Dodatne metode analize krvi određivanje hematokrita retikulocita. Kako prebrojati retikulocite. Uzroci smanjenja broja retikulocita, liječenje

… određivanje broja retikulocita je važan pokazatelj funkcije koštane srži.

Retikulociti- to su mladi oblici eritrocita koji nastaju iz normoblasta nakon gubitka njihovog jezgra (nenuklearni, nezreli eritrociti), čije sazrijevanje nastupa u roku od 24-48 sati nakon ulaska u perifernu krv iz koštane srži, a odražava regenerativnu sposobnost koštane srži (tj. eritropoetska aktivnost koštane srži).

MORFOLOGIJA I KLINIČKI ZNAČAJ RETIKULOCITA

Retikulociti su obično veći od zrelih eritrocita. Citoplazma retikulocita sadrži bazofilnu mrežicu (retikulum) u obliku sitnih zrnaca, pojedinačnih filamenata, glomerula itd., koja predstavlja agregirani ribosom i mitohondrije.

Prema stepenu zrelosti razlikuje se 5 tipova retikulocita:
(1) retikulociti koji imaju jezgro (eritronormoblasti), a njihova granularnost se nalazi u obliku gustog vjenčića oko jezgra;
(2) retikulociti koji imaju zrnasto-mrežastu supstancu u obliku kuglice ili grudve;
(3) retikulociti, koji imaju granularnost u obliku guste mreže;
(4) retikulociti, koji imaju zrnasto-mrežastu supstancu u obliku pojedinačnih niti;
(5) retikulociti koji sadrže pojedinačne granule.

Zapamti: normalno, prema G. A. Alekseevu, skoro 80% retikulocita pripada grupama IV - V.

Normalno, periferna krv sadrži 0,2 - 1% retikulocita ("%" - sadržaj retikulocita od ukupnog broja eritrocita). Ovaj pokazatelj odražava mogućnost ulaska retikulocita u perifernu krv i njihovu daljnju transformaciju u zrele eritrocite (sazrevanje), kao varijanta norme, već u perifernoj krvi (u roku od nekoliko sati). ( ! ) U normalnoj eritropoezi, većina crvenih krvnih zrnaca prolazi kroz retikulocitni stadij u koštanoj srži.

Primjećuje se povećanje njihovih retikulocita u perifernoj krvi (retikulocitoza).:
s hemolitičkom anemijom (broj retikulocita može doseći do 60% ili više (posebno se povećava tijekom hemolitičke krize);
s akutnim gubitkom krvi (3-5 dana nakon gubitka krvi dolazi do retikulocitne krize), uključujući povećanje retikulocita, što omogućava sumnju na latentno krvarenje (na primjer, kod pacijenata s peptičkim ulkusom gastrointestinalnog trakta, tifusnom groznicom) ;
sa malarijom;
s policitemijom;
u liječenju gvožđem anemije usled nedostatka gvožđa (nekoliko dana (3 - 10) nakon početka antianemične terapije perniciozne anemije);
s akutnim nedostatkom kisika;
sa tumorskim metastazama u koštanu srž.

Treba zapamtiti da u slučaju povećanog razaranja eritrocita, udio retikulocita može premašiti 50% zbog umjetnog povećanja broja retikulocita (kao što je ranije navedeno, udio retikulocita se računa u % svih eritrocita). U takvim slučajevima, za procjenu težine anemije, koristi se "retikularni indeks" koji se izračunava po formuli: (% retikulocita x hematokrit) / 45 x 1,85, gdje je 45 normalan hematokrit, 1,85 je broj potrebnih dana da novi retikulociti uđu u krv. Ako index< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, tada dolazi do povećanja stvaranja crvenih krvnih zrnaca.

Prava retikulocitoza: povećanje broja retikulocita u perifernoj krvi uz istovremeno povećanje broja retikulocita u koštanoj srži.

Lažna retikulocitoza: izostanak povećanog broja retikulocita u koštanoj srži uz povećanje njihovog broja u perifernoj krvi (što ukazuje na povećanje ispiranja retikulocita iz koštane srži u perifernu krv).

Faktor koji dovodi do povećanja vrijednosti % sadržaja retikulocita može biti uzimanje sljedećih lijekova: kortikotropin, antimalarijski lijekovi, antipiretici, furazolidon (kod male djece), levodopa.

Zapamti: retikulocitoza, bez odgovarajuće eritronormoblastične reakcije koštane srži, uočava se kada su pojedini njeni dijelovi iritirani metastazama raka ili upalnim žarištima.

Uočeno je smanjenje broja ili izostanak retikulocita (retikulocitopenija):
s regenerativnim aplastičnim i hipoplastičnim anemijama;
kod anemije uzrokovane nedostatkom gvožđa, vitamina B12, folne kiseline (mikrocitno-hipohromna i megaloblastna anemija);
sa talasemijom;
sa sideroblastičnom anemijom;
s metastazama raka u kosti;
sa radijacijskom bolešću i zračnom terapijom;
u liječenju citostaticima;
s autoimunim bolestima hematopoetskog sistema;
sa bolestima bubrega;
sa alkoholizmom;
s recidivom Addison-Birmerove anemije;
sa miksedemom.

Faktori koji iskrivljuju rezultat laboratorijske studije o % sadržaja retikulocita:
pogrešan izbor antikoagulansa ili nedovoljno miješanje krvi s antikoagulansom;
produženo stiskanje ruke podvezom;
uzimanje sulfonamida (mogući su i podcijenjeni i precijenjeni rezultati);
transfuzija krvi neposredno prije studije;
hemoliza uzorka krvi.

Indikacije za imenovanje analize za retikulocite:
procjena aktivnosti eritropoeze u stanjima praćenim hemolizom ili gubitkom krvi;
procjena sposobnosti koštane srži da se regenerira nakon citotoksične terapije i transplantacije koštane srži;
procjena obnove sinteze eritropoetina nakon transplantacije bubrega;
doping kontrola kod sportista (uzimanje eritropoetina);
dijagnoza neučinkovite hematopoeze ili smanjene proizvodnje crvenih krvnih stanica;
diferencijalna dijagnoza anemije;
otkrivanje narušenog regenerativnog kapaciteta koštane srži kod nedostatka gvožđa, vitamina B12, B6, folata, bakra i praćenje odgovarajuće terapije;
procjena odgovora na terapiju eritropoetinom, eritrosupresorima.

METODE ZA BROJANJE RETIKULOCITA

(1) Brojanje broja retikulocita u brisu nakon bojenja posebnim bojama.

Ova metoda je najčešće korištena metoda u praksi zbog činjenice da je jednostavna, prilično jeftina i ne zahtijeva posebnu skupu opremu, pa se može koristiti u bilo kojoj kliničko dijagnostičkoj laboratoriji.

Princip metode zasniva se na detekciji zrnasto-mrežaste supstance retikulocita tokom supravitalnog bojenja alkalnim bojama (zasićeni rastvor briljantnog krezil plavog u apsolutnom alkoholu / rastvor azura I / rastvor azura II) sa njihovim daljim brojanjem u krvi. razmazati. Bojenje retikulocita se vrši ili na staklu ili u epruveti.

Brojanje se vrši mikroskopom: razmazi pripremljeni jednom od gore navedenih metoda se mikroskopiraju imerzionim sočivom; u razmazu, retikulociti i eritrociti su obojeni žućkasto-zelenkasto, zrnasto-filamentozna tvar u retikulocitima je plava (kada je obojena azurnom II i briljantnom kresil plavom bojom) ili plavkasto-ljubičasta (kada je obojena azurom I).

(2) Brojanje broja retikulocita pomoću fluorescentne mikroskopije.

Ova metoda je jednostavna i zahtijeva malo vremena, preciznija od konvencionalne metode, jer fluorescentna mikroskopija otkriva i najmanja zrna mrežasto-filamentne tvari, ali je moguća samo uz luminiscentni mikroskop i posebne boje, pa je stoga dostupna samo nekoliko laboratorija.

Princip brojanja retikulocita pomoću fluorescentne mikroskopije temelji se na korištenju sposobnosti tvari retikulocita da fluoresciraju nakon tretmana krvi akridin narandže. Krv se pomiješa sa akridin narandžastom u epruveti ili mikseru u omjeru 1 dio krvi i 10 dijelova boje (smjesa se može čuvati ne više od 5 sati). Smjesa se miješa 2 minute, kap smjese se nanese na staklo i prekrije pokrovnim stakalcem. U tom slučaju tečnost ne bi trebalo da ide dalje od pokrovnog stakala.

Mikroskopski pomoću svjetlosnog filtera ZhS-17. U preparatu eritrociti imaju tamnozeleni obris i ne fluoresciraju, dok u retikulocitima zrnasto-mrežasta tvar svijetli jarko crveno, što olakšava prebrojavanje retikulocita. U krvi stabilizovanoj heparinom ili natrijum citratom, fluorescencija retikulocita nije primećena.

(3) Automatski broj retikulocita sa hematološkim analizatorom.

U savremenim hematološkim analizatorima, tehnologija brojanja krvnih zrnaca zasniva se na konduktometrijskoj metodi koju su predložili H. Wallace i Joseph R. Culter 1947. Princip metode je da se broji i odredi priroda impulsa koji se javljaju kada ćelija prolazi kroz rupu malog prečnika (otvor), na čije se obe strane nalaze dve elektrode izolovane jedna od druge. Svaki prolazak ćelije kroz otvor je praćen pojavom električnog impulsa, koji se bilježi elektronskim senzorom. Podjela ćelija u kategorije (eritrociti, leukociti, trombociti, sediment) vrši se pomoću aparata na osnovu analize amplitude primljenih impulsa.Za određivanje koncentracije ćelija dovoljno je proći određenu zapreminu uzorkujte kroz kanal i prebrojite broj impulsa koji se generišu.

Treba napomenuti da pored klasičnog parametra retikulocita - relativnog (%) sadržaja retikulocita (RET%, procenat retikulocita), utvrđenog metodom 1 i 2 laboratorijske dijagnostike, zbog pojave hematoloških metoda visoke tehnologije analizatora (metoda 3), postalo je moguće dobiti (na primjer, pomoću patentirane fluorescentne boje za analizator Sysmex-XT-2000i) dodatne informativne parametre retikulocita:
retikulociti sa niskim sadržajem RNK, najzrelije (LFR%, frakcije retikulocita niske fluorescencije, frakcije retikulocita sa niskom fluorescencijom);
retikulociti sa prosječnim sadržajem RNK(MFR%, frakcije retikulocita srednje fluorescencije) - frakcija retikulocita srednje fluorescencije);
retikulociti sa visokim sadržajem RNK(HFR%, frakcije retikulocita visoke fluorescencije) - frakcija retikulocita sa visokom fluorescencijom);
nezrela frakcija retikulocita(IRF%, frakcija nezrelih retikulocita).

Diferencijacija retikulocita, na osnovu stepena zrelosti i, shodno tome, sadržaja nukleinskih kiselina, odraz je hematopoetske aktivnosti koštane srži.

Metoda (Sysmex-XT-2000i analizator). U protočnoj ćeliji ćelije prelaze snop poluvodičkog lasera, dok se snop raspršuje pod velikim i malim uglovima i fluorescentna boja se pobuđuje. Ovo omogućava određivanje različitih faza zrelosti retikulocita prema sadržaju RNK u ćelijama i intenzitetu njihove luminiscencije. Automatski broj retikulocita je vrlo precizan (prebrojano je više od 30.000 crvenih krvnih zrnaca) i reproducibilan (koeficijent varijacije je oko 6%). Ova tehnologija omogućava precizan broj retikulocita čak i pri ekstremno niskim koncentracijama.

