Oznaczanie ilościowe Dikaina. Reakcje autentyczności i metody ilościowego oznaczania leków znieczulających i chlorowodorku dikainy. Skład i formy wydania

Wyślij swoją dobrą pracę w bazie wiedzy jest prosta. Skorzystaj z poniższego formularza

Studenci, doktoranci, młodzi naukowcy, którzy korzystają z bazy wiedzy w swoich studiach i pracy, będą Wam bardzo wdzięczni.

Wysłany dnia http://www.allbest.ru/

Praca kursowa

Temat: 2.4 „Reakcje autentyczności i metody ilościowego oznaczania leków znieczulających i chlorowodorku dikainy”

Wstęp

1. Udowodnienie reakcji autentyczności i metody ilościowego oznaczania na podstawie właściwości aromatycznej grupy aminowej dla związków organicznych

2. Identyfikacja i oznaczenie ilościowe anestezyny (benzokainy)

2.1 Równania reakcji autentyczności

2.2 Metody ilościowe. Obliczanie treści

3. Autentyczność i ocena ilościowa chlorowodorku dikainy (chlorowodorek tetrakainy)

3.1 Równania reakcji autentyczności

3.2 Metody ilościowe. Obliczanie treści

Wniosek

Bibliografia

Wstęp

Zajęcia mają na celu rozważenie reakcji autentyczności oraz metod ilościowego oznaczania proponowanych leków na podstawie właściwości grup funkcyjnych.

Celem pracy jest rozważenie zagadnień teoretycznych metod określania autentyczności oraz oznaczania ilościowego poszczególnych preparatów zawierających aromatyczną grupę aminową na podstawie dokumentacji regulacyjnej, SP X i SP XII, PS.

Analiza jakościowa i ilościowa preparatów organicznych polega na reakcjach z odpowiednimi grupami funkcyjnymi obecnymi w związku. W ramach zajęć przedstawiono główne reakcje jakościowe na grupy funkcyjne, a także metody ilościowego oznaczania substancji, wyznaczanie wskaźników numerycznych do obliczania zawartości ilościowej.

Przeprowadzenie analizy farmakopealnej pozwala ustalić autentyczność leku, jego czystość, określić ilościową zawartość substancji farmakologicznie czynnej lub składników tworzących postać dawkowania. Chociaż każdy z tych kroków ma określony cel, nie można ich rozpatrywać oddzielnie. Są ze sobą powiązane i wzajemnie się uzupełniają.

1. Racjonalne uzasadnieniereakcjeautentycznośćImetodyilościowydefinicjepochodzenie odichnieruchomościaromatycznygrupy aminoweDlaorganicznyznajomości

2. DefinicjaautentycznośćIilościowydefinicjeśrodek znieczulający (benzokaina)

2.1 równaniareakcjeautentyczność

aromatyczna aminoanestezyna benzokaina

A) Ogólne reakcje estrów kwasu n-aminobenzoesowego z niepodstawioną pierwszorzędową aromatyczną grupą aminową

Reakcja tworzenia barwnika azowego. Reakcja diazowania przebiega pod działaniem azotynu sodu w środowisku kwaśnym. W rezultacie powstają niestabilne sole diazoniowe. Po późniejszym dodaniu alkalicznego roztworu dowolnego fenolu (β-naftolu, rezorcyny itp.) Powstaje barwnik azowy o kolorze wiśniowym, czerwonym lub pomarańczowo-czerwonym.

GdzieR-Z 2 H 5

Anestezin tworzy zasadę Schiffa, reagując z aldehydami, na przykład z n-dimetyloaminobenzaldehydem w obecności stężonego kwasu siarkowego, pojawia się żółty lub pomarańczowy kolor:

GdzieR-Z 2 H 5

Podczas interakcji z hydroksyloaminą w środowisku alkalicznym benzokaina tworzy kwas hydroksamowy, ponieważ jest estrem:

GdzieR-Z 2 H 5

Po zakwaszeniu kwasem solnym i dodaniu roztworu chlorku żelaza (III) powstaje hydroksamian żelaza o czerwono-brązowej barwie:

Podczas przeprowadzania tej reakcji konieczne jest ścisłe przestrzeganie procedury, ponieważ wyniki są zauważalne przy określonej wartości pH.

