Filtrat jest stosowany jako roboczy roztwór farby.

Technika jednoczesnego barwienia i liczenia płytek krwi i retikulocytów

Farbę Aleksiejewa wciąga się do miksera dla leukocytów do znaku 1,0, końcówkę wyciera się z farby i kładzie na stole. Wykonać głębsze niż zwykle wstrzyknięcie w palec. Krew pobierana jest do 4/5 objętości rozprężonej części miksera, uważając, aby nie dostały się do niej pęcherzyki powietrza. Krew jest szybko wydmuchiwana z kapilarnej części miksera na wacik, a pozostała zawartość do otworu w szkiełku. Ze studni ciecz jest ponownie wciągana do miksera. Powtarzając tę ​​​​manipulację dwa lub trzy razy, krew miesza się z odczynnikiem. Po ostatnim wlaniu płynu do miksera pozostawia się go w pozycji poziomej na 15-30 minut w celu wybarwienia retikulocytów i płytek krwi. Następnie mikserem wstrząsa się przez minutę i uwalniane są 1-2 krople. Z kolejnych kropli przygotowywane są cienkie rozmazy. Preparaty suszy się na powietrzu, utrwala alkoholem metylowym i barwi farbą Romanowskiego w rozcieńczeniu 1-2 kropli na 1 ml wody przez 35-45 minut. Farbę zmywa się wodą, a rozmazy suszy się i mikroskopijnie. W rozmazie zabarwionym według Aleksiejewa retikulocyty są różowe z niebieską siatką (patrz ryc.), A płytki krwi są niebieskawo-liliowe.

Retikulocyty i płytki krwi są zliczane jednocześnie dla 1000 erytrocytów w taki sam sposób, jak opisano w temacie „Płytki krwi”. Wyniki dla retikulocytów wyrażono w ppm; płytek krwi oblicza się w przeliczeniu na 1 mm3 krwi (w obliczeniach uwzględnia się liczbę erytrocytów zliczoną u danego pacjenta).

We krwi osób zdrowych jest 5-10% retikulocytów.

Recenzje zamieszczone na tej stronie są osobistymi opiniami osób, które je napisały. Nie stosuj samoleczenia!

Retikulocyty (znaczenie kliniczne i diagnostyka laboratoryjna)

(1) retikulocyty, które mają jądro (erytronormoblasty), a ich ziarnistość jest zlokalizowana w postaci gęstej korony wokół jądra;

(2) retikulocyty mające substancję ziarnisto-siatkowatą w postaci kulki lub grudki;

(3) retikulocyty, mające ziarnistość w postaci gęstej sieci;

(4) retikulocyty, mające substancję ziarnisto-siatkowatą w postaci pojedynczych nitek;

(5) retikulocyty zawierające pojedyncze granulki.

Z niedokrwistością hemolityczną (liczba retikulocytów może dochodzić do 60% lub więcej (szczególnie wzrasta podczas kryzysów hemolitycznych);

W przypadku ostrej utraty krwi (przez 3-5 dni po utracie krwi dochodzi do przełomu retikulocytarnego), w tym wzrostu liczby retikulocytów, pozwala podejrzewać utajone krwawienie (np. u pacjentów z chorobą wrzodową przewodu pokarmowego, dur brzuszny);

W leczeniu niedokrwistości z niedoboru żelaza żelazem (kilka dni (3 - 10) po rozpoczęciu leczenia przeciwniedokrwistości niedokrwistości złośliwej);

Z ostrym brakiem tlenu;

Z przerzutami nowotworów do szpiku kostnego.

nieprawidłowa postać hemoglobiny;

Z regeneracyjnymi niedokrwistościami aplastycznymi i hipoplastycznymi;

Z niedokrwistością spowodowaną brakiem żelaza, witaminy B12, kwasu foliowego (niedokrwistość mikrocytarno-hipochromowa i megaloblastyczna);

Z niedokrwistością syderoblastyczną;

Z przerzutami raka do kości;

Z chorobą popromienną i radioterapią;

W leczeniu cytostatyków;

Z chorobami autoimmunologicznymi układu krwiotwórczego;

Z chorobą nerek;

Z nawrotem niedokrwistości Addisona-Birmera;

Niewłaściwy dobór antykoagulantu lub niedostateczne wymieszanie krwi z antykoagulantem;

Długotrwałe ściskanie ręki opaską uciskową;

Odbiór sulfonamidów (możliwe są zarówno niedoszacowane, jak i przeszacowane wyniki);

Transfuzja krwi na krótko przed badaniem;

Hemoliza próbki krwi.

Ocena aktywności erytropoezy w stanach z towarzyszącą hemolizą lub utratą krwi;

Ocena zdolności regeneracji szpiku kostnego po terapii cytotoksycznej i przeszczepie szpiku kostnego;

Ocena przywrócenia syntezy erytropoetyny po przeszczepieniu nerki;

Kontrola antydopingowa u sportowców (przyjmowanie erytropoetyny);

Rozpoznanie nieefektywnej hematopoezy lub zmniejszonej produkcji krwinek czerwonych;

Diagnostyka różnicowa niedokrwistości;

Wykrywanie naruszenia zdolności regeneracyjnych szpiku kostnego z niedoborem żelaza, witamin B12, B6, folianów, miedzi i monitorowanie odpowiedniej terapii;

Ocena odpowiedzi na leczenie erytropoetyną, erytrosupresorami.

Retikulocyty o niskiej zawartości RNA, najbardziej dojrzałe (LFR%, frakcje retikulocytów o niskiej fluorescencji, frakcja retikulocytów o niskiej fluorescencji);

Retikulocyty o średniej zawartości RNA (MFR%, frakcje retikulocytów o średniej fluorescencji) – frakcja retikulocytów o średniej fluorescencji);

Retikulocyty o wysokiej zawartości RNA (HFR%, frakcje retikulocytów o wysokiej fluorescencji) – frakcja retikulocytów o wysokiej fluorescencji);

Frakcja niedojrzałych retikulocytów (IRF%, frakcja niedojrzałych retikulocytów).

Liczenie retikulocytów w rozmazie po zabarwieniu ich specjalnymi barwnikami

Zliczanie retikulocytów w rozmazie po wybarwieniu ich specjalnymi barwnikami jest w praktyce najczęściej stosowaną metodą liczenia liczby retikulocytów. Wynika to z faktu, że metoda jest prosta, dość tania i nie wymaga specjalnego drogiego sprzętu, dzięki czemu może być stosowana w każdym klinicznym laboratorium diagnostycznym.

Zasada metody

Identyfikacja ziarnistej substancji siatkowej retikulocytów z barwieniem nadżyciowym barwnikami alkalicznymi z ich dalszym liczeniem w rozmazie krwi.

Odczynniki

Możesz użyć jednego z następujących barwników:

1. Nasycony roztwór genialnego błękitu krezylowego w alkoholu absolutnym (aby przygotować alkohol absolutny, konieczne jest wytrzymanie 96% etanolu w kilku zmianach kalcynowanego proszku siarczanu miedzi). Na 100 ml absolutnego alkoholu pobiera się 1,2 g farby.
2. Roztwór Azure I: Azur I - 1 g, szczawian amonu - 0,4 g, chlorek sodu - 0,8 g, alkohol etylowy 96% - 10 ml, woda destylowana - 90 ml. Roztwór farby w zamkniętej butelce umieszcza się na 2-3 dni w termostacie o temperaturze 37 ° C i okresowo energicznie wstrząsa. Następnie ochłodzono do temperatury pokojowej i przesączono przez bibułę filtracyjną. Roztwór przechowuje się w pojemniku z ciemnego szkła. Jeśli pojawi się osad, farbę należy ponownie przefiltrować.
3. Roztwór Azure II: Azur II - 1 g, cytrynian sodu - 5 g, chlorek sodu - 0,4 g, woda destylowana - 45 ml. Roztwór pozostawia się w termostacie w temperaturze 37°C na 2 dni, od czasu do czasu mieszając. Aby przyspieszyć rozpuszczanie, farbę można ogrzewać na małym ogniu przez 15 do 20 minut, nie doprowadzając do wrzenia. Ochłodzić do temperatury pokojowej i przesączyć. Przechowywać w pojemniku z ciemnego szkła.

Specjalny sprzęt

Postęp definicji

Barwienie retikulocytów przeprowadza się na szkle lub w probówce.

Barwienie retikulocytów na szkle

Podczas barwienia retikulocytów na szkle dobrze umyte i odtłuszczone szkiełko jest podgrzewane nad płomieniem palnika. Kroplę jednego z wyżej wymienionych barwników nanosi się na szkło za pomocą szklanej pałeczki i przygotowuje się rozmaz farby za pomocą matowego szkła. Glassgraf służy do oznaczania strony szkła, na którą nakładana jest smuga farby. W tej formie szkło można przygotować do przyszłego użytku i przechowywać w suchym, ciemnym miejscu. Przed analizą przygotowywana jest wilgotna komora. Zwykle do tego celu używają szalki Petriego z rolkami zwilżonej waty lub bibuły filtracyjnej ułożonymi wzdłuż krawędzi. Kroplę krwi nakłada się na rozmaz farby, przygotowuje się z niego cienki rozmaz i natychmiast umieszcza w wilgotnej komorze na 3-10 minut. Rozmazy są następnie suszone na powietrzu.

Barwienie retikulocytów in vitro

Barwienie retikulocytów in vitro różni się przy użyciu różnych barwników.

Metoda 1 - barwienie retikulocytów in vitro brylantowym błękitem krezylowym.

Przed użyciem sporządzić roztwór roboczy błękitu krezylowego brylantowego w probówce na bazie kropli 1% roztworu szczawianu potasu 4 krople roztworu barwnika błękitu krezylowego brylantowego. Do farby dodaje się 0,04 ml krwi (dwie pipety do kreski 0,02). Mieszaninę dokładnie, ale delikatnie miesza się i pozostawia na 30 minut. Następnie ponownie wymieszaj i przygotuj cienkie rozmazy.

Metoda 2 - barwienie retikulocytów in vitro lazurem II.

Do probówki umieścić 0,05 ml roztworu barwnika lazurowego II i 0,2 ml krwi. Mieszaninę dokładnie miesza się i pozostawia na 20 - 30 minut. Ponownie wymieszaj i przygotuj cienkie rozmazy.

Metoda 3 - barwienie retikulocytów in vitro lazurem I.

