Процедурата за определяне на кръвни групи по системата ABO се състои в откриването на антигени А и В в еритроцитите с помощта на стандартни антитела и използването на аглутинини в плазмата или серума на анализираната кръв със стандартни еритроцити. Техниката е разработена в началото на 20-ти век и все още се използва активно в медицината. Определянето на антигени А и В се извършва благодарение на анти-А и анти-В коликлони.

Основни понятия

При донорите винаги се определят не само антигени в еритроцитите, но и аглутинини в серума (плазма), като се използват стандартни еритроцити. Като биоматериал се използва венозна кръв. Преди изследването трябва да се откажете от мазни храни един ден преди анализа и да не пушите половин час преди изследването. Кръвните групи се определят два пъти: първо в медицинския отдел, където се събира материалът, и след това се потвърждават чрез изследване в лабораторията.

Определянето на кръвни групи по системата ABO е основният тест, използван в трансфузиологията. Също така някои животни имат подобна система от кръвни групи, като шимпанзета, горили и бонобо.

История на откритията

В науката има общоприето мнение, че методът за определяне на кръвните групи по системата ABO е идентифициран за първи път от австрийския учен Карл Ландщайнер през 1900 г. Тогава той описва в работата си три вида антигени. За това тридесет години по-късно той получава Нобелова награда за медицина и физиология. Поради факта, че преди това не е имало тесни връзки между учените, по-късно се установява, че чешкият серолог Ян Янски, независимо от изследванията на К. Ландщайнер, за първи път описва четири човешки кръвни групи, но неговите изследвания не са били известни на широка публика публика. Понастоящем в Русия и републиките на бившия СССР се използва класификацията, разработена от Я. Янски. В САЩ W. L. Moss създава своя собствена подобна работа през 1910 г.

Метод за определяне на кръвни групи по системата ABO с помощта на коликлони

Кръвната група трябва да се определя в стая с добро осветление, като се спазва температурният диапазон от 15 до 25 градуса по Целзий, тъй като отклоненията от тази норма могат да повлияят на резултатите от изследването. Инициалите и фамилията на пациента се изписват върху табелата или табелата. Отляво надясно или в кръг се прилагат стандартни обозначения на групи (O (I), A (II), B (III)). Под тях капка по капка се поставя съответният серум с отделни пипети за всеки вид. След това към тях се добавя кръвта на пациента. Материалът за изследване се взема от ушната мида или пръста. Това се изисква от техниката за определяне на кръвната група според системата ABO.

Също така е законно да се използват еритроцити, които са в епруветката след образуването на съсирек. Необходимо е количеството серум да бъде десет пъти повече от количеството добавена кръв. След това капките се смесват със стъклени пръчици (поотделно за всяка). В рамките на пет минути, внимателно разклащайки плочата, следете за появата на реакция на хемаглутинация. Открива се във факта, че се появяват малки червени бучки, които след това се сливат в по-големи. Серумът по това време почти напълно губи цвета си.

За да се елиминира фалшивата хемаглутинация чрез проста аглутинация на еритроцитите, след три минути добавете една капка физиологичен разтвор и проверете дали аглутинацията продължава. Ако да, значи е вярно. Всичко, определянето на кръвните групи по системата ABO е завършено.

Тълкуване на резултатите

В резултат на това могат да се наблюдават четири реакции:

• аглутинация не настъпва с нито един от серумите - първата група O (I);
• реакцията се проявява със sera I(ab) и III(a) - втора група A(II);
• аглутинация настъпва със серуми I(ab) и II(b) - трета група B(III);
• ако реакцията протича с три серума, е необходимо да се извърши допълнителна процедура с реактиви от група AB(IV), които са стандартни; ако в такава капка няма аглутинация, можем да приемем, че това е 4-та кръвна група АВ (IV).

Експресен метод за Rh фактор

Методът за определяне на кръвните групи според системата ABO включва едновременно откриване на Rh фактор (Rh).

Повърхността на плочата е предварително навлажнена и върху нея се изписват „контролен серум“ и „антирезус серум“. След това под надписите се поставят една или две капки от необходимите реактиви и към тях се добавя анализираният материал. За целта можете да използвате и кръв от пръст (в същото количество като обема на серума) или еритроцити, останали на дъното на епруветката след появата на съсирек (половината от обема на серума). Изборът на материал не влияе на крайния резултат. След това кръвта и серумът се смесват със суха стъклена пръчка, след което реакцията се очаква да настъпи в продължение на пет минути. За да се елиминират грешните показания, след три до четири минути се добавя изотоничен разтвор на натриев хлорид (само няколко капки). Определянето на кръвната група според системата ABO и Rh се извършва много често.