Pierwszorzędowe aminy aromatyczne wchodzą w reakcje kondensacji z 2,4 - dinitrochlorobenzenem, tworząc jony obojnacze o budowie chinoidalnej. Po dodaniu odczynnika, roztworu wodorotlenku sodu i podgrzaniu pojawia się żółto-pomarańczowy kolor. Zabarwiony związek odzyskuje się chloroformem po zakwaszeniu kwasem octowym.

GdzieR-Z 2 H 5

Pod działaniem chloroformu i alkoholowego roztworu wodorotlenku sodu powstają izonitryle o mdłym zapachu:

GdzieR-Z 2 H 5

Produkty kondensacji z heksametylenotetraaminą w obecności stężonego kwasu siarkowego wykazują słabą fioletową fluorescencję.

Można go zidentyfikować za pomocą odczynników strącających (ogólnych alkaloidów) (kwas pikrynowy, fosforowolframowy, fosfomolibdenowy, chlorek rtęci (II) i inne.

Benzokaina tworzy pochodne dibromo lub dijodo.

Pod działaniem 5% roztworu chloraminy w kwaśnym środowisku powstaje czerwono-pomarańczowy produkt.

Z kwasem azotowym w stężonym kwasie siarkowym pojawia się żółto-zielony kolor, zmieniający kolor na czerwony po dodaniu wody i wodorotlenku sodu.

Kiedy benzokaina jest zmieszana z lodowatym kwasem octowym z tlenkiem ołowiu (IV), pojawia się czerwony kolor.

B) Własna reakcja na benzokainę - hydroliza w roztworze wodorotlenku sodu, powstały alkohol etylowy można wykryć za pomocą reakcji otrzymywania jodoformu, żółtego osadu o charakterystycznym zapachu:

Obecność rodnika etoksylowego w benzokainie można stwierdzić po działaniu kwasu octowego i stężonego kwasu siarkowego – po charakterystycznym owocowym zapachu:

2.2 Metodyilościowydefinicje.Obliczenietreść

A) Do ilościowego oznaczania anestezyny PS zaleca się metodę nitrytometryczną, zgodnie z tworzeniem soli diazoniowej:

1) potencjometrycznie;

Bibuła skrobiowo-jodowa to porowata, bezpopiołowa bibuła filtracyjna impregnowana roztworem skrobi z jodkiem potasu i suszona w ciemnym miejscu. Miareczkowanie prowadzi się do kropli miareczkowanego roztworu, pobieranej 1 minutę po punkcie równoważnikowym

dodanie titranta nie spowoduje natychmiastowego niebieskiego zabarwienia paska bibuły skrobiowej jodowanej:

2 KI+ 2 NaNO 2 + 4 HCl= I 2 + 2 NIE+ 2 KCl+ 2 NaCl+ 2 H 2 O

I 2 + skrobia= niebieskibarwiący

Stoch K \u003d Z \u003d 1

mmm =165,19 g

M(1/Z) = 165,19 g/mol

Wzór na obliczenie zawartości ilościowej z uwzględnieniem doświadczenia kontrolnego:

B) Metoda bromkowo-bromatometryczna oparta na tworzeniu pochodnych dibromowych:

Nadmiar bromu oznacza się jodometrycznie, wskaźnikiem jest skrobia, miareczkowana do koloru niebieskiego:

br 2 + 2 KI= I 2 +2 KBr

I 2 + Na 2 S 2 O 3 = 2 NaI+ Na 2 S 4 O 6

K stoch \u003d 1 / Z \u003d 1/4 (zgodnie z liczbą atomów bromu biorących udział w reakcji)

mmm =165,19 g

M(1/Z) = 41,3 g/mol

Wzór na obliczenie zawartości ilościowej:

