További vérelemzési módszerek a retikulociták hematokritjának meghatározására. Hogyan számoljuk meg a retikulocitákat. A retikulociták számának csökkenésének okai, kezelése

… a retikulociták számának meghatározása a csontvelő működésének fontos mutatója.

Retikulociták- ezek a normoblasztokból magvesztés után képződő vörösvértestek (nem nukleáris, éretlen eritrociták), amelyek érése a csontvelőből a perifériás vérbe jutás után 24-48 órán belül megtörténik, és a regenerációs képességet tükrözi. a csontvelő (azaz eritropoetikus csontvelő-aktivitás).

A RETIKULOCITÁK MORFOLÓGIÁJA ÉS KLINIKAI JELENTŐSÉGE

A retikulociták általában nagyobbak, mint az érett eritrociták. A retikulociták citoplazmája bazofil hálót (retikulum) tartalmaz apró szemcsék, egyedi filamentumok, glomerulusok stb. formájában, amely egy aggregált riboszóma és mitokondrium.

Az érettségi fok szerint 5 típusú retikulocitát különböztetnek meg:
(1) retikulociták, amelyek sejtmaggal rendelkeznek (eritronormoblasztok), és szemcsézettségük sűrű corolla formájában helyezkedik el a sejtmag körül;
(2) retikulociták, amelyek szemcsés-hálós anyagot tartalmaznak golyó vagy csomó formájában;
(3) retikulociták, amelyek granularitása sűrű hálózat formájában van;
(4) retikulociták, amelyek szemcsés-hálós anyagot tartalmaznak egyedi szálak formájában;
(5) egyedi szemcséket tartalmazó retikulociták.

Emlékezik: általában G. A. Alekseev szerint a retikulociták közel 80%-a a IV-V csoportba tartozik.

Normális esetben a perifériás vér 0,2-1% retikulocitát tartalmaz ("%" - a retikulociták tartalma az eritrociták teljes számából). Ez a mutató tükrözi a retikulociták perifériás vérbe kerülésének lehetőségét és további érett eritrocitákká történő átalakulását (érés), a norma egy változataként, már a perifériás vérben (több órán belül). ( ! ) Normál eritropoézis esetén a legtöbb vörösvértest átmegy a retikulocita stádiumon a csontvelőben.

Megfigyelhető retikulocitáik növekedése a perifériás vérben (retikulocitózis).:
hemolitikus vérszegénység esetén (a retikulociták száma elérheti a 60% -ot vagy többet (különösen növekszik hemolitikus krízisek során);
akut vérveszteséggel (3-5 nappal a vérveszteség után retikulocita krízis lép fel), beleértve a retikulociták növekedését, ami lehetővé teszi a látens vérzés gyanúját (például gyomor-bél traktus peptikus fekélyében, tífuszban szenvedő betegeknél) ;
maláriával;
policitémiával;
vashiányos vérszegénység vassal történő kezelésében (néhány nappal (3-10) a vészes anémia vérszegénység elleni kezelésének megkezdése után);
akut oxigénhiány esetén;
daganatos áttétekkel a csontvelőbe.

Emlékezni kell hogy a vörösvértestek fokozott pusztulása esetén a retikulociták aránya meghaladhatja az 50%-ot a retikulociták számának mesterséges növelése miatt (amint korábban megjegyeztük, a retikulociták arányát az összes vörösvértest %-ában számolják). Ilyen esetekben a vérszegénység súlyosságának felmérésére a "retikuláris indexet" használják, amelyet a következő képlettel számítanak ki: (% retikulociták x hematokrit) / 45 x 1,85, ahol 45 a normál hematokrit, 1,85 a szükséges napok száma hogy új retikulociták kerüljenek a vérbe. Ha index< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, akkor fokozódik a vörösvértestek képződése.

Valódi retikulocitózis: a retikulociták számának növekedése a perifériás vérben, ezzel egyidejűleg a retikulociták számának növekedése a csontvelőben.

Hamis retikulocitózis: a retikulociták megnövekedett számának hiánya a csontvelőben, számuk növekedésével a perifériás vérben (ami a retikulociták csontvelőből a perifériás vérbe való kimosódásának növekedését jelzi).

A retikulociták százalékos értékének növekedéséhez vezető tényező a következő gyógyszerek szedése lehet: kortikotropin, malária elleni szerek, lázcsillapítók, furazolidon (kisgyermekeknél), levodopa.

Emlékezik: retikulocitózis, a csontvelő megfelelő eritronormoblasztos reakciója nélkül, akkor figyelhető meg, ha bizonyos részeit rákos áttétek vagy gyulladásos gócok irritálják.

A retikulociták számának csökkenése vagy hiánya (reticulocytopenia) figyelhető meg:
regeneratív aplasztikus és hipoplasztikus anémiák esetén;
vas-, B12-vitamin-, folsavhiány okozta vérszegénység esetén (mikrocitás-hipokróm és megaloblasztos vérszegénység);
talaszémiával;
szideroblasztos vérszegénység esetén;
rák áttétekkel a csontban;
sugárbetegséggel és sugárterápiával;
citosztatikumok kezelésében;
a hematopoietikus rendszer autoimmun betegségeivel;
vesebetegséggel;
alkoholizmussal;
az Addison-Birmer anémia kiújulásával;
myxedemával.

A retikulociták százalékos tartalmára vonatkozó laboratóriumi vizsgálat eredményét torzító tényezők:
az antikoaguláns rossz megválasztása vagy a vér és az antikoaguláns nem megfelelő keverése;
a kéz hosszan tartó szorítása érszorítóval;
szulfonamidok szedése (mind alul-, mind túlbecsült eredmények lehetségesek);
vérátömlesztés röviddel a vizsgálat előtt;
vérminta hemolízise.

Javallatok a retikulociták elemzésének kijelölésére:
az erythropoiesis aktivitásának értékelése hemolízissel vagy vérvesztéssel járó állapotokban;
a csontvelő regenerációs képességének felmérése citotoxikus terápia és csontvelő-transzplantáció után;
az eritropoetin szintézis helyreállításának értékelése veseátültetés után;
doppingellenőrzés sportolóknál (eritropoetin szedése);
a nem hatékony vérképzés vagy a vörösvértestek csökkent termelésének diagnosztizálása;
anémia differenciáldiagnózisa;
a csontvelő károsodott regenerációs képességének kimutatása vashiányban, B12-, B6-vitamin, folsav, réz és a megfelelő terápia monitorozása;
az eritropoetinnel, eritroszuppresszorokkal végzett terápiára adott válasz értékelése.

A RETIKULOCITOK SZÁMÁNAK MÓDSZEREI

(1) A retikulociták számának megszámlálása a kenetben speciális festékekkel való festés után.

Ez a módszer a gyakorlatban a leggyakrabban alkalmazott módszer, mivel egyszerű, meglehetősen olcsó és nem igényel különleges drága berendezéseket, ezért bármely klinikai diagnosztikai laboratóriumban alkalmazható.

A módszer elve a retikulociták szemcsés hálóanyagának kimutatásán alapul lúgos festékekkel (brilliáns krezilkék telített oldata abszolút alkoholban / azúrkék oldat / azúrkék II oldat) végzett szupravitális festés során, és további vérszámlálást végeznek. kenet. A retikulociták festését üvegen vagy kémcsőben végezzük.

A számlálást mikroszkóppal végezzük: a fenti módszerek valamelyikével készített keneteket immerziós lencsével mikroszkóppal vizsgáljuk; kenetben a retikulociták és eritrociták sárgás-zöldesre festődnek, a retikulocitákban lévő szemcsés-szálas anyag kék (azúrkék II-vel és briliáns krezilkékkel festve) vagy kékes-lila (azúr I-vel festve).

(2) A retikulociták számának számolása fluoreszcens mikroszkóppal.

Ez a módszer egyszerű és kis időt vesz igénybe, pontosabb, mint a hagyományos módszer, mivel a fluoreszcens mikroszkóppal a hálós-szálas anyag legkisebb szemcséit is feltárják, de ez csak lumineszcens mikroszkóppal és speciális festékekkel lehetséges, ezért csak néhány laboratórium.

A retikulociták számának fluoreszcens mikroszkóppal történő megszámlálásának elve a retikulociták anyagának akridinnarancsos vérkezelés utáni fluoreszkáló képességének felhasználásán alapul. A vért kémcsőben vagy keverőben akridinnarancsdal keverjük 1 rész vér és 10 rész festék arányban (a keverék legfeljebb 5 órán át tárolható). Az elegyet 2 percig keverjük, egy cseppet egy tárgylemezre helyezünk és fedőlemezzel lefedjük. Ebben az esetben a folyadék nem haladhatja meg a fedőlemezt.

Mikroszkóposan ZhS-17 fényszűrővel. A készítményben az eritrociták sötétzöld körvonalúak és nem fluoreszkálnak, míg a retikulocitákban a szemcsés-hálós anyag élénkvörösen világít, így könnyen megszámolható a retikulociták. A heparinnal vagy nátrium-citráttal stabilizált vérben a retikulocita fluoreszcenciája nem figyelhető meg.

(3) Automatikus retikulocita számlálás hematológiai analizátorral.

A modern hematológiai analizátorokban a vérsejtek megszámlálásának technológiája a H. Wallace és Joseph R. Culter által 1947-ben javasolt konduktometriai módszeren alapul. A módszer alapelve az, hogy megszámolják az impulzusok számát és jellegét, amelyek akkor lépnek fel, amikor cella egy kis átmérőjű lyukon (nyíláson) halad át, melynek mindkét oldalán két-két egymástól elválasztott elektróda található. A cellák minden egyes áthaladását a nyíláson egy elektromos impulzus kíséri, amelyet egy elektronikus érzékelő rögzít. A sejtek kategóriákra (vörösvértestek, leukociták, vérlemezkék, üledék) felosztását a készülék a kapott impulzusok amplitúdójának elemzése alapján végzi el, a sejtek koncentrációjának meghatározásához elegendő egy bizonyos térfogatú sejtet átengedni. mintát venni a csatornán keresztül, és megszámolni a generált impulzusok számát.

Meg kell jegyezni, hogy a retikulociták klasszikus paramétere mellett a retikulociták relatív (%) tartalma (RET%, retikulociták százaléka), amelyet a laboratóriumi diagnosztika 1. és 2. módszerével határoztak meg, a csúcstechnológiás hematológiai módszerek megjelenése miatt. analizátorok (3. módszer), lehetővé vált (például a Sysmex-XT-2000i analizátorhoz szabadalmaztatott fluoreszcens festék használatával) további informatív retikulocita paraméterek beszerzése:
alacsony RNS tartalmú retikulociták, a legérettebb (LFR%, alacsony fluoreszcenciájú retikulocita frakciók, alacsony fluoreszcenciájú retikulocita frakció);
átlagos RNS-tartalmú retikulociták(MFR%, közepes fluoreszcenciájú retikulocita frakciók) - közepes fluoreszcenciájú retikulociták frakciója);
magas RNS-tartalmú retikulociták(HFR%, nagy fluoreszcenciájú retikulocita frakciók) - nagy fluoreszcenciájú retikulocita frakció);
a retikulociták éretlen frakciója(IRF%, éretlen retikulocita frakció).

A retikulociták differenciálódása az érettség foka és ennek megfelelően a nukleinsavtartalom alapján a csontvelő hematopoietikus aktivitását tükrözi.

Módszer (Sysmex-XT-2000i analizátor). Az áramlási cellában a cellák keresztezik a félvezető lézer nyalábját, miközben a nyaláb kis és nagy szögben szétszóródik, és a fluoreszcens festék gerjesztődik. Ez lehetővé teszi a retikulociták különböző érettségi stádiumainak meghatározását a sejtek RNS-tartalma és lumineszcenciájuk intenzitása alapján. Az automatizált retikulocitaszámlálás nagyon pontos (több mint 30 000 vörösvérsejtet számlál meg) és reprodukálható (a variációs együttható körülbelül 6%). Ez a technológia biztosítja a retikulociták pontos számát még rendkívül alacsony koncentrációban is.