Ако се появи аглутинация на червени кръвни клетки в капка серум, това показва положителен резус на кръвта. Според статистиката Rh + се среща при 85% от населението на света. Липсата му ни позволява да говорим за Rh-отрицателна принадлежност. Ако се появи аглутинация в контролния серум, значи той е станал неизползваем. За съжаление, алгоритъмът за определяне на кръвната група по системата ABO не винаги работи перфектно.

Какви грешки могат да бъдат направени с тази техника?

Неточностите при определяне на принадлежността на кръвта към определена група зависят от следните причини:

• Технически.
• Биологични особености на изследваната кръв.
• Дефектен характер на стандартни серуми и еритроцити.

Технически грешки

Възможни грешки при определяне на кръвната група на системата ABO по кръстосан начин:

Грешки на биологичната специфичност

Грешките, свързани с биологичните особености на анализираната кръв, се разделят на два вида.

• В зависимост от характеристиките на еритроцитите.
• Грешки, дължащи се на биологичните характеристики на серума.

Нека разгледаме всеки тип по-подробно.

В зависимост от характеристиките на червените кръвни клетки

• Късна аглутинация поради "слаби" форми на еритроцити и антигени. За да се избегнат грешки, е необходимо да се определи кръвната група на донорите и реципиентите с помощта на стандартни еритроцити. Аглутиноген А 2 трябва да се идентифицира чрез многократно изследване с други видове реагенти и други стъклени съдове, като се удължи времето за регистриране на реакцията.
• "Панаглутинация" ("автоаглутинация") - способността на кръвта да показва една и съща реакция от неспецифичен характер с всички серуми, включително собствения. След пет минути тежестта на такава аглутинация отслабва, въпреки че трябва да се увеличи. Подобни случаи се наблюдават при пациенти с рак, изгаряния и др. Като контрола е необходимо да се оцени проявата на аглутинация на анализираните еритроцити в стандартния серум от четвърта група и физиологичен разтвор. При "панаглутинация" кръвната група се определя в резултат на трикратно измиване на еритроцитите. Ако не даде желания резултат, струва си да вземете отново кръвна проба в епруветка, затоплена преди процедурата, и да поставите пробата в термоконтейнер, за да поддържате температура от 37 градуса по Целзий и повече. След това трябва да се достави в лабораторията, където се поддържа горепосочената температура и се използват загрят физиологичен разтвор, плака и реактиви.

• Понякога еритроцитите на анализираната кръв са подредени като "монетни колони" и могат да бъдат сбъркани с аглутинати. Чрез добавяне на две капки изотоничен физиологичен разтвор и леко разклащане на плаката, червените кръвни клетки са в правилната позиция.
• Непълна или смесена аглутинация, възникваща при пациенти от втора, трета и четвърта група в резултат на трансплантация на костен мозък или през първите три месеца след кръвопреливане 0 (I).

Биологично определен серум

Грешки, свързани с използването на дефектни стандартни еритроцити и серуми

Слаби серуми с изтекъл срок на годност или с титър по-малък от 1:32 са способни да генерират слаба и късна аглутинация. Използването на такива реактиви е неприемливо.

Използването на неподходящи стандартни еритроцити или серуми, приготвени при нестерилни условия и недостатъчно консервирани, води до появата на "бактериална" аглутинация, която е с неспецифичен характер.

Има много популярни предположения за кръвните групи на системата АВО, които се появяват веднага след откриването й в различни култури по света. Така например през 30-те години на миналия век в Япония и някои други страни теорията, свързваща кръвната група с един или друг тип личност, придоби популярност. Подобни теории са популярни днес.

Има също мнение, че човек с група А е склонен към тежък махмурлук, О се свързва с добри зъби, а група А2 е свързана с най-високо ниво на IQ. Но подобни твърдения не са научно доказани.

Разгледахме определянето на кръвните групи според системата ABO, използвайки стандартни серуми.

В наше време медицината е достигнала големи висоти. Лекарите са в състояние да извършват дълги операции и да спасяват хората дори от най-привидно безнадеждните ситуации по отношение на оцеляването. В такива случаи обаче човек трябва да се изправи пред проблема с необходимостта от кръвопреливане. Дълго време това не беше осъществимо поради факта, че пациентите умираха много бързо. Но този проблем беше решен с откриването на концепцията за кръвните групи или по-скоро откриването на антигени върху еритроцитите и, от своя страна, антитела в кръвната плазма.