Za izvođenje ovih studija potrebna je sljedeća oprema na radnom mjestu:

1. Subject glasses.
2. Klizači od brušenog stakla.
3. Mokra komora.
4. Mikseri za bela i crvena krvna zrnca.
5. Čaše sa mjesecom.
6. Mikroskop.
7. Briljantna kresil plava.
8. Apsolutni etil alkohol.
9. Metil alkohol ili mješavina Nikiforova (jednaki dijelovi etil 96 ° alkohola i etra).
10. Guyemov reagens ili 3% fiziološki rastvor.
11. Ulje za potapanje.
12. Set alata za ubod prstiju.

Ovisno o strukturi zrnasto-mrežaste tvari, razlikuje se pet tipova retikulocita: prašinasti, vjenčasti, nepotpuno mrežasti, potpuno mrežasti i loptasti (vidi sliku).

Uzimanje krvi u svrhu brojanja retikulocita u njoj vrši se prema uputstvu ljekara. Da bi se izbrojio broj retikulocita, oni se boje. U tu svrhu koristite:

1. Metoda intravitalnog (supravitalnog) bojenja retikulocita.
2. Metoda istovremenog supravitalnog bojenja trombocita i retikulocita prema Aleksejevu.

Razmotrimo ove metode detaljnije.

Intravitalno (supravitalno) bojenje retikulocita

Ova metoda zahtijeva sljedeće reagense:

1. Apsolutni etil alkohol: kalcinirani bezvodni (bijeli) bakar sulfat stavlja se u suhu posudu začepljenu staklom i sipa se 1/4 apsolutnog alkohola. Sadržaj se protrese. Apsolutni alkohol (alkohol koji ne sadrži vodu) može se dobiti dehidratacijom alkohola bakar sulfatom, prethodno kalciniranim. Dehidracija se zaustavlja kada bakar sulfat prestane da postaje plavi.
2. Zasićena otopina briljantno-krezil plavog u apsolutnom alkoholu: 1 g briljantno-krezil plavog doda se u 80 ml apsolutnog alkohola.
3. Azur I.

Živo bojenje i tehnika brojanja retikulocita

Slajdovi su prethodno premazani zasićenom otopinom dijamant-krezil plave boje. Svježa kap krvi se razmazuje preko stakalca s bojom, kao kod pripreme krvnog razmaza. Preparat se odmah stavlja na 6-8 minuta u vlažnu komoru, nakon čega se suši na vazduhu i mikroskopira (okular 7X, objektiv 90X sa podignutim kondenzatorom). Retikulociti se broje na potpuno isti način kao kod graničnika vidnog polja. Retikulociti obojeni briljantno-krezil plavom bojom su blijedozeleni s plavom ili plavom mrežicom (vidi sliku).

Umjesto briljantno-krezil plave za bojenje retikulocita može se koristiti azurna I boja (1 g azurnog I na 40 ml apsolutnog alkohola; čuvati na sobnoj temperaturi 2 dana), prema Maginom receptu.

Simultano supravitalno bojenje trombocita i retikulocita prema Aleksejevu

Za ovu metodu koristi se boja Aleksejeva. 1 g azurne II boje se sipa u tikvicu kapaciteta 100 ml i dodaje se reagens pripremljen u posebnoj tikvici sledećeg sastava: 5 g natrijum citrata, 4 g natrijum hlorida i 45 ml destilovane vode. Sadržaj tikvice se polako zagreva na azbestnoj rešetki uz stalno mešanje, ne dovodeći do ključanja. Ohladiti, filtrirati. Filtrat se koristi kao radni rastvor boje.

Tehnika istovremenog bojenja i brojanja trombocita i retikulocita

Aleksejeva boja se uvlači u mikser za leukocite do oznake 1,0, vrh se briše od boje i stavlja na sto. Napravite dublju nego inače injekciju u prst. Krv se izvlači do 4/5 zapremine proširenog dela miksera, pazeći da u njega ne uđu mjehurići zraka. Krv se brzo izduvava iz kapilarnog dela miksera na pamučni štapić, a ostatak sadržaja u otvor na stakalcu. Iz bunara se tečnost ponovo uvlači u mikser. Ponavljanjem ove manipulacije dva ili tri puta, krv se miješa s reagensom. Nakon što se zadnji put unese tečnost u mikser, ostavi se u horizontalnom položaju 15-30 minuta da oboji retikulocite i trombocite. Zatim se mikser mućka minutu i puštaju se 1-2 kapi. Od naknadnih kapi pripremaju se tanki razmazi. Preparati se suše na vazduhu, fiksiraju metil alkoholom i farbaju bojom Romanovskog u razblaženju od 1-2 kapi na 1 ml vode 35-45 minuta. Boja se ispere vodom, a mrlje suše i mikroskopski. U razmazu obojenom prema Aleksejevu, retikulociti su ružičasti s plavom mrežicom (vidi sliku), a trombociti su plavkasto-jorgovani.

Retikulociti i trombociti se istovremeno broje za 1000 eritrocita na isti način kao što je opisano u temi "Trombociti". Rezultati za retikulocite su izraženi u ppm; trombociti se računaju na 1 mm3 krvi (za izračun se uzima u obzir broj izbrojanih eritrocita kod datog pacijenta).

U krvi zdravih osoba ima 5-10% retikulocita.

Recenzije objavljene na ovoj stranici su lična mišljenja ljudi koji su ih napisali. Nemojte se samoliječiti!

Retikulociti (klinički značaj i laboratorijska dijagnoza)

(1) retikulociti koji imaju jezgro (eritronormoblasti), a njihova granularnost se nalazi u obliku gustog vjenčića oko jezgra;

(2) retikulociti koji imaju zrnasto-mrežastu supstancu u obliku kuglice ili grudve;

(3) retikulociti, koji imaju granularnost u obliku guste mreže;

(4) retikulociti, koji imaju zrnasto-mrežastu supstancu u obliku pojedinačnih niti;

(5) retikulociti koji sadrže pojedinačne granule.

S hemolitičkom anemijom (broj retikulocita može doseći do 60% ili više (posebno se povećava tijekom hemolitičke krize);

U slučaju akutnog gubitka krvi (3-5 dana nakon gubitka krvi dolazi do retikulocitne krize), uključujući povećanje retikulocita, može se posumnjati na latentno krvarenje (na primjer, kod pacijenata s peptičkim ulkusom gastrointestinalnog trakta, tifusna groznica);

U liječenju anemije uzrokovane nedostatkom gvožđa gvožđem (nekoliko dana (3 - 10) nakon početka antianemične terapije perniciozne anemije);

Sa akutnim nedostatkom kisika;

Sa metastazama tumora u koštanoj srži.

abnormalni oblik hemoglobina;

S regenerativnim aplastičnim i hipoplastičnim anemijama;

Kod anemije uzrokovane nedostatkom željeza, vitamina B12, folne kiseline (mikrocitno-hipohromna i megaloblastna anemija);

Sa sideroblastičnom anemijom;

Sa metastazama raka u kosti;

Kod radijacijske bolesti i terapije zračenjem;

U liječenju citostaticima;

Sa autoimunim bolestima hematopoetskog sistema;

Sa bolestima bubrega;

S recidivom Addison-Birmerove anemije;

Pogrešan izbor antikoagulansa ili nedovoljno miješanje krvi sa antikoagulansom;

Dugotrajno stiskanje šake podvezom;

Prijem sulfonamida (mogući su i podcijenjeni i precijenjeni rezultati);

Transfuzija krvi neposredno prije studije;

Hemoliza uzorka krvi.

Procjena aktivnosti eritropoeze u stanjima praćenim hemolizom ili gubitkom krvi;

Procjena sposobnosti regeneracije koštane srži nakon citotoksične terapije i transplantacije koštane srži;

Procjena obnove sinteze eritropoetina nakon transplantacije bubrega;

Doping kontrola kod sportista (uzimanje eritropoetina);

Dijagnoza neučinkovite hematopoeze ili smanjene proizvodnje crvenih krvnih stanica;

Diferencijalna dijagnoza anemije;

Otkrivanje kršenja regenerativnog kapaciteta koštane srži sa nedostatkom željeza, vitamina B12, B6, folata, bakra i praćenje odgovarajuće terapije;

Procjena odgovora na terapiju eritropoetinom, eritrosupresorima.

Retikulociti sa niskim sadržajem RNK, najzreliji (LFR%, frakcije retikulocita niske fluorescencije, frakcija retikulocita sa niskom fluorescencijom);

Retikulociti sa prosječnim sadržajem RNK (MFR%, frakcije retikulocita srednje fluorescencije) - frakcija retikulocita srednje fluorescencije);

Retikulociti sa visokim sadržajem RNK (HFR%, frakcije retikulocita visoke fluorescencije) - frakcija retikulocita sa visokom fluorescencijom);

Nezrela frakcija retikulocita (IRF%, frakcija nezrelog retikulocita).

Brojanje retikulocita u razmazu nakon bojenja posebnim bojama

Brojanje retikulocita u razmazu nakon bojenja posebnim bojama u praksi je najčešće korištena metoda za brojanje retikulocita. To je zbog činjenice da je metoda jednostavna, prilično jeftina i ne zahtijeva posebnu skupu opremu, te se stoga može koristiti u bilo kojoj kliničkoj dijagnostičkoj laboratoriji.

Princip metode

Identifikacija zrnasto-mrežaste supstance retikulocita sa supravitalnim bojenjem alkalnim bojama sa njihovim daljim brojanjem u razmazu krvi.

Reagensi

Možete koristiti jednu od sljedećih boja:

1. Zasićeni rastvor briljantnog kresil plavog u apsolutnom alkoholu (za pripremu apsolutnog alkohola potrebno je izdržati 96% etanol u nekoliko izmena kalcinisanog praha bakar sulfata). Za 100 ml apsolutnog alkohola uzima se 1,2 g boje.
2. Azure I rastvor: Azur I - 1 g, amonijum oksalat - 0,4 g, natrijum hlorid - 0,8 g, etil alkohol 96% - 10 ml, destilovana voda - 90 ml. Rastvor boje u zatvorenoj boci stavlja se 2-3 dana u termostat na 37 ° C i periodično snažno protrese. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira kroz filter papir. Otopina se čuva u posudi od tamnog stakla. Ako se pojavi talog, boju treba ponovo filtrirati.
3. Azure II rastvor: Azur II - 1 g, natrijum citrat - 5 g, natrijum hlorid - 0,4 g, destilovana voda - 45 ml. Rastvor se ostavi u termostatu na 37°C 2 dana uz povremeno mešanje. Da bi se ubrzalo otapanje, boja se može zagrijavati na laganoj vatri 15 do 20 minuta, bez dovođenja do ključanja. Ohladiti na sobnu temperaturu i filtrirati. Čuvati u posudi od tamnog stakla.

Specijalna oprema

Napredak definicije

Bojenje retikulocita se vrši ili na staklu ili u epruveti.