Umieść 0,3 - 0,5 ml roztworu farby lazurowej I i 5 - 6 kropli krwi pipetą z aparatu Panczenkowa do probówki. Probówkę zamyka się gumowym korkiem, mieszaninę dokładnie, ale delikatnie miesza się i pozostawia na 1-1,5 godziny (retikulocyty lepiej barwią się przy ekspozycji 1,5-3 godzin). Wymieszaj i przygotuj cienkie pociągnięcia.

Gotowe barwniki do retikulocytów są obecnie dostępne na rynku. Barwienie retikulocytów za ich pomocą przeprowadza się zgodnie z załączoną instrukcją.

Liczba retikulocytów.

Rozmazy przygotowane jedną z powyższych metod są mikroskopowane za pomocą soczewki zanurzeniowej. W rozmazie retikulocyty i erytrocyty są zabarwione na żółtawo-zielonkawy, ziarnista nitkowata substancja w retikulocytach jest niebieska (po wybarwieniu lazurem II i genialnym błękitem krezylowym) lub niebieskawo-fioletowym (po wybarwieniu lazurem I).

Zdjęcia retikulocytów:

Znajdź pola widzenia, w których erytrocyty znajdują się oddzielnie. W tych polach widzenia należy policzyć co najmniej 1000 erytrocytów i odnotować wśród nich liczbę erytrocytów zawierających substancję ziarnisto-włóknistą. Większą dokładność uzyskuje się przy liczeniu na 2000 - 3000 erytrocytów.

Ze względu na to, że w polu widzenia znajduje się duża liczba erytrocytów, co utrudnia liczenie, konieczne jest ograniczenie (zmniejszenie) pola widzenia. Aby to zrobić, możesz użyć albo specjalnego okularu, w którym możesz zmniejszyć pole widzenia do wymaganego rozmiaru, albo użyć specjalnego „okienka” (wycięte z papieru kółko o średnicy nieco mniejszej niż okular, w środku koła wycina się mały romb, a powstałe okienko wkłada się do okularu).

Liczbę zliczonych retikulocytów wyraża się na 100 (w procentach) lub na 1000 (w ppm) erytrocytów.

Przykład: Licząc 1000 erytrocytów w rozmazie, ujawniono, że 15 na 1000 erytrocytów ma substancję o ziarnistej siatce w takim czy innym stopniu, to znaczy są to retikulocyty. Dlatego liczba retikulocytów w tym przypadku wynosi 1,5% lub 15‰.

Literatura:

• Podręcznik „Laboratoryjne metody badań w klinice” pod redakcją Menshikova V.V. - Moskwa, „Medycyna”, 1987
• Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. i współautorzy - „Kliniczne badania laboratoryjne” - Moskwa, „Medycyna”, 1984

Zliczanie liczby retikulocytów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej

Metoda zliczania liczby retikulocytów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej jest prosta i wymaga niewiele czasu, dokładniejsza niż metoda konwencjonalna, ponieważ mikroskopia fluorescencyjna ujawnia najmniejsze ziarna substancji siatkowato-włóknistej.

Retikulocyty

Retikulocyty to młode krwinki czerwone powstałe po utracie jąder komórkowych przez normoblasty. Cechą charakterystyczną retikulocytów jest obecność w ich cytoplazmie substancji ziarnisto-włóknistej (retikulum), reprezentującej zagregowane rybosomy i mitochondria.

Patologiczne inkluzje w erytrocytach

Ciała Jolly'ego (ciałka Howella-Jolly'ego) to małe, okrągłe, fioletowo-czerwone inkluzje o wielkości µm, występujące po 1 (rzadko 2-3) w jednym erytrocytach. Są to pozostałości jądra po usunięciu jego OZE. Wykrywane są przy intensywnej hemolizie i „przeciążeniu” RES, po splenektomii, z niedokrwistością megaloblastyczną.

Cytochemiczne badanie lipidów

Cytochemiczne badanie lipidów opiera się na wykorzystaniu barwników rozpuszczalnych w tłuszczach (Sudan III, Sudan IV, czarny Sudan itp.). Do identyfikacji neutralnego tłuszczu stosuje się Sudan III, który zabarwia tłuszcz na pomarańczowo. Lipoidy są lepiej wykrywane z czernią Sudanu (barwienie na czarno).

Analiza moczu według Nechiporenko

Metoda Nechiporenko w domowej diagnostyce laboratoryjnej jest najczęstszą metodą ilościowego oznaczania utworzonych pierwiastków w moczu. Ta metoda jest najprostsza, dostępna dla każdego laboratorium i wygodna w praktyce ambulatoryjnej, a także ma szereg zalet w porównaniu z innymi znanymi ilościowymi metodami badania osadu moczu. Zgodnie z metodą Nechiporenko liczbę utworzonych elementów (erytrocytów, leukocytów i cylindrów) określa się w 1 ml moczu.

©18 Diagnostyka laboratoryjna

Retikulocyt - co to jest w badaniu krwi? Wskaźniki normy i oznaczenie

Retikulocyt jest prekursorem erytrocytów, czyli jest to erytrocyt w młodej postaci. We krwi zdrowej osoby ich zawartość wynosi 0,2-1,2%. Ten stosunek odzwierciedla zawartość retikulocytów we krwi w stosunku do erytrocytów. Dojrzewają 4-5 dni.

Podstawowe koncepcje

Cechą charakterystyczną młodych form erytrocytów jest to, że w cytoplazmie znajduje się substancja ziarnisto-włóknista, która jest zagregowanym rybosomem i mitochondriami. Substancję tę można wykryć za pomocą specjalnej metody barwienia rozmazów krwi. To barwienie retikulocytów nazywa się nadżyciowym, to znaczy jest wytwarzane bez uprzedniego utrwalania komórek.

Grupy retikulocytów

W sumie eksperci wyróżniają pięć głównych grup retikulocytów. Różnią się siatkówką. Jego gęstość i wiek są odwrotnie proporcjonalne: im grubsze oczka, tym są młodsze. Dowiedzmy się, jaki jest najmłodszy retikulocyt.

Jest to komórka, która ma siatkę w postaci grubej kuli. Komórki te należą do pierwszej grupy. Retikulocyty o bardziej dojrzałej postaci pojawiają się jako substancja o wyraźnie widocznej siatce. W grupach czwartej i piątej jest reprezentowany przez pojedyncze nitki i ziarna. Najczęściej krew osób zdrowych zawiera retikulocyty tych ostatnich grup, czyli bardziej dojrzałych. Z reguły stanowią one około 80% reszty. Wraz ze zwiększoną regeneracją, która jest charakterystyczna dla niektórych patologii, wzrasta liczba retikulocytów z pierwszych trzech grup. Te patologie obejmują:

Kryzys retikulocytarny towarzyszący niedokrwistości z niedoboru witaminy B12.

Funkcje pełnione przez retikulocyty

Retikulocyt jest również erytrocytem. Charakteryzuje się taką samą funkcją jak erytrocyty. Oznacza to, że komórki również przenoszą cząsteczki tlenu do różnych tkanek i narządów, ale wydajność tego procesu jest znacznie niższa niż w przypadku przenoszenia tlenu przez dojrzałe erytrocyty. Retikulocyty mogą adsorbować cząsteczki żelaza zawarte w hemoglobinie. Jest to możliwe dzięki receptorom wrażliwym na transferynę. Dlaczego wykonuje się liczbę retikulocytów? Więcej na ten temat później.

Mechanizm pobierania krwi

Pobiera się próbkę krwi w celu określenia tego wskaźnika w ramach ogólnej analizy. Jeśli istnieje potrzeba określenia poziomu retikulocytów, lekarz, który przepisał analizę, wskazuje w kierunku potrzebę dodatkowego liczenia.

Ta analiza nie wymaga specjalnego przygotowania, ale tradycyjnie jest przyjmowana rano na pusty żołądek. Jednocześnie, jeśli zajdzie taka potrzeba, można go przekazać o dowolnej porze dnia. Krew do analizy należy pobrać z palca, jej badanie przeprowadza się w laboratorium na oddziale hematologii.

Zliczanie liczby retikulocytów przeprowadza się w rozmazie barwionym nadżyciowo. Stosowana jest metoda mikroskopowa, to znaczy ich liczba jest po prostu liczona poprzez umieszczenie próbki krwi pod mikroskopem. Do tej pory istnieje sprzętowa metoda liczenia. Jest używany przez nowoczesne laboratoria.

Oznaczenie retikulocytów w badaniu krwi to RET.

Przeprowadzenie analizy

Istnieje kilka metod przeprowadzania takiego badania:

• Szkło jest myte, suszone i podgrzewane specjalnym palnikiem. Następnie nakłada się na niego jeden z trzech barwników, następnie dodaje się kroplę krwi, po czym wykonuje się cienki rozmaz. Szklankę umieszcza się na określony czas w szalce Petriego lub innej komorze, po czym suszy się ją na świeżym powietrzu.
• Jeśli używana jest probówka, umieszcza się w niej substancję barwiącą i dodaje się tam kroplę krwi. Mieszaninę należy wymieszać. Czas oczekiwania - od 20 minut do 3 godzin, w zależności od użytego odczynnika. Następnie ponownie wymieszaj płyn znajdujący się w probówce, pobiera się z niego rozmazy.

Trudno powiedzieć, która metoda zapewnia dokładniejsze wyniki. Oba są dobre na swój sposób, ale lekarz może uznać za konieczne przeprowadzenie analizy w określony sposób, wtedy musi skierować go w odpowiednim kierunku.

Wskaźniki

Przy obliczaniu poziomu retikulocytów różnice między płciami w normie mają znaczenie dopiero po 12 latach. Do tego wieku norma u dzieci obojga płci jest taka sama. W wieku około roku dziewczęta rozpoczynają miesiączkę, która jest regularna. W wyniku miesięcznej utraty krwi poszerza się zakres fluktuacji komórek erytroidalnych.

1. U noworodków norma mieści się w przedziale od 0,15 do 1,5%.

2. U dzieci w wieku dwóch tygodni - od 0,45 do 2,0%.

3. U dzieci w wieku od jednego do dwóch miesięcy - od 0,25 do 0,95%.

4. U dzieci w wieku sześciu miesięcy - od 0,2 do 1,0%.

5. U dzieci w wieku od dwóch do sześciu lat - od 0,25 do 0,75%.

6. U dzieci w wieku od sześciu do dwunastu lat - od 0,25 do 1,3%.

7. U mężczyzn w wieku powyżej dwunastu lat - od 0,25 do 1,7%.

8. U kobiet powyżej dwunastego roku życia - od 0,12 do 2,1%.

Co oznacza sytuacja, gdy liczba retikulocytów jest zwiększona?