В началото на ХХ век австралийски лекар, учен на непълно работно време К. Ландщайнер открива наличието на антигени и антитела в кръвта. Антигените се намират на повърхността на червените кръвни клетки. Има 2 вида от тях. За простота биолозите са ги обозначили като А и В. От своя страна антителата се съдържат в кръвната плазма и се наричат ​​α и β. Ако А е свързан с α, а B с β, ще започне процесът на съсирване на кръвта. Тази реакция се нарича хемаглутинация.

Така от наличните набори от антигени и антитела могат да се направят 4 вида кръв, показани в таблицата по-долу:

важно!В зависимост от вида дарена кръв, предоставена за трансфузия, кръвта на пациента ще се съсири или не. Първият случай е фатален.

Серум за реакция

В момента има доста голям брой начини за определяне на кръвната група. Но повечето от тях са предназначени за анализ в големи лаборатории. Въпреки това, дори ако сте в малко село или на място, където няма начин да се свържете с подобни институции, възможността за идентифициране на номер на кръвна група все още остава.

Определянето на кръвната група се извършва с помощта на четири специални стандартни серума, които ще бъдат направени от човешка кръв. Предлагат се в бутилки или в ампули от 2-5 ml и отговарят на различни кръвни групи:

1. 0. Предлага се с бял етикет и е прозрачен.
2. А. Синя течност. Две сини ивици са нанесени върху бутилката.
3. Б. Бледорозова течност. На бутилката има три ивици от един и същи цвят.
4. AB. Жълта течност. Бутилката има 4 ленти от един и същи цвят.

важно!Всъщност тези реагенти са безцветни по време на производството. Те са специално оцветени, така че при използването им е невъзможно да ги объркате.

Също етикетирани:

• титър;
• дата на производство;
• най-доброто преди среща;
• информация за производителя;
• сериен номер.

Как се определя кръвната група?

За да определите кръвната група, ще ви трябва:

• плоска чиния с 8 вдлъбнатини;
• стъклени пръчки или пипети - 8 броя;
• 2 комплекта серуми от различни серии, за да се елиминира възможността за грешки;
• обикновен или пясъчен часовник.

Серумите се поставят върху плоска чиния в 2 реда, след което се вземат стъклени пръчици. С тяхна помощ в редовете се въвежда тестовата кръв. Тя разбърква с тези пръчици, след което чинията започва да се разклаща. С късмет процесът може да бъде проследен за 10-30 секунди, но е по-добре да направите това до 5 минути, за да изключите възможността за инхибиране на реакцията. След това има изследване и интерпретация на резултатите.

внимание!На първо място, трябва да обърнете внимание на кръговете, в които се излива серумът от II и III кръвни групи. Интерес представлява наличието на малки люспи, които се появяват в резултат на аглутинация - слепване на еритроцитите.

1. Ако няма люспи нито във II, нито в III, а също така нищо не се съсирва нито в I, нито в IV, тогава има първа кръвна група.
2. Ако в резултат на това съсирването се наблюдава навсякъде, с изключение на серума от група II, тогава изследваната кръв принадлежи към втората група.
3. Ако се наблюдава коагулация във всички проби, с изключение на серума от група III, тогава изследваната кръв принадлежи към едноименната група.
4. Ако съсирването е настъпило във всички проби, с изключение на серума от група IV, тогава анализът е подложен на една и съща кръвна група.

важно! Строго погледнато, кръвната група може да се определи чрез наличие на серуми само от 2 и 3 кръвни групи. Въпреки това, както може да се заключи от същността на метода, има голямо влияние на човешкия фактор. Поради тази причина серуми за I и IV кръвна група се използват като допълнителна проверка.

След процедурата използваните съдове трябва да бъдат добре измити с топла вода и подсушени. След това може да се използва за по-нататъшни изследвания.

Неточности в резултатите и причините за тях

Понякога се случва струпвания от аглутинирани червени кръвни клетки да не се виждат много ясно. По време на теста често може да се добави изотоничен разтвор на натриев хлорид. Той елиминира възможността за фалшива аглутинация, като кара люспите, които не са резултат от процеса на коагулация, да се разпаднат обратно.

