Вътрешно ухо. Структурата на охлюва. Микроструктура на кортиевия орган. Провеждане на звукови вибрации в кохлеята Възможно ли е да се възстановят космените клетки на вътрешното ухо

И ще се оправиш.

Как работи нашият слух?

Ушите отварят за нас света на гласове, звуци, мелодии. Сложен механизъм предава звуци, приятни и не много приятни, до мозъка. В ухото има и орган, който ни помага да се ориентираме свободно в пространството и да поддържаме равновесие.
Органът на слуха е гениална система, състояща се от най-тънките мембрани, кухини, малки кости и космати слухови клетки. Ухото възприема невидими звукови вибрации, вълнообразни във въздуха. Те се улавят от ушната мида, в ухото вибрациите се превръщат в нервни импулси, които мозъкът регистрира като звуци. Ушната мида и външният слухов канал образуват външното ухо. Жлезите в кожата на ушния канал отделят специален лубрикант, ушна кал, за да предотвратят навлизането на бактерии, мръсотия и вода в силно чувствителните зони на вътрешното ухо дълбоко в черепа.
Ушният канал завършва с еластична тимпанична мембрана, която под въздействието на звукови вибрации започва да вибрира, предавайки осцилаторни импулси към слуховите осикули на средното ухо. Тези три малки кости - чук, наковалня и стреме - получават имената си от специфичната си форма. Те са разположени в своеобразна верига, с помощта на която вибрациите на диафрагмата се преобразуват в енергия на натиск и се предават на вътрешното ухо.

Кохлеята е органът, в който се осъществява слуха.

Във вътрешното ухо се намира така наречената кохлея, която съдържа крайния апарат на слуховия нерв - органът на Корти. В спиралния канал на кохлеята, пълен с вискозна течност, има приблизително 20 000 микроскопични космени клетки. Чрез сложни химически процеси те преобразуват вибрациите в нервни импулси, които се изпращат по слуховия нерв до центъра на слуха в мозъка. Тук те вече се възприемат като слухово усещане, независимо дали става въпрос за реч, музика или други звуци. Вътрешното ухо също съдържа вестибуларния апарат. Състои се от три полукръгли канала, разположени под прав ъгъл един спрямо друг. Те са пълни с лимфа. При всяко движение на главата възникват светлинни потоци, които се улавят от космените клетки и се предават под формата на нервни импулси към мозъчните полукълба. Ако човек започне да губи равновесие, тези импулси предизвикват рефлекторни реакции в мускулите и очите и позицията на тялото се коригира.

Причини за загуба на слуха.

Шумът е една от най-честите причини за загуба на слуха. Силата на звука се измерва в децибели (dB). Звук от 85-90 dB или повече (като шума, произвеждан от стандартен кухненски робот или преминаващ камион в непосредствена близост), изложен на ушите на човек всеки ден за дълго време, може да причини загуба на слуха. Постоянният шум причинява прекомерно дразнене, което има пагубен ефект върху чувствителните клетки. Силните шумове, като експлозии, могат да причинят временна загуба на слуха.
С възрастта остротата на слуха намалява. Този процес обикновено започва след 40-годишна възраст. Причината за свързаната с възрастта загуба на слуха е намаляването на ефективността на космените клетки.
Шумът, стресът, някои лекарства, вирусните инфекции и недостатъчното кръвоснабдяване могат да доведат до загуба на слуха.
Слухът може да страда и от неправилно положение на шийните прешлени и челюстта, от прекалено високо кръвно налягане. Всички тези фактори също могат да причинят рязко намаляване на слуха - неочаквано възникваща едностранна или двустранна глухота. Те също често са причина за шум в ушите, когато се чува шумолене, съскане, свистене или звънене. Това явление обикновено е временно, но също така се случва, че шумът в ушите безпокои човек постоянно. Ако имате болка в ушите, незабавно се свържете с Вашия лекар, тъй като те могат да доведат до загуба на слуха и дори до глухота.

Подобряване на слуха - помощ при загуба на слуха.

Приблизително 20% от хората в индустриализираните страни са с увреден слух и имат нужда от подобряване на слуха.
При първите оплаквания от загуба на слуха се консултирайте с лекар: колкото по-рано се проведе прегледът, толкова по-ефективно може да бъде лечението.
Има различни модели слухови апарати. Наред с моделите, които имат микрофон зад ухото, има устройства, които се поставят в ушната мида и са почти невидими. През последните години бяха разработени устройства-импланти, които се имплантират на хора, страдащи от пълна глухота.
Слуховите апарати трябва да се поставят от лекар или специалист по акустика. Устройствата трябва не само да усилват звуците, но и да ги филтрират.