3. DefinicjaautentycznośćIilościowydefinicjedikainachlorowodorek(tetrakainachlorowodorek)

3.1 równaniareakcjeautentyczność

A) Ogólne reakcje estrów kwasu n-aminobenzoesowego z podstawioną pierwszorzędową aromatyczną grupą aminową

Aminy drugorzędowe pod działaniem azotynu sodu tworzą związki nitrozowe:

Barwnik azowy można również otrzymać dodając lekko kwaśny roztwór aminy aromatycznej do soli diazoniowej.

Reakcje te stanowią podstawę nitrytometrycznej metody analizy amin aromatycznych.

Reakcje kondensacji. Aminy aromatyczne wchodzą w reakcje kondensacji z 2,4-dinitrochlorobenzenem, aldehydami i innymi substancjami. W wyniku interakcji amin z aldehydami powstają zasady Schiffa - związki pomalowane na kolor żółty lub pomarańczowo-żółty.

GdzieR-Z 4 H 9

reakcje halogenowania. Podstawienie zachodzi w pozycjach orto i para w stosunku do grupy aminowej. W wyniku reakcji bromowania powstają białe lub żółte osady, a woda bromowa ulega odbarwieniu.

Reakcje utleniania. Pod działaniem różnych utleniaczy aromatyczne aminy tworzą barwniki indofenolowe.

Reakcja z aromatyczną grupą nitrową.

Pod wpływem alkaliów na związek zawierający grupę nitrową barwa intensyfikuje się do żółtej, żółtopomarańczowej lub czerwonej w wyniku powstania soli kwasowej.

Chlorowodorek tetrakainy z roztworów wytrąca się jodkiem potasu w postaci soli jodowodorowej

Pod działaniem izotiocyjanianu amonu wytrąca się izotiocyjanian tetrakainy, którego temperatura topnienia wynosi 130-132 ° C

Chlorowodorek tetrakainy w reakcji z jodanem potasu w środowisku fosforanowym po podgrzaniu tworzy produkt utleniania o barwie fioletowej z maksimum absorpcji światła przy 552 nm. Reakcja jest specyficzna do oznaczania jakościowego i ilościowego.

B) Indywidualne reakcje na chlorowodorek tetrakainy:

Chlorowodorek tetrakainy po ogrzaniu ze stężonym kwasem azotowym i dodaniu do pozostałości roztworu wodorotlenku potasu nabiera krwistoczerwonego zabarwienia. Reakcja opiera się na jej nitrowaniu, a następnie utworzeniu soli potasowej związku orto-chinoidowego:

Produkty uboczne hydrolizy alkalicznej:

Po zakwaszeniu wytrąca się biały osad kwasu p-butyloaminobenzoesowego, który rozpuszcza się w nadmiarze kwasu solnego:

Z kwasu p-butyloaminobenzoesowego pod działaniem azotynu sodu wytrąca się osad związku N-nitrozo tego kwasu:

Reakcja wykrywania jonów chlorkowych:

3.2 Metodyilościowydefinicje.Obliczenietreść

1. Nitrytometria.

Metoda opiera się na reakcji diazowania pierwszorzędowych i drugorzędowych amin aromatycznych azotynem sodu, który służy jako titrant. Miareczkowanie prowadzi się w środowisku kwaśnym (kwas solny), w niskiej temperaturze, aby zapobiec rozkładowi kwasu azotawego i soli diazoniowych; jako katalizator stosuje się bromek potasu. Reakcja diazowania przebiega w czasie, więc miareczkowanie prowadzi się powoli.