важно!Ако резултатът от анализа не е много ясен, той трябва да се направи отново и да се използва микроскоп за изследване на фината аглутинация.

В случай на ясно идентифициран резултат, можете веднага точно да кажете на пациента неговата кръвна група. В противен случай трябва да се обърнете към други методи за анализ.

Не забравяйте за възможността за грешки, които обикновено възникват поради следните причини:

• използване на изтекъл или слаб серум;
• използване на твърде много тестова кръв по отношение на обема на серума;
• реакцията се извършва много по-дълго, отколкото се изисква от разпоредбите;
• температурата на околната среда не съответства на нормалната, което води до студена аглутинация на червените кръвни клетки.

Освен това трябва да се отбележи, че в процеса на сушене по краищата на сместа от серум и тестова кръв е възможно образуването на гранулирани зони, които не могат да служат като индикатори за реакцията.

Използване на резултата на практика

Както вече споменахме, определянето на кръвната група се извършва, за да се изключи смъртоносен изход по време на нейното преливане. В идеалния случай пациент, получаващ кръв - реципиент - трябва да бъде прелят със същия тип кръв като самия него. Това обаче не винаги се получава. Макар и само защото по-голямата част от хората с първа кръвна група - 50%. В същото време те са универсални донори, тъй като им липсват аглутиногени, които стимулират процеса на коагулация на кръвта.

внимание!Що се отнася до пациентите с кръвна група IV, те могат да бъдат наречени универсални реципиенти, тъй като тялото им е в състояние да приеме кръв от всяка група. В същото време тяхната кръв не може да бъде прелята на представители на друга група.

За по-голяма яснота съвместимостта на донорите и реципиентите е дадена в таблицата:

Номер на групата	За кои групи става донор	За кои групи става получател
аз	I, II, III, IV	аз
II	II, IV	I, II
III	III, IV	I, III
IV	IV	I, II, III, IV

В днешния свят познаването на кръвната група е жизненоважно. От гледна точка на лекарите, от това ще зависи степента на оцеляване на пациентите. От гледна точка на обикновените хора това е шанс в спешен случай човек да спаси живота си. В тази връзка няма да е излишно да знаете кръвната си група и, ако е възможно, да я поставите в паспорта или други документи, тъй като рискът за здравето и живота може да възникне по всяко време.

Видео - Определяне на кръвна група

Видео - Определяне на кръвна група и Rh фактор

Кръвни групи от системата АВ0

Кръвните групи на системата AB0 са открити през 1900 г. от К. Ландщайнер, който, смесвайки еритроцитите на някои индивиди с кръвния серум на други индивиди, установява, че при някои комбинации кръвта се съсирва, образувайки люспи (реакция на аглутинация), докато други не го правят. Въз основа на тези изследвания Ландщайнер разделя кръвта на всички хора на три групи: A, B и C. През 1907 г. е открита друга кръвна група.

Установено е, че реакцията на аглутинация възниква, когато антигени от една кръвна група (те се наричат ​​аглутиногени), които са в червените кръвни клетки - червени кръвни клетки с антитела от друга група (те се наричат ​​аглутинини), които са в плазмата - течната част на кръвта. Разделянето на кръвта според системата АВ0 на четири групи се основава на факта, че кръвта може да съдържа или да не съдържа антигени (аглутиногени) А и В, както и антитела (аглутинини) α (алфа или анти-А) и β (бета или анти-B).

Първа кръвна група - 0 (I)

I група – не съдържа аглутиногени (антигени), но съдържа аглутинини (антитела) α и β. Означава се с 0 (I). Тъй като тази група не съдържа чужди частици (антигени), тя може да се прелива на всички хора. Човек с тази кръвна група е универсален донор.

Втора кръвна група A β (II)

Група II съдържа аглутиноген (антиген) А и аглутинин β (антитела срещу аглутиноген В). Следователно, той може да се прелива само на онези групи, които не съдържат антиген В - това са групи I и II.

Трета кръвна група Вα (III)

Група III съдържа аглутиноген (антиген) В и аглутинин α (антитела срещу аглутиноген А). Следователно, той може да се прелива само на онези групи, които не съдържат антиген А - това са групи I и III.

Четвърта кръвна група AB0 (IV)

IV кръвна група съдържа аглутиногени (антигени) А и В, но съдържа аглутинини (антитела). Поради това може да се прелива само на тези, които имат същата четвърта кръвна група. Но тъй като в кръвта на такива хора няма антитела, които да се слепват с антитела, въведени отвън, те могат да бъдат преляти с кръв от всяка група. Хората с четвърта кръвна група са универсални реципиенти.