Двуседмична програма за подобряване на слуха.

Движение за подобряване на слуха
"Санаториална програма" за вашите уши ще подобри слуха и функционирането на вестибуларния апарат. Включва:

• за подобряване на кръвообращението.
• Йога упражнения за развиване на чувство за баланс.

Релаксация за по-добър слух
Физическото и духовно стеснение ни пречи да чуваме добре.

• Освободете стреса и, включително точка.
• Научете се да слушате тишината, за да подобрите възприемането на звуците.

Хранене на слуха

• Подкрепете слуха си с правилния избор на храна, която трябва да е с високо съдържание на витамин В6. Това ще подобри кръвообращението.
• Противодействайте на запушванията в ушите, като избягвате храни с високо съдържание на наситени мастни киселини.

шумоизолация. Федор, на 48 години, страда от главоболие в продължение на много години и. Лекарят не можа да разбере защо. Веднъж лекарят дойде в къщата на Фьодор и чу непрекъснатия шум от натовареното движение по улицата. Лекарят препоръча да се поставят щори на прозорците. След няколко седмици симптомите почти изчезнаха.

Пропуснете, ако започнете да забелязвате, че забравяте някои неща.

Изобретението се отнася до медицината и може да се използва в отоларингологията за лечение на сензоневрална загуба на слуха (загуба на слуха и глухота) на различни етапи. За тази цел са предложени възможности за лечение, които включват компонент, който активира сигналния път на Sonic hedgehog клетка. Като такъв компонент в първата версия на агента се използва витронектин. Освен това, той допълнително съдържа поне един антитуморен агент. Във втория вариант на агента като такъв компонент се използва смес от витронектин и поне един глюкокортикоид. За разлика от първия агент, той допълнително съдържа поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам. ЕФЕКТ: Осигуряване на регенерация на увредените космени клетки на вътрешното ухо, включително тяхната пролиферация, без риск от рак в тялото, по-специално ретинобластом, както и разширяване на методите за използване на агента за лечение на сензоневрална загуба на слуха. 2 п. и 5 з.п. f-ly, 6 ил., 2 pr.

Групата изобретения се отнася до биохимията, а именно до областта на контрола на генната експресия, и може да се използва в отоларингологията като препарати за лечение на сензоневрална загуба на слуха (глухота и загуба на слуха на различни етапи).

За лечение на невросензорна загуба на слуха е известно използването на невротропни комплекси milgamma и milgamma compositum, съдържащи комбинация от синергично действащи невротропни витамини B1, B6 и B12 („Ефективна фармакотерапия. Пулмология и оториноларингология“, 2011, № 4, стр. 2-6).

Подобряването на слуха по време на лечението с тези лекарства се обяснява със стимулирането на естествения механизъм за възстановяване на нервните тъкани, по-специално на спиралния ганглий, но тези лекарства не осигуряват възстановяване на космените клетки на кохлеята.

Известно е използването на невротрофичен фактор от глиална клетъчна линия (GDNF) като част от фармацевтичен състав за превенция на заболявания на вътрешното ухо и/или лечение на космени клетки и спирални ганглийни клетки. Този GDNF протеинов продукт може да се прилага във вътрешното ухо чрез операция или чрез кохлеарен имплант. В допълнение, този продукт може да бъде и капки за уши, масло за втриване или орални лекарства, като таблетки или суспензия (IL 121790 A, A61K 38/18, 08/14/2002).

Същността на описаното изобретение се състои в това, че космените клетки на вътрешното ухо и слуховите неврони в присъствието на GDNF са в състояние да устоят на ефектите на такива ототоксични вещества като цисплатин и неомицин, но остава неизвестно дали възстановяването и пролиферацията на в негово присъствие са възможни и увредени космени клетки. В допълнение, експериментите, описани в патента, са извършени директно с извлечени клетки от убити опитни животни и следователно няма материални доказателства, че това лекарство под формата на лекарство за вътрешна или външна употреба може да бъде ефективно.

Известен метод за лечение на сензоневрална загуба на слуха с глюкокортикостероиди на фона на съдова терапия, при който в случай на внезапна поява на невросензорни нарушения се предписват глюкокортикостероиди, например преднизолон, в съкратен курс за 6-8 дни, като се започне с натоварваща доза с постепенно намаляване (EN 2188642 C1, A61K 31/ 573, 09/10/2002).