Bojenje retikulocita na staklu

Prilikom bojenja retikulocita na staklu, dobro oprano i odmašćeno staklo se zagrijava iznad plamena plamenika. Na staklo se staklenim štapićem nanosi kap jedne od gore navedenih boja, a brušenim staklom se priprema razmaz boje. Glasgraf se koristi za označavanje strane stakla na koju se nanosi mrlja boje. U ovom obliku staklo se može pripremiti za buduću upotrebu i čuvati na suhom, tamnom mjestu. Prije analize priprema se vlažna komora. Obično u tu svrhu koriste Petrijevu posudu s rolama navlažene vate ili filter papira položenim uz rubove. Kap krvi se nanese na mrlju boje, od nje se pripremi tanak bris i odmah stavi u vlažnu komoru na 3-10 minuta. Razmazi se zatim suše na vazduhu.

Bojenje retikulocita in vitro

Bojenje retikulocita in vitro se razlikuje kada se koriste različite boje.

Metoda 1 - bojenje retikulocita in vitro briljantnim kresil plavim.

Prije upotrebe pripremiti radni rastvor briljantnog krezil plavog u epruveti na bazi kapi 1% rastvora kalijum oksalata 4 kapi rastvora briljantne krezil plave boje. U boju se dodaje 0,04 ml krvi (dvije pipete do oznake 0,02). Smjesa se temeljno, ali lagano promiješa i ostavi 30 minuta. Zatim ponovo izmiksajte i pripremite tanke mrlje.

Metoda 2 - bojenje retikulocita in vitro azurom II.

U epruvetu stavite 0,05 ml rastvora azurne II boje i 0,2 ml krvi. Smjesa se dobro promiješa i ostavi 20-30 minuta. Ponovo promiješajte i pripremite tanke mrlje.

Metoda 3 - bojenje retikulocita in vitro azurom I.

U epruvetu stavite 0,3 - 0,5 ml rastvora azurne I boje i 5 - 6 kapi krvi pipetom iz aparata Pančenkov. Epruveta se zatvori gumenim čepom, smjesa se dobro, ali lagano promiješa i ostavi 1-1,5 sati (retikulociti se bolje boje uz izlaganje od 1,5-3 sata). Promiješajte i pripremite tanke poteze.

Gotove boje za retikulocite trenutno su komercijalno dostupne. Bojenje retikulocita uz njihovu pomoć provodi se prema priloženim uputama.

Broj retikulocita.

Razmazi pripremljeni jednom od gore navedenih metoda mikroskopiraju se imersionom sočivom. U razmazu su retikulociti i eritrociti obojeni žućkasto-zelenkasto, zrnasto-filamentozna tvar u retikulocitima je plava (kada je obojena azurnom II i briljantnom kresil plavom) ili plavkasto-ljubičastom (kada je obojena azurom I).

Fotografije retikulocita:

Pronađite vidna polja u kojima se eritrociti nalaze odvojeno. U ovim vidnim poljima potrebno je izbrojati najmanje 1000 eritrocita i među njima zabilježiti broj eritrocita koji sadrže zrnasto-filamentnu supstancu. Veća tačnost se postiže kada se broji 2000 - 3000 eritrocita.

Zbog činjenice da se u vidnom polju nalazi veliki broj eritrocita, što otežava brojanje, potrebno je ograničiti (smanjiti) vidno polje. Da biste to učinili, možete koristiti ili poseban okular, u kojem možete smanjiti vidno polje na potrebnu veličinu, ili koristiti poseban "prozor" (krug s promjerom nešto manjim od okulara izrezan je iz papira, mali romb je izrezan u sredini kruga i rezultirajući prozor je umetnut u okular).

Broj izbrojanih retikulocita izražava se na 100 (u procentima) ili na 1000 (u ppm) eritrocita.

primjer: Prilikom brojanja 1000 eritrocita u razmazu, otkriveno je da 15 od 1000 eritrocita ima zrnasto-mrežastu supstancu ovog ili onog stepena, odnosno da su retikulociti. Stoga je broj retikulocita u ovom slučaju 1,5% ili 15‰.

književnost:

• Priručnik "Laboratorijske metode istraživanja u klinici" urednika Menshikov V.V. - Moskva, "Medicina", 1987.
• Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. i koautori - "Kliničke laboratorijske studije" - Moskva, "Medicina", 1984.

Brojanje broja retikulocita pomoću fluorescentne mikroskopije

Metoda brojanja retikulocita pomoću fluorescentne mikroskopije je jednostavna i zahtijeva malo vremena, preciznija je od konvencionalne metode, budući da fluorescentna mikroskopija otkriva najmanja zrna mrežasto-filamentne supstance.

Retikulociti

Retikulociti su mlada crvena krvna zrnca nastala nakon gubitka jezgara od strane normoblasta. Karakteristična karakteristika retikulocita je prisustvo u njihovoj citoplazmi zrnasto-filamentne supstance (retikuluma), koja predstavlja agregirane ribozome i mitohondrije.

Patološke inkluzije u eritrocitima

Jollyjeva tijela (Howell-Jollyjeva tijela) su male okrugle ljubičasto-crvene inkluzije veličine µm, koje se nalaze 1 (rijetko 2-3) u jednom eritrocitu. Oni su ostaci jezgra nakon uklanjanja njegovih OIE. Otkrivaju se intenzivnom hemolizom i "preopterećenjem" RES, nakon splenektomije, sa megaloblastnom anemijom.

Citokemijska studija lipida

Citokemijska studija lipida zasniva se na upotrebi boja koje se rastvaraju u mastima (Sudan III, Sudan IV, crni Sudan, itd.). Za identifikaciju neutralne masti koristi se Sudan III, koji masti mast u narandžastu boju. Lipoidi se bolje otkrivaju sa Sudan black (crno bojenje).

Analiza urina prema Nechiporenko

Metoda Nechiporenko u domaćoj laboratorijskoj dijagnostici najčešća je metoda za kvantitativno određivanje formiranih elemenata u urinu. Ova metoda je najjednostavnija, dostupna svakom laboratoriju i prikladna u ambulantnoj praksi, a također ima niz prednosti u odnosu na druge poznate kvantitativne metode za proučavanje sedimenta urina. Prema metodi Nechiporenko, broj formiranih elemenata (eritrocita, leukocita i cilindara) određuje se u 1 ml urina.

©18 Laboratorijska dijagnostika

Retikulociti - šta je to u testu krvi? Indikatori i oznaka norme

Retikulocit je prekursor eritrocita, odnosno eritrocit u mladom obliku. U krvi zdrave osobe njihov sadržaj je 0,2-1,2%. Ovaj omjer odražava sadržaj retikulocita u krvi u odnosu na eritrocite. Sazrevaju 4-5 dana.

Osnovni koncepti

Karakteristična karakteristika mladih oblika eritrocita je da se u citoplazmi nalazi zrnasto-filamentozna tvar, agregirani ribosom i mitohondrije. Ova se tvar može otkriti posebnom metodom bojenja razmaza krvi. Ovo bojenje retikulocita naziva se supravitalno, odnosno proizvodi se bez prethodne fiksacije ćelija.

Grupe retikulocita

Ukupno, stručnjaci razlikuju pet glavnih grupa retikulocita. Razlikuju se po retikularnom retikulumu. Njegova gustina i starost su u obrnutoj proporciji: što je mreža deblja, to su mlađe. Hajde da shvatimo koji je najmlađi retikulocit.

Ovo je ćelija koja ima mrežu u obliku debele lopte. Ove ćelije pripadaju prvoj grupi. Retikulociti zrelijeg oblika pojavljuju se kao tvar koja ima jasno prepoznatljivu mrežu. U četvrtoj i petoj grupi predstavljen je pojedinačnim nitima i zrncima. Krv zdravih ljudi najčešće sadrži retikulocite potonjih grupa, odnosno zrelije. Oni u pravilu čine oko 80% ostalih. Uz pojačanu regeneraciju, koja je karakteristična za neke patologije, povećava se broj retikulocita prve tri grupe. Ove patologije uključuju:

Retikulocitna kriza koja prati anemiju zbog nedostatka B12.

Funkcije koje obavljaju retikulociti

Retikulocit je takođe eritrocit. Karakterizira ga ista funkcija kao i eritrocite. Odnosno, ćelije prenose i molekule kiseonika u različita tkiva i organe, ali je efikasnost ovog procesa mnogo manja nego kada kiseonik prenose zreli eritrociti. Retikulociti mogu adsorbirati molekule željeza sadržane u hemoglobinu. To je moguće zbog receptora osjetljivih na transferin. Zašto se radi brojanje retikulocita? Više o tome kasnije.

Mehanizam uzimanja uzoraka krvi

Za određivanje ovog pokazatelja uzima se uzorak krvi kao dio opće analize. Ako postoji potreba za određivanjem nivoa retikulocita, tada liječnik koji je propisao analizu ukazuje u smjeru potrebe za dodatnim brojanjem.

Ova analiza ne zahtijeva posebnu pripremu, ali se tradicionalno uzima ujutro na prazan želudac. Istovremeno, ako postoji potreba, onda se može predati u bilo koje doba dana. Krv za analizu treba uzeti iz prsta, njeno proučavanje se provodi u laboratoriji, na odjelu za hematologiju.

Brojanje retikulocita vrši se u supravitalnom obojenom brisu. Koristi se mikroskopska metoda, odnosno njihov broj se jednostavno broji stavljanjem uzorka krvi pod mikroskop. Do danas postoji hardverski metod brojanja. Koriste ga moderne laboratorije.

Oznaka retikulocita u testu krvi je RET.

Sprovođenje analize

Postoji nekoliko metoda za provođenje takve studije:

• Staklo se pere, suši i grije posebnim plamenikom. Zatim se na njega nanosi jedna od tri boje, zatim se dodaje kap krvi, nakon čega se pravi tanak razmaz. Čaša se stavlja u Petrijevu posudu ili drugu komoru na određeno vrijeme, a zatim se suši na svježem zraku.
• Ako se koristi epruveta, tada se u nju stavlja tvar za bojenje i tamo se dodaje kap krvi. Smjesa se mora promiješati. Vrijeme čekanja - od 20 minuta do 3 sata, ovisno o tome koji se reagens koristi. Zatim ponovo pomešati tečnost koja se nalazi u epruveti, iz nje se uzimaju brisevi.

Teško je reći koja metoda daje tačnije rezultate. Oboje su dobri na svoj način, ali doktor može smatrati da je potrebno da analizu izvrši na određeni način, a onda mora da je usmeri u pravcu.

Indikatori

Prilikom izračunavanja nivoa retikulocita, rodne razlike u normi su bitne tek nakon 12 godina. Do ovog uzrasta norma kod djece oba pola je ista. U dobi od oko godinu dana djevojčice počinju menstruaciju, koja je redovna. Kao rezultat mjesečnog gubitka krvi, raspon fluktuacija u eritroidnim stanicama se širi.

1. Kod novorođenčadi norma je u rasponu od 0,15 do 1,5%.

2. Kod djece uzrasta od dvije sedmice - od 0,45 do 2,0%.

3. Kod djece uzrasta od jednog do dva mjeseca - od 0,25 do 0,95%.

4. Kod djece uzrasta od šest mjeseci - od 0,2 do 1,0%.

5. Kod djece uzrasta od dvije do šest godina - od 0,25 do 0,75%.

6. Kod djece uzrasta od šest do dvanaest godina - od 0,25 do 1,3%.

7. Kod muškaraca starijih od dvanaest godina - od 0,25 do 1,7%.

8. Kod žena starijih od 12 godina - od 0,12 do 2,1%.

Šta znači situacija kada su retikulociti povećani?