Кръвни групи по системата АВО

Метод за определяне на кръвни групи

Кръвната група според системата ABO се определя с помощта на реакцията на аглутинация. В момента има три начина за определяне на кръвни групи според системата ABO:

Според стандартни изохемаглутиниращи серуми;

С помощта на моноклонални антитела (анти-А и анти-В золиклони).

Определяне на кръвни групи чрез стандартни изохемаглутиниращи серуми

Същността на метода е да се открият антигени от група А и В в тестовата кръв с помощта на стандартни серуми. За тези цели се използва реакцията на аглутинация. Тестът трябва да се проведе в стая с добро осветление при температура 15-25 ° C.

За провеждане на теста са ви необходими: - Стандартни изохемаглутиниращи серуми от групи O (I), A (II), B (III) и AB (IV) от две различни серии. Серумите за определяне на кръвни групи се произвеждат от дарена кръв в специални лаборатории. Серумите се съхраняват в хладилник при температура 4 - 8 ° C. Срокът на годност на серума е посочен на етикета. Етикетът също така показва титъра (максималното разреждане на серума, при което може да възникне реакция на аглутинация), който трябва да бъде най-малко 1: 32 (за серум B (III) - най-малко 1:16 / 32). Суроватката трябва да е прозрачна, без признаци на гниене. За удобство стандартните серуми са оцветени в определен цвят: O (I) - безцветен (сив), A (II) - син, B (III) - червен, AB (IV) - ярко жълт. Тези цветове съпътстват всички етикети на кръвни продукти, които имат групова принадлежност (кръв, еритроцитна маса, плазма и др.).

Бели порцеланови или емайлирани чинии или други мокрими чинии, обозначени според кръвната група.

Изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Игли, пипети, стъклени пръчици (предметни стъкла).

Реакционна техника.

1. При съответните обозначения на кръвната група серумът от I, II, III групи се прилага върху плочата (плоча) в обем от 0,1 ml (една голяма капка с диаметър около 1 cm). За да избегнете грешки, приложете две серии серуми, тъй като една от серията може да има ниска активност и да не даде ясна аглутинация. Така се получават 6 капки, образуващи два реда от по три капки в следния ред отляво надясно: 0 (I), A (II), B (III).

2. Кръвта за изследване се взема от пръст или от вена. Със суха стъклена пръчица 6 капки тестова кръв с размер приблизително колкото главичка на карфица 0,01 ml (малка капка) се прехвърлят последователно в плаката в 6 точки, всяка до капка стандартен серум. Освен това количеството на серума трябва да бъде 10 пъти по-високо от количеството изследвана кръв. След това внимателно се разбъркват със стъклени пръчици със заоблени ръбове.

Възможна е и по-проста техника: една голяма капка кръв се нанася върху плаката, след това се взема оттам с ъгъла на предметно стъкло и всяка капка серум се прехвърля, като внимателно се смесва с последната. В същото време всеки път кръвта се взема с чист ъгъл на стъклото, като се внимава капките да не се смесват.

3. След смесване на капките плочата периодично се разклаща. Аглутинацията започва през първите 10-30 секунди. Но наблюдението трябва да се извършва най-малко 5 минути, тъй като е възможна по-късна аглутинация, например с еритроцити от група А 2 (II).

4. В тези капки, където е настъпила реакцията, добавете една капка изотоничен разтвор на натриев хлорид, след което се оценяват резултатите от реакцията.

Реакцията на аглутинация може да бъде положителна или отрицателна.

При положителна реакция през първите 10-30 секунди в сместа се наблюдават малки червени зърна (аглутинати), видими с невъоръжено око, състоящи се от залепени червени кръвни клетки. Малките зърна постепенно се сливат в по-големи зърна или дори в люспи с неправилна форма. При отрицателна реакция капката остава равномерно оцветена в червено.

Резултатите от реакциите на две серии в капки със серум от една и съща група трябва да съвпадат.

Принадлежността на изследваната кръв към съответната група се определя от наличието или отсъствието на аглутинация в реакцията със съответните серуми.

Ако всички серуми са дали положителна реакция, тогава тестовата кръв съдържа и двата аглутиногена - А и В. Но в такива случаи, за да се изключи неспецифична реакция на аглутинация, допълнително контролно изследване на тестовата кръв със стандартен серум от група АВ (IV) трябва да се извърши.