Punkt równoważnikowy można ustalić na trzy sposoby:

1) potencjometrycznie;

2) przy użyciu wskaźników wewnętrznych - tropeolin 00 (przejście barwy z czerwonej na żółtą), tropeolina 00 zmieszana z błękitem metylenowym (przejście barwy z czerwono-fioletowej na niebieską), czerwień neutralna (przejście barwy z czerwono-fioletowej na niebieską);

3) przy użyciu zewnętrznych wskaźników, na przykład papieru jodowego skrobi.

Bibuła skrobiowo-jodowa to porowata, bezpopiołowa bibuła filtracyjna impregnowana roztworem skrobi z jodkiem potasu i suszona w ciemnym miejscu. Miareczkowanie prowadzi się do momentu, aż kropla miareczkowanego roztworu pobrana 1 minutę po dodaniu titranta spowoduje natychmiastowe zabarwienie na niebiesko paska bibuły skrobiowej jodowanej.

Drugorzędowe aminy aromatyczne z azotynem sodu tworzą związki nitrozowe:

Stoch K \u003d Z \u003d 1

mmm = 300,83 g

M(1/Z) = 300,83 g/mol

Wzór na obliczenie zawartości ilościowej:

Chlorowodorek tetrakainy można określić na podstawie ilości związanego kwasu chlorowodorowego metodą alkalimetryczną, miareczkowanie przeprowadza się w obecności chloroformu, który ekstrahuje uwolnioną zasadę:

Metoda argentometrii jonów chlorkowych:

Wniosek

Pochodne kwasu p-aminobenzoesowego (nowokaina, anestezyna, dikaina, diklofenak sodowy i inne) zawierają pierwszorzędową lub drugorzędową aromatyczną grupę aminową.

Wzajemne oddziaływanie atomów w cząsteczce wpływa na właściwości amin aromatycznych. Pojedyncza para elektronów atomu azotu pierwszorzędowej aromatycznej grupy aminowej uczestniczy w koniugacji z układem p-elektronów pierścienia benzenowego. W efekcie następuje przesunięcie gęstości elektronowej, co prowadzi do aktywacji pozycji orto i para w jądrze aromatycznym oraz zmniejszenia zasadowości atomu azotu w grupie aminowej. Zatem aminy aromatyczne są słabymi zasadami.

Aminy aromatyczne charakteryzują się reakcjami tworzenia barwnika azowego, kondensacji, halogenowania i utleniania.

Listaliteratura

1. Belikov, V. G. Chemia farmaceutyczna: podręcznik dla gospodarstwa. uniwersytety. - M.: Szkoła wyższa, 2003r. - 697 s.

2. Chemia farmaceutyczna: Podręcznik / wyd. AP Arzamastsev.-2nd ed., Rev.- M.: GEOTAR - Medicine, 2008.- 640 s.

3. Farmakopea Państwowa ZSRR: wydanie X. 1968

4. Farmakopea Państwowa ZSRR: Х1 wydanie. Wydanie 1.- M.: Medycyna, 1987.-336 s.

5. Farmakopea Państwowa ZSRR: Х1 wydanie. Wydanie 2. M.: Medycyna, 1986.-368 s.

6. Dudko, V. V., Tikhonova, LA Analiza substancji leczniczych według grup funkcjonalnych: przewodnik po badaniach / wyd. EA Krasnova, MS Yusubova. - Tomsk: NTL, 2004. - 140 s.

7. Przewodnik po badaniach laboratoryjnych z chemii farmaceutycznej: przewodnik po studiach / wyd. A. P. Arzamascewa. - M.: Medycyna, 2004. - 384 s.

8. Chemia farmaceutyczna: podręcznik dla szkół wyższych / wyd. A. P. Arzamascewa. - M.: GEOTAR-Media, 2006. - 640 s.

9. Chekryshkina L.A. i wsp. Analiza leków według grup funkcyjnych Perm. 2012

10. Chekryshkina L.A. i wsp. Metody analizy miareczkowej. Permski. 2012

Hostowane na Allbest.ru

...