E vizsgálatok elvégzéséhez a következő munkahelyi berendezésekre van szükség:

1. Témaszemüveg.
2. Köszörült üveg csúszdák.
3. Nedves kamra.
4. Keverők fehér- és vörösvérsejtekhez.
5. Szemüveg holddal.
6. Mikroszkóp.
7. Ragyogó krezilkék.
8. Abszolút etil-alkohol.
9. Metil-alkohol vagy Nikiforov keveréke (egyenlő rész 96 ° etil-alkohol és éter).
10. Guyem-reagens vagy 3%-os sóoldat.
11. Merítési olaj.
12. Ujjszúró szerszámkészlet.

A szemcsés-hálós anyag szerkezetétől függően ötféle retikulocitát különböztetünk meg: porszerű, corolla alakú, hiányos hálós, teljesen hálós és gömb alakú (lásd ábra).

A retikulociták megszámlálásához szükséges vérvételt az orvos utasítása szerint kell elvégezni. A retikulociták számának megszámlálásához megfestik őket. Erre a célra használja:

1. A retikulociták intravitális (supravitális) festésének módszere.
2. A vérlemezkék és retikulociták egyidejű szupravitális festésének módszere Alekseev szerint.

Tekintsük ezeket a módszereket részletesebben.

A retikulociták intravitális (supravitális) festése

Ehhez a módszerhez a következő reagensek szükségesek:

1. Abszolút etil-alkohol: kalcinált vízmentes (fehér) réz-szulfátot egy száraz üveggel dugós edénybe helyezünk, és 1/4 abszolút alkoholt öntünk rá. A tartalmat összerázzuk. Abszolút alkoholt (vizet nem tartalmazó alkoholt) úgy kaphatunk, hogy az alkoholt előzőleg kalcinált réz-szulfáttal dehidratáljuk. A dehidratáció leáll, amikor a réz-szulfát már nem kékül.
2. Ragyogó-krezilkék telített oldata abszolút alkoholban: 1 g briliáns-krezilkéket adunk 80 ml abszolút alkoholhoz.
3. Azúr I.

Élő festés és retikulocitaszámlálás technika

A tárgylemezeket előzetesen telített gyémánt-krezilkék oldattal vonják be. Friss csepp vért kennek a tárgylemezre festékkel, mint a vérkenet elkészítésekor. A készítményt azonnal 6-8 percre nedves kamrába helyezzük, majd levegőn szárítjuk és mikroszkóppal (okulár 7X, objektív 90X emelt kondenzátorral) megszárítjuk. A retikulocitákat pontosan ugyanúgy számolják meg, mint a látótér-korlátozóval. A briliáns-krezilkékkel festett retikulociták halványzöldek, kék vagy kék hálóval (lásd az ábrát).

A retikulociták festésére szolgáló briliáns-krezilkék helyett azúr I festék (1 g azúr I 40 ml abszolút alkoholra; szobahőmérsékleten 2 napig tartva) használható a Magina előírása szerint.

A vérlemezkék és retikulociták egyidejű szupravitális festése Alekseev szerint

Ehhez a módszerhez Alekseev festékét használják. 1 g azure II festéket öntünk egy 100 ml-es lombikba, és egy külön lombikban elkészített reagenst adunk hozzá a következő összetétellel: 5 g nátrium-citrát, 4 g nátrium-klorid és 45 ml desztillált víz. A lombik tartalmát azbesztrácson, állandó keverés mellett lassan felmelegítjük anélkül, hogy felforrnánk. Lehűtjük, szűrjük. A szűrletet munkafesték-oldatként használják.

A vérlemezkék és retikulociták egyidejű festésének és számlálásának technikája

Alekseev festékét beszívják a leukociták keverőjébe 1,0 jelig, a hegyét letörlik a festékről, és az asztalra helyezik. Adjon a szokásosnál mélyebb injekciót az ujjába. A keverő kibővített részének térfogatának 4/5-éig vért szívunk fel, ügyelve arra, hogy légbuborékok ne kerüljenek bele. A vért gyorsan kifújják a keverő kapilláris részéből egy vattakorongra, a többi tartalom pedig az üveglap lyukába kerül. A kútból a folyadékot ismét a keverőbe szívják. Ezt a manipulációt kétszer vagy háromszor megismételve a vér összekeveredik a reagenssel. Miután utoljára beütötte a folyadékot a keverőbe, 15-30 percig vízszintes helyzetben hagyja, hogy a retikulociták és a vérlemezkék megfestődjenek. Ezután a keverőt egy percig rázzuk, és 1-2 cseppet engedünk ki belőle. A következő cseppekből vékony keneteket készítenek. A készítményeket levegőn szárítjuk, metil-alkohollal rögzítjük és Romanovsky festékkel festjük 1-2 csepp/1 ml víz hígításban 35-45 percig. A festéket vízzel lemossuk, a keneteket mikroszkopikusan szárítjuk. Az Alekseev szerint festett kenetben a retikulociták rózsaszínűek, kék hálóval (lásd az ábrát), a vérlemezkék pedig kékes-lila színűek.

A retikulocitákat és a vérlemezkéket egyidejűleg 1000 eritrocitára számolják a "Trombociták" című témakörben leírtak szerint. A retikulocitákra vonatkozó eredményeket ppm-ben fejezzük ki; a vérlemezkék számát 1 mm3 vérre számítják (a számításhoz az adott betegnél megszámlált eritrociták számát vesszük figyelembe).

Az egészséges egyének vérében 5-10% retikulociták találhatók.

Az ezen az oldalon közzétett vélemények az azokat írók személyes véleményei. Ne öngyógyuljon!

Retikulociták (klinikai jelentősége és laboratóriumi diagnózis)

(1) retikulociták, amelyek sejtmaggal rendelkeznek (eritronormoblasztok), és szemcsézettségük sűrű corolla formájában helyezkedik el a sejtmag körül;

(2) retikulociták, amelyek szemcsés-hálós anyagot tartalmaznak golyó vagy csomó formájában;

(3) retikulociták, amelyek granularitása sűrű hálózat formájában van;

(4) retikulociták, amelyek szemcsés-hálós anyagot tartalmaznak egyedi szálak formájában;

(5) egyedi szemcséket tartalmazó retikulociták.

Hemolitikus vérszegénység esetén (a retikulociták száma elérheti a 60% -ot vagy többet (különösen növekszik hemolitikus krízisek során);

Akut vérveszteség esetén (a vérveszteség után 3-5 napig retikulocita krízis lép fel), beleértve a retikulociták növekedését, lehetővé teszi a látens vérzés gyanúját (például gyomor-bél traktus peptikus fekélyében szenvedő betegeknél, tífusz);

A vashiányos vérszegénység vassal történő kezelésében (néhány nappal (3-10) a vészes vérszegénység vérszegénység elleni kezelésének megkezdése után);

Akut oxigénhiány esetén;

A csontvelőben lévő daganatok metasztázisaival.

a hemoglobin rendellenes formája;

Regeneratív aplasztikus és hipoplasztikus anémiák esetén;

Vas-, B12-vitamin-, folsavhiány okozta vérszegénység esetén (mikrocitás-hipokróm és megaloblasztos vérszegénység);

szideroblasztos vérszegénység esetén;

Rák áttétekkel a csontban;

Sugárbetegséggel és sugárterápiával;

A citosztatikumok kezelésében;

A hematopoietikus rendszer autoimmun betegségeivel;

Vesebetegség esetén;

Addison-Birmer vérszegénység kiújulásával;

Az antikoaguláns helytelen kiválasztása vagy a vér és az antikoaguláns nem megfelelő keverése;

A kéz hosszan tartó szorítása érszorítóval;

Szulfonamidok befogadása (alul- és túlbecsült eredmények is lehetségesek);

Vérátömlesztés röviddel a vizsgálat előtt;

Vérminta hemolízise.

Az erythropoiesis aktivitásának értékelése hemolízissel vagy vérveszteséggel járó állapotokban;

A csontvelő regenerációs képességének értékelése citotoxikus terápia és csontvelő-transzplantáció után;

Az eritropoetin szintézis helyreállításának értékelése veseátültetés után;

Doppingellenőrzés sportolóknál (eritropoetin szedése);

Hatástalan hematopoiesis vagy csökkent vörösvértest-termelés diagnózisa;

vérszegénység differenciáldiagnózisa;

A csontvelő regenerációs képességének megsértésének kimutatása vas-, B12-, B6-vitamin-, folsav-, rézhiánnyal és a megfelelő terápia ellenőrzése;

Az eritropoetinnel, eritroszuppresszorokkal végzett kezelésre adott válasz értékelése.

Alacsony RNS tartalmú retikulociták, a legérettebbek (LFR%, alacsony fluoreszcenciájú retikulocita frakciók, alacsony fluoreszcenciájú retikulociták frakciója);

Átlagos RNS-tartalmú retikulociták (MFR%, közepes fluoreszcens retikulocita frakciók) - közepes fluoreszcenciájú retikulociták frakciója);

Magas RNS-tartalmú retikulociták (HFR%, magas fluoreszcenciájú retikulocita frakciók) - a retikulociták nagy fluoreszcenciájú frakciója);

Éretlen retikulocita frakció (IRF%, Éretlen retikulocita frakció).

A retikulociták számlálása kenetben speciális festékekkel való megfestés után

A retikulociták számának megszámlálására a gyakorlatban a leggyakrabban használt módszer a retikulociták speciális festékekkel való megfestése utáni kenetben történő megszámlálása. Ez annak köszönhető, hogy a módszer egyszerű, meglehetősen olcsó, és nem igényel különleges drága berendezéseket, ezért bármely klinikai diagnosztikai laboratóriumban alkalmazható.

A módszer elve

Szupravitális festéssel lúgos festékekkel végzett retikulociták szemcsés hálóanyagának azonosítása vérkenetben történő további számlálással.

Reagensek

Az alábbi színezékek egyikét használhatja:

1. Ragyogó krezilkék telített oldata abszolút alkoholban (abszolút alkohol előállításához 96%-os etanolnak kell ellenállni a kalcinált réz-szulfát por többszöri cseréjében). 100 ml abszolút alkoholhoz 1,2 g festéket veszünk.
2. Azure I oldat: Azur I - 1 g, ammónium-oxalát - 0,4 g, nátrium-klorid - 0,8 g, 96% -os etil-alkohol - 10 ml, desztillált víz - 90 ml. A zárt palackban lévő festékoldatot 2-3 napra termosztátba helyezzük 37 ° C-on, és időszakonként erőteljesen megrázzuk. Ezután szobahőmérsékletre hűtjük és szűrőpapíron szűrjük. Az oldatot sötét üvegtartályban tárolják. Ha csapadék jelenik meg, a festéket újra szűrni kell.
3. Azure II oldat: Azur II - 1 g, nátrium-citrát - 5 g, nátrium-klorid - 0,4 g, desztillált víz - 45 ml. Az oldatot 2 napig 37 °C-on termosztátban hagyjuk, időnként megkeverve. Az oldódás felgyorsítása érdekében a festéket alacsony lángon 15-20 percig melegíthetjük anélkül, hogy felforrna. Szobahőmérsékletre hűtjük és szűrjük. Tárolja sötét üvegedényben.

Különleges felszerelés

Definíció haladás

A retikulociták festését üvegen vagy kémcsőben végezzük.