Wzrost liczby retikulocytów we krwi

W przypadku niedokrwistości o różnej etymologii szczególną rolę odgrywa określenie liczby retikulocytów. Jeśli ich zawartość jest zwiększona we krwi, wówczas ta patologia nazywa się retikulocytozą. Jeśli wzrostowi towarzyszy wzrost poziomu hemoglobiny, oznacza to, że szpik kostny ma dobrą zdolność regeneracyjną. Może się to zdarzyć, jeśli obecne są następujące czynniki:

Niedokrwistość hemolityczna o różnej etymologii. Jest to szereg chorób charakteryzujących się niszczeniem czerwonych krwinek. Zjawisko to nazywa się hemolizą. W tym przypadku zawartość retikulocytów we krwi może osiągnąć 60%. Jeśli wystąpi kryzys hemolityczny, liczba ta może ulec zaostrzeniu.

Zatrucie hemotoksyną powodujące hemolizę. Hemotoksyny obejmują jad żmii i niektóre leki stosowane w leczeniu erytremii. Toksyny malarii mogą również powodować hemolizę.

Terapia lewodopą w chorobie Parkinsona.

Długotrwałe stosowanie niektórych leków przeciwzapalnych i przeciwgorączkowych.

Terapia lekami „Erytropoetyna” choroby anemiczne.

Przerzuty do szpiku kostnego.

Okres rekonwalescencji po radioterapii lub chemioterapii.

Retikulocytoza może być fałszywa i prawdziwa.

Dlaczego warto wykonać badanie retikulocytów? To pytanie jest często zadawane.

Fałszywa i prawdziwa retikulocytoza

Prawdziwa retikulocytoza charakteryzuje się wzrostem liczby młodych retikulocytów we krwi, czemu towarzyszy wzrost ich liczby w szpiku kostnym.

Fałszywa retikulocytoza charakteryzuje się wzrostem liczby retikulocytów wyłącznie we krwi obwodowej, podczas gdy w szpiku kostnym ich poziom pozostaje prawidłowy lub nieznacznie obniżony.

Obniżone stawki

Obserwuje się proces zmniejszania liczby retikulocytów z zahamowaniem erytropoezy. Występuje w wyniku następujących czynników:

Długotrwałe stosowanie sulfonamidów.

Przyjmowanie niektórych leków, takich jak chloramfenikol lub karbamazepina.

Przewlekłe choroby zakaźne.

Niektóre ciężkie choroby nerek wpływające na erytropoezę.

Obrzęk śluzowaty lub inna dysfunkcja tarczycy.

Nowotwory w szpiku kostnym.

Zbadaliśmy, czym jest retikulocyt. To młoda czerwona krwinka w ludzkiej krwi.

Przyczyny wzrostu retikulocytów, jak określić funkcjonalność układu krwiotwórczego?

Czasami przy przepisywaniu badania klinicznego ogólne badanie krwi może osobno wskazywać RTC lub RET - skróty, które pokazują zawartość retikulocytów. Są to komórki bezjądrzaste, które poprzedzają erytrocyty (czerwone krwinki) podczas ich tworzenia. Retikulocyty w badaniu krwi, ich liczba i stosunek do erytrocytów odzwierciedlają stan i funkcjonalność reprodukcyjną szpiku kostnego, a także całego układu krwiotwórczego.

Certyfikat medyczny

Możesz szczegółowo określić, jakie są retikulocyty: są to okrągłe lub gwiaździste komórki, które tworzą się w szpiku kostnym i przekształcają się w czerwone krwinki pod wpływem hormonu glikoproteinowego erytropoetyny.

Kolor retikulocytów jest zwykle różowy z niebieskim odcieniem. Ich cechą odróżniającą od późniejszej formy jest obecność w strukturze szczątkowego RNA, mitochondriów i innych organelli, które wyglądają jak formacje ziarniste i nitkowate, których utrata wskazuje na transformację w dojrzałą komórkę.

Funkcjonalne obowiązki retikulocytów pokrywają się z erytrocytami - przenoszenie tlenu, ale ze znacznie mniejszą wydajnością ze względu na niską zawartość w nich hemoglobiny. Koncentrują się głównie w czerwonym szpiku kostnym, kościach płaskich i rurkowatych, a do krwiobiegu dostają się tylko dojrzałe krwinki czerwone. Ale niewielka frakcja niedojrzałych retikulocytów jest również dopuszczona do krwiobiegu obwodowego, co wskazuje na aktywację procesu wytwarzania erytrocytów (erytropoezy).

Proces powstawania krwi

Erytropoeza rozpoczyna się od przekształcenia erytroblastu, komórki zawierającej jądro, ale niezawierającej hemoglobiny, w pronormblast. Ponadto w serii erytroidów powstaje zasadochłonny erytroblast, który ma już zadatki na hemoglobinizację.

Gdy erytrocyty przodków gromadzą substancję zatrzymującą tlen (hemoglobinę), komórka przechodzi przez etapy polichromatofilnego, a następnie oksyfilnego normoblastu. W tym okresie jądro jest nadal zachowane, którego inwolucja prowadzi do powstania bezpośrednio młodego erytrocytu - retikulocytu, który ma już zdolność zatrzymywania i transportu tlenu i dwutlenku węgla.

Młode krwinki czerwone pozostają w miejscu powstania do 40 godzin, po czym niewielka ich część pod wpływem erytropoetyny przedostaje się do naczyń krwionośnych, gdzie swobodnie przemieszcza się przez 1,5 lub 2 dni. W tym czasie komórka traci retikulum (resztkowe formacje nitkowate) i zamienia się w erytrocyt.

Etapy rozwoju retikulocytów

We krwi retikulocyty przechodzą pięć etapów dojrzewania, gdy retikulum ewolwentuje:

1. etap zerowy - gdy substancja zasadochłonna (siatkowata substancja wewnątrzkomórkowa) ma kształt jądra, to znaczy nagromadzenie ziarnistości wygląda jak rodzaj korony;
2. pierwszy etap - substancja zasadochłonna (BS) uzyskuje strukturę siatkową w postaci kuli;
3. drugi etap - sieć ziarnista jest równomiernie rozłożona w komórce;
4. trzeci etap - BV wygląda jak osobne wątki;
5. etap czwarty – BV jest rozprowadzany w postaci małych ziaren wzdłuż obwodu komórki.

W zdrowym organizmie retikulocyty we krwi powinny występować tylko w III i IV stadium dojrzewania (80 proc.), a 0 – II – w pojedynczych egzemplarzach. Jednak nadmierna śmierć krwinek czerwonych lub głód tlenu stymulują zwiększone wytwarzanie erytropoetyny przez nerki, co prowadzi do uwalniania niedojrzałych komórek wszystkich stadiów, a nawet normoblastów do naczyń.

Badanie krwi na obecność retikulocytów

Liczba retikulocytów w rozmazie krwi nie jest obowiązkowa w badaniu hematologicznym, ale stanowi część ogólnej oceny klinicznej. Dopiero gdy pojawiają się pewne podejrzenia, lekarz dokonuje specjalnego oznaczenia w analizie.

Powody badania

Przyczyną wykonania badania na ilość RTC we krwi jest sprawdzenie pracy szpiku kostnego i nerek w produkcji krwinek i erytropoetyny w takich przypadkach:

• z podejrzeniem niedokrwistości różnego pochodzenia;
• w razie potrzeby kontrola farmakoterapii niedoboru żelaza, witaminy B12 i kwasu foliowego;
• do monitorowania podczas przyjmowania leków zawierających erytropoetynę, erytrosupresorów;
• z ciężkim krwawieniem zewnętrznym lub podejrzeniem wewnętrznego;
• ze względu na konieczność przyjmowania leków neutralizujących toksyny w wyniku ukąszeń jadowitych owadów lub węży;
• do kontrolowania produkcji czerwonych krwinek podczas przeszczepu szpiku kostnego lub nerki;
• do definicji raka.

Ostatni punkt dotyczy osobliwości przerzutów niektórych guzów nowotworowych do narządów krwiotwórczych.

Metoda wykrywania

Jeśli jądro zostanie utracone, na komórki krwi można nakładać tylko barwniki kwasowe. Barwienie w rozmazie krwi wskazuje elementy serii erytroidów, które następnie wykrywa się za pomocą mikroskopii świetlnej. Aby wyizolować retikulocyty z całkowitej masy erytrocytów, konieczne jest zastosowanie specjalnych preparatów zmieniających kolor ziarnistej struktury komórek.

Sam proces wykrywania polega na zmieszaniu osocza krwi z błękitem krezylowym brylantowym lub barwnikiem oranżu akrydynowego in vitro (in vitro) lub na szkle w proporcjach: 1 część krwi na 10 części substancji.

Metody na szkle i in vitro są zasadniczo różne. W pierwszym przypadku zmieszane rozmazy krwi z barwnikiem zanurza się w wilgotnym środowisku na 10 minut, po czym suszy i liczy komórki pod mikroskopem. W drugim wariancie wymieszaną kompozycję w probówce pozostawia się na maksymalnie 3 godziny, po czym ponownie miesza, rozsmarowuje i liczy.

Kiedy komórki gwiaździste retikulocytów stają się widoczne i określa się stopień ich dojrzałości (na podstawie struktury wybarwionego BV), można uzyskać informację o stanie szpiku kostnego.

Dopuszczalne wskaźniki

Normalny poziom retikulocytów odpowiada procesowi tworzenia krwi w zdrowym organizmie. Do uporządkowania danych służy specjalna tabela, w której uporządkowane są przedziały normy według wieku i płci osoby.

Norma retikulocytów we krwi u dzieci

Norma retikulocytów u dzieci różni się w zależności od konkretnego okresu formowania się układu krwiotwórczego. Tak więc u noworodków do 14 dnia życia dopuszczalny wskaźnik wynosi od 0,15 do 1,5 procent w stosunku do krwinek czerwonych. Normalne wartości dla niemowląt do dwóch miesięcy wynoszą od 0,45 do 2,1 procent, a do sześciu miesięcy - 0,25 - 0,9 procent. U dziecka w wieku od sześciu miesięcy do roku wartości od 0,2 do 1 procenta są uważane za zdrowe i stabilizują się do szóstego roku życia. Dalej przedział się zawęża: od 7 do 12 lat waha się od 0,2 do 1,3 proc.