Povećanje broja retikulocita u krvi

Kod anemije različite etimologije određivanje broja retikulocita igra posebnu ulogu. Ako je njihov sadržaj povećan u krvi, tada se ova patologija naziva retikulocitoza. Ako je povećanje praćeno povećanjem nivoa hemoglobina, onda to ukazuje da koštana srž ima dobru regenerativnu sposobnost. To se može dogoditi ako su prisutni sljedeći faktori:

Hemolitička anemija različitih etimologija. Riječ je o nizu bolesti koje karakterizira uništavanje crvenih krvnih stanica. Ova pojava se naziva hemoliza. U ovom slučaju sadržaj retikulocita u krvi može doseći 60%. Ako dođe do hemolitičke krize, ova brojka se može pogoršati.

Trovanje hemotoksinom koje uzrokuje hemolizu. Hemotoksini uključuju otrov zmije i neke lijekove koji se koriste za liječenje eritremije. Toksini malarije također mogu uzrokovati hemolizu.

Levodopa terapija za Parkinsonovu bolest.

Dugotrajna upotreba određenih protuupalnih i antipiretičkih lijekova.

Terapija lijekom "Eritropoetin" anemičnih bolesti.

Metastaze u koštanoj srži.

Period oporavka nakon zračenja ili hemijske terapije.

Retikulocitoza može biti lažna i istinita.

Zašto uraditi test na retikulocite? Ovo pitanje se često postavlja.

Lažna i prava retikulocitoza

Pravu retikulocitozu karakterizira povećanje broja mladih retikulocita u krvi, što je praćeno povećanjem njihovog broja u koštanoj srži.

Lažnu retikulocitozu karakterizira povećanje broja retikulocita isključivo u perifernoj krvi, dok u koštanoj srži njihov nivo ostaje normalan ili blago smanjen.

Snižene stope

Proces smanjenja broja retikulocita se opaža uz inhibiciju eritropoeze. Nastaje kao rezultat sljedećih faktora:

Dugotrajna upotreba sulfonamida.

Uzimanje određenih lijekova, kao što su kloramfenikol ili karbamazepin.

Hronične zarazne bolesti.

Neke teške bolesti bubrega koje utiču na eritropoezu.

Miksedem ili druga disfunkcija štitnjače.

Tumori u koštanoj srži.

Ispitivali smo šta je retikulocit. Ovo je mlada crvena krvna zrnca u ljudskoj krvi.

Razlozi za povećanje retikulocita, kako odrediti funkcionalnost hematopoetskog sistema?

Ponekad, kada se propisuje klinički pregled, opći test krvi može zasebno ukazivati ​​na RTC ili RET - skraćenice koje pokazuju sadržaj retikulocita. To su ćelije bez jezgre koje prethode eritrocitima (crvenim krvnim zrncima) tokom njihovog formiranja. Retikulociti u krvi, njihov broj i odnos sa eritrocitima odražavaju stanje i reproduktivnu funkcionalnost koštane srži, kao i cjelokupnog hematopoetskog sistema.

Medicinski certifikat

Možete detaljno definirati što su retikulociti: to su okrugle ili zvijezdaste stanice koje se formiraju u koštanoj srži i transformiraju u crvena krvna zrnca pod utjecajem glikoproteinskog hormona eritropoetina.

Boja retikulocita je obično ružičasta s plavom nijansom. Njihova odlika od kasnijeg oblika je prisutnost u strukturi rezidualne RNK, mitohondrija i drugih organela koje izgledaju kao zrnaste i filamentne formacije, čiji gubitak ukazuje na transformaciju u zrelu ćeliju.

Funkcionalne dužnosti retikulocita se poklapaju sa eritrocitima - da prenose kiseonik, ali sa mnogo manjom efikasnošću zbog niskog sadržaja hemoglobina u njima. Uglavnom su koncentrisane u crvenoj koštanoj srži, ravnim i cjevastim kostima, a samo zrele crvene stanice ulaze u krvotok. Ali mali dio nezrelih retikulocita također je dopušten u perifernom krvotoku, što ukazuje na aktivaciju procesa proizvodnje eritrocita (eritropoeza).

Proces stvaranja krvi

Eritropoeza počinje transformacijom eritroblasta, ćelije koja sadrži jezgro, ali bez hemoglobina, u pronormblast. Dalje, u seriji eritroida formira se bazofilni eritroblast, koji već ima zasluge za hemoglobinizaciju.

Kako eritrociti predaka akumuliraju tvar koja zadržava kisik (hemoglobin), stanica prolazi kroz faze polihromatofilnog, a zatim oksifilnog normoblasta. U tom periodu jezgra je još uvijek očuvana, čija involucija dovodi do stvaranja direktno mladog eritrocita - retikulocita, koji već ima sposobnost zadržavanja i transporta kisika i ugljičnog dioksida.

Mlada crvena krvna zrnca ostaju na mjestu svog nastanka do 40 sati, nakon čega manji dio njih, pod utjecajem eritropoetina, ulazi u krvne žile, gdje se slobodno kreće 1,5 ili 2 dana. Za to vrijeme stanica gubi retikulum (rezidualne filamentne formacije) i pretvara se u eritrocit.

Faze razvoja retikulocita

U krvi, retikulociti prolaze kroz pet faza sazrijevanja kako retikulum involuira:

1. nulti stupanj - kada bazofilna tvar (mrežasta intracelularna tvar) ima oblik jezgre, odnosno nakupljanje granularnosti izgleda kao neka vrsta vjenčića;
2. prva faza - bazofilna tvar (BS) dobiva mrežastu strukturu u obliku lopte;
3. druga faza - granularna mreža je ravnomjerno raspoređena po ćeliji;
4. treća faza - BV izgleda kao zasebne niti;
5. četvrti stepen – BV se distribuira u obliku malih zrna duž periferije ćelije.

U zdravom tijelu, retikulociti u krvotoku bi se trebali pojaviti samo u fazama III i IV sazrijevanja (80 posto), a 0 - II - u pojedinačnim kopijama. Ali prekomjerno odumiranje crvenih krvnih stanica ili gladovanje kisikom stimuliraju povećanu proizvodnju eritropoetina u bubrezima, što dovodi do oslobađanja nezrelih stanica svih faza, pa čak i normoblasta u krvne žile.

Krvni test na retikulocite

Broj retikulocita u brisu krvi nije obavezan za hematološki pregled, ali je dio cjelokupne kliničke procjene. Tek kada se pojave određene sumnje, doktor daje posebnu oznaku u analizi.

Razlozi za studiju

Razlozi za ispitivanje količine RTC u krvi su provjera rada koštane srži i bubrega u proizvodnji krvnih stanica i eritropoetina u takvim slučajevima:

• sa sumnjom na anemiju različitog porijekla;
• po potrebi kontrola terapije lijekovima za nedostatak željeza, vitamina B12 i folne kiseline;
• za praćenje prilikom uzimanja lijekova koji sadrže eritropoetin, eritrosupresora;
• sa teškim vanjskim krvarenjem ili sumnjom na unutrašnje;
• zbog potrebe za uzimanjem lijekova koji neutraliziraju toksine kao rezultat ugriza otrovnih insekata ili zmija;
• za kontrolu proizvodnje crvenih krvnih zrnaca tokom transplantacije koštane srži ili bubrega;
• za definiciju raka.

Posljednja točka se odnosi na posebnosti metastaziranja nekih kancerogenih tumora u krvotvornim organima.

Metoda detekcije

Ako je jezgro izgubljeno, na krvna zrnca se mogu primijeniti samo kisele boje. Bojenjem u razmazu krvi indiciraju se elementi serije eritroida, koji se zatim otkrivaju svjetlosnom mikroskopom. Za izolaciju retikulocita iz ukupne mase eritrocita potrebno je koristiti posebne preparate koji mijenjaju boju granularne strukture stanica.

Sam proces detekcije sastoji se u miješanju krvne plazme sa briljantnom kresil plavom ili akridin narandžastom bojom in vitro (in vitro) ili na staklu u omjerima: 1 dio krvi na 10 dijelova supstance.

Metode na staklu i in vitro su fundamentalno različite. U prvom slučaju, pomiješani razmazi krvi sa bojom se potapaju u vlažnu sredinu na 10 minuta, nakon čega se osuše i ćelije se broje pod mikroskopom. U drugoj varijanti, sastav pomešan u epruveti se ostavi do 3 sata, zatim se ponovo meša, razmazuje i broji.

Kada zvjezdaste ćelije retikulocita postanu vidljive i odredi se stupanj njihove zrelosti (prema strukturi obojenog BV), može se dobiti informacija o stanju koštane srži.

Dozvoljeni indikatori

Normalan nivo retikulocita odgovara procesu stvaranja krvi u zdravom tijelu. Za organizaciju podataka koristi se posebna tabela u kojoj su normalni rasponi ocijenjeni prema dobi i spolu osobe.

Norma retikulocita u krvi kod djece

Norma retikulocita kod djece varira u zavisnosti od specifičnog perioda formiranja hematopoetskog sistema. Dakle, kod novorođenčadi do 14 dana prihvatljiva stopa je od 0,15 do 1,5 posto u odnosu na crvena krvna zrnca. Normalne vrijednosti za bebe do dva mjeseca su od 0,45 do 2,1 posto, a do šest mjeseci - 0,25 - 0,9 posto. Kod djeteta od šest mjeseci do godinu dana vrijednosti od 0,2 do 1 posto smatraju se zdravim i stabiliziraju se do šeste godine. Nadalje, raspon se sužava: od 7 do 12 godina, kreće se od 0,2 do 1,3 posto.

Retikulociti u krvi kod odraslih

Daljnji dozvoljeni sadržaj retikulocita u krvi ovisi više o spolu djeteta nego o dobi i odgovara pokazateljima odraslih. To je zbog početka menstrualnog ciklusa kod djevojčica, što podrazumijeva mjesečni gubitak krvi i, shodno tome, povećanje proizvodnje krvnih zrnaca u ovom periodu. Normativni indikatori:

• prihvatljiv nivo mladih crvenih krvnih zrnaca u krvi žena i djevojaka od 13 godina biće od 0,12 do 2,05 posto (od 1,2 do 20 ppm, respektivno);
• broj retikulocita kod muškaraca se normalno kreće od 0,24 do 1,7 posto ukupne eritroidne mase.

Dakle, kod odrasle osobe uspostavlja se stalan raspon dopuštene koncentracije mladih krvnih stanica, koje sadrže zrnasto-mrežastu tvar. Istovremeno, povećani rekulociti ili retikulocitna kriza ukazuju na određene poremećaje u funkcionisanju hematopoetskog sistema.

Povećanje retikulocita

Povišeni retikulociti (ili na drugi način retikulocitoza) mogu biti pozitivni i negativni za subjekta. Povećani broj nezrelih krvnih zrnaca javlja se u slučajevima:

• Uz pozitivne rezultate terapije preparatima koji sadrže gvožđe, vitaminom B12 i folnom kiselinom, koji se obično javljaju nakon nedelju dana.
• Prilikom popunjavanja volumena krvi nakon značajnog gubitka krvi.
• Sa pozitivnim rezultatima u liječenju onkoloških bolesti antikancerogenim lijekovima ili zračenjem.

Bitan! Retikulocitoza se uočava sa nedostatkom kiseonika na značajnoj visini iznad nivoa mora.