Retikulociták festése üvegen

A retikulociták üvegen történő festésekor egy jól megmosott és zsírtalanított tárgylemezt égő lángja fölött hevítenek. A fent felsorolt ​​​​festékek egyikéből egy cseppet üvegrúddal felvisznek az üvegre, és csiszolt üveggel festékkenetet készítenek. Üveggráfot használnak az üveg azon oldalának megjelölésére, amelyre festékfoltot visznek fel. Ebben a formában az üveg előkészíthető jövőbeli használatra, és száraz, sötét helyen tárolható. Az elemzés előtt nedves kamrát készítünk. Általában erre a célra Petri-csészét használnak, amelynek szélei mentén megnedvesített vatta vagy szűrőpapír tekercs van elhelyezve. A festékkenetre egy csepp vért teszünk, vékony kenetet készítünk belőle, és azonnal nedves kamrába helyezzük 3-10 percre. A keneteket ezután levegőn szárítjuk.

A retikulociták festése in vitro

A retikulociták festődése in vitro eltérő, ha különböző festékeket használunk.

1. módszer - retikulociták in vitro festése briliáns krezilkékkel.

Használat előtt készítsen briliáns krezilkék munkaoldatot egy kémcsőben egy csepp 1%-os kálium-oxalát oldat és 4 csepp briliáns krezilkék festékoldat alapján. 0,04 ml vért adunk a festékhez (két pipettával a 0,02-es jelig). A keveréket alaposan, de óvatosan összekeverjük, és 30 percig állni hagyjuk. Ezután ismét keverjük össze, és készítsünk vékony keneteket.

2. módszer - retikulociták in vitro festése azúrkék II-vel.

Tegyünk 0,05 ml azure II festékoldatot és 0,2 ml vért egy kémcsőbe. A keveréket alaposan összekeverjük és 20-30 percig állni hagyjuk. Keverjük újra, és készítsünk vékony keneteket.

3. módszer - retikulociták festése in vitro azúrkék I-gyel.

Tegyünk 0,3-0,5 ml azúrkék I-es festékoldatot és 5-6 csepp vért pipettával a Panchenkov készülékből egy kémcsőbe. A kémcsövet gumidugóval lezárjuk, a keveréket alaposan, de óvatosan összekeverjük, és 1-1,5 órán át állni hagyjuk (a retikulociták 1,5-3 órás expozícióval jobban festenek). Keverjük össze, és készítsünk vékony köröket.

A retikulociták számára kész festékek jelenleg kereskedelmi forgalomban kaphatók. A retikulociták festését segítségükkel a mellékelt utasítások szerint végezzük.

Retikulocitaszám.

A fenti módszerek egyikével készített keneteket immerziós lencsével mikroszkóppal vizsgáljuk. A kenetben a retikulociták és az eritrociták sárgás-zöldesre festődnek, a retikulociták szemcsés-szálas anyaga kék (azúrkék II-vel és briliáns krezilkékkel festve) vagy kékes-lila (azúr I-vel festve).

Képek a retikulocitákról:

Keresse meg azokat a látómezőket, ahol az eritrociták külön-külön helyezkednek el. Ezekben a látómezőkben legalább 1000 vörösvértestet kell megszámolni, és ezek között fel kell jegyezni a szemcsés-szálas anyagot tartalmazó eritrociták számát. Nagyobb pontosság érhető el, ha 2000-3000 vörösvértestet számolunk.

Tekintettel arra, hogy a látómezőben nagyszámú eritrocita található, ami megnehezíti a számlálást, szükséges a látómező korlátozása (csökkentése). Ehhez használhat egy speciális okulárt, amelyben a látómezőt a kívánt méretre csökkentheti, vagy egy speciális „ablakot” (papírból egy, az okulárnál valamivel kisebb átmérőjű kört vágnak ki, a kör közepén egy kis rombuszt vágunk ki, és a kapott ablakot behelyezzük az okulárba).

A megszámolt retikulociták számát 100 (százalékban) vagy 1000 (ppm-ben) eritrocitára vetítik.

Példa: A kenetben 1000 eritrocita megszámlálásakor kiderült, hogy 1000 vörösvértestből 15-nek van ilyen vagy olyan fokú szemcsés hálóanyaga, vagyis retikulociták. Ezért a retikulociták száma ebben az esetben 1,5% vagy 15 ‰.

Irodalom:

• Kézikönyv "A klinikai kutatás laboratóriumi módszerei" Mensikov V. V. szerkesztésében - Moszkva, "Orvostudomány", 1987
• Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. és társszerzők - "Klinikai laboratóriumi vizsgálatok" - Moszkva, "Orvostudomány", 1984

A retikulociták számának számolása fluoreszcens mikroszkóppal

A retikulociták számának fluoreszcens mikroszkópos megszámlálásának módszere egyszerű és kevés időt igényel, pontosabb, mint a hagyományos módszer, mivel a fluoreszcens mikroszkóppal feltárják a retikuláris fonalas anyag legkisebb szemcséit.

Retikulociták

A retikulociták fiatal vörösvérsejtek, amelyek a normoblasztok magvesztése után keletkeznek. A retikulociták jellegzetes tulajdonsága, hogy citoplazmájukban egy szemcsés-fonalas anyag (retikulum) van jelen, amely aggregált riboszómákat és mitokondriumokat képvisel.

Patológiás zárványok az eritrocitákban

A Jolly-testek (Howell-Jolly-testek) kis kerek, ibolyavörös zárványok, amelyek mérete µm, 1 (ritkán 2-3) található egy vörösvértestben. Ezek a mag maradványai a RES eltávolítása után. Intenzív hemolízissel és a RES "túlterhelésével", splenectomia után, megaloblasztos vérszegénységgel észlelik.

Lipidek citokémiai vizsgálata

A lipidek citokémiai vizsgálata zsírokban oldódó színezékek (Szudán III, Szudán IV, Fekete Szudán stb.) felhasználásán alapul. A semleges zsír azonosítására a Sudan III-at használják, amely megfesti a zsír narancssárgáját. A lipoidok jobban kimutathatók a szudánfeketével (fekete festés).

Vizeletvizsgálat Nechiporenko szerint

A Nechiporenko módszer a hazai laboratóriumi diagnosztikában a legelterjedtebb módszer a vizeletben képződött elemek mennyiségi meghatározására. Ez a módszer a legegyszerűbb, bármely laboratórium számára hozzáférhető és kényelmes a járóbeteg-gyakorlatban, és számos előnnyel rendelkezik a vizelet üledék vizsgálatának más ismert kvantitatív módszereivel szemben. A Nechiporenko módszer szerint a képződött elemek (eritrociták, leukociták és hengerek) számát 1 ml vizeletben határozzák meg.

©18 Laboratóriumi diagnosztika

Retikulocita - mi ez a vérvizsgálatban? Norma mutatók és kijelölés

A retikulocita az eritrocita prekurzora, azaz fiatal formában lévő vörösvértest. Egészséges ember vérében ezek tartalmuk 0,2-1,2%. Ez az arány tükrözi a retikulociták tartalmát a vérben az eritrocitákhoz viszonyítva. 4-5 napig érnek.

Alapfogalmak

A vörösvértestek fiatal formáira jellemző, hogy a citoplazmában szemcsés-szálas anyag található, amely egy aggregált riboszóma és mitokondrium. Ezt az anyagot egy speciális vérkenet festési módszerrel lehet kimutatni. A retikulocitáknak ezt a festődését supravitalisnak nevezik, vagyis a sejtek előzetes rögzítése nélkül jön létre.

A retikulociták csoportjai

Összességében a szakértők a retikulociták öt fő csoportját különböztetik meg. A retikuláris retikulumban különböznek egymástól. Sűrűsége és kora fordított arányban áll: minél vastagabb a háló, annál fiatalabbak. Találjuk ki, mi a legfiatalabb retikulocita.

Ez egy olyan cella, amelynek hálója vastag golyó formájában van. Ezek a sejtek az első csoportba tartoznak. Az érettebb formájú retikulociták olyan anyagként jelennek meg, amelynek jól megkülönböztethető hálója van. A negyedik és ötödik csoportban egyedi szálak és szemcsék képviselik. Leggyakrabban az egészséges emberek vére az utóbbi csoportok retikulocitjait tartalmazza, azaz érettebbeket. Általában a többi körülbelül 80%-át teszik ki. Fokozott regenerációval, amely egyes patológiákra jellemző, az első három csoport retikulocitáinak száma nő. Ezek a patológiák a következők:

B12-hiányos vérszegénységet kísérő retikulocita krízis.

A retikulociták által végrehajtott funkciók

A retikulocita is vörösvértest. Ugyanaz a funkciója jellemzi, mint az eritrocitáké. Vagyis a sejtek oxigénmolekulákat is szállítanak különböző szövetekbe és szervekbe, de ennek a folyamatnak a hatékonysága jóval alacsonyabb, mint amikor az oxigént érett vörösvértestek szállítják. A retikulociták képesek adszorbeálni a hemoglobinban lévő vasmolekulákat. Ez a transzferrinre érzékeny receptorok miatt lehetséges. Miért végeznek retikulocitaszámlálást? Erről később.

Vérvételi mechanizmus

Ennek a mutatónak a meghatározásához egy általános elemzés részeként vérmintát vesznek. Ha meg kell határozni a retikulociták szintjét, akkor az elemzést felíró orvos jelzi a további számlálás szükségességét.

Ez az elemzés nem igényel különleges előkészítést, de hagyományosan reggel éhgyomorra veszi. Ugyanakkor igény esetén a nap bármely szakában átvehető. Az elemzéshez szükséges vért ujjból kell venni, a vizsgálatot a laboratóriumban, a hematológiai osztályon végzik.

A retikulociták számának megszámlálását szupravitálisan festett kenetben végezzük. A mikroszkópos módszert alkalmazzák, vagyis a számukat egyszerűen megszámolják vérminta mikroszkóp alá helyezésével. A mai napig létezik hardveres számolási módszer. A modern laboratóriumok használják.

A retikulociták megnevezése a vérvizsgálatban RET.

Elemzés lefolytatása

Számos módszer létezik egy ilyen vizsgálat elvégzésére:

• Az üveget speciális égővel mossuk, szárítjuk és melegítjük. Ezután három festék közül egyet alkalmazunk rá, majd egy csepp vért adunk hozzá, majd vékony kenetet készítünk. Az üveget meghatározott időre Petri-csészébe vagy más kamrába helyezzük, majd friss levegőn szárítjuk.
• Ha kémcsövet használunk, akkor színezőanyagot helyezünk bele, és egy csepp vért adunk hozzá. A keveréket fel kell keverni. Várakozási idő - 20 perctől 3 óráig, a használt reagenstől függ. Ezután ismét keverjük össze a kémcsőben lévő folyadékot, és keneteket veszünk belőle.

Nehéz megmondani, melyik módszer határoz meg pontosabb eredményeket. Mindkettő jó a maga módján, de az orvos szükségesnek találhatja, hogy bizonyos módon elvégezze az elemzést, akkor meg kell mutatnia az irányt.

Mutatók

A retikulociták szintjének kiszámításakor a nemek közötti normák közötti különbségek csak 12 év után számítanak. Eddig a korig a norma mindkét nemnél azonos. Körülbelül egy éves kor körül kezdődik a lányoknál a menstruáció, ami rendszeres. A havi vérveszteség következtében az eritroid sejtek fluktuációinak tartománya kitágul.

1. Újszülötteknél a norma 0,15 és 1,5% közötti tartományban van.

2. Két hetes gyermekeknél - 0,45-2,0%.

3. Egy-két hónapos gyermekeknél - 0,25-0,95%.

4. Hat hónapos gyermekeknél - 0,2-1,0%.

5. Két és hat év közötti gyermekeknél - 0,25-0,75%.

6. Hat és tizenkét év közötti gyermekeknél - 0,25-1,3%.

7. Tizenkét évnél idősebb férfiaknál - 0,25-1,7%.

8. Tizenkét évnél idősebb nőknél - 0,12-2,1%.

Mit jelent az a helyzet, amikor a retikulociták megnövekednek?