Retikulocyty we krwi u dorosłych

Dalsza dopuszczalna zawartość retikulocytów we krwi zależy bardziej od płci dziecka niż od wieku i odpowiada wskaźnikom dorosłych. Wynika to z początku cyklu miesiączkowego u dziewcząt, co oznacza comiesięczną utratę krwi, a tym samym wzrost produkcji krwinek w tym okresie. Wskaźniki normatywne:

• dopuszczalny poziom młodych krwinek czerwonych we krwi kobiet i młodych dziewcząt w wieku od 13 lat będzie wynosił od 0,12 do 2,05 proc. (odpowiednio od 1,2 do 20 ppm);
• liczba retikulocytów u mężczyzn wynosi zwykle od 0,24 do 1,7 procent całkowitej masy erytroidalnej.

Tak więc u osoby dorosłej ustala się stały zakres dopuszczalnego stężenia młodych krwinek, które zawierają substancję ziarnistą. Jednocześnie zwiększona liczba rekulocytów lub przełom retikulocytarny wskazują na pewne zaburzenia w funkcjonowaniu układu krwiotwórczego.

Wzrost liczby retikulocytów

Podwyższone retikulocyty (lub inaczej retikulocytoza) mogą być zarówno dodatnie, jak i ujemne dla osobnika. Zwiększona liczba niedojrzałych krwinek występuje w przypadkach:

• Z pozytywnymi wynikami terapii preparatami zawierającymi żelazo, witaminę B12 i kwas foliowy, które zwykle pojawiają się po tygodniu.
• Podczas uzupełniania objętości krwi po znacznej utracie krwi.
• Z pozytywnym skutkiem w leczeniu chorób onkologicznych poprzez leki przeciwnowotworowe czy radioterapię.

Ważny! Retikulocytozę obserwuje się przy niedoborze tlenu na znacznej wysokości nad poziomem morza.

Ujemne wartości retikulocytozy obejmują:

• Konsekwencje chorób, takich jak dur brzuszny, które wywołują krwawienie wewnętrzne.
• Retikulocyty są zwiększone podczas zatrucia truciznami chemicznymi lub czynnikami obcymi.
• Fałszywa retikulocytoza świadczy o obecności niedojrzałych komórek we krwi przy ich braku w szpiku kostnym, co wskazuje na procesy zapalne lub przerzuty w narządzie.
• Retikulocytozę obserwuje się w przypadku malarii, niedokrwistości hemolitycznej lub talasemii.

Zwiększona zawartość niedojrzałych krwinek we krwi (retikulocytoza) jest obarczona jej pogrubieniem, co może następnie prowadzić do zakrzepicy, zawału serca lub udaru mózgu.

Retikulocyty we krwi podczas ciąży

U kobiet w ciąży całkowita objętość krwi wzrasta z powodu osocza, dlatego obserwuje się jego rozcieńczenie i spadek poziomu czerwonych krwinek. Ze względu na to, że we krwi nie ma wystarczającej ilości hemoglobiny, rozwija się niedokrwistość, która aktywuje proces erytropoezy. Dlatego u kobiet w ciąży stwierdza się wysoki odsetek retikulocytów. Klinika tego zjawiska spełnia normę fizjologicznego przystosowania organizmu do rodzenia dziecka.

Retikulocyty są obniżone

Retikulocytopenia (gdy poziom retikulocytów jest obniżony) często wskazuje na uszkodzenie nerek i/lub szpiku kostnego. Czynnikami zmniejszającymi zawartość młodych erytrocytów są:

• Anemia spowodowana brakiem kwasu foliowego, witaminy B12 lub żelaza, co prowadzi do zniszczenia czerwonych krwinek.
• Choroby nerek, ale mogą nieznacznie obniżyć poziom retikulocytów.
• Nadużywanie alkoholu, które wykaże spadek RTC z powodu zahamowania czynności nerek, zahamowania czynności szpiku kostnego i bezpośredniego zniszczenia komórek w wyniku zatrucia.

Ważny! Nowotwory złośliwe mogą również obniżać poziom retikulocytów we krwi. Zależy to od obszaru szpiku kostnego, w którym rak dał przerzuty.

Sam wskaźnik zawartości retikulocytów we krwi nie jest diagnozą. Przy znacznym odchyleniu od dopuszczalnego zakresu wyznacza ogólny kierunek diagnostyki.

Wykrywanie ziarnistej substancji retikulocytów po barwieniu błękitem brylantowo-krezylowym bez uprzedniego utrwalania.

Odczynniki:

1% roztwór błękitu brylantowo-krezylowego: 50 mg barwnika rozpuszcza się w 5 ml soli fizjologicznej i dodaje 20 mg cytrynianu sodu (roztwór przechowuje się w pojemniku z ciemnego szkła, jest dobry przez kilka dni).

Metodologia:

Umieść 2 krople 1% roztworu genialnego błękitu krezylowego i 1 kroplę krwi na szkiełku podstawowym z dołkiem. Delikatnie wymieszać szklanym prętem i mieszaninę umieścić w wilgotnej komorze (szalka Petriego, w której brzegi umieszcza się lekko zwilżoną gazę lub waciki) na 30 minut w temperaturze pokojowej. Następnie wykonuje się rozmazy i suszy.

Liczba retikulocytów:

W rozmazach erytrocyty są zabarwione na żółto-zielono, a ziarnista siatka w retikulocytach jest niebieska i fioletowa.

Rozmazy są badane pod mikroskopem za pomocą soczewki zanurzeniowej. Retikulocyty zlicza się na 1000 erytrocytów (większą dokładność uzyskuje się przy zliczeniu 2000-3000 erytrocytów).

Wzrost liczby retikulocytów obserwuje się przy:

stymulacja erytropoezy (utrata krwi, hemoliza, kryzys retikulocytarny z skutecznym leczeniem niedokrwistości z niedoboru witaminy B12, ostry brak tlenu).

Spadek liczby retikulocytów obserwuje się przy:

hamowanie erytropoezy (niedokrwistość aplastyczna i hipoplastyczna, nieleczona niedokrwistość z niedoboru witaminy B12, przerzuty nowotworowe do kości),

choroby nerek, choroby endokrynologiczne.

Obserwuje się wzrost ich retikulocytów we krwi obwodowej (retikulocytoza): z niedokrwistością hemolityczną (liczba retikulocytów może dochodzić do 60% lub więcej (szczególnie wzrasta podczas kryzysów hemolitycznych); z ostrą utratą krwi (przełom retikulocytarny występuje 3- 5 dni po utracie krwi), w tym wzrost retikulocytów pozwala podejrzewać ukryte krwawienie (na przykład u pacjentów z chorobą wrzodową przewodu pokarmowego, durem brzusznym); z malarią; z policytemią; w leczeniu żelaza niedokrwistości z niedoboru żelaza (kilka dni (3 - 10) po rozpoczęciu leczenia przeciwanemicznego niedokrwistości złośliwej), przy ostrym niedotlenieniu, przy przerzutach nowotworu do szpiku kostnego. Należy pamiętać, że w przypadku zwiększonej destrukcji erytrocytów, udział retikulocytów może przekraczać 50% z powodu sztucznego wzrostu liczby retikulocytów (jak wspomniano wcześniej, udział retikulocytów oblicza się w % wszystkich erytrocytów. stosuje się indeks”, który oblicza się według wzoru: (% retikulocytów x hematokryt) / 45 x 1,85, gdzie 45 to prawidłowy hematokryt, a 1,85 to liczba dni potrzebnych do przybycia nowych retikulocytów do krwi. Jeśli indeks