Negativne vrijednosti retikulocitoze uključuju:

• Posljedice bolesti poput trbušnog tifusa, koje izazivaju unutrašnje krvarenje.
• Retikulociti se povećavaju tokom intoksikacije hemijskim otrovima ili stranim agensima.
• Lažna retikulocitoza pokazuje prisustvo nezrelih ćelija u krvi u odsustvu istih u koštanoj srži, što ukazuje na upalne procese ili metastaze u organu.
• Retikulocitoza se opaža kod malarije, hemolitičke anemije ili talasemije.

Povećani sadržaj nezrelih krvnih stanica u krvi (retikulocitoza) prepun je zadebljanja, što može dovesti do tromboze, srčanog ili moždanog udara.

Retikulociti u krvi tokom trudnoće

Kod trudnica se ukupni volumen krvi povećava zbog plazme, pa se uočava njeno razrjeđivanje i smanjenje razine crvenih krvnih zrnaca. Zbog činjenice da u krvi nema dovoljno hemoglobina, razvija se anemija koja aktivira proces eritropoeze. Zbog toga se kod trudnica utvrđuje visok procenat retikulocita. Klinika ovog fenomena zadovoljava normu s fiziološkom adaptacijom tijela na rađanje djeteta.

Retikulociti su sniženi

Retikulocitopenija (kada je nivo retikulocita smanjen) često ukazuje na oštećenje bubrega i/ili koštane srži. Faktori koji smanjuju sadržaj mladih eritrocita su:

• Anemija uzrokovana nedostatkom folne kiseline, vitamina B12 ili željeza, što dovodi do uništavanja crvenih krvnih stanica.
• Bolesti bubrega, ali mogu malo sniziti nivo retikulocita.
• Zloupotreba alkohola, koja će pokazati smanjenje RTC-a zbog inhibicije bubrežnih funkcija, supresije koštane srži i direktnog uništavanja stanica kao posljedica intoksikacije.

Bitan! Maligni tumori takođe mogu sniziti nivo retikulocita u krvi. Zavisi od područja koštane srži gdje je rak metastazirao.

Sam po sebi, pokazatelj sadržaja retikulocita u krvi nije dijagnoza. Uz značajno odstupanje od dozvoljenog raspona, postavlja opći smjer za dijagnostiku.

Detekcija granularno-mrežaste supstance retikulocita kod bojenja briljantno-krezil plavom bez prethodne fiksacije.

reagensi:

1% rastvor briljantno-krezil plavog: 50 mg boje se rastvori u 5 ml fiziološkog rastvora i doda se 20 mg natrijum citrata (otopina se čuva u tamnoj staklenoj posudi, dobra je nekoliko dana).

metodologija:

Stavite 2 kapi 1% rastvora briljantne kresil plave boje i 1 kap krvi na stakalce sa jažicom. Lagano promiješajte staklenom šipkom i smjesu stavite u vlažnu komoru (Petrijeva zdjelica, u koju se po rubovima stavljaju lagano navlažene rolne gaze ili pamuka) na 30 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim se prave brisevi i suše.

Broj retikulocita:

U razmazima, eritrociti su obojeni žućkasto-zelenom bojom, a zrnasto-mrežasta tvar u retikulocitima je plava i ljubičasta.

Razmazi se mikroskopiraju imersionim sočivom. Retikulociti se broje na 1000 eritrocita (veća tačnost se postiže kod brojanja 2000-3000 eritrocita).

Povećanje broja retikulocita se opaža kod:

stimulacija eritropoeze (gubitak krvi, hemoliza, retikulocitna kriza uz uspješno liječenje B12 deficijentne anemije, akutni nedostatak kisika).

Smanjenje broja retikulocita se opaža kod:

inhibicija eritropoeze (aplastična i hipoplastična anemija, neliječena anemija s nedostatkom B12, metastaze raka u kostima),

bolesti bubrega, endokrine bolesti.

Primjećuje se povećanje njihovih retikulocita u perifernoj krvi (retikulocitoza): s hemolitičkom anemijom (broj retikulocita može doseći do 60% ili više (posebno se povećava tijekom hemolitičke krize); s akutnim gubitkom krvi (retikulocitna kriza se javlja 3- 5 dana nakon gubitka krvi), uključujući i povećanje retikulocita, omogućava sumnju na skriveno krvarenje (na primjer, kod pacijenata sa peptičkim ulkusom gastrointestinalnog trakta, tifusnom groznicom); s malarijom; s policitemijom; u liječenju željeza deficijentna anemija gvožđem (nekoliko dana (3 - 10) nakon početka antianemičnog lečenja perniciozne anemije); sa akutnim nedostatkom kiseonika; sa tumorskim metastazama u koštanoj srži. Treba imati na umu da u slučaju pojačanog razaranja eritrocita, udio retikulocita može premašiti 50% zbog umjetnog povećanja broja retikulocita (kao što je ranije navedeno, udio retikulocita se izračunava u % svih eritrocita U takvim slučajevima, da bi se procijenila težina anemije, „retikularni koristi se indeks” koji se izračunava po formuli: (% retikulocita x hematokrit) / 45 x 1,85, gdje je 45 normalan hematokrit, 1,85 je broj dana potrebnih za dolazak novih retikulocita u krv. Ako index

METODE ZA BROJANJE RETIKULOCITA

(1) Brojanje broja retikulocita u brisu nakon bojenja posebnim bojama. Ova metoda je najčešće korištena metoda u praksi zbog činjenice da je jednostavna, prilično jeftina i ne zahtijeva posebnu skupu opremu, pa se može koristiti u bilo kojoj kliničko dijagnostičkoj laboratoriji. Princip metode zasniva se na detekciji zrnasto-mrežaste supstance retikulocita tokom supravitalnog bojenja alkalnim bojama (zasićeni rastvor briljantnog krezil plavog u apsolutnom alkoholu / rastvor azura I / rastvor azura II) sa njihovim daljim brojanjem u krvi. razmazati. Bojenje retikulocita se vrši ili na staklu ili u epruveti. Brojanje se vrši mikroskopom: razmazi pripremljeni jednom od gore navedenih metoda se mikroskopiraju imerzionim sočivom; u razmazu, retikulociti i eritrociti su obojeni žućkasto-zelenkasto, zrnasto-filamentozna tvar u retikulocitima je plava (kada je obojena azurnom II i briljantnom kresil plavom bojom) ili plavkasto-ljubičasta (kada je obojena azurom I). (2) Brojanje broja retikulocita pomoću fluorescentne mikroskopije. Ova metoda je jednostavna i zahtijeva malo vremena, preciznija od konvencionalne metode, jer fluorescentna mikroskopija otkriva i najmanja zrna mrežasto-filamentne tvari, ali je moguća samo uz luminiscentni mikroskop i posebne boje, pa je stoga dostupna samo nekoliko laboratorija. Princip brojanja retikulocita pomoću fluorescentne mikroskopije temelji se na korištenju sposobnosti tvari retikulocita da fluoresciraju nakon tretmana krvi akridin narandže. Krv se pomiješa sa akridin narandžastom u epruveti ili mikseru u omjeru 1 dio krvi i 10 dijelova boje (smjesa se može čuvati ne više od 5 sati). Smjesa se miješa 2 minute, kap smjese se nanese na staklo i prekrije pokrovnim stakalcem. U tom slučaju tečnost ne bi trebalo da ide dalje od pokrovnog stakala. Mikroskopski pomoću svjetlosnog filtera ZhS-17. U preparatu eritrociti imaju tamnozeleni obris i ne fluoresciraju, dok u retikulocitima zrnasto-mrežasta tvar svijetli jarko crveno, što olakšava prebrojavanje retikulocita. U krvi stabilizovanoj heparinom ili natrijum citratom, fluorescencija retikulocita nije primećena. (3) Automatsko brojanje retikulocita sa hematološkim analizatorom. U modernim hematološkim analizatorima, tehnologija za brojanje krvnih zrnaca temelji se na konduktometrijskoj metodi koju je predložio H. Wallace i Joseph R. Culter 1947. Princip metode je brojanje i određivanje prirode impulsa koji se javljaju kada ćelija prođe kroz rupu malog prečnika (otvor), na čije se obje strane nalaze dvije elektrode. izolovani jedno od drugog. Svaki prolazak ćelije kroz otvor je praćen pojavom električnog impulsa, koji se bilježi elektronskim senzorom. Podjela ćelija u kategorije (eritrociti, leukociti, trombociti, sediment) vrši se pomoću aparata na osnovu analize amplitude primljenih impulsa.Za određivanje koncentracije ćelija dovoljno je proći određenu zapreminu uzorkujte kroz kanal i prebrojite broj impulsa koji se generišu. Treba napomenuti da pored klasičnog parametra retikulocita - relativnog (%) sadržaja retikulocita (RET%, procenat retikulocita), utvrđenog metodom 1 i 2 laboratorijske dijagnostike, zbog pojave hematoloških metoda visoke tehnologije analizatorima (metod 3), postalo je moguće dobiti (na primjer, pomoću patentirane fluorescentne boje za analizator Sysmex-XT-2000i) dodatne informativne parametre retikulocita: retikulociti sa niskim sadržajem RNK, najzreliji (LFR%, frakcije retikulocita niske fluorescencije , frakcija retikulocita niske fluorescencije); retikulociti sa prosječnim sadržajem RNK (MFR%, srednje fluorescentne frakcije retikulocita) - frakcija retikulocita srednje fluorescencije); retikulociti sa visokim sadržajem RNK (HFR%, frakcije retikulocita visoke fluorescencije) - frakcija retikulocita sa visokom fluorescencijom); nezrela frakcija retikulocita (IRF%, frakcija nezrele retikulocita). Diferencijacija retikulocita, na osnovu stepena zrelosti i, shodno tome, sadržaja nukleinskih kiselina, odraz je hematopoetske aktivnosti koštane srži. Metoda (Sysmex-XT-2000i analizator). U protočnoj ćeliji ćelije prelaze snop poluvodičkog lasera, dok se snop raspršuje pod velikim i malim uglovima i fluorescentna boja se pobuđuje. Ovo omogućava određivanje različitih faza zrelosti retikulocita prema sadržaju RNK u ćelijama i intenzitetu njihove luminiscencije. Automatski broj retikulocita je vrlo precizan (prebrojano je više od 30.000 crvenih krvnih zrnaca) i reproducibilan (koeficijent varijacije je oko 6%). Ova tehnologija omogućava precizan broj retikulocita čak i pri ekstremno niskim koncentracijama.

Retikulocitopenija i retikulocitoza, uzroci razvoja, dijagnostička vrijednost njihovog otkrivanja.

studfiles.net

retikulociti (retikulociti)

Retikulociti su mlada crvena krvna zrnca koja nastaju nakon gubitka jezgara od strane normoblasta.

Karakteristična karakteristika retikulocita je prisustvo zrnasto-mrežaste supstance, koja se pojavljuje supravitalnim bojenjem, odnosno bez prethodnog fiksiranja ćelija.

Elektronski mikroskopski je pokazao da su granularno-mrežaste strukture ostaci endoplazmatskog retikuluma, ribozoma i mitohondrija koji sadrže RNK. U retikulocitima se u maloj mjeri odvija sinteza proteina (globina), hema, purina, pirimidin nukleotida, fosfatida, lipida, ali se u njima ne sintetizira RNK. U roku od 2 dana, retikulocit ostaje u krvotoku, nakon čega, kako se RNK smanjuje, postaje zreli eritrocit.

U brisevima obojenim konvencionalnim hematološkim metodama, sivkasto-ružičasti retikulociti su polihromatofilni, tj. farbane različitim bojama.