A retikulociták számának növekedése a vérben

Különböző etimológiájú vérszegénység esetén a retikulociták számának meghatározása kiemelt szerepet játszik. Ha tartalmuk megnövekszik a vérben, akkor ezt a patológiát retikulocitózisnak nevezik. Ha az emelkedést a hemoglobinszint emelkedése kíséri, akkor ez azt jelzi, hogy a csontvelő jó regenerációs képességgel rendelkezik. Ez akkor fordulhat elő, ha a következő tényezők jelen vannak:

Különböző etimológiájú hemolitikus anémia. Számos olyan betegségről van szó, amelyet a vörösvértestek pusztulása jellemez. Ezt a jelenséget hemolízisnek nevezik. Ebben az esetben a retikulociták tartalma a vérben elérheti a 60% -ot. Ha hemolitikus krízis lép fel, ez a szám súlyosbodhat.

Hemotoxin mérgezés hemolízist okoz. A hemotoxinok közé tartozik a vipera méreg és néhány gyógyszer, amelyeket az erythemia kezelésére használnak. A malária toxinok hemolízist is okozhatnak.

Levodopa terápia Parkinson-kórban.

Bizonyos gyulladáscsökkentő és lázcsillapító gyógyszerek hosszú távú alkalmazása.

Terápia az "Erythropoetin" gyógyszerrel anémiás betegségek.

Csontvelő metasztázisok.

A gyógyulási időszak sugár- vagy kémiai kezelés után.

A retikulocitózis lehet hamis és igaz.

Miért érdemes retikulocita tesztet végezni? Ezt a kérdést gyakran felteszik.

Hamis és valódi retikulocitózis

Az igazi retikulocitózist a fiatal retikulociták számának növekedése jellemzi a vérben, ami a csontvelőben való számuk növekedésével jár együtt.

A hamis retikulocitózist a retikulociták számának növekedése jellemzi kizárólag a perifériás vérben, míg a csontvelőben ezek szintje normális vagy enyhén csökkent.

Csökkentett árak

A retikulociták számának csökkentésének folyamata az eritropoézis gátlásával figyelhető meg. A következő tényezők hatására fordul elő:

A szulfonamidok hosszú távú alkalmazása.

Bizonyos gyógyszerek, például klóramfenikol vagy karbamazepin szedése.

Krónikus fertőző betegségek.

Néhány súlyos vesebetegség, amely befolyásolja az eritropoézist.

Myxedema vagy más pajzsmirigy-működési zavar.

Daganatok a csontvelőben.

Megvizsgáltuk, mi az a retikulocita. Ez egy fiatal vörösvértest az emberi vérben.

A retikulociták növekedésének okai, hogyan határozható meg a vérképző rendszer működőképessége?

Néha a klinikai vizsgálat felírásakor az általános vérvizsgálat külön jelezheti az RTC-t vagy a RET-et - a retikulociták tartalmát mutató rövidítéseket. Nem magvú sejtek, amelyek képződésük során megelőzik az eritrocitákat (vörösvérsejteket). A retikulociták a vérvizsgálatban, számuk és az eritrocitákkal való arányuk tükrözi a csontvelő állapotát és reproduktív funkcióit, valamint az egész vérképző rendszert.

Orvosi igazolás

Részletesen meghatározhatja, hogy milyenek a retikulociták: kerek vagy csillag alakú sejtek, amelyek a csontvelőben alakulnak ki, és az eritropoetin glikoprotein hormon hatására vörösvérsejtekké alakulnak át.

A retikulociták színe általában rózsaszín, kék árnyalattal. Megkülönböztető jellemzőjük a későbbi formától a maradék RNS, a mitokondriumok és más, szemcsés és fonalas képződménynek tűnő organellumok jelenléte a szerkezetben, amelyek elvesztése érett sejtté való átalakulást jelez.

A retikulociták funkcionális feladatai egybeesnek az eritrocitákéval - oxigént szállítanak, de sokkal kisebb hatékonysággal a bennük lévő alacsony hemoglobintartalom miatt. Főleg a vörös csontvelőben, lapos és csőszerű csontokban koncentrálódnak, és csak az érett vörösvértestek jutnak be a véráramba. De az éretlen retikulociták egy kis része a perifériás véráramban is megengedett, ami az eritrociták termelődésének (eritropoézis) aktiválódását jelzi.

A vérképzés folyamata

Az eritropoézis egy eritroblaszt, egy sejtmagot, de hemoglobint nem tartalmazó sejt pronormblaszttá történő átalakulásával kezdődik. Ezenkívül az eritroid sorozatban egy bazofil eritroblaszt képződik, amely már rendelkezik hemoglobinizációval.

Ahogy az ősi eritrociták felhalmozzák az oxigénmegtartó anyagot (hemoglobint), a sejt a polikromatofil, majd az oxifil normoblaszt stádiumain megy keresztül. Ebben az időszakban a sejtmag továbbra is megmarad, amelynek involúciója közvetlenül fiatal eritrocita - retikulocita - kialakulásához vezet, amely már képes az oxigén és a szén-dioxid megtartására és szállítására.

A fiatal vörösvértestek képződésük helyén legfeljebb 40 óráig tartózkodnak, majd kis részük eritropoetin hatására az erekbe kerül, ahol 1,5-2 napig szabadon mozog. Ez idő alatt a sejt elveszíti a retikulumot (maradvány fonalas képződmények), és vörösvértestté alakul.

A retikulociták fejlődési szakaszai

A vérben a retikulociták öt érési szakaszon mennek keresztül, ahogy a retikulum beépül:

1. nulladik szakasz - amikor a bazofil anyag (hálós intracelluláris anyag) sejtmag alakú, vagyis a szemcsésség felhalmozódása egyfajta corollaként néz ki;
2. az első szakasz - a bazofil anyag (BS) hálószerkezetet szerez labda formájában;
3. a második szakasz - a szemcsés hálózat egyenletesen oszlik el a cellán;
4. a harmadik szakasz - BV úgy néz ki, mint külön szálak;
5. negyedik szakasz – a BV kis szemcsék formájában oszlik el a sejt perifériáján.

Egészséges szervezetben a retikulociták a véráramban csak az érés III és IV szakaszában fordulhatnak elő (80 százalék), és 0 - II - egyetlen példányban. De a vörösvértestek túlzott elpusztulása vagy az oxigénéhezés serkenti a vesék fokozott eritropoetintermelését, ami minden stádiumú éretlen sejtek, sőt normoblasztok felszabadulásához vezet az erekbe.

A retikulociták vérvizsgálata

A vérkenet retikulocitaszáma nem kötelező a hematológiai vizsgálathoz, de az átfogó klinikai értékelés része. Csak bizonyos gyanúk felmerülésekor az orvos külön jelölést ad az elemzésben.

A tanulmány okai

A vérben lévő RTC mennyiségének vizsgálata a csontvelő és a vesék vérsejtek és eritropoetin termelődésének ellenőrzése miatt indokolt ilyen esetekben:

• különböző eredetű vérszegénység gyanúja esetén;
• szükség esetén a vashiány, a B12-vitamin és a folsav gyógyszeres terápiájának ellenőrzése;
• monitorozáshoz eritropoetin tartalmú gyógyszerek, eritroszuppresszorok szedésekor;
• súlyos külső vérzés vagy belső vérzés gyanúja esetén;
• mert olyan gyógyszereket kell szedni, amelyek semlegesítik a toxinokat a mérgező rovarok vagy kígyók harapása következtében;
• a vörösvértestek termelésének szabályozására csontvelő- vagy vesetranszplantáció során;
• a rák meghatározásához.

Az utolsó pont egyes rákos daganatok metasztázisának sajátosságaihoz kapcsolódik a vérképző szervekben.

Az észlelés módja

Ha a sejtmag elveszett, csak savas festékeket lehet a vérsejtekre felvinni. A vérkenetben történő festéssel jelzik az eritroid sorozat elemeit, amelyeket fénymikroszkóppal detektálnak. A retikulociták izolálásához az eritrociták teljes tömegéből speciális készítményeket kell használni, amelyek megváltoztatják a sejtek szemcsés szerkezetének színét.

Maga a kimutatási eljárás abból áll, hogy a vérplazmát briliáns krezilkék vagy akridinnarancs festékkel keverik össze in vitro (in vitro) vagy üvegen olyan arányban: 1 rész vér 10 rész anyaghoz.

Az üvegen és az in vitro végzett eljárások alapvetően különböznek egymástól. Az első esetben a festékkel kevert vérkenetet 10 percre nedves környezetbe mártják, majd megszárítják, és mikroszkóp alatt megszámlálják a sejteket. A második változatban a kémcsőben összekevert készítményt legfeljebb 3 órán át állni hagyjuk, majd újra összekeverjük, bekenjük és megszámoljuk.

Amikor a retikulociták csillagsejtjei láthatóvá válnak, és érettségük mértékét meghatározzuk (a festett BV szerkezete szerint), akkor a csontvelő állapotáról kaphatunk információt.

Megengedett mutatók

A retikulociták normál szintje megfelel az egészséges szervezetben a vérképzés folyamatának. Az adatok rendszerezéséhez egy speciális táblázatot használnak, amelyben a normál tartományokat a személy kora és neme szerint osztályozzák.

A retikulociták normája a vérben gyermekeknél

A retikulociták normája gyermekeknél a vérképző rendszer kialakulásának adott időszakától függően változik. Tehát 14 napos újszülötteknél az elfogadható arány 0,15-1,5 százalék a vörösvértestekhez viszonyítva. A normál értékek két hónapos korig 0,45-2,1 százalék, hat hónapos korig pedig 0,25-0,9 százalék. Egy hat hónapostól egy évig terjedő gyermeknél a 0,2-1 százalékos értékeket tekintjük egészségesnek, és 6 éves korig stabilizálódnak. Továbbá szűkül a tartomány: 7 és 12 éves kor között 0,2 és 1,3 százalék között mozog.

Retikulociták a vérben felnőtteknél

A retikulociták további megengedett tartalma a vérben inkább a gyermek nemétől, mint életkorától függ, és megfelel a felnőttkori mutatóknak. Ennek oka a lányok menstruációs ciklusának kezdete, ami havi vérveszteséggel és ennek megfelelően a vérsejtek termelésének növekedésével jár ebben az időszakban. Normatív mutatók:

• a fiatal vörösvértestek elfogadható szintje a nők és a 13 éves kortól fiatal lányok vérében 0,12-2,05 százalék (1,2-20 ppm);
• a retikulociták száma férfiakban általában a teljes eritroid tömeg 0,24 és 1,7 százaléka között van.

Tehát egy felnőttben a fiatal vérsejtek megengedett koncentrációjának állandó tartománya jön létre, amelyek szemcsés hálóanyagot tartalmaznak. Ugyanakkor a megnövekedett reculocita vagy a retikulocita krízis a vérképző rendszer működésének bizonyos zavarait jelzi.

A retikulociták számának növekedése

Az emelkedett retikulociták (vagy más módon retikulocitózis) pozitívak és negatívak is lehetnek az alany számára. Az éretlen vérsejtek számának növekedése a következő esetekben fordul elő:

• A vastartalmú készítményekkel, B12-vitaminnal és folsavval végzett terápia pozitív eredményeivel, amelyek általában egy hét után jelentkeznek.
• Vérmennyiség pótlásakor jelentős vérveszteség után.
• Pozitív eredménnyel az onkológiai betegségek kezelésében rákellenes gyógyszerekkel vagy sugárterápiával.

Fontos! A retikulocitózist oxigénhiány esetén figyelik meg jelentős tengerszint feletti magasságban.