Podobne dokumenty

Analiza stanu metod standaryzacji i kontroli jakości właściwości leczniczych kwasu askorbinowego; farmakopei zagranicznych. Wybór oceny walidacyjnej metod ustalania autentyczności i oznaczania ilościowego kwasu askorbinowego w roztworze.

praca dyplomowa, dodano 23.07.2014


Chemioterapeutyki: antybiotyki, ich zastosowanie w medycynie. Ogólna charakterystyka fizykochemiczna, właściwości farmakopealne penicylin; synteza przemysłowa. Metody ilościowego oznaczania ampicyliny w gotowych postaciach dawkowania.

praca dyplomowa, dodano 20.02.2011


Badanie metody jakościowego, ilościowego oznaczania kwasu askorbinowego. Określenie autentyczności wartości składu produktu farmaceutycznego wskazanych na opakowaniu. Jodometria, kulometria, fotometria. Porównanie wyników dwóch metod według kryterium Fishera.

praca semestralna, dodano 16.12.2015


Struktura budowa, synteza i właściwości barbituranów. Badanie ogólnych metod określania autentyczności leków zawierających barbiturany. Test czystości produktów leczniczych zawierających barbiturany. Przechowywanie i stosowanie barbituranów.

praca semestralna, dodano 19.03.2016


Toksyczne działanie fenolu i formaldehydu na organizmy żywe, metody ich jakościowego oznaczania. Ilościowe oznaczanie fenolu w próbkach wód naturalnych. Metoda wyznaczania minimalnych stężeń wykrywalnych organicznych substancji toksycznych w wodzie.

praca semestralna, dodano 20.05.2013


Charakterystyka reakcji chemicznych tworzenia kompleksów, właściwości różnych kompleksów stosowanych do separacji i wykrywania kationów oraz ich ilościowego oznaczania, w technologii oczyszczania metali i ich przetwórstwa. sole podwójne i złożone.

praca laboratoryjna, dodano 15.11.2011


Uwzględnienie metod rozdzielania mieszanin. Badanie cech analizy jakościowej i ilościowej. Opis detekcji kationu Cu2+. Analiza właściwości substancji w proponowanej mieszaninie, identyfikacja metody oczyszczania i detekcja proponowanego kationu.

praca semestralna, dodano 03.01.2015


Zastosowanie analizy jakościowej w farmacji. Oznaczanie autentyczności, badanie czystości farmaceutyków. Metody przeprowadzania reakcji analitycznych. Praca z chemikaliami. Reakcje kationów i anionów. Systematyczna analiza materii.

samouczek, dodano 19.03.2012


Ogólna charakterystyka i główne właściwości chemiczne aromatycznych pochodnych acetaminy. Metody określania autentyczności aromatycznych pochodnych acetaminy. Zastosowanie pochodnych acetaminy w farmakologii i ich wpływ na organizm człowieka.

praca semestralna, dodano 11.11.2009


Nialamid jako hydrazyd kwasu izonikotynowego, jego główne właściwości fizyczne i chemiczne, metoda określania autentyczności i jakości. Charakterystyczne reakcje tego związku chemicznego, zasady jego przyjmowania i przechowywania, wskazania i przeciwwskazania.

Biały krystaliczny proszek, bezwonny. Łatwo rozpuszczalny w wodzie i alkoholu, trudny w chloroformie, nierozpuszczalny w eterze.

Paragon.

Podobnie jak nowokaina: anestezyna jest przekształcana przez estryfikację w eter β-dimetyloaminoetylowy

n-aminobenzoesowy do ciebie, a następnie alkilat.

Autentyczność.

1. Reakcja hydrolizy alkalicznej.

Po zakwaszeniu wytrąca się osad kwasu n-butyloaminobenzoesowego, który rozpuszcza się w nadmiarze kwasu solnego.