METODY ZLICZANIA LICZBY RETIKULOCYTÓW

(1) Zliczanie liczby retikulocytów w rozmazie po zabarwieniu ich specjalnymi barwnikami. Metoda ta jest metodą najczęściej stosowaną w praktyce ze względu na to, że jest prosta, dość tania i nie wymaga specjalnego drogiego sprzętu, dzięki czemu może być stosowana w każdym klinicznym laboratorium diagnostycznym. Zasada metody opiera się na wykrywaniu ziarnistej substancji retikulocytów podczas barwienia nadżyciowego barwnikami alkalicznymi (nasycony roztwór błękitu krezylowego w absolutnym alkoholu / roztwór lazurowy I / roztwór lazurowy II) z ich dalszym liczeniem we krwi rozmaz. Barwienie retikulocytów przeprowadza się na szkle lub w probówce. Liczenie przeprowadza się za pomocą mikroskopu: rozmazy przygotowane jedną z powyższych metod są mikroskopowane za pomocą soczewki zanurzeniowej; w rozmazie retikulocyty i erytrocyty są zabarwione na żółtawo-zielonkawy, ziarnista nitkowata substancja w retikulocytach jest niebieska (przy barwieniu lazurem II i brylantowym błękitem krezylowym) lub niebieskawo-fioletowym (przy barwieniu lazurem I). (2) Zliczanie liczby retikulocytów przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej. Ta metoda jest prosta i zajmuje trochę czasu, dokładniejsza niż metoda konwencjonalna, ponieważ mikroskopia fluorescencyjna ujawnia najmniejsze ziarna substancji siatkowato-włóknistej, ale jest to możliwe tylko za pomocą mikroskopu luminescencyjnego i specjalnych barwników, a zatem jest dostępna tylko dla kilka laboratoriów. Zasada zliczania liczby retikulocytów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej opiera się na wykorzystaniu zdolności substancji retikulocytów do fluorescencji po potraktowaniu krwi oranżem akrydynowym. Krew miesza się z oranżem akrydynowym w probówce lub mikserze w stosunku 1 część krwi i 10 części barwnika (mieszaninę można przechowywać nie dłużej niż 5 godzin). Mieszaninę miesza się przez 2 minuty, kroplę mieszaniny nanosi się na szkiełko i przykrywa szkiełkiem nakrywkowym. W takim przypadku płyn nie powinien wychodzić poza szkiełko nakrywkowe. Mikroskopowo przy użyciu filtra światła ZhS-17. W preparacie erytrocyty mają ciemnozielony obrys i nie fluoryzują, natomiast w retikulocytach substancja ziarnisto-siatkowata świeci jaskrawoczerwonym światłem, co ułatwia liczenie retikulocytów. We krwi stabilizowanej heparyną lub cytrynianem sodu nie obserwuje się fluorescencji retikulocytów. (3) Automatyczne liczenie retikulocytów za pomocą analizatora hematologicznego. W nowoczesnych analizatorach hematologicznych technologia zliczania krwinek oparta jest na metodzie konduktometrycznej zaproponowanej przez H. Wallace i Joseph R. Culter w 1947 r. Zasada metody polega na zliczeniu liczby i określeniu charakteru impulsów, które pojawiają się, gdy komórka przechodzi przez otwór (otwór) o małej średnicy, po obu stronach którego znajdują się dwie elektrody odizolowane od siebie. Każdemu przejściu komórki przez otwór towarzyszy pojawienie się impulsu elektrycznego, który jest rejestrowany przez czujnik elektroniczny. Podziału komórek na kategorie (erytrocyty, leukocyty, płytki krwi, osad) dokonuje urządzenie na podstawie analizy amplitudy odbieranych impulsów.Aby określić stężenie komórek wystarczy przejść określoną objętość pobrać próbkę przez kanał i policzyć liczbę generowanych impulsów. Należy zauważyć, że oprócz klasycznego parametru retikulocytów – względnej (%) zawartości retikulocytów (RET%, procent retikulocytów), określanej metodami 1 i 2 diagnostyki laboratoryjnej, w związku z pojawieniem się najnowocześniejszych technik hematologicznych analizatorów (metoda 3), możliwe stało się uzyskanie (na przykład przy użyciu opatentowanego barwnika fluorescencyjnego do analizatora Sysmex-XT-2000i) dodatkowych informacyjnych parametrów retikulocytów: retikulocyty o niskiej zawartości RNA, najbardziej dojrzałe (LFR%, frakcje retikulocytów o niskiej fluorescencji , frakcja retikulocytów o niskiej fluorescencji); retikulocyty o średniej zawartości RNA (MFR%, frakcje retikulocytów o średniej fluorescencji) – frakcja retikulocytów o średniej fluorescencji); retikulocyty o wysokiej zawartości RNA (HFR%, frakcje retikulocytów o wysokiej fluorescencji) – frakcja retikulocytów o wysokiej fluorescencji); frakcja niedojrzałych retikulocytów (IRF%, frakcja niedojrzałych retikulocytów). Zróżnicowanie retikulocytów na podstawie stopnia dojrzałości i odpowiednio zawartości kwasów nukleinowych jest odzwierciedleniem aktywności hematopoetycznej szpiku kostnego. Metoda (analizator Sysmex-XT-2000i). W komorze przepływowej komórki przecinają wiązkę lasera półprzewodnikowego, podczas gdy wiązka jest rozpraszana pod dużymi i małymi kątami, a barwnik fluorescencyjny jest wzbudzany. Umożliwia to określenie różnych stadiów dojrzałości retikulocytów na podstawie zawartości RNA w komórkach oraz intensywności ich luminescencji. Zautomatyzowane zliczanie retikulocytów jest bardzo dokładne (zlicza się ponad 30 000 czerwonych krwinek) i powtarzalne (współczynnik zmienności wynosi około 6%). Technologia ta zapewnia dokładne zliczanie retikulocytów nawet przy bardzo niskich stężeniach.

Retikulocytopenia i retikulocytoza, przyczyny rozwoju, wartość diagnostyczna ich wykrywania.

Studfiles.net

Retikulocyty (retikulocytus)

Retikulocyty to młode krwinki czerwone, które powstają po utracie jąder komórkowych przez normoblasty.

Cechą charakterystyczną retikulocytów jest obecność substancji ziarnisto-siatkowatej, która pojawia się przy barwieniu nadżyciowym, czyli bez uprzedniego utrwalenia komórek.

Mikroskop elektronowy wykazał, że struktury ziarnistej siatki są pozostałościami retikulum endoplazmatycznego, rybosomów i mitochondriów zawierających RNA. W retikulocytach synteza białka (globiny), hemu, puryn, nukleotydów pirymidynowych, fosfatydów, lipidów odbywa się w niewielkim stopniu, ale RNA nie jest w nich syntetyzowany. W ciągu 2 dni retikulocyt pozostaje w krwioobiegu, po czym wraz ze spadkiem RNA staje się dojrzałym erytrocytem.

W rozmazach barwionych konwencjonalnymi metodami hematologicznymi szaro-różowe retikulocyty są polichromatofilne, tj. barwione różnymi barwnikami.

Obecnie stosowana jest ujednolicona metoda zliczania liczby retikulocytów po ich wybarwieniu.

• genialny błękit krezylowy,
• Azur I lub
• Azur II bezpośrednio na szkle lub w probówce.

1. Zasada metody

Identyfikacja ziarnistej substancji erytrocytów po barwieniu farbami alkalicznymi z ich dalszym liczeniem w rozmazie krwi.

2. Odczynniki:

a) nasycony roztwór brylantowego błękitu krezylowego w alkoholu absolutnym (aby przygotować alkohol absolutny, 96% etanol należy przechowywać w kilku zmianach kalcynowanego proszku siarczanu miedzi): 1,2 g farby na 100 ml alkoholu;

b) roztwór lazuru I: lazur I – 1 g, szczawian amonu – 0,4 g, chlorek sodu – 0,8 g, alkohol etylowy 96% – 10 ml, woda destylowana – 90 ml. Roztwór farby w zamkniętej fiolce umieszcza się na 2–3 dni w termostacie o temperaturze 37°C i okresowo energicznie wstrząsa. Następnie ochłodzono do temperatury pokojowej i przesączono przez bibułę filtracyjną. Roztwór przechowuje się w pojemniku z ciemnego szkła. Jeśli pojawi się osad, farbę należy ponownie przefiltrować;

c) Roztwór Azur II: Azur II - 1 g, cytrynian sodu - 5 g, chlorek sodu - 0,4 g, woda destylowana - 45 ml. Roztwór pozostawia się w termostacie w temperaturze 37°C na 2 dni, od czasu do czasu mieszając. Aby przyspieszyć rozpuszczanie, farbę można ogrzewać na małym ogniu przez 15–20 minut bez wrzenia. Ochłodzić do temperatury pokojowej i przesączyć. Przechowywać w pojemniku z ciemnego szkła.

3. Kolorowanie

Kolorystyka na szkle:

• dobrze umyte i odtłuszczone szkiełko jest podgrzewane nad płomieniem palnika. Szklanym prętem nakłada się na szkło kroplę jednego z barwników i na polerowanym szkle przygotowuje się smugę farby. Szklanym rysikiem zaznacz stronę szkła, na którą została naniesiona smuga farby. W tej formie szkło można przygotować do przyszłego użytku i przechowywać w suchym, ciemnym miejscu;
• na tak przygotowane szklanki nanosi się kroplę krwi, wykonuje się cienką smugę, a szklankę natychmiast umieszcza się w wilgotnej komorze. Aby to zrobić, użyj szalki Petriego z pokrywką, w której wzdłuż krawędzi umieszcza się lekko zwilżoną gazę lub bawełniane rolki;
• rozmazy są przechowywane w wilgotnej komorze przez 3-5 minut, a następnie suszone na powietrzu. Ziarnisto-siatkowata substancja retikulocytów zmienia kolor na purpurowo-niebieski, wyraźnie odcinając się od zielonkawo-niebieskiego tła erytrocytów.

Koloryzacja in vitro:

• metoda 1: przed użyciem sporządzić w probówce roztwór roboczy błękitu krezylowego brylantowego na kroplę 1% roztworu szczawianu potasu 4 krople roztworu barwnika 1. Dodać 40 µl krwi do barwnika (dwie pipety do kreski 0,02). Dokładnie, ale delikatnie wymieszać i odstawić na 30 minut. Wymieszaj i przygotuj cienkie pociągnięcia;
• metoda 2: 0,05 ml roztworu barwnika 3 i 0,2 ml krwi umieszcza się w probówce. Mieszaninę dokładnie miesza się i pozostawia na 20-30 minut. Wymieszaj i przygotuj cienkie pociągnięcia;
• metoda 3: umieścić 0,3-0,5 ml roztworu barwnika 2 i 5-6 kropli krwi do probówki za pomocą pipety z aparatu Panczenkowa. Probówkę zamyka się gumowym korkiem, mieszaninę dokładnie, ale delikatnie miesza się i pozostawia na 1–1,5 godziny (retikulocyty lepiej wybarwiają się po ekspozycji na 1,5–3 godziny). Wymieszaj i przygotuj cienkie pociągnięcia.

4. Liczba retikulocytów

W rozmazach erytrocyty są zabarwione na żółtawo-zielonkawą, ziarnisto-włóknistą substancję - niebieską lub niebieskawo-fioletową.

• Rozmazy przygotowane jedną z powyższych metod są mikroskopowane za pomocą soczewki zanurzeniowej;
• konieczne jest policzenie co najmniej 1000 erytrocytów i odnotowanie wśród nich liczby erytrocytów zawierających substancję ziarnisto-włóknistą. Przy jednolitych cienkich rozmazach, w których erytrocyty są ułożone w jednym rzędzie, wybiera się takie pole widzenia, w którym znajduje się np. 50 erytrocytów, a następnie oblicza się 20 takich pól widzenia;
• w praktyce dla większej dokładności stosuje się specjalny okular, w którym można zmniejszyć pole widzenia do wymaganej wielkości. W przypadku braku gotowego okularu można go łatwo przygotować odkręcając okular ×7, wkładając w niego kartkę papieru z wyciętym małym kwadracikiem i przykręcając go. Liczbę zliczonych retikulocytów wyraża się na 1000 lub na 100 erytrocytów.

Dawka: 0,5–1,2% (30–70 × 109/l)

Wzrost liczby retikulocytów obserwuje się przy:

• utrata krwi (szczególnie ostra);
• niedokrwistość hemolityczna, zwłaszcza w okresie kryzysu (do 20-30%);
• na tle leczenia niedokrwistości megaloblastycznej witaminą B12 (kryzys retikulocytarny - wzrost liczby retikulocytów w 4-8 dniu leczenia).

Spadek liczby retikulocytów jest charakterystyczny dla:

• niedokrwistości aplastyczne i hipoplastyczne;
• nieleczona niedokrwistość megaloblastyczna;
• choroba popromienna;
• przyjmowanie leków cytotoksycznych.