A retikulocitózis negatív értékei a következők:

• Olyan betegségek következményei, mint a tífusz, amelyek belső vérzést váltanak ki.
• A retikulociták megnövekednek vegyi mérgekkel vagy idegen anyagokkal való mérgezés során.
• A hamis retikulocitózis az éretlen sejtek jelenlétét mutatja a vérben, ezek hiányában a csontvelőben, ami gyulladásos folyamatokat vagy áttéteket jelez a szervben.
• A retikulocitózist malária, hemolitikus anémia vagy talaszémia esetén figyelik meg.

A megnövekedett éretlen vérsejtek mennyisége a vérben (retikulocitózis) tele van annak megvastagodásával, ami ezt követően trombózishoz, szívrohamhoz vagy szélütéshez vezethet.

Retikulociták a vérben a terhesség alatt

Terhes nőknél a vér teljes térfogata a plazma miatt növekszik, ezért annak hígulását és a vörösvértestek szintjének csökkenését figyelik meg. Mivel a vérben nincs elegendő hemoglobin, vérszegénység alakul ki, amely aktiválja az eritropoézis folyamatát. Ezért terhes nőknél a retikulociták nagy százalékát határozzák meg. Ennek a jelenségnek a klinikája megfelel a normának a test fiziológiai adaptációjával a gyermekvállaláshoz.

A retikulociták csökkennek

A retikulocitopénia (amikor a retikulociták szintje csökken) gyakran a vesék és/vagy a csontvelő károsodását jelzi. A fiatal eritrociták tartalmát csökkentő tényezők a következők:

• A folsav, a B12-vitamin vagy a vas hiánya által okozott vérszegénység, amely a vörösvértestek pusztulásához vezet.
• Vesebetegségek, de kismértékben csökkenthetik a retikulociták szintjét.
• Alkohollal való visszaélés, amely az RTC csökkenését mutatja a vesefunkciók gátlása, a csontvelő elnyomása és a sejtek mérgezés következtében bekövetkező közvetlen pusztulása miatt.

Fontos! A rosszindulatú daganatok csökkenthetik a retikulociták szintjét a vérben. Ez a csontvelő azon területétől függ, ahol a rák metasztatizált.

Önmagában a retikulociták tartalmának mutatója a vérben nem diagnózis. A megengedett tartománytól való jelentős eltéréssel meghatározza a diagnosztika általános irányát.

A retikulociták szemcsés hálóanyagának kimutatása briliáns-krezilkékkel festve előzetes rögzítés nélkül.

Reagensek:

1%-os briliáns-krezilkék oldat: 50 mg festéket 5 ml sóoldatban feloldunk és 20 mg nátrium-citrátot adunk hozzá (az oldatot sötét üvegedényben tároljuk, több napig is eláll).

Módszertan:

Helyezzen 2 csepp 1%-os briliáns krezilkék festékoldatot és 1 csepp vért egy lyukkal ellátott tárgylemezre. Óvatosan keverjük üvegrúddal, és a keveréket egy nedves kamrába (Petri-csészébe, amelybe enyhén megnedvesített géz- vagy pamuttekercseket helyeznek a szélein) 30 percre szobahőmérsékleten. Ezután kenetet készítenek és szárítják.

Retikulocitaszám:

A kenetekben az eritrociták sárgászöldre festődnek, a retikulociták szemcsés hálóanyaga kék és lila színű.

A keneteket immerziós lencsével mikroszkóppal vizsgálják. A retikulocitákat 1000 eritrocitára számítjuk (nagyobb pontosság érhető el, ha 2000-3000 vörösvértestet számolunk).

A retikulociták számának növekedése figyelhető meg:

erythropoiesis stimulálása (vérveszteség, hemolízis, retikulocita krízis B12-hiányos vérszegénység sikeres kezelésével, akut oxigénhiány).

A retikulociták számának csökkenése figyelhető meg:

az erythropoiesis gátlása (aplasztikus és hipoplasztikus anémia, kezeletlen B12-hiányos vérszegénység, rákos áttétek a csontban),

vesebetegségek, endokrin betegségek.

Megfigyelhető retikulocitáik növekedése a perifériás vérben (retikulocitózis): hemolitikus vérszegénység esetén (a retikulociták száma elérheti a 60% -ot vagy még többet is (különösen növekszik hemolitikus krízisek esetén); akut vérveszteség esetén (retikulocita krízis fordul elő 3- 5 nappal a vérveszteség után), beleértve a retikulociták számának növekedését, lehetővé teszi rejtett vérzés gyanúját (például gyomor-bél traktus peptikus fekélyében, tífuszban szenvedő betegeknél); maláriában; policitémiában; vas kezelésében vashiányos vérszegénység (néhány nappal (3-10) a vészes vérszegénység vérszegénység elleni kezelésének megkezdése után); akut oxigénhiány; daganatos áttétek a csontvelőben. Nem szabad megfeledkezni arról, hogy a vérszegénység fokozott pusztulása esetén vörösvértestek esetében a retikulociták aránya a retikulociták számának mesterséges növelése miatt meghaladhatja az 50%-ot (amint azt korábban említettük, a retikulociták arányát az összes vörösvértest %-ában számítják. Ilyen esetekben a vérszegénység súlyosságának felmérésére a „retikuláris index” értéket használjuk, amelyet a következő képlettel számítanak ki: (retikulociták %-a x hematokrit) / 45 x 1,85, ahol 45 a normál hematokrit, 1,85 az új retikulociták vérbe jutásához szükséges napok száma. Ha index

A RETIKULOCITOK SZÁMÁNAK MÓDSZEREI

(1) A retikulociták számának megszámlálása a kenetben speciális festékekkel való megfestés után. Ez a módszer a gyakorlatban a leggyakrabban alkalmazott módszer, mivel egyszerű, meglehetősen olcsó és nem igényel különleges drága berendezéseket, ezért bármely klinikai diagnosztikai laboratóriumban alkalmazható. A módszer elve a retikulociták szemcsés hálóanyagának kimutatásán alapul lúgos festékekkel (brilliáns krezilkék telített oldata abszolút alkoholban / azúrkék oldat / azúrkék II oldat) végzett szupravitális festés során, és további vérszámlálást végeznek. kenet. A retikulociták festését üvegen vagy kémcsőben végezzük. A számlálást mikroszkóppal végezzük: a fenti módszerek valamelyikével készített keneteket immerziós lencsével mikroszkóppal vizsgáljuk; kenetben a retikulociták és eritrociták sárgás-zöldesre festődnek, a retikulocitákban lévő szemcsés-szálas anyag kék (azúrkék II-vel és briliáns krezilkékkel festve) vagy kékes-lila (azúr I-vel festve). (2) A retikulociták számának megszámlálása fluoreszcens mikroszkóppal. Ez a módszer egyszerű és kis időt vesz igénybe, pontosabb, mint a hagyományos módszer, mivel a fluoreszcens mikroszkóppal a hálós-szálas anyag legkisebb szemcséit is feltárják, de ez csak lumineszcens mikroszkóppal és speciális festékekkel lehetséges, ezért csak néhány laboratórium. A retikulociták számának fluoreszcens mikroszkóppal történő megszámlálásának elve a retikulociták anyagának akridinnarancsos vérkezelés utáni fluoreszkáló képességének felhasználásán alapul. A vért kémcsőben vagy keverőben akridinnarancsdal keverjük 1 rész vér és 10 rész festék arányban (a keverék legfeljebb 5 órán át tárolható). Az elegyet 2 percig keverjük, egy cseppet egy tárgylemezre helyezünk és fedőlemezzel lefedjük. Ebben az esetben a folyadék nem haladhatja meg a fedőlemezt. Mikroszkóposan ZhS-17 fényszűrővel. A készítményben az eritrociták sötétzöld körvonalúak és nem fluoreszkálnak, míg a retikulocitákban a szemcsés-hálós anyag élénkvörösen világít, így könnyen megszámolható a retikulociták. A heparinnal vagy nátrium-citráttal stabilizált vérben a retikulocita fluoreszcenciája nem figyelhető meg. (3) Automatikus retikulocitaszámlálás hematológiai analizátorral. A modern hematológiai analizátorokban a vérsejtek számlálásának technológiája a H. által javasolt konduktometrikus módszeren alapul. Wallace és Joseph R. Culter 1947-ben. A módszer elve azon impulzusok számának megszámlálása és természetének meghatározása, amelyek akkor keletkeznek, amikor egy cella áthalad egy kis átmérőjű lyukon (apertúrán), amelynek mindkét oldalán két elektróda található. elszigetelve egymástól. A cellák minden egyes áthaladását a nyíláson egy elektromos impulzus kíséri, amelyet egy elektronikus érzékelő rögzít. A sejtek kategóriákra (vörösvértestek, leukociták, vérlemezkék, üledék) felosztását a készülék a kapott impulzusok amplitúdójának elemzése alapján végzi el, a sejtek koncentrációjának meghatározásához elegendő egy bizonyos térfogatú sejtet átengedni. mintát venni a csatornán keresztül, és megszámolni a generált impulzusok számát. Meg kell jegyezni, hogy a retikulociták klasszikus paramétere mellett a retikulociták relatív (%) tartalma (RET%, retikulociták százaléka), amelyet a laboratóriumi diagnosztika 1. és 2. módszerével határoztak meg, a csúcstechnológiás hematológiai módszerek megjelenése miatt. analizátorok (3. módszer) segítségével lehetővé vált (például a Sysmex-XT-2000i analizátorhoz szabadalmaztatott fluoreszcens festék használatával) további informatív retikulocita paraméterek beszerzése: alacsony RNS tartalmú retikulociták, a legérettebb (LFR%, alacsony fluoreszcens retikulocita frakciók) , alacsony fluoreszcenciájú retikulocita frakció); átlagos RNS-tartalmú retikulociták (MFR%, közepes fluoreszcens retikulocita frakciók) - közepes fluoreszcenciájú retikulociták frakciója); magas RNS-tartalmú retikulociták (HFR%, magas fluoreszcenciájú retikulocita frakciók) - a retikulociták nagy fluoreszcenciájú frakciója); éretlen retikulocita frakció (IRF%, Éretlen retikulocita frakció). A retikulociták differenciálódása az érettség foka és ennek megfelelően a nukleinsavtartalom alapján a csontvelő hematopoietikus aktivitását tükrözi. Módszer (Sysmex-XT-2000i analizátor). Az áramlási cellában a cellák keresztezik a félvezető lézer nyalábját, miközben a nyaláb kis és nagy szögben szétszóródik, és a fluoreszcens festék gerjesztődik. Ez lehetővé teszi a retikulociták különböző érettségi stádiumainak meghatározását a sejtek RNS-tartalma és lumineszcenciájuk intenzitása alapján. Az automatizált retikulocitaszámlálás nagyon pontos (több mint 30 000 vörösvérsejtet számlál meg) és reprodukálható (a variációs együttható körülbelül 6%). Ez a technológia biztosítja a retikulociták pontos számát még rendkívül alacsony koncentrációban is.

Retikulocitopénia és retikulocitózis, kialakulásának okai, kimutatásuk diagnosztikus értéke.

studfiles.net

Retikulociták (reticulocytus)

A retikulociták fiatal vörösvérsejtek, amelyek a normoblasztok magvesztése után keletkeznek.

A retikulociták jellegzetessége a szemcsés hálós anyag jelenléte, amely szupravitális festéssel, azaz a sejtek előzetes rögzítése nélkül jelenik meg.

Elektronmikroszkóppal kimutatták, hogy a szemcsés hálós szerkezetek az endoplazmatikus retikulum, a riboszómák és az RNS-t tartalmazó mitokondriumok maradványai. A retikulocitákban a fehérje (globin), a hem, a purinok, a pirimidin nukleotidok, a foszfatidok, a lipidek szintézise kis mértékben történik, de RNS nem szintetizálódik bennük. 2 napon belül a retikulocita a véráramban marad, majd az RNS csökkenésével érett eritrocitává válik.