Определяне на кръвни групи с моноклонални антитела

За определяне на кръвните групи по този начин се използват моноклинални антитела, които се получават чрез хибридомна биотехнология.

Хибридомът е клетъчен хибрид, образуван от сливането на клетка от костен мозък (миелома) с имунен лимфоцит, който синтезира специфични моноклонални антитела. Хибридомът има способността за неограничен растеж, характерен е за туморна клетка и способността да синтезира антитела, присъщи на лимфоцита.

Разработени са стандартни реагенти - моноклонални антитела (MCA): анти-А и анти-В коликлони, използвани за определяне на еритроцитни аглутиногени. Золиклоните са червен (анти-А) и син (анти-В) лиофилизиран прах, който се разрежда с изотоничен разтвор на натриев хлорид непосредствено преди изследването.

Техника.

Анти-А и анти-В соликлони се нанасят върху бяла таблетка по една голяма капка (0,1 ml) под съответните надписи: анти-А или анти-В. До капките антитела трябва да се постави една малка капка от изследваната кръв. След смесване на компонентите реакцията на аглутинация се наблюдава в продължение на 2-3 минути. Оценката на резултатите е много проста.

Определянето на кръвната група може да бъде придружено от грешки, които водят до неправилно тълкуване на резултатите. Могат да се разграничат три основни групи грешки: грешки, свързани с ниското качество на реагентите; технически грешки; грешки, свързани с характеристики Схема за оценка на резултатите от определяне на кръвни групи с помощта на моноклонални антитела (анти-А и анти-В золиклони) на изследваната кръв. Първите две могат да бъдат избегнати чрез стриктно спазване на изискванията за серум, условия на реакция и т.н. собствените (автоаглутинация), като в същото време еритроцитите дават аглутинация с всички серуми, дори със серум от група АВ. Подобно явление е описано при редица заболявания: заболявания на кръвта, спленомегалия, цироза на черния дроб, инфекциозни заболявания и др. Панаглутинация и автоаглутинация са описани и при здрави хора.

Явлението панаглутинация и автоаглутинация се наблюдава само при стайна температура. Ако определянето на груповата принадлежност се извършва при температура 37 ° C, те изчезват.

Трябва стриктно да се помни, че във всички случаи на неясни или съмнителни резултати кръвните групи трябва да се определят отново, като се използват стандартни серуми от други серии, както и кръстосано.

Многобройни изследвания показват, че кръвта може да съдържа различни протеини (аглутиногени и аглутинини), чиято комбинация (наличие или отсъствие) образува четири кръвни групи.
Всяка група получава символ: 0 ( аз), А (II), IN (III)AB(IV).
Установено е, че може да се прелива само едногрупова кръв. В изключителни случаи, когато няма кръв от една група и кръвопреливането е жизненоважно, е допустимо да се прелива кръв от друга група.При тези условия кръвта 0 ( аз) групи могат да се преливат на пациенти с всяка кръвна група и на пациенти с кръв AB(IV) групи, можете да прелеете дарена кръв от всяка група.

Ето защо, преди да се започне кръвопреливане, е необходимо точно да се установи кръвната група на пациента и групата на прелятата кръв.

Определяне на кръвна група.

За определяне на кръвната група се използват стандартни серуми от група 0 ( аз), А (II), IN (III)които се приготвят специално в лабораториите на станциите за кръвопреливане.
Числата се поставят върху бяла чиния на разстояние 3-4 см отляво надясно аз, II, III,означаващи стандартни серуми. Капка стандартен серум 0( аз) групи се нанасят с пипета върху сектора на плаката, обозначен с номера аз; след това се нанася капка серум с втора пипета А (II)групи под номер II;също вземете серум IN (III)групи и третата пипета - нанесете под бр III.

След това пръстът се убожда върху субекта и изтичащата кръв се прехвърля със стъклена пръчица върху капка серум, разположена върху плаката, и се смесва до равномерно оцветяване. Във всеки серум кръвта се прехвърля с нова пръчка. След 5 минути от момента на оцветяване (по часовника!) Кръвната група се определя от промяната в сместа. В серума, където настъпва аглутинация (слепване на еритроцити), се появяват ясно видими червени гранули и бучки; в серума, където не настъпва аглутинация, капка кръв ще остане хомогенна, равномерно оцветена в розово.