Czy Chrystus żyje? Czy Chrystus powstał z martwych? Naukowcy badają fakty

diagnoza.ru

Retikulocyty normalne i zliczanie ich liczby

Retikulocyty, których norma zmienia się z powodu wielu czynników, są nieuformowanymi formami krwinek czerwonych i można je znaleźć w szpiku kostnym i krwi obwodowej. Z reguły retikulocyty we krwi dojrzewają w ciągu trzech do pięciu dni, a następnie komórki te zamieniają się w już dojrzałe czerwone krwinki. Ponadto liczba nieuformowanych erytrocytów u noworodków jest znacznie większa niż u dorosłych.

Wykrywanie retikulocytów:

Podczas identyfikacji retikulocytów, których normę określa się za pomocą specjalnej tabeli, należy wziąć pod uwagę ich różnice w stosunku do dojrzałych erytrocytów. Ta różnorodność komórek krwi albo zawiera całe jądro, albo jego pozostałości obserwuje się jako część substancji ziarnisto-włóknistej. Aby określić liczbę takich komórek, konieczne jest zbadanie koloru rozmazu krwi w laboratorium. W tym celu stosuje się roztwór niebieskiego diamentu, który nakłada się na odtłuszczone i wstępnie umyte szkło, a dopiero potem wykonuje się rozmaz.

Po wykryciu retikulocytów, których norma jest inna, natychmiast po rozmazie, użyte szkło należy umieścić na szalce Petriego - specjalnej wilgotnej komorze, a następnie trzymać przez pięć minut, dokładnie wysuszyć na świeżym powietrzu, a następnie mikroskopowo. Ponadto substancja typu ziarnisto-włóknistego wewnątrz retikulocytu jest zwykle zabarwiona na fioletowo-niebieski odcień, a tło erytrocytów wyróżnia się niebieskawo-zielonym odcieniem.

Jeśli stosuje się metodę Gel-Meyer, barwienie niedojrzałych krwinek można zobaczyć znacznie lepiej, ale wymaga to probówki Vidala. W tym naczyniu kilka kropli krwi miesza się z genialnym roztworem i chlorkiem sodu, następnie probówkę zamyka się pokrywką, a sam rozmaz wykonuje się w ciągu godziny.

Liczba retikulocytów:

Obliczając liczbę niedojrzałych krwinek, należy wziąć za podstawę 1000 czerwonych krwinek, a następnie wziąć pod uwagę retikulocyty, których szybkość zwykle waha się na poziomie 0,2% -1,2% liczby dorosłych czerwonych krwinek. Średnio u większości ludzi liczba niedojrzałych krwinek czerwonych wynosi zwykle 0,7% całkowitej liczby w pełni dojrzałych krwinek. Jeśli liczba retikulocytów jest wyższa niż maksymalna dopuszczalna norma o 10% lub więcej, u osoby rozwija się retikulocytoza, choroba, której towarzyszy regularne ostre krwawienie i niedokrwistość hemolityczna.

Licząc retikulocyty (norma u dzieci jest zwykle wysoka) warto pilnować, aby ich liczba nie przekraczała wartości granicznych typowych dla dorosłych. Normy zależą również od płci, ponieważ u kobiet 2,07% niedojrzałych erytrocytów nadal uważa się za akceptowalny parametr, au mężczyzn wskaźnik ten nie powinien przekraczać 1,92%.

W przypadkach, gdy poziom retikulocytów jest znacznie zwiększony, wskazuje to na obecność takich zaburzeń w organizmie, jak malaria i talasemia, policytemia i niedotlenienie, anemia, wszelkiego rodzaju zespoły hemolityczne, ale takie wskaźniki są również możliwe przy leczeniu cyjanokobalaminą. W przypadku obniżenia poziomu niedojrzałych erytrocytów u człowieka może wystąpić niedokrwistość aplastyczna i niedorozwojowa, wszelkiego rodzaju choroby nerek i obrzęk śluzowaty, a także szerzenie się przerzutów nowotworowych do kości.

Aby zdiagnozować stopień zaawansowania niedokrwistości, należy obliczyć „wskaźnik retikulocytów”, który jest obliczany jako stosunek odsetka retikulocytów do prawidłowych wartości hematokrytu pomnożony przez liczbę dni wymaganych do przedostania się niedojrzałych komórek do krwi obwodowej. Jeśli otrzymany wskaźnik nie przekracza dwóch, wskaźnik wskazuje na hipoproliferacyjny składnik niedokrwistości, a jeśli przekracza dwa, wskazuje na prawdopodobieństwo zwiększonego tworzenia czerwonych krwinek.

fb.ru

Badanie krwi. Analiza krwi

Oznaczanie stężenia hemoglobiny

Wśród metod oznaczania hemoglobiny najszerzej stosowane są metody oparte na kolorymetrii, tj. określaniu intensywności barwy. Są to zamknięte szklane probówki z wzorcem barwy (hematyna chlorowodorowa w glicerynie). 0,1% roztwór kwasu solnego jest najpierw wlej do centralnej probówki do kreski odpowiadającej 2 lub 3 g%, następnie ostrożnie dodaj (dokładnie!) 0,02 ml krwi pobranej z palca specjalną pipetą przymocowaną do hemometru. Warstwę powierzchniową kwasu przemywa się pipetą i po zmieszaniu krwi z kwasem pałeczką szklaną pozostawia się na 5 minut do utworzenia chlorowodorku hematyny. Następnie dodając wodę destylowaną i ciągle mieszając patyczkiem, kolor płynu w centralnej probówce całkowicie odpowiada wzorcom. Stężenie hemoglobiny odpowiada oznaczeniu poziomu roztworu na dolnym menisku. Stężenie hemoglobiny można wyrazić w g% hemoglobiny lub w jednostkach konwencjonalnych. 16,67 g hemoglobiny przyjmuje się jako 100 jednostek.

Stężenie hemoglobiny we krwi u kobiet wynosi od 11,7 do 15,8 g ° / o lub od 117 do 158 g / l, u mężczyzn - od 13,3 do 18 g% lub od 133 do 180 g / l.

Pobieranie krwi do liczenia uformowanych elementów

Aby policzyć utworzone pierwiastki, krew rozcieńcza się w mikserach (melanżerach) lub probówkach, co ostatnio stało się szerzej stosowane.Do liczenia krwinek czerwonych krew rozcieńcza się 200-krotnie 3% roztworem chlorku sodu; jeśli do pobierania krwi używamy pipety hemometrycznej, której objętość wynosi 0,02 ml, to musimy pobrać 4 ml roztworu chlorku sodu.Aby policzyć leukocyty, krew rozcieńcza się 20-krotnie, a więc 0,02 ml krwi i 0,38 ml 3% pobiera się zabarwiony błękitem metylenowym roztwór kwasu octowego, który jest niezbędny do spowodowania zniszczenia krwinek czerwonych.Pobieranie krwi należy przeprowadzać z dużą dokładnością, ponieważ przy tak małych objętościach przedostanie się pęcherzyków powietrza lub pozostałości krwi na na zewnątrz pipety prowadzi do zwiększenia błędu oznaczenia.Przed napełnieniem komory konieczne jest wytarcie wypolerowanego szkła w komorze, tak aby pojawiły się opalizujące pierścienie.Przed napełnieniem komory rozcieńczona krew jest dokładnie wymieszana, ponieważ komórki osadzić na ściankach probówki lub ampułek miksera, następnie kroplę krwi umieścić pod wyszlifowanym szkłem komory i pozostawić na 1 min w spoczynku, aby komórki osiadły.

Zliczanie uformowanych elementów odbywa się przy małym powiększeniu mikroskopu (obiektyw 8X, okular 15X lub 10X) w zaciemnionym polu widzenia.

Erytrocyty zlicza się na 5 dużych kwadratach (16x5 = 80 małych kwadratów) rozmieszczonych w różnych częściach komory, można brać kwadraty położone po przekątnej Liczone są erytrocyty leżące wewnątrz kwadratu oraz te, które znajdują się na jego górnej i lewej stronie; erytrocyty leżące na dolnej i prawej stronie nie są liczone, ponieważ należą już do innych kwadratów.

Po zliczeniu liczby erytrocytów (A) w 5 dużych kwadratach znajdują średnią arytmetyczną liczbę erytrocytów w jednym małym kwadracie A / 80, tj. W 1/4000 μl. Dlatego, aby znaleźć liczbę krwinek czerwonych w 1 µl, liczbę uzyskaną z dzielenia musimy pomnożyć przez 4000 i przez 200 (rozcieńczenie).

W ten sposób otrzymujemy następującą formułę:

X=A*4000*200/80,

gdzie X to liczba erytrocytów w 1 µl, a A to liczba erytrocytów w 5 dużych kwadratach.Jeśli policzymy erytrocyty w 5 dużych kwadratach i rozcieńczymy krew 200 razy, to całkowity współczynnik dla liczby A wyniesie 10 000.

Normalna zawartość czerwonych krwinek we krwi kobiet wynosi 4-5 * 106, mężczyzn - 4,5-5,5 * 106.

Leukocyty są liczone w 100 dużych kwadratach, nie dzielonych na małe, co odpowiada 1600 małym. Tak więc liczbę leukocytów znalezioną w 100 kwadratach dzieli się przez 1600, mnoży przez 4000 i 20 (rozcieńczenie). W takim przypadku, aby uzyskać wynik, wystarczy pomnożyć liczbę zliczonych leukocytów przez 50. Normalna zawartość leukocytów we krwi wynosi 5 * 103 - 8 * 103 w 1 μl.

Kolorowy wskaźnik krwi. Barwny wskaźnik krwi to liczba, która pokazuje średnie nasycenie hemoglobiny pojedynczego erytrocytu danej krwi w porównaniu z wysyceniem pojedynczego erytrocytu normalnej krwi.Za normalną zawartość hemoglobiny przyjmuje się 100 jednostek, a normalną liczbę erytrocytów wynosi 5 000 000. Wartość wskaźnika barwy zdrowych ludzi waha się od 0,9 do 1,1. Badanie rozmazu krwi obwodowej. W rozmazach krwi bada się morfologię erytrocytów i bierze się pod uwagę formułę leukocytów, czyli procentowy stosunek między różnymi typami leukocytów.Aby badanie zakończyło się sukcesem, należy przeprowadzić przygotowanie, utrwalenie i wybarwienie rozmazów krwi bardzo ostrożnie.W celu przygotowania rozmazu, powierzchnię czystej, odtłuszczonej szklanki w odległości 0,5 cm od krawędzi szkiełka dotykają kropli krwi w miejscu nakłucia na palcu, a następnie wypolerowane szkiełko nakrywkowe umieszcza się pod kątem 45° w stosunku do szkiełka podstawowego i pierwsze doprowadza się do kropli krwi tak, aby rozeszła się ona wzdłuż tylnej krawędzi szkiełka nakrywkowego i ruchem płuc, bez gwałtownego nacisku, utworzyła rozmaz. Rozmaz powinien kończyć się na szkiełku „wiechą”. Rozmaz suszy się na powietrzu, po wyschnięciu dobry, cienki rozmaz ma żółty kolor.