A hagyományos hematológiai módszerekkel festett kenetekben a szürkés-rózsaszín retikulociták polikromatofilek, azaz. különböző festékekkel festve.

Jelenleg egységes módszert alkalmaznak a retikulociták számának festés utáni számlálására.

• ragyogó krezilkék,
• Azur I ill
• Azur II közvetlenül üvegen vagy kémcsőben.

1. A módszer elve

Az eritrociták szemcsés hálóanyagának azonosítása lúgos festékkel festve, vérkenetben történő további megszámlálással.

2. Reagensek:

a) briliáns krezilkék abszolút alkoholos telített oldata (abszolút alkohol előállításához 96% etanolt kell tartani a kalcinált réz-szulfát por többszöri cseréjével): 1,2 g festék 100 ml alkoholra;

b) azúr I oldat: azúr I - 1 g, ammónium-oxalát - 0,4 g, nátrium-klorid - 0,8 g, 96% -os etil-alkohol - 10 ml, desztillált víz - 90 ml. A zárt fiolában lévő festékoldatot 2-3 napra 37 °C-os termosztátba helyezzük, és időszakonként erőteljesen rázza meg. Ezután szobahőmérsékletre hűtjük és szűrőpapíron szűrjük. Az oldatot sötét üvegtartályban tárolják. Ha csapadék jelenik meg, a festéket újra szűrni kell;

c) Azur II oldat: Azur II - 1 g, nátrium-citrát - 5 g, nátrium-klorid - 0,4 g, desztillált víz - 45 ml. Az oldatot 2 napig 37 °C-on termosztátban hagyjuk, időnként megkeverve. Az oldódás felgyorsítása érdekében a festéket alacsony lángon 15-20 percig forralás nélkül melegíthetjük. Szobahőmérsékletre hűtjük és szűrjük. Tárolja sötét üvegedényben.

3. Színezés

Színezés üvegen:

• egy jól megmosott és zsírtalanított üveglemezt égőláng fölött hevítenek. Üvegrúddal az egyik festékből egy cseppet felvisznek az üvegre, és csiszolt üveggel festékfoltot készítenek. Jelölje meg az üvegnek azt az oldalát, amelyre a festékfoltot felvitték egy üvegceruzával. Ebben a formában az üveg előkészíthető jövőbeli használatra, és száraz, sötét helyen tárolható;
• az így elkészített poharakra egy csepp vért csepegtetünk, vékony kenetet készítünk, és az üveget azonnal nedves kamrába helyezzük. Ehhez használjon egy fedős Petri-csészét, amelybe enyhén megnedvesített géz- vagy pamuttekercseket helyeznek a szélei mentén;
• A keneteket 3-5 percig nedves kamrában tartják, majd levegőn szárítják. A retikulociták szemcsés hálóanyaga lilás-kék színűvé válik, egyértelműen kiemelkedik az eritrociták zöldes-kék hátteréből.

Színezés in vitro:

• 1. módszer: használat előtt készítsen briliáns krezilkék munkaoldatot egy kémcsőben cseppenként 1%-os kálium-oxalát oldat 4 csepp festékoldat 1. Adjon hozzá 40 µl vért a festékhez (két pipettával a 0,02-es jelig). Alaposan, de óvatosan keverjük össze, és hagyjuk állni 30 percig. Keverjük össze és készítsünk vékony mozdulatokat;
• 2. módszer: 0,05 ml 3. festékoldatot és 0,2 ml vért helyezünk egy kémcsőbe. A keveréket alaposan összekeverjük és 20-30 percig állni hagyjuk. Keverjük össze és készítsünk vékony mozdulatokat;
• 3. módszer: 0,3-0,5 ml 2. festékoldatot és 5-6 csepp vért tegyünk egy kémcsőbe a Panchenkov-készülék pipettájával. A csövet gumidugóval lezárjuk, a keveréket alaposan, de óvatosan összekeverjük, és 1–1,5 órán át állni hagyjuk (a retikulociták jobban festenek, ha 1½ óra–3 óra expozíció van). Keverjük össze, és készítsünk vékony köröket.

4. Retikulocitaszám

A kenetekben az eritrociták sárgás-zöldes, szemcsés-szálas anyag - kék vagy kékes-lila színűek.

• A fenti módszerek egyikével készített keneteket immerziós lencsével mikroszkóppal vizsgáljuk;
• legalább 1000 vörösvértestet meg kell számolni, és ezek között fel kell jegyezni a szemcsés-szálas anyagot tartalmazó eritrociták számát. Egységes vékony kenetekkel, amelyekben az eritrociták egy sorban vannak elrendezve, olyan látómezőt választanak ki, amelyben például 50 vörösvértest van, majd 20 ilyen látómezőt számítanak ki;
• a gyakorlatban a nagyobb pontosság érdekében speciális okulárt használnak, amelyben a látómező a kívánt méretre csökkenthető. Kész okulár hiányában egyszerűen elkészíthető úgy, hogy az ×7-es okulárt lecsavarjuk, belerakunk egy kis négyzet alakú papírlapot és felcsavarjuk. A megszámolt retikulociták számát 1000 vagy 100 eritrocitára számítjuk.

ARÁNY: 0,5–1,2% (30–70 × 109/l)

A retikulociták számának növekedése figyelhető meg:

• vérveszteség (különösen akut);
• hemolitikus anémia, különösen válság idején (legfeljebb 20-30%);
• a megaloblasztos vérszegénység B12-vitaminnal történő kezelésének hátterében (retikulocita krízis - a retikulociták számának növekedése a kezelés 4-8. napján).

A retikulociták számának csökkenése jellemző:

• aplasztikus és hipoplasztikus anémiák;
• kezeletlen megaloblasztos vérszegénység;
• sugárbetegség;
• citotoxikus gyógyszerek szedése.

Krisztus él? Krisztus feltámadt a halálból? A kutatók tanulmányozzák a tényeket

diagnoz.ru

A retikulociták normálisak és számukat számolják

A retikulociták, amelyek normája számos tényezőtől függően változik, a vörösvértestek formálatlan formái, és megtalálhatók a csontvelőben és a perifériás vérben. A vérben lévő retikulociták általában három-öt napon belül érnek, majd ezek a sejtek már érett vörösvérsejtekké alakulnak. Ezenkívül az újszülötteknél a formálatlan eritrociták száma lényegesen nagyobb, mint a felnőtteknél.

A retikulociták kimutatása:

A retikulociták azonosításakor, amelyek normáját egy speciális táblázat segítségével határozzák meg, figyelembe kell venni az érett eritrocitáktól való különbségeiket. Ez a fajta vérsejt vagy egy teljes sejtmagot tartalmaz, vagy maradványait szemcsés-szálas anyag részeként figyelik meg. Az ilyen sejtek számának meghatározásához meg kell vizsgálni a vérkenet színét a laboratóriumban. Ehhez kék gyémánt oldatot használnak, amelyet zsírtalanított és előmosott üvegre visznek fel, és csak ezután készítenek kenetet.

Amikor retikulocitákat észlelnek, amelyek normája eltérő, közvetlenül a kenet után a felhasznált üveget Petri-csészébe - egy speciális nedves kamrába - kell helyezni, majd öt percig tartani, friss levegőn alaposan szárítani, majd mikroszkóposan. Ezenkívül a retikulocita belsejében lévő szemcsés-szálas típusú anyag általában ibolya-kék árnyalattal festődik, és az eritrociták háttere kékes-zöld árnyalat miatt kiemelkedik.

Ha a Gel-Meyer módszert alkalmazzuk, sokkal jobban látható az éretlen vérsejtek festése, ehhez azonban Vidal tubus szükséges. Ebben az edényben néhány csepp vért briliáns oldattal és nátrium-kloriddal összekeverünk, majd a csövet fedéllel lezárjuk, és magát a kenetet egy órán belül elvégezzük.

Retikulocitaszám:

Az éretlen vérsejtek számának kiszámításakor 1000 vörösvérsejtet kell alapul venni, majd figyelembe kell venni a retikulocitákat, amelyek aránya általában a felnőtt vörösvértestek számának 0,2-1,2% -a között változik. Átlagosan a legtöbb emberben az éretlen vörösvértestek száma általában a teljesen érett vérsejtek teljes számának 0,7%-a. Ha a retikulociták száma legalább 10% -kal meghaladja a maximálisan megengedett normát, akkor egy személy retikulocitózist, rendszeres akut vérzést és hemolitikus anémiát kísér.

A retikulociták megszámlálásakor (a gyermekek normája általában magas), érdemes figyelni, hogy számuk ne haladja meg a felnőttekre jellemző határértékeket. A szabványok a nemtől is függnek, mivel a nőknél az éretlen eritrociták 2,07%-a még mindig elfogadható paraméternek számít, és férfiaknál ez az érték nem haladhatja meg az 1,92%-ot.

Azokban az esetekben, amikor a retikulociták szintje jelentősen megnövekedett, ez olyan rendellenességek jelenlétét jelzi a szervezetben, mint a malária és a talaszémia, a policitémia és a hipoxia, a vérszegénység, mindenféle hemolitikus szindróma, de az ilyen mutatók cianokobalamin kezeléssel is lehetségesek. Az éretlen eritrociták szintjének csökkenése esetén az ember aplasztikus és hipoplasztikus anémiát, mindenféle vesebetegséget és myxedemát tapasztalhat, valamint a daganatos áttétek csontokra való terjedését.

A vérszegénység súlyosságának diagnosztizálásához ki kell számítani a "retikulocita indexet", amelyet a retikulociták százalékos aránya és a normál hematokritértékek arányaként számítanak ki, megszorozva az éretlen sejtek perifériás vérbe jutásához szükséges napok számával. Ha a kapott index nem haladja meg a kettőt, akkor a mutató a vérszegénység hipoproliferatív komponensét jelzi, ha pedig meghaladja a kettőt, akkor a vörösvértestek fokozott képződésének valószínűségét mutatja.

fb.ru

Vérvizsgálat. Vérelemzés

A hemoglobin koncentráció meghatározása

A hemoglobin meghatározására szolgáló módszerek közül a kolorimetriás, azaz a színintenzitás meghatározásán alapuló módszerek a legelterjedtebbek.Léteznek lezárt üvegcsövek színstandardtal (glicerinben sósav hematin) 0,1%-os sósavoldat az először a központi kémcsőbe öntjük a 2 vagy 3 g%-nak megfelelő jelig, majd óvatosan adjunk hozzá (pontosan!) 0,02 ml ujjból vett vért egy hemométerhez rögzített speciális pipettával. A felületi savréteget pipettával mossuk, majd a vért és a savat üvegrúddal összekeverve hagyjuk állni 5 percig, hogy hematin-hidroklorid képződjön. Ezután desztillált víz hozzáadásával és folyamatos keveréssel a központi csőben a folyadék színe teljesen megfelel a szabványnak. A hemoglobin-koncentráció az alsó meniszkuszon lévő oldatszint-jelnek felel meg. A hemoglobin koncentrációja kifejezhető a hemoglobin g%-ában vagy hagyományos mértékegységekben. 16,67 g hemoglobint 100 egységnek tekintünk.

A hemoglobin koncentrációja a vérben a nőknél 11,7-15,8 g ° / o vagy 117-158 g / l, férfiaknál - 13,3-18 g% vagy 133-180 g / l.