В зависимост от кръвната група на субекта, в определени проби ще настъпи аглутинация. Ако обектът има 0 ( аз) кръвна група, тогава еритроцитите няма да се слепват със серум.
Ако субектът има А (II)кръвна група, тогава няма да има аглутинация само със серума на групата А (II), и ако субектът има B (III)група, тогава няма да има аглутинация със серум В (III).Аглутинация се наблюдава при всички серуми, ако тестовата кръв е такава AB(IV) групи.

Rh фактор.

Понякога дори при едногрупово кръвопреливане се наблюдават тежки реакции. Проучванията показват, че приблизително 15% от хората нямат специален протеин в кръвта си, така нареченият Rh фактор.

Ако на тези индивиди се прелее повторно кръв, съдържаща този фактор, тогава ще настъпи тежко усложнение, наречено резус конфликт, и ще се развие шок. Следователно понастоящем всички пациенти са длъжни да определят Rh фактора, тъй като само Rh-отрицателна кръв може да бъде прелята на реципиент с отрицателен Rh фактор.

Ускорен начин за определяне на Rh-принадлежността.5 капки антирезус серум от същата група като този на реципиента се нанасят върху стъклена паничка на Петри. Добавете капка кръв на субекта към серума и разбъркайте добре. Петриевото блюдо се поставя на водна баня при температура 42-45°C. Резултатите от реакцията се оценяват след 10 минути. Ако настъпи кръвна аглутинация, тогава кръвта на субекта е Rh-положителна (Rh +); ако няма аглутинация, тогава изследваната кръв е Rh-отрицателна (Rh-).
Разработени са редица други методи за определяне на Rh фактора, по-специално с помощта на универсалния антирезус реагент D.

Задължително е определянето на кръвна група и Rh принадлежност на всички пациенти, които са в болницата. Резултатите от изследването трябва да бъдат вписани в паспорта на пациента.

В съвременната медицина кръвната група характеризира набор от антигени, разположени на повърхността на еритроцитите, които определят тяхната специфичност. Има огромен брой такива антигени (обикновено се използва таблица с кръвни групи с различни антигени), но определянето на кръвната група обикновено се извършва с помощта на класификацията според Rh фактора и системата AB0.

Определянето на група е задължителна процедура при подготовката за всяка операция. Такъв анализ е необходим и при постъпване на служба в някои контингенти, включително военни, служители на вътрешните органи и правоприлагащите органи. Тази интервенция се извършва поради повишен риск от животозастрашаващо състояние, за да се намали времето, необходимо за оказване на помощ под формата на кръвопреливане.

Съставът на кръвта на различни кръвни групи

Същността на системата АВ0 е наличието на антигенни структури върху еритроцитите. В плазмата няма типични антитела, съответстващи на тях (гама глобулини).Следователно, за кръвен тест, можете да използвате реакцията "антиген + антитяло".

Червените кръвни клетки се слепват, когато антигенът и антитялото се срещнат.Тази реакция се нарича хемаглутинация. Реакцията се появява като малки люспи по време на анализа. Изследването се основава на серу-аглутинация.

Еритроцитните антигени "А" се свързват съответно с антителата "ά", както и "В" с "β".

По състав се разграничават следните кръвни групи:

• I (0) - ά, β - повърхността на еритроцитите изобщо не съдържа антигени;
• II (A) - β - на повърхността има антиген А и антитяло β;
• III (B) – ά - повърхността съдържа B с ά-тип антитяло;
• IV (AB) - 00 - повърхността съдържа и двата антигена, но няма антитела.

Ембрионът вече има антигени в състоянието на ембриона, а аглутинините (антитела) се появяват през първия месец от живота.

Методи за определяне

Стандартен метод

Има много техники, но лабораторията обикновено използва стандартни серуми.

Стандартният серумен метод се използва за определяне на типовете АВ0 антигени. Съставът на стандартния изохемаглутиниращ серум съдържа набор от антитела срещу еритроцитните молекули.В присъствието на антиген, който е податлив на действието на антитела, се образува комплекс антиген-антитяло, който предизвиква каскада от имунни отговори.

Резултатът от тази реакция е аглутинацията на еритроцитите, въз основа на естеството на протичащата аглутинация е възможно да се определи дали пробата принадлежи към някоя група.