Описаният режим на лечение може да се разглежда като патогенетична терапия, която има силен противовъзпалителен ефект, но не е в състояние нито да елиминира причините за заболяването, нито да възстанови увредените клетки на косата. Лек ефект от действителното възстановяване на космените клетки, а не премахването на симптома на загуба на слуха, може да се наблюдава само при хирургическа интервенция и въвеждане на глюкокортикостероиди директно във вътрешното или поне в средното ухо.

Известно е използването на винпоцетин (кавинтон), пентоксифилин, церебролизин, пирацетам (ноотропил) за комплексно лечение на сензоневрална загуба на слуха (http://otolaryngologist.ru/530, 29.05.2014 г.).

Положителният ефект от лечението с тези лекарства обаче е подобряването на кръвоснабдяването на вътрешното ухо, като същевременно се елиминират само симптомите на заболяването.

Известен е метод за генериране на диференцирани космени клетки от вътрешното ухо, който включва инактивиране или намаляване на експресията на Rb гена, достатъчно за растежа на тези клетки. За тази цел е предложено да се използват Rb-свързващи молекули като антисенс олигонуклеотиди, RNAi miRNAs (двойноверижни РНК вируси), вътреклетъчни антитела, E1A аденовируси или SV40 Т антиген. Също така, за тази цел беше предложено да се използват активатори на циклин-зависими кинази, които фосфорилират pRb протеина, или инхибитори на инхибитори на циклин-зависими кинази, например хистон ацетилтрансфераза (HAT). МиРНК молекулата може да бъде базирана на плазмиден шаблон (US 2006024278 A1, A61K 48/00, 02.02.2006).

Този метод включва директно инактивиране на протеина на ретинобластома с помощта на труднодостъпни съединения. Някои от тях могат да донесат непоправима вреда на тялото. Например, известно е, че аденовирусният протеин E1A стимулира апоптозата. Наред с инактивирането на протеина на ретинобластома, който предотвратява появата на рак, има голяма вероятност ускорената апоптоза при тези условия да доведе до бърз растеж на злокачествен тумор на ретината - ретинобластом, и то до такава степен, че приемът всякакви противоракови лекарства може да са безполезни. Използването на хистон ацетилтрансфераза (HAT), която участва в активирането на ДНК транскрипцията, може да доведе до свръхекспресия на някои гени.

Най-близкият аналог е средство за лечение на сензоневрална загуба на слуха, което представлява Shh протеин, смесен с инхибитор на Shh-циклопамин. Този агент е използван в метода за инактивиране на Rb1, описан в /Na Lu, Yan Chen „Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein“, Biochemical and Biophysical Research Communications, том 430, брой 2, 11 януари 2013 г.: колона 1 , параграф 3 на стр. 701/, чрез въвеждането му в колонията от космени клетки. Експериментът включваше следните етапи. Първо, под анестезия, невроепителият на кохлеята на плъхове се отваря на 2-ия постнатален ден, съдовата лента, невроепителият и част от нервните влакна се прехвърлят в чиния с хранителна среда и се добавя неомицин за 24 часа, за да убие космените клетки. След това, през следващите 5 дни, се добавя вещество, което активира сигналния път на Sonic hedgehog клетки - Shh протеин (5 nmol, производител "R&D Systems") и циклопамин (2,5 μmol, производител "Sigma-Aldrich"). За да се определи степента на пролиферация, към средата се добавя бромодеоксиуридин (BrdU) до крайна концентрация от 10 µg/mL. Опитът показва, че този метод провокира пролиферацията на космените клетки.

Според опита може да се предположи, че лечението с Shh протеин (5 nmol, R&D Systems) и циклопамин (2,5 µmol, Sigma-Aldrich) е възможно само по оперативен начин, тъй като ефектът на това лекарство върху космените клетки, за например, когато се приема през устата. В допълнение, инактивирането на Rb1 в прототипа се извършва чрез добавяне на протеина Shh от R&D Systems, който е труден за получаване. Употребата на циклопамин може да доведе до сериозни нарушения. Това съединение нарушава ембрионалното развитие на плода и води до циклопия. В допълнение, той може да инхибира растежа както на базалноклетъчен карцином в кожата, така и на медулабластома в мозъка. Настоящата липса на възможност за отстраняване на тези недостатъци не позволява използването на прототипа на инструмента за лечение на сензоневрална загуба на слуха.

По този начин, след анализ на предшестващото състояние на техниката, можем да заключим, че въпреки значимостта на проблема с невросензорната загуба на слуха, свързана с увреждане или смърт на космени клетки, понастоящем няма ефективно средство за лечение на това заболяване.