Vérvétel a formált elemek megszámlálásához

A képződött elemek megszámlálásához keverőkben (melangerekben) vagy kémcsövekben vért hígítanak, ami az utóbbi időben egyre szélesebb körben elterjedt.A vörösvértestek számlálásához a vért 3%-os nátrium-klorid oldattal 200-szorosra hígítják; ha hemométer pipettával veszünk vért, melynek térfogata 0,02 ml, akkor 4 ml nátrium-klorid oldatot kell venni A leukociták megszámlálásához a vért 20-szorosra hígítjuk, ezért 0,02 ml vért és 0,38 ml 3%-ot színezett metilénkék ecetsavoldatot veszünk, amely a vörösvértestek pusztulásához szükséges. A vérvételt nagy pontossággal kell végezni, mivel ilyen kis térfogatok esetén légbuborék vagy vérmaradvány kerül a véráramba. a pipettán kívül a meghatározási hiba növekedéséhez vezet A kamra feltöltése előtt a kamrában polírozott üveget kell törölni, hogy szivárványos gyűrűk jelenjenek meg A kamra feltöltése előtt a hígított vért alaposan összekeverjük, mivel a sejtek leülepedni a keverő kémcsőjének vagy ampulláinak falán, majd a kamra csiszolt csiszolt üvege alá egy csepp vért teszünk, és 1 percig pihentetjük, hogy a sejtek leülepedjenek.

A kialakított elemek számlálása a mikroszkóp kis nagyításán (objektív 8X, okulár 15X vagy 10X) sötét látómezőben történik.

Az eritrocitákat 5 nagy négyzetben (16x5 = 80 kis négyzet) számoljuk, amelyek a kamra különböző részein helyezkednek el, átlósan elhelyezkedő négyzeteket vehetünk.A négyzet belsejében lévő, valamint a felső és bal oldalán lévő vörösvértesteket megszámoljuk; az alsó és a jobb oldalon fekvő eritrocitákat nem számoljuk, mivel ezek már más négyzetekhez tartoznak.

Miután megszámolták az eritrociták számát (A) 5 nagy négyzetben, megtalálják az eritrociták számának számtani átlagát egy kis négyzetben A / 80, azaz 1/4000 μl-ben. Ezért, hogy megtudjuk a vörösvértestek számát 1 µl-ben, meg kell szoroznunk az osztásból kapott számot 4000-rel és 200-zal (hígítás).

Így a következő képletet kapjuk:

X=A*4000*200/80,

ahol X az eritrociták száma 1 µl-ben, A pedig az eritrociták száma 5 nagy négyzetben. Ha 5 nagy négyzetben számoljuk a vörösvértesteket és 200-szor hígítjuk a vért, akkor az A szám össztényezője 10 000 lesz.

A normál vörösvértest-tartalom a nők vérében 4-5 * 106, a férfiaknál - 4,5-5,5 * 106.

A leukocitákat 100 nagy négyzetben számolják, nem apróra osztva, ami 1600 kicsinek felel meg. Így a 100 négyzetben talált leukociták számát elosztjuk 1600-zal, szorozzuk 4000-rel és 20-zal (hígítás). Ebben az esetben az eredmény eléréséhez elegendő a megszámlált leukociták számát 50-zel megszorozni. A vér normál leukociták tartalma 5 * 103 - 8 * 103 1 μl-ben.

A vér színjelzője. A vér színindikátora egy olyan szám, amely egy adott vér egyedi vörösvértestének átlagos hemoglobin telítettségét mutatja a normál vér egyedi vörösvértestének telítettségéhez viszonyítva. A normál hemoglobintartalomhoz 100 egységet veszünk, és a normál vérszámot. eritrociták száma 5 000 000. Egészséges emberek színindexének értéke 0,9 és 1,1 között változik Perifériás vérkenet vizsgálata. A vérkeneteknél az eritrociták morfológiáját vizsgálják és a leukocita képletet, vagyis a különböző típusú leukociták közötti százalékos arányt vizsgálják, a vizsgálat sikeressége érdekében a vérkenet elkészítését, rögzítését és festését kell elvégezni. A kenet elkészítéséhez egy tiszta, zsírmentes pohár felületét a tárgylemez szélétől 0,5 cm távolságra megérintik az ujjon a szúrás helyén egy vércseppet, majd a polírozott fedőlemezt 45°-os szögben helyezünk el a tárgylemezhez képest, és az elsőt a vércsepphez visszük úgy, hogy az a fedőlemez hátsó széle mentén elterjedjen és a tüdő mozgása éles nyomás nélkül kenést hozzon létre. A kenetnek az üveglemezen „panikával” kell végződnie. A kenetet levegőn szárítják, szárítva a jó, vékony kenet sárga színű.

Egy egyszerű, kihegyezett ceruzával a kenet közepére felírják a páciens nevét és a vizsgálat dátumát, majd a keneteket legalább 5 percig metil-alkoholban rögzítik és Romanovsky-Giemsa módszerrel megfestik.

A festék savas (eozin) és bázikus (Azur II) festékek keverékéből áll. Ez a festési módszer lehetővé teszi a sejtek megkülönböztetését. A kenettel végzett munka első lépése a vörösvértestek morfológiájának felmérése. Ehhez válasszon egy vékony helyet, ahol a cellák külön fekszenek, és ne érmeoszlopok formájában. A normál eritrociták magmentes, rózsaszín színű sejtek, lekerekítettek, megközelítőleg azonos átmérőjűek - 7,5 mikron, az eritrociták bikonkáv korong alakúak, ezért a kenetben a közepén megvilágosodás és intenzívebben festett periféria van.

(direkt4 modul)

Vastag csepp előkészítése

A Plasmodium malária vérvizsgálatához vastag cseppet készítenek. A vért a szokásos módon veszik az ujjpépből. Az injekció beadásának helyéről kilépő vércseppet egy tárgylemez felületével érintik. A külön felvitt 2-3 cseppet egy másik pohár sarkával megkenjük. Száraz kenetet öntünk (rögzítés nélkül) Romanovsky-festékkel 30-40 percig, majd a színes cseppet gondosan leöblítjük vízzel, és a készítményt függőleges helyzetben szárítjuk.

Mintaelemzési adatok

A megnövekedett vörösvértest- és hemoglobinszám a vérben vörösvértest-betegséggel - erythremiával - fordulhat elő, majd a vörösvértestek száma eléri a 9-106-ot vagy még többet, és a vörösvértestek száma nő a vörösvértest-betegségek következtében. egyéb szervek és rendszerek (dekompenzált diffúz pneumoszklerózissal, emfizémával, bizonyos típusú veleszületett szívhibákkal, a pulmonalis artériás rendszer vaszkuláris szklerózisával, jobb szívhibákkal, III. fokú keringési elégtelenséggel stb.). Ezt a tünetet eritrocitózisnak nevezik.

Morfológiailag megváltozott eritrociták hiperkróm (megaloblasztos) vérszegénységben jelennek meg. Ugyanakkor a vérben nagyméretű, magas hemoglobintartalmú vörösvértestek (makrociták), embrionális eritrociták (megaloblasztok) találhatók, amelyek általában nem találhatók meg a perifériás vérben. Az eritrociták morfológiája is megváltozik a hipokróm vérszegénység esetén: kisméretű vörösvértestek (mikrociták) jelennek meg, alakjuk megváltozott (poikilociták) és alacsony hemoglobintartalmú eritrociták (hipokróm eritrociták).

Leukociták száma

A leukocita képlet kiszámításakor meg kell határozni a citoplazma és a sejtmagok szerkezeti jellemzőit. A sejt egyik vagy másik csoporthoz való tartozását a citoplazma és a sejtmag összes jelének összessége alapján határozzuk meg, a képlet kiszámításakor az üveg mikroszkóp alatti mozgatásának ugyanazt a módját kell betartani. Leggyakrabban a mikroszkópos módszert a kenet 4 helyén alkalmazzák. Ismeretes, hogy a leukociták egyenetlenül oszlanak el a kenetben: a széleken kevesebb limfocita van, mint a közepén, és több a monocita a kenet végén, mint az elején. Ezért a leukocita képlet kiszámításakor a legjobb, ha egy szaggatott vonal mentén haladunk, megszámolva az összes talált sejtet.200 sejt megszámlálása a gyakorlati minimum a rutin klinikai vizsgálatokhoz Perifériás vér leukociták, attól függően, hogy a szemcsézettség megléte vagy hiánya citoplazmában granulocitákra (neutrofil, eozinofil, bazofil) és agranulocitára (monociták és limfociták) oszthatók.

Neutrophilek. A cella mérete 10-12 mikron. A sejtek citoplazmája halvány rózsaszín színű, finom, bőséges, lila szemcsézettséggel. Normális esetben szúrt (2-4%) és szegmentált (60-65%) neutrofilek találhatók a vérben.

Eozinofilek. A sejtek a neutrofilekkel megegyező méretűek, néha kicsit nagyobbak, a citoplazma nagy sárgásvörös szemcsékkel van tele, a sejtmag általában két azonos méretű szegmensből áll. Az eozinofilek normál 2-4% a bazofilek. Méretében a legkisebb granulocita. A sejtmag szabálytalan, sokkaréjos, szinte az egész sejtet elfoglalja, a halványrózsaszín citoplazma nagy sötétlila szemcséket tartalmaz. A bazofil granulátumok vízben oldódnak, és néha a készítmény festésekor történő lemosás következtében színtelen sejtek maradnak a szemcsék helyén. Normális esetben a bazofilek 0,1% -a limfociták. A sejtméret 7 és 10 µm között van. A mag tömör, lekerekített vagy bab alakú. A sejtek citoplazmája halványkék, a sejtmag körül megvilágosodási zónával (perinukleáris), néha a citoplazmában különálló vörös-ibolya színű azurofil szemcsék vannak. A perifériás vérben a limfociták 20-35%-a normális.Monociták. A sejtméret 12 és 20 µm között van. A mag gyakran patkó alakú, néha szabálytalan alakú. A citoplazma kiterjedtebb, mint a limfocitáké, hamukék színű, finom, finom, vöröses szemcsézettséggel, a monociták 6-8%-a normális.

A vér megnövekedett leukocitatartalmát leukocitózisnak, a lecsökkent mennyiséget pedig leukopéniának nevezik.

Retikulocita festés és számlálás

A retikulociták fiatal vörösvérsejtek, vékony kék retinával vagy szemcsézettséggel a citoplazmában. Ezek a sejtek jellemzik a vörös vérképzés aktivitását, a retikulociták számának kimutatására a supravitális (élettartam) festés módszerét alkalmazzuk. A briliánskrezilkék festékből üveglemezekre abszolút alkoholban kenetet készítenek, majd a festett üvegen a szokásos módon vérkenetet készítenek, és 3-5 percre nedves kamrába helyezik, majd szárítják és egy szűrővel mikroszkóppal. merülőlencse. Normális esetben 8-10 retikulocitát találunk 1000 eritrocitára, számukat százalékban (0,8-1%) vagy ppm-ben (8-10% o) fejezzük ki a vörösvértestekhez viszonyítva. eritrociták a csontvelőben.

Nagy százalékban jelennek meg a perifériás vérben hipokróm vérszegénység ("rosszindulatú anémia"), hemolitikus anémia és más betegségek esetén. A hiperkróm vérszegénység súlyosbodása során a retikulociták csökkent mennyisége és teljes eltűnése a perifériás vérben figyelhető meg.

A vérlemezkék aggregációjának (ragasztásának) megelőzése érdekében bőrszúrást végeznek egy csepp 14% -os magnézium-szulfát oldattal, amelyet az ujjra helyeznek. A vért magnézium-oxiddal összekeverjük és üveglemezeken vékony keneteket készítünk, amelyeket ezután fixálunk és Romanovszkij szerint festünk 2 órán keresztül Meghatározzuk az 1000 eritrocitára jutó vérlemezkék számát, és az 1 μl-ben lévő vörösvértestek számának ismeretében a a vérlemezkék számát 1 μl vérben megszámolják. A normál vérlemezkék 250 000 és 400 000 közötti mennyiséget tartalmaznak.