Prostym, zaostrzonym ołówkiem na środku rozmazu wpisuje się nazwisko pacjenta i datę badania, po czym rozmazy utrwala się w alkoholu metylowym przez co najmniej 5 minut i barwi zgodnie z metodą Romanovsky'ego-Giemsy.

Farba składa się z mieszaniny barwników kwaśnych (eozyna) i zasadowych (Azur II). Ta metoda barwienia umożliwia różnicowanie komórek. Pierwszym krokiem w pracy z rozmazem jest ocena morfologii krwinek czerwonych. Aby to zrobić, wybierz cienkie miejsce, w którym komórki leżą osobno, a nie w postaci kolumn monet. Normalne erytrocyty to komórki pozbawione jąder, różowe, zaokrąglone, mniej więcej tej samej średnicy - 7,5 mikrona, erytrocyty mają kształt dwuwklęsłego krążka, dlatego w rozmazie mają oświecenie w środku i intensywniej zabarwione obrzeże.

(moduł bezpośredni4)

Przygotowanie gęstej kropli

Aby przetestować krew na malarię Plasmodium, wykonuje się grubą kroplę. Krew pobiera się w zwykły sposób z miazgi palca. Kroplę krwi wypływającą z miejsca wstrzyknięcia dotyka się powierzchnią szkiełka podstawowego. 2-3 krople nakładane osobno są rozmazane rogiem innej szklanki. Suchy rozmaz wylewa się (bez utrwalania) farbą Romanovsky'ego na 30-40 minut, następnie kolorową kroplę ostrożnie spłukuje się wodą i preparat suszy się w pozycji pionowej.

Przykładowe dane analityczne

Zwiększona liczba erytrocytów i hemoglobiny we krwi może być związana z chorobą czerwonych krwinek - erytremią, wtedy liczba erytrocytów dochodzi do 9-106 lub więcej, a liczba czerwonych krwinek wzrasta w wyniku chorób inne narządy i układy (ze zdekompensowaną rozlaną pneumosklerozą, rozedmą płuc, niektórymi rodzajami wrodzonych wad serca, stwardnieniem naczyniowym układu tętnic płucnych, wadami prawego serca, niewydolnością krążenia III stopnia itp.). Ten objaw nazywa się erytrocytoza.

Morfologicznie zmienione erytrocyty pojawiają się w niedokrwistości hiperchromicznej (megaloblastycznej). Jednocześnie we krwi znajdują się duże erytrocyty o wysokiej zawartości hemoglobiny (makrocyty), erytrocyty embrionalne (megaloblasty), które zwykle nie występują we krwi obwodowej. Wraz z niedokrwistością hipochromiczną zmienia się również morfologia erytrocytów: pojawiają się małe erytrocyty (mikrocyty) o zmienionym kształcie (poikilocyty) oraz erytrocyty o niskiej zawartości hemoglobiny (erytrocyty hipochromiczne).

Liczba leukocytów

Przy obliczaniu wzoru leukocytów konieczne jest określenie cech strukturalnych cytoplazmy i jąder komórkowych. Przynależność komórki do jednej lub drugiej grupy określa się na podstawie całości wszystkich znaków cytoplazmy i jądra.Przy obliczaniu wzoru należy przestrzegać tej samej metody przesuwania szkła pod mikroskopem. Najczęściej metodę mikroskopii stosuje się w 4 miejscach rozmazu. Wiadomo, że leukocyty są rozmieszczone nierównomiernie w rozmazie: na brzegach jest mniej limfocytów niż na środku, a na końcu rozmazu jest więcej monocytów niż na początku. Dlatego przy obliczaniu wzoru leukocytów najlepiej poruszać się po linii przerywanej, licząc wszystkie napotkane komórki.Liczenie 200 komórek to praktyczne minimum dla rutynowych badań klinicznych.Leukocyty krwi obwodowej, w zależności od obecności lub braku ziarnistości w cytoplazmy dzielą się na granulocyty (neutrofilowe, eozynofilowe, zasadochłonne) i agranulocyty (monocyty i limfocyty).

Neutrofile. Wielkość komórki wynosi 10-12 mikronów. Cytoplazma komórek jest bladoróżowa z drobną, obfitą, purpurową ziarnistością. Zwykle we krwi stwierdza się kłujące (2-4%) i segmentowane (60-65%) neutrofile.

eozynofile. Komórki są tej samej wielkości co neutrofile, czasami nieco większe, cytoplazma jest wypełniona dużymi żółtawo-czerwonymi granulkami, jądro ma zwykle dwa segmenty tej samej wielkości. Eozynofile to normalne 2-4%. Bazofile. Jest to najmniejszy granulocyt pod względem wielkości. Jądro jest nieregularne, wielopłatowe, zajmuje prawie całą komórkę, jasnoróżowa cytoplazma zawiera duże ciemnofioletowe granulki. Granulki zasadochłonne rozpuszczają się w wodzie, a czasami w wyniku wypłukiwania podczas barwienia preparatu w miejscu granulek pozostają bezbarwne komórki. Zwykle bazofile to 0,1% limfocytów. Wielkość komórek waha się od 7 do 10 µm. Jądro jest zwarte, zaokrąglone lub w kształcie fasoli. Cytoplazma komórek jest bladoniebieska ze strefą oświecenia wokół jądra (okołojądrowego), czasami w cytoplazmie występują oddzielne azurofilne ziarna o czerwono-fioletowym kolorze. We krwi obwodowej 20-35% limfocytów jest prawidłowych.Monocyty. Wielkość komórek waha się od 12 do 20 µm. Jądro ma często kształt podkowy, czasem nieregularny. Cytoplazma jest bardziej rozbudowana niż limfocytów, barwy popielatoniebieskiej z drobną, delikatną, czerwonawą ziarnistością Monocyty są prawidłowe 6-8%.

Podwyższona zawartość leukocytów we krwi nazywana jest leukocytozą, a obniżona – leukopenią.

Barwienie i liczenie retikulocytów

Retikulocyty to młode czerwone krwinki z cienką niebieską siatkówką lub ziarnistością w cytoplazmie. Komórki te charakteryzują się aktywnością czerwonej hematopoezy.Do wykrywania liczby retikulocytów stosuje się metodę barwienia przyżyciowego (żywotnego). Rozmazy błękitu brylantowo-krezylowego wykonuje się na szkiełkach podstawowych w alkoholu absolutnym, a następnie w zwykły sposób na witrażu wykonuje się rozmaz krwi i umieszcza w wilgotnej komorze na 3-5 minut, po czym suszy się go i bada pod mikroskopem za pomocą soczewka zanurzeniowa. Normalnie na 1000 erytrocytów znajduje się 8-10 retikulocytów, ich liczbę zwykle wyraża się w procentach (0,8-1%) lub w ppm (8-10% o) w stosunku do erytrocytów.Retikulocyty to komórki charakteryzujące się zwiększoną produkcją erytrocyty w szpiku kostnym.

Pojawiają się w dużym odsetku we krwi obwodowej z niedokrwistością niedobarwliwą („niedokrwistością złośliwą”), z niedokrwistością hemolityczną i innymi chorobami. Podczas zaostrzenia niedokrwistości hiperchromicznej obserwuje się zmniejszoną zawartość retikulocytów i ich całkowity zanik we krwi obwodowej.

Aby zapobiec agregacji (sklejaniu się) płytek krwi, wykonuje się nakłucie skóry przez kroplę 14% roztworu siarczanu magnezu nałożonego na palec. Krew miesza się z magnezją i na szklanych szkiełkach przygotowuje się cienkie rozmazy, które następnie utrwala się i barwi według Romanowskiego przez 2 h. Określa się liczbę płytek krwi na 1000 erytrocytów, a znając liczbę erytrocytów w 1 μl, liczbę liczy się liczbę płytek krwi w 1 μl krwi. Normalne płytki krwi zawierają od 250 000 do 400 000.

Definicja OB

Szybkość sedymentacji erytrocytów oznacza się we krwi zmieszanej z cytrynianem sodu w stosunku 4: 1. Reakcję ustawia się w aparacie Panczenkowa. Kapilara Panczenkowa jest przemywana cytrynianem sodu, następnie cytrynian jest wciągany do znaku 50, gdzie znajduje się litera R (odczynnik) i wdmuchiwany do probówki Vidalevsky'ego. Ta sama kapilara służy do dwukrotnego pobrania krwi do znaku K (krew) i zmieszania jej z cytrynianem. Ta sama kapilara jest wypełniona krwią zmieszaną z cytrynianem do podziału 0 i umieszczona pionowo na statywie na godzinę. Godzinę później w milimetrach odnotowuje się wartość kolumny osocza utworzonej nad osadzonymi erytrocytami, która jest miarą szybkości sedymentacji erytrocytów.Normalny ESR u mężczyzn wynosi 10 mm/h, u kobiet 14 mm/h.

Szybkość sedymentacji erytrocytów wzrasta w chorobach zapalnych, ostrych i przewlekłych, nowotworach złośliwych i innych chorobach.

Test zgodności czynnika Rh

Do probówki bez cytrynianu pobiera się 2-3 ml krwi biorcy, po skrzepnięciu krwi skrzep otacza się szklanym prętem i krew odwirowuje. Dwie krople surowicy z tej probówki nakłada się na szalkę Petriego, dodaje się do niej pół kropli krwi dawcy, miesza, a kubek umieszcza się w łaźni wodnej (42-45 °). Po 10 minutach zdejmuje się miseczkę i ogląda w świetle z lekkim kołysaniem. Pojawienie się aglutynacji wskaże na niedopuszczalność tej transfuzji krwi.