Задачата на предложената група изобретения е да разработи агенти за лечение на сензоневрална загуба на слуха, които не съдържат опасно за здравето циклопаминово съединение и се състоят от по-достъпни компоненти от тези, включени в агентите, които директно инактивират Rb (не чрез активиране на сигналният път на клетката Sonic hedgehog).

Техническият резултат от предложената група изобретения е да се осигури регенерация на увредени космени клетки на вътрешното ухо, включително тяхната пролиферация, без риск от рак в тялото, по-специално ретинобластом, както и разширяване на методите за използване на средство за лечение на сензоневрална загуба на слуха.

За постигане на технически резултат се предлага средство за лечение на сензоневрална загуба на слуха, включващо вещество, което активира сигналния път на Sonic hedgehog клетка, докато допълнително съдържа поне един антитуморен агент и веществото, което активира Sonic hedgehog cell сигнализация пътят е витронектин.

Горният агент може допълнително да съдържа поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам.

За постигане на технически резултат е предложено и лекарство за лечение на сензоневрална загуба на слуха, включващо вещество, което активира сигналния път на клетката Sonic hedgehog, като освен това съдържа поне едно противотуморно средство, поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам, а активаторът на сигналния път на клетката Sonic hedgehog е смес от витронектин и поне един глюкокортикоид.

Горният инструмент може допълнително да съдържа палмитинова киселина.

Горният инструмент може допълнително да съдържа ламинин.

Повечето проблеми със слуха са резултат от увреждане на структурите на вътрешното ухо. Така невросензорната загуба на слуха заема 90% от всички случаи на загуба на слуха и глухота.

Типичните причини за това са: прекомерно излагане на шум, лекарствена токсичност, алергични реакции, естествено стареене и травма на главата. Настъпва увреждане на тънките космени клетки, които изпълняват функцията да преобразуват механичната енергия в електрическа и да предават сигнали към слуховия нерв. Досега се смяташе, че в повечето случаи подобни нарушения са необратими поради липсата на възстановителна функция в космените клетки на бозайниците и единственият начин за компенсиране на сензоневралната глухота е използването на слухови апарати.

Сензоревралното увреждане на слуха възниква поради загуба на чувствителност на спиралния орган на кохлеята на вътрешното ухо или нарушения във функционирането на слуховите нерви. Подобни нарушения могат да доведат до загуба на слуха от всякаква степен – от лека до тежка, та дори до пълна глухота.

В повечето случаи сензоневралната загуба на слуха при хората се причинява от аномалии на космените клетки в кохлеарния орган на Корти. Понякога има сензоневрална загуба на слуха, причинена от нарушения в VIII черепномозъчен нерв (вестибулокохлеарния) или в частите на мозъка, отговорни за слуха. В изключително редки случаи на този вид увреждане на слуха се засягат само слуховите центрове на мозъка (централна загуба на слуха), като в този случай пациентът чува звуци с нормална сила, но тяхното качество е толкова лошо, че не е в състояние да издаде изказване.

Аномалиите на космените клетки могат да бъдат вродени или придобити по време на живота от самия индивид. Те могат да варират от генетични аномалии до наранявания от силен шум и наранявания, дължащи се на инфекциозни заболявания.

Известен факт е, че докато невросензорната загуба на слуха е нелечимо заболяване при бозайниците, клетките на вътрешното ухо при рибите, птиците и влечугите имат способността да се самовъзстановяват. Това предполага наличието в бозайниците на определен ген, който е молекулярен превключвател, който блокира възстановяването на тези клетки и поради това едновременно изпълнява някаква друга функция, необходима за нормалното функциониране на тялото.

Учени от университета в Масачузетс са открили ген, отговорен за тази функция. Дадено му е името Rbl (Charles Q. Choi „Hope for Fixing Gene Defects“, SCIENTIFIC AMERICAN, том 293, номер 6, декември 2005 г., страница 65). Генът Rb1 експресира протеин на ретинобластома (pRb), който предотвратява клетъчния свръхрастеж чрез инхибиране на клетъчния цикъл, докато клетките са готови за делене. Когато клетката е готова за делене, pRb се фосфорилира, става неактивен и позволява на клетъчния цикъл да напредне.

Въз основа на гореизложеното може да се заключи, че навременното инактивиране на гена Rb1 може да осигури възстановяването на кохлеарните космени клетки.