2. Reakcja ze stężonym kwasem azotowym, po podgrzaniu preparatu z HNO 3 (stęż.), dodać kilka kropel alkoholowego roztworu potasu żrącego, pojawi się krwistoczerwony kolor.

3. R-I z tiocyjanianem amonu - wytrąca się tiocyjanian dikainy, który po rekrystalizacji i wysuszeniu sprawdza się pod kątem temperatury topnienia.

Oznaczenie ilościowe.

1. Nitrytometria po zmydlaniu kwasem (HF).

2. Zobojętnienie kwasem solnym w obecności chloroformu.

Aplikacja.

Działanie dikainy jest 8-10 razy silniejsze niż kokainy, ale stosowana jest w znacznie mniejszych dawkach niż kokaina. Stosowany jest do znieczulenia powierzchniowego w praktyce okulistycznej i otorynolaryngologicznej.

Składowanie.

Według listy A. W dobrze zamkniętym pojemniku z pomarańczowego szkła.

Sulfonamidy.

Streptocidum. Steptocyd.

Biały krystaliczny proszek, bezwonny. Słabo rozpuszczalny w wodzie, łatwo we wrzącej wodzie, rozpuszczalny w rozcieńczonym kwasie solnym, roztworach zasad i acetonie.

Leki z tej grupy odkryto jako najsilniejsze środki przeciwbakteryjne. Mechanizm przeciwdrobnoustrojowego działania sulfonamidów opiera się na teorii antagonizmu kompetycyjnego. Jego istota: do utrzymania żywotnej aktywności wielu mikroorganizmów chorobotwórczych niezbędne są czynniki wzrostu zawierające zasady purynowe. Ich biosynteza jest prowadzona przez mikroorganizmy na bazie kwasu para-aminobenzoesowego, który jest zawarty w tkankach ludzkiego ciała. Sulfonamidy wykazują nie tylko strukturalne, ale także sferyczne podobieństwo do kwasu para-minobenzoesowego. Dlatego dostając się (podczas przyjmowania leku) do tkanek organizmu, sulfonamidy zastępują kwas para-aminobenzoesowy. Dochodzi do biosyntezy substancji, które ze względu na różnice w budowie chemicznej działają bakteriostatycznie na mikroorganizmy. Teoria konkurencyjnego antagonizmu pozwoliła uzasadnić optymalne dawki sulfonamidów. Dawki początkowe (wstrząsowe) powinny być dwukrotnie większe niż dalsze pojedyncze dawki, nie należy dopuszczać do przerw w przyjęciu.

Autentyczność.

1. Ogólną reakcją jest tworzenie barwnika azowego:

2. Reakcja z nadtlenkiem wodoru w obecności chlorku żelaza (III) - streptocydu tworzy purpurowy kolor.

3. Piroliza - streptocyd tworzy niebiesko-fioletowy stop, podczas gdy uwalniana jest anilina i amoniak.

4. Oznaczanie siarki sulfamidowej.

W celu wykrycia siarki sulfamidowej substancję poddaje się mineralizacji poprzez gotowanie ze stężonym kwasem azotowym.

Formuła molekularna. Ci5H24N202-HC1.

Względna masa cząsteczkowa. 300,8.

Formuła strukturalna.

CH3(CHg)3NH-Q-COOCH2CH2N(CH3)2

Nazwa chemiczna. monochlorowodorek p-(butyloamino)benzoesanu 2-(dimetyloamino)etylu; monochlorowodorek 4-(butyloamino)benzoesanu 2-(dimetyloamino)etylu; za.

Nr CAS 136-47-0.

Synonimy. chlorowodorek ametokainy; Dikain.

Opis. Biały krystaliczny proszek, bezwonny.

Rozpuszczalność. Rozpuszczalny w około 8 częściach wody; rozpuszczalny w etanolu (-750 g/l) TS; trudno rozpuszczalny w chloroformie R; praktycznie nierozpuszczalny w eterze R.