Az ESR meghatározása

Az eritrociták ülepedési sebességét nátrium-citráttal 4:1 arányban elegyített vérben határozzuk meg, majd a reakciót Panchenkov készülékben állítjuk be. Pancsenkov kapillárisát nátrium-citráttal mossuk, majd a citrátot felszívjuk az 50-es jelig, ahol az R betű áll (reagens), és Vidalevszkij kémcsőbe fújjuk. Ugyanazt a kapillárist használjuk vérvételre kétszer a K jelig (vér), és összekeverjük citráttal. Ugyanezt a kapillárist megtöltjük citráttal 0-ig elegyített vérrel, és függőlegesen állványra helyezzük egy órára. Egy órával később, milliméterben, a leülepedett eritrociták felett képződött plazmaoszlop értékét jegyezzük fel, amely a vörösvértest ülepedési sebességének mértéke. A normál ESR férfiaknál 10 mm / h, nőknél - 14 mm / h.

Gyulladásos, akut és krónikus betegségek, rosszindulatú daganatok és egyéb betegségek esetén az eritrociták ülepedési sebessége fokozódik.

Rh faktor kompatibilitási teszt

A recipiens véréből 2-3 ml-t citrát nélküli kémcsőbe veszünk, a véralvadás után az alvadékot üvegrúddal felkarikázik és a vért centrifugálják. Ebből a csőből két csepp szérumot csepegtetünk egy Petri-csészére, fél csepp donor vért adunk hozzá, összekeverjük, és a csészét vízfürdőbe (42-45 °) helyezzük. 10 perc elteltével a poharat eltávolítjuk, és enyhe ringatással fényben nézzük. Az agglutináció megjelenése a vérátömlesztés elfogadhatatlanságát jelzi.

A retikulociták számának meghatározása- klinikai vérvizsgálat, amelyben megszámolják a csontvelő által termelt fiatal vörösvértesteket. A vizsgálat kiegészíti az általános vérvizsgálatot. A retikulocitaszámlálást különféle típusú vérszegénységek differenciáldiagnosztikájára, a csontvelő és a lép működésének felmérésére, vashiányos, B12-vitamin- vagy folsavhiányos, veseelégtelenségben, daganatos betegek állapotának monitorozására végezzük. A kutatáshoz szükséges vérminta vénából vagy kapillárisokból történik. A retikulocitaszámot áramlási citometriás módszerrel határozzuk meg. A referenciaértékek férfiaknál 23-70 ezer / μl, nőknél 17-63,8 ezer / μl. Az elemzés időtartama nem haladja meg az 1 munkanapot.

A retikulociták az eritrociták prekurzorai. Ezeket a csontvelő termeli az őssejtek differenciálódása és osztódása során. A retikulociták nagy része a csontvelőben helyezkedik el, a már érett eritrociták főként a véráramba kerülnek. A retikulociták aránya a vérben körülbelül 0,5-2%. Az elemzés során meghatározzák az ilyen típusú sejtek számát és százalékos arányát a vörösvértestek teljes számához viszonyítva. Az eredmények lehetővé teszik számunkra, hogy értékeljük a vörösvértestek képződését a csontvelőben, és meghatározzuk e folyamat aktivitásának mértékét.

A szervezet fenntartja a vörösvértestek stabil szintjét a vérben. A hemolízis, a szintézis károsodása és a vérzés következtében számuk csökkenésével aktiválódnak a normál koncentrációk helyreállítására szolgáló kompenzációs mechanizmusok. A retikulociták szintjének és százalékos arányának megváltoztatásával a csontvelőben a vörösvértestek termelésének fokozódása vagy e folyamat gátlása érhető el. Ha a csontvelő normálisan működik, akkor a vörösvértestek elvesztése a későbbiekben számuk és a retikulociták számának növekedéséhez vezet. Ezeknek a sejttípusoknak a szintje csökken, ha a vörös csontvelőt daganat, áttétek, sugárterápia és kemoterápia károsítja. A retikulociták elemzéséhez a bioanyag kapilláris vagy vénás vér. A vizsgálatot hematológiai analizátorral, áramlási citometriával végezzük. Az eredményeket az általános terápiás gyakorlatban, hematológiában, gyermekgyógyászatban, fertőző betegségekben és sebészetben hasznosítják.

Javallatok

A retikulocita tesztet a csontvelő vörösvérsejt-termelésének értékelésére használják. A vizsgálat eredményei lehetővé teszik a vérszegénység különböző típusainak megkülönböztetését. A retikulociták szintje szerint hiporegeneratív és regeneratív csoportokra oszthatók. Az első esetben a vizsgálati paraméterek lecsökkennek, a vörösvértestek termelése nem elegendő, a csontvelő funkciói le vannak nyomva. Ebbe a csoportba tartozik a hemolitikus vérszegénység krónikus betegségekben, általános mérgezés, cachexia, fehérje-, vas-, vitaminhiány. A regeneratív vérszegénységet a retikulociták szintjének kompenzációs növekedése kíséri az eritrociták fokozott pusztulásának vagy elvesztésének hátterében. Ez a csoport magában foglalja a poszthemorrhagiás és néhány hemolitikus anémiát. A retikulocita analízis segítségével meghatározható a vérszegénység súlyossága, majd eredményeit kiegészítik az eritrociták szintjét, a hemoglobint és az eritrocita indexeket mutató mutatókkal.

A retikulociták szintjének meghatározását csökkent vörösvértest-szint, hemoglobin, gyakori fáradtság, fejfájás, légszomj, véres vizelet vagy széklet panaszai jelzik. A vérszegénység megállapított diagnózisával elemzést írnak elő a kezelés hatékonyságának értékelésére. Különösen gyakran használják a vas-, B12-vitamin- vagy folsavhiány okozta vérszegénység, valamint a veseelégtelenség, krónikus betegségek hátterében kialakuló vérszegénység monitorozására. A csontvelő-funkció értékeléséhez retikulocita-tesztet kell végezni a megemelkedett vörösvérsejtszámra a policitémia okának meghatározására.

A vér retikulocita tesztjét nem használják a diagnózis felállítására. Fő célja a klinikai gyakorlatban a további diagnosztikai eljárások tervezése és a terápia sikerének nyomon követése. A retikulociták száma a vérben viszonylag stabil, ezért az eritrociták és a hematokrit szintjének csökkenésével az elemzési mutatók mesterségesen magasak. Ez elkerülhető a retikulocita index kiszámításával - a retikulociták abszolút számával (a retikulociták százalékos aránya szorozva a hematokrit indexszel). A tanulmány másik jellemzője, hogy az eredmények a közelmúltbeli csontvelői aktivitásra utalnak, mivel az éretlen vörösvérsejtek 2 napig keringenek a vérben.

Felkészülés az elemzésre és az anyaggyűjtésre

A retikulociták elemzéséhez ajánlott vért venni reggel, éhgyomorra. Az étkezés és az eljárás közötti minimális intervallum 3-4 óra. Legalább egy nappal korábban el kell hagyni az intenzív fizikai erőfeszítést, az alkoholfogyasztást, és kerülni kell a stressztényezőknek való kitettséget. Az elemzés felírásakor érdemes tájékoztatni az orvost az alkalmazott gyógyszerekről, mivel egyes gyógyszerek befolyásolják a retikulociták szintjét a vérben. 30 perccel a mintavételi eljárás előtt abba kell hagynia a dohányzást, ki kell zárnia a fizikai és érzelmi stresszt.

A retikulociták szintjét kapilláris vagy vénás vérben határozzák meg. Ennek megfelelően a kerítés a gyűrűsujjból vagy a cubitalis vénából készül. A vért véralvadásgátlóval ellátott kémcsőbe helyezik, és a laboratóriumba küldik. Jelenleg hematológiai analizátorokat szinte mindenhol használnak a retikulociták megszámlálására. A vizsgálatot áramlási citometriával végzik - a folyadékáramban lévő sejtek egy nagyon keskeny kapillárison mozognak, és figyelembe veszik őket a lézeres besugárzás során. Az elemzés teljesítési feltételei - 1 nap.

Normál értékek

A retikulociták elemzésének eredményei a sejtek abszolút számát egységnyi vér térfogatára vonatkoztatva és a vörösvértestek teljes számának százalékát mutatják. Általában női betegeknél a retikulociták szintje 17 * 109 és 63,8 * 109 sejt / l között van, férfi betegeknél 23 * 109 és 70 * 109 sejt / l között. Az ilyen típusú sejtek aránya a vörösvértestek teljes számában az életkorral változik:

• születéstől 2 hétig - 0,15-1,5%;
• 2 héttől 1 hónapig - 0,45-1,4%;
• 2 és 6 hónap között - 0,25 és 0,9% között;
• 6 hónaptól 2 évig - 0,2-1%;
• 2-6 év - 0,2-0,7%;
• 6-12 éves korig - 0,2-1,3%;
• 12-18 éves korig - 0,12-2,05% lányoknál, 0,24-1,7% fiúknál;
• 18 éves kortól - 0,59-2,07% nőknél, 0,67-1,92% férfiaknál.

A retikulociták szintjének fiziológiás emelkedése a vérben a nagy magasságba való mászás vagy víz alá süllyedés, a hosszan tartó szellőzetlen helyiségben való tartózkodás, a dohányzás és az alkoholfogyasztás okozta oxigénéhezés során következik be. Ezenkívül e sejtek koncentrációjának növekedését néha terhes nőknél határozzák meg, és a norma egyik változatának tekintik.

Szintlépés

A vér retikulociták szintjének emelkedésének oka vérzés lehet. Az eritrociták koncentrációja annak helyreállítása érdekében csökken, a csontvelő fokozza prekurzoraik termelését. Akut vérzés esetén a retikulociták száma a 3. vagy 4. napon növekszik, krónikus vérzés esetén folyamatosan emelkedett marad. Hemolízissel (a vörösvértestek elpusztításával) járó betegségekben a retikulocitaszám jelentősen meghaladja a normát, néha az eltérések elérik a 300% -ot. Ennek a csoportnak a leggyakoribb patológiái az eritrociták örökletes hibái, autoimmun pusztulásuk és a malária toxikus károsodása. A retikulociták szintjének növekedésének további okai lehetnek policitémia, gyulladásos folyamatok, csontvelőrák vagy áttétek terjedése arra, a csontvelő működésének helyreállítása sugárzás és kemoterápia után. A vérszegénység kezelésében a retikulociták koncentrációjának normalizálása a terápiás intézkedések sikerét jelzi.

Szintcsökkentés

A vér retikulociták szintjének csökkenésének oka vas-, B12-vitamin- vagy folsavhiány okozta vérszegénység lehet. Ilyenkor az „építőanyag” hiánya miatt csökken a vérsejtek termelése. A retikulociták szintjének csökkenésének másik oka az anémia, amely a csontvelő elváltozásai vagy funkcióinak gátlása hátterében alakul ki. Az ilyen típusú változásokat alkoholmérgezés, a pajzsmirigy csökkent aktivitása, krónikus fertőzések, autoimmun patológiák, vesebetegségek, mérgező anyagoknak való kitettség, beleértve a gyógyszereket, a sugárzást határozzák meg.

A normától való eltérések kezelése

A klinikai gyakorlatban a retikulocita tesztet leggyakrabban teljes vérkép után írják elő, a vörösvértestek és a hemoglobin csökkenésével. A retikulociták szintje lehetővé teszi a csontvelő funkcióinak, a vörösvértestek szintézisének értékelését, a vérszegénység típusának meghatározását és a kezelés hatékonyságának nyomon követését. Ha a vizsgálat eredményei eltérnek a normálistól, tanácsot kell kérnie orvosától - általános orvostól, gyermekorvostól, hematológustól, sebésztől. A fiziológiai tényezők retikulociták számára gyakorolt ​​hatásának megelőzése érdekében ki kell zárni az oxigén éhezést okozó helyzeteket - magasba mászás vagy víz alá ereszkedés, hosszan tartó kitettség gázos vagy fülledt helyiségben, dohányzás, alkoholfogyasztás.