Ретинобластомният протеин в тялото се фосфорилира от определени циклин-зависими кинази и по този начин става неактивен. Потискането на Rb е възможно поради активирането на сигналния път на Sonic hedgehog (Shh), по време на който самият протеин на ретинобластом се фосфорилира и транскрипцията на съответния ген е намалена (Na Lu, Yan Chen „Sonic hedgehog инициира кохлеарни космени клетки регенерация чрез понижаване на регулирането на ретинобластомния протеин", Biochemical and Biophysical Research Communications, том 430, брой 2, 11 януари 2013 г.: 6-7 реда от резюмето на страница 700; колона 1, параграф 2 на страница 701).

При бозайниците генът Shh е член на генната група на таралежите (Hh) - звуков таралеж (Shh), индийски таралеж (Ihh) и пустинен таралеж (Dhh). Секретираните гликопротеини на Hedgehogs действат чрез трансмембранните протеини Patched 1 (Ptc1) и Smoothened (Smo), за да активират вътреклетъчния сигнален път.

Изследователи от изследователския център по невробиология в Испания - Института по невробиология. Сантяго Рамон и Кахал (Institute de Neurobiologia Ramon y Cajal) е първият, който открива връзката между активността на сигналния път на Shh и витронектина.

В /Martinez-Morales JR, Barbas JA, Marti E, Bovolenta P, Edgar D, Rodriguez-Tebar A. „Витронектинът се експресира във вентралната област на невралната тръба и насърчава диференциацията на моторните неврони“. развитие. декември 1997 г.; 124(24): страници 5139-5147/ описва способността на витронектина да стимулира диференциацията на моторните неврони in vitro и in vivo, беше направено заключението, че витронектинът може да действа или като ефектор надолу по веригата в индуцираната от Shh сигнална каскада, или като синергетик фактор, който увеличава индуцираната от Shh диференциация на моторните неврони.

В /Pons S, Marti E. "Sonic hedgehog синергизира с извънклетъчния матричен протеин витронектин, за да индуцира диференциация на гръбначния моторен неврон." развитие. 2000 януари; 127(2): страници 333-342/ е показано, че диференциацията на моторните неврони се засилва от синергичното действие на N-Shh и витронектин и че витронектинът може да е необходим за доставяне на морфогена N-Shh до целевите клетки - диференциране двигателни неврони.

В /Pons S, Trejo JL, Martinez-Morales JR, Marti E. "Vitronectin регулира активността на Sonic hedgehog по време на развитието на малкия мозък чрез CREB фосфорилиране." развитие. 2001 май; 128(9): стр. 1481-1492/ представя резултатите от изследване на развитието на малкия мозък чрез фосфорилиране на транскрипционния фактор CREB. В същото време, както при изследванията на диференциацията на моторните неврони, беше разкрито взаимодействие между Shh и компонентите на извънклетъчния матрикс - гликопротеини (предимно витронектин), който регулира следващите етапи в развитието на гранулираните клетки - малки неврони, намиращи се в гранулирания слой на малкия мозък. Така беше установено, че диференциацията на гранулирани клетки се регулира от индуцирано от витронектин CREB фосфорилиране, чието критично събитие завършва с Shh-медиирана пролиферация на тези клетки и прави възможно прилагането на програма за клетъчна диференциация в този тип.

Учени от катедрата по клетъчна биология от университета Вандербилт (САЩ) по време на проучвания за индуциране на моторни неврони чрез промяна на активността на сигналния път на Shh също разкриха повишаване на активността на Shh под въздействието на витронектин, улеснявайки транспортирането на Shh до целевите клетки (статия Litingtung Y, Chiang C. „Контрол на активността на Shh и сигнализирането в невралната тръба.“ Динамика на развитието. 2000 октомври; 219(2): страници 143-154).

По отношение на механизма на активиране на сигналния път на Shh, известно е, че той може да бъде задействан от повишаване на ядрената концентрация на Gli (Gli2 и Gli3). Секретираните Hh гликопротеини (Shh, Ihh и Dhh) действат чрез трансмембранните протеини Patched 1 (Ptc1) и Smoothened (Smo), за да активират сложен вътреклетъчен сигнален път. Hh свързва протеина Ptcl с 12 трансмембранни домена, което определя основната репресия, която Ptcl упражнява върху протеина Smo със 7 трансмембранни домена, който е хомолог на G-протеин-свързани рецептори. Вътре в клетката мултимолекулен комплекс, включващ Costal2 (Cos2), Fused (Fu) и супресор на Fused (Su(Fu)), реагира на активирането на Smo по начин, който променя активността на Gli протеините (Stecca B, Ruiz i Алтаба А. „Терапевтичният потенциал на модулаторите на сигналния път на Hedgehog-Gli". J Biol. 2002, 6 ноември; 1(2): страници 9).