Składowanie. Chlorowodorek tetrakainy należy przechowywać w szczelnie zamkniętym pojemniku, chronić przed światłem.

Dodatkowe informacje. Chlorowodorek tetrakainy jest higroskopijny; ma lekko gorzki smak i powoduje miejscowe drętwienie języka. Nawet w ciemności stopniowo rozkłada się w wilgotnej atmosferze, a niszczenie przyspiesza wraz ze wzrostem temperatury.

Chlorowodorek tetrakainy topi się w temperaturze około 148°C lub może występować w jednej z dwóch form polimorficznych, z których jedna topi się w temperaturze 134°C, a druga w temperaturze 139°C. Mieszaniny tych form topnieją w zakresie 134-147°C.

WYMAGANIA

Ogólne wymaganie. Chlorowodorek tetrakainy zawiera min

98,0 i nie więcej niż 101,0% Сі5Н24^02-HC1 w przeliczeniu na suchą substancję.

Autentyczność

A. Rozpuścić 0,2 g w 10 ml wody i dodać 1 ml tiocyjanianu amonu (75 g/l) TS. Osad zbiera się na filtrze, rekrystalizuje z wody i suszy przez 2 godziny w temperaturze 80°C; temperatura topnienia wynosi około 131°C.

B. Roztwór badanej substancji w stężeniu 20 mg/ml daje reakcję A, charakterystyczną dla chlorków, opisaną w rozdziale „Ogólne testy tożsamości” (t. 1, s. 129).

Przejrzystość i kolor roztworu. Roztwór 0,20 g w 10 ml wody wolnej od dwutlenku węgla R jest klarowny i bezbarwny.

popiół siarczanowy. Nie więcej niż 1,0 mg/g.

Strata przy suszeniu. Suszyć do stałej wagi w 105°C; strata nie większa niż 10 mg/g.

pH roztworu. pH roztworu badanej substancji w wodzie wolnej od dwutlenku węgla R przy stężeniu 10 mg/ml wynosi 4,5-6,0.

obce zanieczyszczenia. Wykonać test zgodnie z opisem w Chromatografia cienkowarstwowa (t. 1, str. 92), używając żelu krzemionkowego R4 jako sorbentu i mieszaniny 80 objętości eteru dibutylowego OD, 16 objętości heksanu OD i 4 objętości kwasu octowego lodowatego kwas jako fazę ruchomą kwas R. Umieścić płytkę w komorze chromatograficznej, zanurzając ją na głębokość 5 mm w cieczy. Po osiągnięciu przez front rozpuszczalnika wysokości około 12 cm należy wyjąć płytkę z komory i suszyć ją przez kilka minut w strumieniu ciepłego powietrza. Pozostawić płytkę do ostygnięcia i nanieść osobno 5 µl każdego z 2 roztworów zawierających (A) 0,10 g badanej substancji na ml i (B) 0,050 mg kwasu 4-aminobenzoesowego R na ml. Pozwolić, aby czoło rozpuszczalnika wzniosło się 10 cm powyżej linii nakładania. Po wyjęciu z komory chromatograficznej płytkę suszy się przez 10 minut w temperaturze 105°C i ocenia chromatogram w świetle ultrafioletowym (254 nm). Żadna plama, którą daje roztwór A, inna niż plama główna, nie powinna być bardziej intensywna niż plama, którą tworzy roztwór do darta B. Główna plama pozostaje na linii aplikacji.

Oznaczenie ilościowe. Wykonać badanie zgodnie z opisem w Nitrytometrii (t. 1, s. 153), używając około 0,5 g badanej substancji (dokładnie odważonej) rozpuszczonej w mieszaninie 50 ml wody i 5 ml kwasu solnego (-420 g/l ) TS i miareczkować azotynem sodu (0,1 mol/l) VS. Każdy mililitr azotynu sodu (0,1 mol/l) VS odpowiada 30,08 mg Ci5H24N2O2-HC1.