Trenutno se koristi jedinstvena metoda za brojanje broja retikulocita nakon bojenja.

• briljantna kresil plava,
• Azur I ili
• Azur II direktno na staklu ili u epruveti.

1. Princip metode

Identifikacija zrnasto-mrežaste supstance eritrocita kada su obojeni alkalnim bojama uz njihovo daljnje brojanje u razmazu krvi.

2. Reagensi:

a) zasićeni rastvor briljantnog kresil plavog u apsolutnom alkoholu (za pripremu apsolutnog alkohola potrebno je držati 96% etanol u nekoliko izmena praha kalcinisanog bakar sulfata): 1,2 g boje na 100 ml alkohola;

b) rastvor azura I: azur I - 1 g, amonijum oksalat - 0,4 g, natrijum hlorid - 0,8 g, etil alkohol 96% - 10 ml, destilovana voda - 90 ml. Rastvor boje u zatvorenoj bočici stavlja se na 2-3 dana u termostat na 37 °C i periodično snažno protrese. Zatim se ohladi na sobnu temperaturu i filtrira kroz filter papir. Otopina se čuva u posudi od tamnog stakla. Ako se pojavi talog, boju treba ponovo filtrirati;

c) Azur II rastvor: Azur II - 1 g, natrijum citrat - 5 g, natrijum hlorid - 0,4 g, destilovana voda - 45 ml. Rastvor se ostavi u termostatu na 37 °C 2 dana uz povremeno miješanje. Da bi se ubrzalo otapanje, boja se može zagrijavati na laganoj vatri 15-20 minuta bez ključanja. Ohladiti na sobnu temperaturu i filtrirati. Čuvati u posudi od tamnog stakla.

3. Bojanje

Bojenje na staklu:

• dobro oprano i odmašćeno staklo zagreva se na plamenu gorionika. Staklenom šipkom se na staklo nanosi kap jedne od boja i priprema se razmaz boje od poliranog stakla. Staklenom olovkom označite stranu stakla na koju se nanosi mrlja boje. U ovom obliku staklo se može pripremiti za buduću upotrebu i čuvati na suhom, tamnom mjestu;
• Na ovako pripremljene čaše nanese se kap krvi, napravi se tanak razmaz i staklo se odmah stavi u vlažnu komoru. Da biste to učinili, koristite Petrijevu posudu s poklopcem, u koju se uz rubove stavljaju lagano navlažene rolne gaze ili pamuka;
• razmazi se drže u vlažnoj komori 3-5 minuta, a zatim se suše na vazduhu. Zrnasto-mrežasta tvar retikulocita postaje ljubičasto-plava, jasno se ističe na zelenkasto-plavkastoj pozadini eritrocita.

Bojanje in vitro:

• metoda 1: prije upotrebe pripremiti radni rastvor briljantnog krezil plavog u epruveti po kapi 1% rastvora kalijum oksalata 4 kapi rastvora boje 1. U boju dodati 40 µl krvi (dve pipete do oznake 0,02). Dobro, ali nežno promešajte i ostavite 30 minuta. Pomiješajte i pripremite tanke poteze;
• Metoda 2: 0,05 ml rastvora boje 3 i 0,2 ml krvi stavlja se u epruvetu. Smjesa se dobro promiješa i ostavi 20-30 minuta. Pomiješajte i pripremite tanke poteze;
• metod 3: pipetom iz aparata Panchenkov u epruvetu staviti 0,3-0,5 ml otopine boje 2 i 5-6 kapi krvi. Epruveta se zatvori gumenim čepom, smjesa se dobro, ali lagano promiješa i ostavi 1-1½ sata (retikulociti se bolje boje kada su izloženi 1½ sata-3 sata). Promiješajte i pripremite tanke poteze.

4. Broj retikulocita

U razmazima, eritrociti su obojeni žućkasto-zelenkastim, zrnasto-filamentoznim supstancama - plavim ili plavkasto-ljubičastim.

• Razmazi pripremljeni jednom od gore navedenih metoda mikroskopiraju se imersionom sočivom;
• potrebno je izbrojati najmanje 1000 eritrocita i među njima zabilježiti broj eritrocita koji sadrže zrnasto-filamentnu supstancu. Kod ujednačenih tankih razmaza, u kojima su eritrociti raspoređeni u jedan red, odabire se takvo vidno polje u kojem ima, na primjer, 50 eritrocita, a zatim se računa 20 takvih vidnih polja;
• u praksi se za veću preciznost koristi poseban okular, u kojem se vidno polje može smanjiti na potrebnu veličinu. U nedostatku gotovog okulara, lako se može pripremiti tako da odvrnete okular ×7, u njega stavite komad papira s malim kvadratom izrezanim i zašrafite ga. Broj izbrojanih retikulocita se izražava na 1000 ili na 100 eritrocita.

NOZA: 0,5–1,2% (30–70 × 109/l)

Povećanje broja retikulocita se opaža kod:

• gubitak krvi (posebno akutni);
• hemolitička anemija, posebno tokom krize (do 20-30%);
• na pozadini liječenja megaloblastične anemije vitaminom B12 (retikulocitna kriza - povećanje broja retikulocita 4-8 dana liječenja).

Smanjenje broja retikulocita tipično je za:

• aplastične i hipoplastične anemije;
• neliječena megaloblastna anemija;
• radijaciona bolest;
• uzimanje citotoksičnih lijekova.

Da li je Hrist živ? Da li je Hristos uskrsnuo iz mrtvih? Istraživači proučavaju činjenice

diagnoz.ru

Retikulociti normalni i brojimo njihov broj

Retikulociti, čija norma varira zbog mnogih faktora, su neformirani oblici crvenih krvnih zrnaca, a mogu se naći u koštanoj srži i perifernoj krvi. U pravilu, retikulociti u krvi sazrijevaju za tri do pet dana, a zatim se te stanice pretvaraju u već zrela crvena krvna zrnca. Štaviše, broj neformiranih eritrocita kod novorođenčadi je značajno veći nego kod odraslih.

Detekcija retikulocita:

Prilikom identifikacije retikulocita, čija se norma utvrđuje pomoću posebne tablice, potrebno je uzeti u obzir njihove razlike od zrelih eritrocita. Ova vrsta krvnih stanica ili sadrži cijelo jezgro, ili se njegovi ostaci promatraju kao dio granularno-filamentne supstance. Za određivanje broja takvih stanica potrebno je laboratorijski proučiti boju krvnog razmaza. Za to se koristi otopina plavog dijamanta, koja se nanosi na odmašćeno i prethodno oprano staklo, a tek onda se pravi razmaz.

Kada se otkriju retikulociti, čija je norma drugačija, odmah nakon razmaza upotrijebljeno staklo treba staviti u Petrijevu posudu - posebnu vlažnu komoru, zatim držati pet minuta, temeljito osušiti na svježem zraku, a zatim mikroskopski. Štoviše, tvar granularno-filamentoznog tipa unutar retikulocita obično je obojena u ljubičasto-plavu nijansu, a pozadina eritrocita se ističe zbog plavkasto-zelene nijanse.

Ako se koristi Gel-Meyerova metoda, bojenje nezrelih krvnih stanica može se vidjeti mnogo bolje, ali za to je potrebna Vidal epruveta. U ovoj posudi se pomiješa nekoliko kapi krvi sa briljantnom otopinom i natrijum hloridom, zatim se epruveta zatvori poklopcem, a sam bris se izvede u roku od sat vremena.

Broj retikulocita:

Prilikom izračunavanja broja nezrelih krvnih zrnaca potrebno je kao osnovu uzeti 1000 crvenih krvnih zrnaca, a zatim uzeti u obzir retikulocite, čija stopa obično varira na nivou od 0,2% -1,2% od broja crvenih krvnih zrnaca odraslih. U prosjeku, kod većine ljudi, broj nezrelih crvenih krvnih stanica je obično 0,7% od ukupnog broja potpuno zrelih krvnih stanica. Ako je broj retikulocita veći od maksimalno dopuštene norme za 10% ili više, osoba razvija retikulocitozu, bolest praćenu redovitim akutnim krvarenjem i hemolitičkom anemijom.

Prilikom brojanja retikulocita (norma kod djece je obično visoka), vrijedi paziti da njihov broj ne prelazi granične vrijednosti tipične za odrasle. Standardi zavise i od spola, jer se kod žena 2,07% nezrelih eritrocita još uvijek smatra prihvatljivim parametrom, a kod muškaraca ova brojka ne bi trebala prelaziti 1,92%.

U slučajevima kada je nivo retikulocita značajno povećan, to ukazuje na prisutnost takvih poremećaja u organizmu kao što su malarija i talasemija, policitemija i hipoksija, anemija, sve vrste hemolitičkih sindroma, ali takvi pokazatelji su mogući i kod liječenja cijanokobalaminom. Ako je nivo nezrelih eritrocita snižen, osoba može da doživi aplastičnu i hipoplastičnu anemiju, sve vrste bolesti bubrega i miksedema, kao i širenje tumorskih metastaza na kosti.

Za dijagnozu težine anemije potrebno je izračunati „indeks retikulocita“, koji se izračunava kao omjer procenta retikulocita i normalnih vrijednosti hematokrita, pomnožen sa brojem dana potrebnih da nezrele ćelije uđu u perifernu krv. Ako rezultirajući indeks ne prelazi dva, indikator ukazuje na hipoproliferativnu komponentu anemije, a ako prelazi dva, pokazuje vjerojatnost povećanog stvaranja crvenih krvnih zrnaca.

fb.ru

Studija krvi. Analiza krvi

Određivanje koncentracije hemoglobina

Među metodama za određivanje hemoglobina najviše se koriste metode zasnovane na kolorimetriji, odnosno određivanju intenziteta boje.Postoje zatvorene staklene epruvete sa standardom boje (hlorovodonični hematin u glicerinu) 0,1% rastvor hlorovodonične kiseline prvo se sipa u centralnu epruvetu do oznake koja odgovara 2 ili 3 g%, a zatim pažljivo dodati (tačno!) 0,02 ml krvi uzete iz prsta posebnom pipetom pričvršćenom na hemometar. Površinski sloj kiseline se ispere pipetom i nakon miješanja krvi i kiseline staklenom šipkom ostavi 5 minuta da se formira hematin hidrohlorid. Zatim, dodavanjem destilovane vode i stalnim mešanjem štapom, boja tečnosti u centralnoj cevi u potpunosti odgovara standardima. Koncentracija hemoglobina odgovara oznaci nivoa rastvora na donjem meniskusu. Koncentracija hemoglobina može se izraziti u g% hemoglobina ili u konvencionalnim jedinicama. 16,67 g hemoglobina uzima se kao 100 jedinica.

Koncentracija hemoglobina u krvi kod žena je od 11,7 do 15,8 g ° / o ili od 117 do 158 g / l, kod muškaraca - od 13,3 do 18 g% ili od 133 do 180 g / l.