За приготвянето на стандартен серум се използва донорска кръв и се използва определена система - чрез изолиране на плазма, включително антитела, и след това разреждане. Разреждането се извършва с изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Развъждането се извършва по следния начин:

Самото изследване се провежда по следния начин:

1. Капка от всеки серум (с общ обем приблизително 0,1 милилитра) се поставя върху специална таблетка върху зоната, където има съответна маркировка (използват се 2 проби, едната от тях е контролна, втората е предназначена за изследване).
2. След това до всяка капка серум се поставя пробата за изследване в обем от 0,01 милилитра, след което се смесва отделно с всеки диагностикум.

Правила за декодиране на резултатите

След пет минути можете да оцените резултатите от изследването. При големи капки серум се получава избистряне, при някои има реакция на аглутинация (образуват се малки люспи), при други не.

Видео: Определяне на кръвна група и Rh фактор

Ето възможните варианти:

• Ако няма реакция на аглутинация и в двете проби със серуми II и III (+ контрола 1 и IV) - определението на първата група;
• Ако съсирването се наблюдава във всички проби, с изключение на II - дефиницията на втората;
• При липса на реакция на аглутинация само в проба от група III - определение III;
• Ако се наблюдава съсирване във всички проби, включително IV-контрола - дефиницията на IV.

Когато серумите са подредени в правилния ред и етикетите са върху плаката, е лесно да се ориентирате: групата съответства на места без аглутинация.

В някои случаи свързването не се вижда ясно.След това анализът трябва да се повтори, фината аглутинация се наблюдава под микроскоп.

Метод на кръстосана реакция

Същността на тази техника е определянето на аглутиногени с помощта на стандартни серуми или коликлони с паралелно определяне на аглутинини с помощта на референтни еритроцити.

Техниката на анализ чрез кръстосания метод практически няма разлики от изследването с използване на серуми, но има някои допълнения.

Капка по капка стандартни еритроцити трябва да се добавят към плаката под серума.След това от епруветката с кръвта на пациента, преминала през центрофугата, се изважда с пипета плазма, която се поставя на дъното на стандартните еритроцити - добавя се към стандартния серум.

Както и според техниката на стандартния метод, резултатите от изследването се оценяват няколко минути след началото на реакцията. При реакция на аглутинация можем да говорим за наличие на аглутинини AB0, при плазмена реакция можем да съдим за аглутиногени.

Резултатите от кръвен тест с помощта на стандартни еритроцити и серуми:

аглутинация;

- липса на аглутинация;

- не се извършва реакция.

Кръстосаният метод стана широко разпространен поради факта, че предотвратява диагностични грешки, възникващи при използване на стандартни методи.

Определяне на кръвна група чрез цоликлони

Цоликлоните са синтетични серумни заместители, които съдържат изкуствени заместители на ά и β аглутинини. Те се наричат ​​еритротести "Цоликлон анти-А" (имат розов цвят), както и "анти-В" (имат син цвят). Очакваната аглутинация се наблюдава между коликлон аглутинини и кръвни еритроцити.

Тази техника не изисква две серии, тя е по-надеждна и точна. Провеждането на изследване и оценката на неговите резултати се извършват по същия начин, както при стандартния метод.

Група IV (АВ) задължително се потвърждава чрез аглутинация с анти-АВ коликлон, както и чрез липса на аглутинация на еритроцитите в изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Експресен метод с помощта на комплекта "Erythrotest-Groupcard"

Въпреки че общоприетите методи за определяне на принадлежността на кръвта към определена група са широко разпространени, в съвременната медицина има въвеждане на експресни методи, най-често срещаният от които е "Erythrotest".

При определяне на група по метода „Erythrotest groupcard“ е необходим набор от инструменти, включително следните устройства:

• Таблетка с пет ямки за определяне на групата по Rh-принадлежност и система АВ0;
• Скарификатор, предназначен за получаване на проба, необходима за изследване;
• Стъклени пръчици за смесване на проби;
• Чиста пипета за набор от разтвори.

Всички тези инструменти са необходими за диагностика без грешки.

Комплектът за кръвен тест Erythrotest-Groupcard ви позволява да изследвате Rh фактора и да определите кръвната група при всякакви условия, той е особено ефективен при липса на възможност за използване на конвенционални методи.

В ямките на плаката има цоликлони към антигени (това са цоликлони анти-А, -В, -АВ) и към основния антиген, който определя наследяването на Rh фактора (това е цоликлон анти-D). Петата ямка съдържа контролен реагент, който ви позволява да предотвратите възможни грешки и правилно да определите принадлежността към кръвна група.

Видео: Определяне на кръвни групи с помощта на цоликлон