По този начин може да се приеме, че витронектинът активира Shh сигналния път чрез увеличаване на количеството Gli транскрипционни фактори в негово присъствие.

В процеса на фибронолиза витронектинът е в състояние да регулира активирането на плазминогена. Той има две места на свързване за инхибитора на плазминогенния активатор-1 (PAI-1). Основният е разположен на N-края - соматомедин В-подобният домен. С него витронектинът свързва и стабилизира молекулата PAI-1 (Zhou A, Huntington JA, Pannu NS, Carrell RW, Read RJ „How vitronectin binds PAI-1 to modulate fibrinolysis and cell migration“. Nat Struct Biol. 2003 Jul; 10 (7): страници 541-544).

Вероятно витронектинът свързва някои хомеопротеини, които потискат Gli по подобен начин.

Въз основа на известните проучвания, описани по-горе, относно ефекта на витронектин върху активирането на сигналния път на Shh в моторните неврони и гранулираните клетки, се предполага, че подобен ефект може да възникне по отношение на космените клетки.

Добре известен факт е, че въпреки факта, че всяка клетка на тялото има един и същ геном, всички те са клетки от различен тип и имат индивидуални характеристики, по-специално изразяващи се в една или друга реакция към едни и същи условия и вещества.

За да се изследва реакцията на космените клетки на вътрешното ухо към витронектин, да се проучат факторите, които биха могли да причинят тяхното поведение под въздействието на витронектин, а не поведението на моторните неврони и гранулираните клетки, морфологичните промени в специфичните космени клетки под неговото влияние е изследвано. По този начин сканиращата електронна и конфокалната микроскопия демонстрират възстановяване, по-специално пролиферация, на този тип клетки.

Количествен анализ на генната експресия беше извършен чрез високопроизводително паралелно РНК секвениране (RNA-Seq), използвайки програмата Scripture, което показа, че витронектинът потенцира активността на гена Shh в културата на космени клетки на кохлеята на сив плъх. Бързото инактивиране на Rb1 в този случай се обяснява със свойството на витронектина да дифундира протеина Shh и да го доставя до целевите клетки, което е значително предимство пред използването на вещество под формата на смес от протеина Shh и Shh инхибитор циклопамин (прототип), по отношение на който това свойство се използва като инактивиращо Rb1 вещество, не е намерен.

Изследванията, описани по-горе, предполагат, че активността на гена Shh се повишава в присъствието на витронектин не само в моторните неврони и гранулираните клетки, но също така и в космените клетки на кохлеята.

По този начин, като се вземат предвид описаните по-рано научни публикации на Масачузетския технологичен институт и Шанхайския институт за изследване на слуха относно възможността за възстановяване на кохлеарните космени клетки чрез активиране на сигналния път Sonic hedgehog (Shh), може да се заключи, че предложените агенти осигуряват регенериране на клетките на ухото, кохлеа чрез активиране на този сигнален път.

Фармакологично ефективните дози витронектин зависят от степента на сензоневрална загуба на слуха, индивидуалните характеристики на пациента (вид, възраст, тегло и др.), Лекарствената форма на лекарството (капки, крем, масло, балсам, таблетки, разтвор, суспензия, прах) и начина на приложение. Така например, по време на хирургично лечение на малко животно, необходимите дози могат да бъдат по-малко от 0,001 g/ml от клетъчната среда, а когато лекарството се приема перорално от възрастен човек, те трябва да бъдат с няколко порядъка по-високи .

Витронектинът е гликопротеин, присъстващ в големи количества в животински серум и в кръвни съсиреци. Също така е част от извънклетъчния матрикс на много тъкани.

Разтворът на витронектин може да бъде изолиран от човешки серум с помощта на моноклонални антитела.

Известен прост начин за получаване на витронектин от човешка плазма чрез афинитетна хроматография с хепарин. Серумът се получава от плазмата чрез добавяне на калций и след това центрофугиране. Хепаринът, който свързва активния витронектин, може да се активира в човешки серум с урея. Активираният витронектин се свързва специфично с хепарин-сефароза в урея и се елуира в 0,5 mol/l разтвор на NaCl, съдържащ 8 mol/l урея. В резултат на тази процедура е възможно да се получат 3-6 mg чист витронектин от 100 ml човешка плазма в рамките на 2 дни (Takemi Yatohgo, Masako Izumi и др. „Ново пречистване на витронектин от човешка плазма чрез хепарин афинитетна хроматография“ , Клетъчна структура и функция, том 13, страници 281-292, 1988).