Oznaczanie liczby retikulocytów- kliniczne badanie krwi, w którym zliczane są młode krwinki czerwone wytwarzane przez szpik kostny. Badanie uzupełnia ogólne badanie krwi. Zliczanie retikulocytów wykonuje się w diagnostyce różnicowej różnych typów niedokrwistości, ocenie czynności szpiku kostnego i śledziony, monitorowaniu stanu pacjentów z niedoborem żelaza, witaminy B12 lub kwasu foliowego, niewydolnością nerek, chorobą nowotworową. Pobieranie krwi do badań pobiera się z żyły lub naczyń włosowatych. Liczbę retikulocytów określa się metodą cytometrii przepływowej. Wartości referencyjne dla mężczyzn to 23-70 tys./μl, dla kobiet - 17-63,8 tys./μl. Terminy analizy nie przekraczają 1 dnia roboczego.

Retikulocyty są prekursorami erytrocytów. Są wytwarzane przez szpik kostny podczas różnicowania i podziału komórek macierzystych. Większość retikulocytów znajduje się w szpiku kostnym, już dojrzałe erytrocyty dostają się głównie do krwioobiegu. Udział retikulocytów we krwi wynosi około 0,5-2%. Podczas przeprowadzania analizy określa się liczbę komórek tego typu i ich procent całkowitej liczby krwinek czerwonych. Wyniki pozwalają ocenić produkcję krwinek czerwonych w szpiku kostnym, określić stopień aktywności tego procesu.

Organizm utrzymuje stały poziom czerwonych krwinek we krwi. Wraz ze spadkiem ich liczby w wyniku hemolizy, upośledzenia syntezy i krwawienia, aktywowane są mechanizmy kompensacyjne przywracania prawidłowych stężeń. Zmieniając poziom i procent retikulocytów można stwierdzić wzrost produkcji krwinek czerwonych w szpiku kostnym lub zahamowanie tego procesu. Jeśli szpik kostny funkcjonuje normalnie, to utrata czerwonych krwinek prowadzi do późniejszego wzrostu ich liczby i liczby retikulocytów. Spadek poziomu tych typów komórek występuje, gdy czerwony szpik kostny jest uszkodzony przez guz, przerzuty, radioterapię i chemioterapię. Do analizy retikulocytów biomateriałem jest krew włośniczkowa lub żylna. Badanie przeprowadza się za pomocą analizatora hematologicznego metodą cytometrii przepływowej. Wyniki są wykorzystywane w ogólnej praktyce terapeutycznej, w hematologii, pediatrii, chorobach zakaźnych i chirurgii.

Wskazania

Test retikulocytów służy do oceny produkcji czerwonych krwinek przez szpik kostny. Wyniki badania pozwalają na rozróżnienie różnych typów niedokrwistości. W zależności od poziomu retikulocytów dzieli się je na hiporegeneracyjne i regeneracyjne. W pierwszym przypadku parametry testu są obniżone, produkcja czerwonych krwinek jest niewystarczająca, a funkcje szpiku kostnego są osłabione. Ta grupa obejmuje niedokrwistość hemolityczną w chorobach przewlekłych, ogólne zatrucie, kacheksję, niedobór białek, żelaza, witamin. Niedokrwistości regeneracyjnej towarzyszy kompensacyjny wzrost poziomu retikulocytów na tle zwiększonego niszczenia lub utraty erytrocytów. Ta grupa obejmuje niedokrwistości pokrwotoczne i niektóre niedokrwistości hemolityczne. Analizę retikulocytów można wykorzystać do określenia nasilenia niedokrwistości, a następnie jej wyniki są uzupełniane wskaźnikami poziomu erytrocytów, hemoglobiny i wskaźników erytrocytów.

Oznaczanie poziomu retikulocytów jest wskazane przy obniżonym poziomie czerwonych krwinek, hemoglobiny, przy dolegliwościach związanych z częstym zmęczeniem, bólami głowy, dusznościami, krwią w moczu lub stolcu. Przy ustalonej diagnozie niedokrwistości zalecana jest analiza w celu oceny skuteczności leczenia. Szczególnie często stosuje się go do monitorowania niedokrwistości spowodowanej niedoborem żelaza, witaminy B12 lub kwasu foliowego, a także rozwijających się na tle niewydolności nerek, chorób przewlekłych. Aby ocenić czynność szpiku kostnego, wskazany jest test retikulocytów na podwyższoną liczbę czerwonych krwinek w celu ustalenia przyczyny czerwienicy.

Badanie retikulocytów krwi nie służy do postawienia diagnozy. Jej głównym celem w praktyce klinicznej jest planowanie dalszych procedur diagnostycznych i monitorowanie powodzenia terapii. Liczba retikulocytów we krwi jest stosunkowo stabilna, dlatego wraz ze spadkiem poziomu erytrocytów i hematokrytu wskaźniki analizy stają się sztucznie wysokie. Można tego uniknąć, obliczając wskaźnik retikulocytów - bezwzględną liczbę retikulocytów (procent retikulocytów pomnożony przez wskaźnik hematokrytu). Inną cechą tego badania jest to, że wyniki wskazują na niedawną aktywność szpiku kostnego, ponieważ niedojrzałe krwinki czerwone krążą we krwi przez 2 dni.

Przygotowanie do analizy i zebrania materiału

Zaleca się pobieranie krwi do analizy na obecność retikulocytów rano, na czczo. Minimalny odstęp między posiłkiem a zabiegiem to 3-4 godziny. Z co najmniej jednodniowym wyprzedzeniem należy zrezygnować z intensywnego wysiłku fizycznego, spożywania alkoholu i unikać narażenia na czynniki stresowe. Zlecając analizę, warto poinformować lekarza o stosowanych lekach, ponieważ niektóre leki wpływają na poziom retikulocytów we krwi. 30 minut przed pobraniem próbki należy rzucić palenie, wykluczyć stres fizyczny i emocjonalny.

Poziom retikulocytów oznacza się we krwi włośniczkowej lub żylnej. W związku z tym ogrodzenie jest wykonane z palca serdecznego lub z żyły łokciowej. Krew umieszcza się w probówce z antykoagulantem i wysyła do laboratorium. Obecnie niemal wszędzie stosuje się analizatory hematologiczne do zliczania retikulocytów. Badanie wykonuje się metodą cytometrii przepływowej - komórki w strumieniu płynu poruszają się przez bardzo wąską kapilarę i są brane pod uwagę podczas naświetlania laserem. Termin wykonania analizy - 1 dzień.

Normalne wartości

Wyniki analizy dla retikulocytów przedstawiają bezwzględną liczbę komórek na jednostkę objętości krwi oraz procent całkowitej liczby erytrocytów. Normalnie u kobiet poziom retikulocytów waha się od 17*109 do 63,8*109 komórek/l, u mężczyzn – od 23*109 do 70*109 komórek/l. Udział komórek tego typu w ogólnej liczbie erytrocytów zmienia się wraz z wiekiem:

• od urodzenia do 2 tygodni - od 0,15 do 1,5%;
• od 2 tygodni do 1 miesiąca - od 0,45 do 1,4%;
• od 2 do 6 miesięcy - od 0,25 do 0,9%;
• od 6 miesięcy do 2 lat - od 0,2 do 1%;
• od 2 do 6 lat - od 0,2 do 0,7%;
• od 6 do 12 lat - od 0,2 do 1,3%;
• od 12 do 18 lat - od 0,12 do 2,05% dla dziewcząt, od 0,24 do 1,7% dla chłopców;
• od 18 roku życia – od 0,59 do 2,07% dla kobiet, od 0,67 do 1,92% dla mężczyzn.

Fizjologiczny wzrost poziomu retikulocytów we krwi występuje podczas niedotlenienia spowodowanego wchodzeniem na dużą wysokość lub zanurzaniem się pod wodę, długotrwałym przebywaniem w niewentylowanym pomieszczeniu, paleniem tytoniu i piciem alkoholu. Ponadto wzrost stężenia tych komórek jest czasami określany u kobiet w ciąży i jest uważany za wariant normy.

Podnieść do właściwego poziomu

Przyczyną wzrostu poziomu retikulocytów we krwi może być krwawienie. Stężenie erytrocytów spada, aby je odbudować, szpik kostny zwiększa produkcję ich prekursorów. W krwawieniach ostrych liczba retikulocytów wzrasta w 3. lub 4. dobie, w krwawieniach przewlekłych przez cały czas utrzymuje się na stałym poziomie. W chorobach, którym towarzyszy hemoliza (niszczenie krwinek czerwonych) liczba retikulocytów znacznie przekracza normę, czasami odchylenia sięgają 300%. Najczęstszymi patologiami z tej grupy są dziedziczne defekty erytrocytów, ich autoimmunologiczne niszczenie oraz uszkodzenia toksyczne w malarii. Innymi przyczynami wzrostu poziomu retikulocytów mogą być policytemia, procesy zapalne, rak szpiku kostnego lub rozprzestrzenianie się do niego przerzutów, przywrócenie funkcji szpiku kostnego po radioterapii i chemioterapii. W leczeniu niedokrwistości normalizacja stężenia retikulocytów wskazuje na powodzenie działań terapeutycznych.

Redukcja poziomu

Przyczyną spadku poziomu retikulocytów we krwi może być niedokrwistość spowodowana niedoborem żelaza, witaminy B12 czy kwasu foliowego. W takich przypadkach produkcja krwinek jest zmniejszona z powodu braku „materiału budulcowego”. Innym powodem obniżenia poziomu retikulocytów jest niedokrwistość, która rozwija się na tle uszkodzeń szpiku kostnego lub zahamowania jego funkcji. Zmiany tego typu określa się zatruciem alkoholem, zmniejszoną czynnością tarczycy, przewlekłymi infekcjami, patologiami autoimmunologicznymi, chorobami nerek, narażeniem na substancje toksyczne, w tym leki, promieniowanie.

Leczenie odchyleń od normy

W praktyce klinicznej test retikulocytów jest najczęściej przepisywany po pełnej morfologii krwi ze spadkiem liczby czerwonych krwinek i hemoglobiny. Poziom retikulocytów pozwala ocenić funkcje szpiku kostnego, syntezę czerwonych krwinek, określić rodzaj anemii i monitorować skuteczność jej leczenia. Jeśli wyniki badania odbiegają od normy, należy zasięgnąć porady lekarza – lekarza pierwszego kontaktu, pediatry, hematologa, chirurga. Aby zapobiec wpływowi czynników fizjologicznych na liczbę retikulocytów, należy wykluczyć sytuacje powodujące niedotlenienie - wchodzenie na wysokość lub schodzenie pod wodę, długotrwałe przebywanie w zagazowanym lub dusznym pomieszczeniu, palenie tytoniu, picie alkoholu.