Vađenje krvi za brojanje formiranih elemenata

Za brojanje formiranih elemenata krv se razrjeđuje u mikserima (melanžerima) ili epruvetama, što se u posljednje vrijeme sve više koristi.Za brojanje crvenih krvnih zrnaca krv se razrjeđuje 200 puta sa 3% otopinom natrijum hlorida; ako za vađenje krvi koristimo hemometarsku pipetu, zapremine 0,02 ml, onda moramo uzeti 4 ml rastvora natrijum hlorida.Za brojanje leukocita krv se razblaži 20 puta, dakle 0,02 ml krvi i 0,38 ml 3% uzimaju se obojeni rastvor sirćetne kiseline metilensko plavo, koji je neophodan za uništavanje crvenih krvnih zrnaca.Uzorkovanje krvi se mora vršiti sa velikom preciznošću, jer kod tako malih zapremina dolazi do prodiranja vazdušnog mehurića ili ostatka krvi na izvan pipete dovodi do povećanja greške u određivanju.Prije punjenja komore potrebno je prebrisati uglačano staklo u komori kako bi se pojavili iridescentni prstenovi.Prije punjenja komore, razrijeđena krv se dobro promiješa, jer ćelije taloži se na zidove epruvete ili ampule miksera, nakon čega se kap krvi stavi ispod brušenog poliranog stakla komore i ostavi 1 min da miruje da se ćelije slegnu.

Brojanje formiranih elemenata vrši se pri malom uvećanju mikroskopa (objektiv 8X, okular 15X ili 10X) u zatamnjenom vidnom polju.

Eritrociti se broje u 5 velikih kvadrata (16x5 = 80 malih kvadrata) koji se nalaze u različitim delovima komore, možete uzeti kvadrate koji se nalaze dijagonalno.Prebrojavaju se eritrociti koji se nalaze unutar kvadrata i oni koji se nalaze na njegovoj gornjoj i levoj strani; eritrociti koji leže na donjoj i desnoj strani se ne broje, jer već pripadaju drugim kvadratima.

Izbrojavši broj eritrocita (A) u 5 velikih kvadrata, pronalaze srednji aritmetički broj eritrocita u jednom malom kvadratu A/80, odnosno u 1/4000 μl. Stoga, da bismo pronašli broj crvenih krvnih zrnaca u 1 µl, moramo pomnožiti broj dobiven dijeljenjem sa 4000 i sa 200 (razrjeđivanje).

Tako dobijamo sledeću formulu:

X=A*4000*200/80,

gdje je X broj eritrocita u 1 µl, a A broj eritrocita u 5 velikih kvadrata. Ako izbrojimo eritrocite u 5 velikih kvadrata i razrijedimo krv 200 puta, onda će ukupan faktor za broj A biti 10 000.

Normalan sadržaj crvenih krvnih zrnaca u krvi žena je 4-5 * 106, muškaraca - 4,5-5,5 * 106.

Leukociti se broje u 100 velikih kvadrata, ne podijeljenih na male, što odgovara 1600 malih. Dakle, broj leukocita pronađenih u 100 kvadrata podijeljen je sa 1600, pomnožen sa 4000 i 20 (razrjeđenje). U ovom slučaju, da biste dobili rezultat, dovoljno je pomnožiti broj izbrojanih leukocita sa 50. Normalan sadržaj leukocita u krvi je 5 * 103 - 8 * 103 u 1 μl.

Indikator u boji krvi. Indikator boje krvi je broj koji pokazuje prosječnu zasićenost hemoglobinom pojedinog eritrocita date krvi u odnosu na zasićenost pojedinog eritrocita normalne krvi. Za normalan sadržaj hemoglobina uzima se 100 jedinica, a normalan broj eritrocita je 5 000 000. Vrijednost indeksa boja kod zdravih ljudi varira od 0,9 do 1,1 Studija razmaza periferne krvi. U brisevima krvi proučava se morfologija eritrocita i uzima se u obzir leukocitna formula, odnosno procentualni odnos između različitih vrsta leukocita.Da bi studija bila uspješna potrebno je izvršiti pripremu, fiksiranje i bojenje krvnih briseva. Za pripremu razmaza, površinu čistog stakla bez masti na udaljenosti od 0,5 cm od ruba stakalca dodiruju kap krvi na mjestu uboda na prstu, a zatim polirani pokrovni stakal se postavlja pod uglom od 45° prema stakalcu i prvi se dovodi do kapi krvi tako da se širi po zadnjoj ivici pokrovnog stakla i pokretom pluća, bez oštrog pritiska napravi razmaz. Razmaz treba završiti na staklenom predmetu „metlicom“. Razmaz se suši na vazduhu, kada se osuši, dobar, tanak bris ima žutu boju.

Jednostavnom, naoštrenom olovkom u sredini brisa upisuje se ime pacijenta i datum istraživanja, nakon čega se brisevi fiksiraju u metil alkoholu najmanje 5 minuta i boje prema metodi Romanovsky-Giemsa.

Boja se sastoji od mješavine kiselih (eozin) i bazičnih (Azur II) boja. Ova metoda bojenja omogućava razlikovanje stanica. Prvi korak u radu s brisom je procjena morfologije crvenih krvnih zrnaca. Da biste to učinili, odaberite tanko mjesto gdje ćelije leže odvojeno, a ne u obliku stupaca novčića. Normalni eritrociti su ćelije bez jezgre, ružičaste boje, zaobljene, približno istog promjera - 7,5 mikrona, eritrociti imaju oblik bikonkavnog diska, stoga u razmazu imaju prosvjetljenje u centru i intenzivnije obojenu periferiju.

(modul direct4)

Priprema guste kapi

Za testiranje krvi na Plasmodium malariju, pravi se debela kap. Krv se uzima na uobičajen način iz pulpe prsta. Kap krvi koja izlazi iz mjesta uboda dodiruje se površinom predmetnog stakla. 2-3 kapi odvojeno namažu se uglom druge čaše. Suhi razmaz se sipa (bez fiksiranja) bojom Romanovskog 30-40 minuta, zatim se obojena kapljica pažljivo ispere vodom i preparat osuši u uspravnom položaju.

Podaci analize uzorka

Povećani broj eritrocita i hemoglobina u krvi može biti kod bolesti crvenih krvnih zrnaca - eritremije, tada broj eritrocita dostiže do 9-106 ili više, a povećava se broj crvenih krvnih zrnaca kao posljedica bolesti drugi organi i sistemi (sa dekompenziranom difuznom pneumosklerozom, emfizemom, nekim vrstama urođenih srčanih mana, vaskularnom sklerozom sistema plućnih arterija, defektima desnog srca, cirkulatornom insuficijencijom III stepena itd.). Ovaj simptom se naziva eritrocitoza.

Morfološki izmijenjeni eritrociti se javljaju kod hiperkromne (megaloblastične) anemije. Istovremeno, u krvi se nalaze veliki eritrociti sa visokim sadržajem hemoglobina (makrociti), embrionalni eritrociti (megaloblasti), koji se obično ne nalaze u perifernoj krvi. Morfologija eritrocita se mijenja i kod hipohromne anemije: pojavljuju se mali eritrociti (mikrociti) promijenjenog oblika (poikilociti) i eritrociti sa niskim sadržajem hemoglobina (hipokromni eritrociti).

Broj leukocita

Prilikom izračunavanja formule leukocita potrebno je odrediti strukturne karakteristike citoplazme i ćelijskih jezgara. Pripadnost ćelije određenoj grupi utvrđuje se na osnovu ukupnosti svih znakova citoplazme i jezgra.Prilikom izračunavanja formule mora se pridržavati iste metode pomicanja stakla pod mikroskopom. Najčešće se metoda mikroskopije koristi na 4 mjesta razmaza. Poznato je da su leukociti u brisu neravnomjerno raspoređeni: na rubovima je manje limfocita nego u sredini, a monocita je više na kraju brisa nego na početku. Stoga je pri izračunavanju formule leukocita najbolje kretati se isprekidanom linijom, brojeći sve naiđene ćelije. Brojanje 200 ćelija je praktičan minimum za rutinske kliničke studije. Leukociti periferne krvi, u zavisnosti od prisustva ili odsustva granularnosti u citoplazmi, dijele se na granulocite (neutrofilne, eozinofilne, bazofilne) i agranulocite (monocite i limfocite).

Neutrofili. Veličina ćelije je 10-12 mikrona. Citoplazma ćelija je blijedoružičaste boje sa finom, obilnom, ljubičastom granularnošću. Normalno se u krvi nalaze ubodni (2-4%) i segmentirani (60-65%) neutrofili.

Eozinofili. Ćelije su iste veličine kao neutrofili, ponekad malo veće, citoplazma je ispunjena velikim žućkastocrvenim granulama, jezgro obično ima dva segmenta iste veličine. Eozinofili su normalni 2-4%.Bazofili. To je najmanji granulocit po veličini. Jezgro je nepravilno, višestruko, zauzima gotovo cijelu ćeliju, blijedoružičasta citoplazma sadrži velike tamnoljubičaste granule. Granule bazofila se otapaju u vodi, a ponekad, kao rezultat ispiranja pri bojenju preparata, bezbojne ćelije ostaju na mjestu granula. Normalno, bazofili su 0,1% Limfociti. Veličina ćelije se kreće od 7 do 10 µm. Jezgro je kompaktno, zaobljeno ili u obliku graha. Citoplazma ćelija je blijedoplava sa zonom prosvjetljenja oko jezgra (perinuklearna), ponekad u citoplazmi postoje odvojena azurofilna zrna crveno-ljubičaste boje. U perifernoj krvi 20-35% limfocita je normalno.Monociti. Veličina ćelije se kreće od 12 do 20 µm. Jezgro je često u obliku potkovice, ponekad nepravilnog oblika. Citoplazma je opsežnija od limfocita, pepeljasto plave boje sa finom, delikatnom, crvenkastom granularnošću.Monociti su normalni 6-8%.

Povećani sadržaj leukocita u krvi naziva se leukocitoza, a smanjen sadržaj naziva se leukopenija.

Bojenje i brojanje retikulocita

Retikulociti su mlada crvena krvna zrnca s tankom plavom retinom ili granularnošću u citoplazmi. Ove ćelije karakterišu aktivnost crvene hematopoeze.Za detekciju broja retikulocita koristi se metoda supravitalnog (doživotnog) bojenja. Na staklenim predmetima u apsolutnom alkoholu izrađuju se razmazi briljantne kresil plave boje, a zatim se na uobičajeni način napravi bris krvi na vitraž i stavi u vlažnu komoru na 3-5 minuta, nakon čega se osuši i mikroskopira. imerziona sočiva. Normalno se na 1000 eritrocita nalazi 8-10 retikulocita, njihov broj se obično izražava u procentima (0,8-1%) ili u ppm (8-10% o) u odnosu na eritrocite.Retikulociti su ćelije koje karakterišu povećanu proizvodnju eritrocita u koštanoj srži.

Pojavljuju se u velikom procentu u perifernoj krvi kod hipohromne anemije („maligne anemije“), kod hemolitičke anemije i drugih bolesti. Smanjen sadržaj retikulocita i njihov potpuni nestanak u perifernoj krvi uočeni su tijekom egzacerbacije hiperhromne anemije.

Da bi se spriječilo agregiranje (ljepljenje) trombocita, vrši se punkcija kože kroz kapljicu 14% otopine magnezijum sulfata koja se nanosi na prst. Krv se pomeša sa magnezijumom i na stakalcima se pripremaju tanki razmazi koji se potom fiksiraju i boje po Romanovskom 2 sata Određuje se broj trombocita na 1000 eritrocita, a znajući broj eritrocita u 1 μl, broj broj trombocita u 1 μl krvi. Normalni trombociti sadrže od 250.000 do 400.000.