По подобен начин е възможно да се получи витронектин от говежди серум (I.G. Shvykova, T.A. Muranova "Протеолитична специфичност на плазмина във връзка с адхезивни протеини", Bioorganic Chemistry, том 26, № 5, страница 353, колона 1, параграф 3, 2000 г.) .

За да се потенцира активността на Shh протеина, е необходимо да се активира неговият N-край. Това може да се постигне с палмитинова киселина, която чрез модифициране на N-края потенцира функцията на Shh протеина, като същевременно ограничава неговата дифузия.

Въпреки това, ограничаването на дифузията на протеина Shh от палмитинова киселина се компенсира от присъствието на витронектин, който, напротив, може да дифузира този протеин.

Тъй като палмитиновата киселина може да влезе в човешкото тяло заедно с някои хранителни продукти (сметана, заквасена сметана, масло, сирене и др.), Не е необходимо нейното присъствие във версиите на предложеното средство, предназначено за орална употреба.

В същото време трябва да се отбележи, че в отсъствието на витронектин, палмитинова киселина не е в състояние да действа върху космените клетки на вътрешното ухо, поради това, че чрез модифициране на N-края на протеина Shh, тя ограничава неговия дифузия и по този начин протеинът не достига целевите клетки (космените клетки) . В допълнение, наличието на витронектин е задължително, както беше споменато по-горе, поради способността да потенцира активността на Shh гена и да провокира активирането на Shh сигналния път.

Също така си струва да се отбележи, че наред с това присъстващият в кръвта витронектин не е достатъчен, за да задейства сигналния път на Shh и по всяка вероятност, с оглед на това, клетките на косата не могат да бъдат възстановени само под действието на витронектин, присъстващ в кръвта и постъпващи в организма с храната.палмитинова киселина.

Изследвания на мишки с дефицит на витамин D3 ядрен хормонален рецептор (VDR), както и миши кожни експланти, показват, че слабата експресия на VDR гена води до повишена експресия на няколко компонента на Hh пътя, като Shh, Smo, Gli1, Gli2 и Ptch1.

От /Медицинска имунология, том 16, № 6, страница 504, 1-ва колона, 2-ри параграф, 2014/ е известно, че асоциираният VDR потиска транскрипцията на VDR гена чрез механизъм на отрицателна обратна връзка.

Експресията на VDR във всички тъкани може да бъде намалена от глюкокортикоиди, основните представители на които са вещества като флутиказон фуроат, мометазон, мометазон фуроат, метилпреднизолон ацепонат, триамцинолон, хидрокортизон, бетаметазон, будезонид, алклометазон, беклометазон, дексаметазон, метилпреднизолон, метил преднизолон ацепонат, флунизолид, клобетазол, хидрокортизон, кортизон, флуметазон, преднизолон, флуоцинолон ацетонид.

По този начин глюкокортикоидите, смесени с витронектин, могат да образуват вещество, което активира клетъчния сигнален път на Sonic hedgehog в по-голяма степен, отколкото само витронектин, което ще увеличи ефективността на агента. Въпреки това, използването само на глюкокортикоиди не дава видим терапевтичен резултат по отношение на космените клетки и е по-скоро патогенетична терапия, която има силен противовъзпалителен ефект. Това може да се дължи на недостатъчно познаване на условията за повишаване на степента на инактивиране на Rb1 от глюкокортикоиди чрез VDR механизма, липсата на тяхната дифузия в увредени космени клетки и недостатъчна дифузия на Shh протеина към целевите клетки. В същото време лек ефект от действителното възстановяване на космените клетки, а не само премахването на симптома на загуба на слуха, се наблюдава само при хирургическа интервенция и въвеждане на глюкокортикоиди директно във вътрешното или поне в средното ухо . Тези обстоятелства понастоящем не позволяват използването на глюкокортикоиди като самостоятелно ефективно лечение на сензоневрална загуба на слуха.

Ефективността на предложения инструмент също така увеличава наличието на палмитинова киселина.

За по-нататъшно повишаване на неговата ефективност чрез стимулиране на активирането на сигналния път на Shh в клетките на косата е необходимо да се подобри микроциркулацията в кохлеята, което може да бъде осигурено от наличието на такива налични и ефективни компоненти в лекарството като винпоцетин, пентоксифилин, и пирацетам.