Definicija ESR

Brzina sedimentacije eritrocita određuje se u krvi pomiješanoj sa natrijum citratom u omjeru 4: 1. Reakcija se postavlja u aparatu Panchenkov. Pančenkovljeva kapilara se ispere natrijum citratom, zatim se citrat izvuče do oznake 50, gdje stoji slovo R (reagens) i uduva se u epruvetu Vidalevsky. Ista kapilara se koristi za uzimanje krvi dva puta do oznake K (krv) i miješanje sa citratom. Ista kapilara se napuni krvlju pomiješanom s citratom do odjeljka 0 i stavi okomito u stativ na sat vremena. Sat kasnije, u milimetrima, bilježi se vrijednost stupca plazme koji se formira iznad staloženih eritrocita, što je mjera brzine sedimentacije eritrocita.Normalni ESR kod muškaraca je 10 mm/h, kod žena - 14 mm/h.

Brzina sedimentacije eritrocita se povećava kod upalnih, akutnih i kroničnih bolesti, malignih tumora i drugih bolesti.

Test kompatibilnosti Rh faktora

U epruvetu bez citrata uzima se 2-3 ml krvi primaoca, nakon zgrušavanja krvi ugrušak se zaokruži staklenom šipkom i krv se centrifugira. Dvije kapi seruma iz ove epruvete nanose se na Petrijevu posudu, u nju se doda pola kapi krvi davaoca, pomiješa se i čaša se stavi u vodeno kupatilo (42-45°). Nakon 10 minuta, šolja se vadi i gleda na svetlost uz lagano ljuljanje. Pojava aglutinacije će ukazivati ​​na neprihvatljivost ove transfuzije krvi.

Određivanje broja retikulocita- klinički test krvi u kojem se broje mlada crvena krvna zrnca proizvedena u koštanoj srži. Studija nadopunjuje opći test krvi. Brojanje retikulocita vrši se za diferencijalnu dijagnozu različitih vrsta anemija, procjenu funkcionisanja koštane srži i slezene, praćenje stanja pacijenata sa nedostatkom gvožđa, vitamina B12 ili folne kiseline, zatajenja bubrega i raka. Uzimanje krvi za istraživanje vrši se iz vene ili kapilara. Broj retikulocita se određuje metodom protočne citometrije. Referentne vrijednosti za muškarce su 23-70 hiljada / μl, za žene - 17-63,8 hiljada / μl. Termini analize ne prelaze 1 radni dan.

Retikulociti su prethodnici eritrocita. Proizvodi ih koštana srž tokom diferencijacije i diobe matičnih stanica. Većina retikulocita nalazi se u koštanoj srži; već zreli eritrociti uglavnom ulaze u krvotok. Udio retikulocita u krvi je oko 0,5-2%. Prilikom vršenja analize utvrđuje se broj ćelija ove vrste i njihov procenat u ukupnom broju crvenih krvnih zrnaca. Rezultati nam omogućavaju da procenimo proizvodnju crvenih krvnih zrnaca u koštanoj srži, da identifikujemo stepen aktivnosti ovog procesa.

Tijelo održava stabilan nivo crvenih krvnih zrnaca u krvi. Sa smanjenjem njihovog broja kao rezultatom hemolize, poremećene sinteze i krvarenja, aktiviraju se kompenzacijski mehanizmi za vraćanje normalne koncentracije. Promjenom nivoa i procenta retikulocita može se uspostaviti povećanje proizvodnje crvenih krvnih zrnaca u koštanoj srži ili inhibicija ovog procesa. Ako koštana srž funkcionira normalno, gubitak crvenih krvnih stanica dovodi do naknadnog povećanja njihovog broja i broja retikulocita. Do smanjenja nivoa ovih tipova ćelija dolazi kada je crvena koštana srž oštećena tumorom, metastazama, terapijom zračenjem i hemoterapijom. Za analizu retikulocita, biomaterijal je kapilarna ili venska krv. Studija se izvodi pomoću hematološkog analizatora protočnom citometrijom. Rezultati se koriste u opštoj terapijskoj praksi, u hematologiji, pedijatriji, infektivnim bolestima i hirurgiji.

Indikacije

Retikulocitni test se koristi za procjenu proizvodnje crvenih krvnih stanica u koštanoj srži. Rezultati studije nam omogućavaju da razlikujemo različite vrste anemije. Prema nivou retikulocita dijele se na hiporegenerativne i regenerativne. U prvom slučaju, parametri testa su smanjeni, proizvodnja crvenih krvnih zrnaca je nedovoljna, a funkcije koštane srži su depresivne. U ovu grupu spadaju hemolitička anemija kod kroničnih bolesti, opća intoksikacija, kaheksija, nedostatak proteina, željeza, vitamina. Regenerativna anemija je praćena kompenzacijskim povećanjem razine retikulocita u pozadini povećanog uništenja ili gubitka eritrocita. U ovu grupu spadaju posthemoragijske i neke hemolitičke anemije. Analiza retikulocita može se koristiti za određivanje težine anemije, a zatim se njeni rezultati dopunjuju indikatorima nivoa eritrocita, hemoglobina i indeksa eritrocita.

Određivanje nivoa retikulocita indikovano je sniženim nivoom crvenih krvnih zrnaca, hemoglobina, uz tegobe na česti umor, glavobolje, otežano disanje, krv u mokraći ili stolici. Uz utvrđenu dijagnozu anemije, propisuje se analiza za procjenu učinkovitosti liječenja. Posebno se često koristi za praćenje anemije uzrokovane nedostatkom željeza, vitamina B12 ili folne kiseline, kao i koja se razvija u pozadini zatajenja bubrega, kroničnih bolesti. Za procjenu funkcije koštane srži indiciran je retikulocitni test za povišeni broj crvenih krvnih zrnaca kako bi se utvrdio uzrok policitemije.

Test retikulocita u krvi se ne koristi za postavljanje dijagnoze. Njegova glavna svrha u kliničkoj praksi je planiranje daljih dijagnostičkih procedura i praćenje uspješnosti terapije. Broj retikulocita u krvi je relativno stabilan, stoga, sa smanjenjem nivoa eritrocita i hematokrita, pokazatelji analize postaju umjetno visoki. Ovo se može izbjeći izračunavanjem retikulocitnog indeksa – apsolutnog broja retikulocita (procenat retikulocita pomnožen indeksom hematokrita). Još jedna karakteristika ove studije je da rezultati ukazuju na nedavnu aktivnost koštane srži, jer nezrela crvena krvna zrnca cirkulišu u krvi 2 dana.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Preporučuje se vađenje krvi na retikulocite ujutro, na prazan želudac. Minimalni interval između obroka i procedure je 3-4 sata. Najmanje dan ranije potrebno je napustiti intenzivne fizičke napore, konzumaciju alkohola i izbjeći izlaganje faktorima stresa. Prilikom propisivanja analize, vrijedi obavijestiti liječnika o korištenim lijekovima, jer neki lijekovi utječu na nivo retikulocita u krvi. 30 minuta prije postupka uzorkovanja, morate prestati pušiti, isključiti fizički i emocionalni stres.

Nivo retikulocita se određuje u kapilarnoj ili venskoj krvi. U skladu s tim, ograda se pravi od prstenjaka ili od kubitalne vene. Krv se stavlja u epruvetu sa antikoagulansom i šalje u laboratoriju. Trenutno se gotovo posvuda koriste hematološki analizatori za brojanje retikulocita. Studija se izvodi protočnom citometrijom - ćelije u struji tečnosti kreću se kroz vrlo usku kapilaru i uzimaju se u obzir prilikom laserskog zračenja. Uslovi izvođenja analize - 1 dan.

Normalne vrijednosti

Rezultati analize za retikulocite pokazuju apsolutni broj ćelija po jedinici zapremine krvi i procenat ukupnog broja eritrocita. Normalno, kod ženskih pacijenata, nivo retikulocita se kreće od 17 * 109 do 63,8 * 109 ćelija / l, kod muških pacijenata - od 23 * 109 do 70 * 109 ćelija / l. Udio ćelija ovog tipa u ukupnom broju eritrocita mijenja se sa godinama:

• od rođenja do 2 sedmice - od 0,15 do 1,5%;
• od 2 sedmice do 1 mjeseca - od 0,45 do 1,4%;
• od 2 do 6 mjeseci - od 0,25 do 0,9%;
• od 6 mjeseci do 2 godine - od 0,2 do 1%;
• od 2 do 6 godina - od 0,2 do 0,7%;
• od 6 do 12 godina - od 0,2 do 1,3%;
• od 12 do 18 godina - od 0,12 do 2,05% za djevojčice, od 0,24 do 1,7% za dječake;
• od 18 godina - od 0,59 do 2,07% za žene, od 0,67 do 1,92% za muškarce.

Do fiziološkog povećanja nivoa retikulocita u krvi dolazi prilikom gladovanja kiseonikom uzrokovanog penjanjem na veliku visinu ili spuštanjem pod vodu, dužim boravkom u neprozračenoj prostoriji, pušenjem i ispijanjem alkohola. Osim toga, povećanje koncentracije ovih stanica ponekad se određuje kod trudnica i smatra se varijantom norme.

Nivo gore

Uzrok povećanja nivoa retikulocita u krvi može biti krvarenje. Koncentracija eritrocita se smanjuje kako bi se obnovila, koštana srž povećava proizvodnju njihovih prekursora. Kod akutnog krvarenja broj retikulocita se povećava 3. ili 4. dana, a kod kroničnog krvarenja ostaje stalno povišen. U bolestima praćenim hemolizom (uništenjem crvenih krvnih zrnaca), broj retikulocita značajno premašuje normu, ponekad odstupanja dosežu 300%. Najčešće patologije ove skupine su nasljedni defekti eritrocita, njihovo autoimuno uništenje i toksična oštećenja kod malarije. Drugi razlozi za povećanje nivoa retikulocita mogu biti policitemija, upalni procesi, rak koštane srži ili širenje metastaza na nju, obnavljanje funkcije koštane srži nakon zračenja i kemoterapije. U liječenju anemije, normalizacija koncentracije retikulocita ukazuje na uspješnost terapijskih mjera.

Smanjenje nivoa

Razlog za smanjenje nivoa retikulocita u krvi može biti anemija uzrokovana nedostatkom željeza, vitamina B12 ili folne kiseline. U takvim slučajevima dolazi do smanjenja proizvodnje krvnih stanica zbog nedostatka "građevnog materijala". Drugi razlog za smanjenje razine retikulocita je anemija koja se razvija u pozadini lezija koštane srži ili inhibicije njezinih funkcija. Promjene ove vrste određuju se kod intoksikacije alkoholom, smanjene aktivnosti štitne žlijezde, kroničnih infekcija, autoimunih patologija, bolesti bubrega, izloženosti toksičnim tvarima, uključujući lijekove, zračenju.

Liječenje odstupanja od norme

U kliničkoj praksi, retikulocitni test se najčešće propisuje nakon kompletne krvne slike sa smanjenjem crvenih krvnih stanica i hemoglobina. Nivo retikulocita vam omogućava da procijenite funkcije koštane srži, sintezu crvenih krvnih zrnaca, odredite vrstu anemije i pratite učinkovitost njenog liječenja. Ako rezultati studije odstupaju od normalnih, trebate potražiti savjet svog liječnika – liječnika opće prakse, pedijatra, hematologa, hirurga. Da bi se spriječio utjecaj fizioloških faktora na broj retikulocita, potrebno je isključiti situacije koje uzrokuju gladovanje kisikom - penjanje na visinu ili spuštanje pod vodu, produženo izlaganje u zagašenoj ili zagušljivoj prostoriji, pušenje, pijenje alkohola.