Извършва се от предложения инструмент чрез активиране на сигналния път Shh инактивиране на Rb, което предотвратява появата на рак, създава вероятност от злокачествен тумор, по-специално ретинобластом. За да се избегне това, към състава на средството трябва да се добави поне едно противотуморно средство (алкилиращи антинеопластични лекарства, антиметаболити, растителни алкалоиди, противотуморни антибиотици, платинови съединения - цисплатин, оксоплатин, карбоплатин, оксалиплатин, циклоплатам, противотуморни хормонални лекарства). Можете да въведете съединения като мелфалан, хлорамбуцил, бендамустин, проспидин, спиробромин, маномустин, преднимустин, естрамустин, новембихин, пафенцил, лофенал, циклофосфамид, ифосфамид, мафосфамид, трофосфамид, азацитидин, капецитабин, кармофур, цитарабин, децитабин, флоксуридин, 5 - флуороурацил.

Трябва да се отбележи, че инактивирането на Rb не води до ретинобластом във всички случаи. Разбира се, повечето лекарствени форми на предложените лекарства, включително всички тези, предназначени за перорално приложение, трябва да съдържат противотуморен агент, който предотвратява развитието на ретинобластом, но дозираните форми, например за хирургично лечение, когато няма ефект на агента върху ретината на окото, като противотуморен агент може да съдържа такива вещества като алкалоиди (елиптицин, винбластин, винкристин) от естествен произход или антитуморни антибиотици и в много по-ниски концентрации. В същото време наличието на антитуморен агент, който предотвратява развитието на ретинобластом, все още е за предпочитане, тъй като във всеки случай появата на всеки рак при активиране на сигналния път на Shh ще бъде свързано с инактивирането на гена Rb1. Въпреки това, в зависимост от метода на лечение и индивидуалните характеристики на пациента (предразположение към рак), като противотуморен агент могат да се използват напълно различни вещества.

При умерени дози витронектин и кратки курсове на лечение, безвредни растителни алкалоиди като елиптицин се препоръчват като противотуморни средства.

Към продукта може да се добави и ламинин, който насърчава клетъчната пролиферация.

Предложеният инструмент може да бъде въведен във вътрешното ухо чрез операция или чрез кохлеарен имплант. Може да бъде и капки за уши, крем, масло или балсам за втриване или лекарство за перорална употреба (таблетки, разтвор, суспензия, прах).

При тежки стадии на сензоневрална загуба на слуха, независимо от вида на приложение (перорално, външно, чрез операция), продуктът трябва да съдържа смес от витронектин и поне един глюкокортикоид, противотуморно средство(а) и поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам.

Необходимостта от добавяне на палмитинова киселина към продукта зависи от диетата на пациента, тъй като, от една страна, не е желателно да се допуска излишък от тази киселина в организма, а от друга страна, нейното присъствие е желателно за активиране на Шшш сигнален път.

Постигането на желания резултат с помощта на предложените средства е показано на фиг. 1-6.

На фиг. 1 показва сравнение на компютърни аудиограми, направени с автоматичен аудиометър АА-02, слуховата система на куче преди курса на лечение и 3 дни след края на курса на лечение.

Крива 1-AD е аудиограма на дясното ухо на куче със сензорна загуба на слуха, направена преди лечението.

Крива 1-AS е аудиограма на лявото ухо на куче със сензорна загуба на слуха, направена преди лечението.

Кривата 2-AD е аудиограма на дясното ухо на куче, направена след лечението от Пример 1.

Крива 2-AS е аудиограма на лявото ухо на куче, взета след лечението от Пример 1.

На фиг. Фигура 2 сравнява компютърни аудиограми, направени с автоматизиран аудиометър AA-02 на човешката слухова система преди курса на лечение и 3 дни след края на курса на лечение.

Крива 3-AD е аудиограма на дясното ухо на човек, страдащ от сензоневрална глухота, направена преди лечението.

Крива 3-AS е аудиограма на лявото ухо на човек, страдащ от сензоневрална глухота, направена преди лечението.

Крива 4-AD е аудиограма на дясното ухо на човек, направена след курса на лечение съгласно пример 2.

Крива 4-AS е аудиограма на лявото ухо на човек, направена след курса на лечение съгласно пример 2.

На фиг. Фигура 3 показва снимка на невроепител на кохлеята на сив плъх с изразена сензоневрална загуба на слуха, направена с помощта на сканиращ електронен микроскоп.

На фиг. 4 показва снимка на невроепител на кохлеята на сив плъх след 5-дневно излагане на витронектин-съдържащ агент, направена с помощта на сканиращ електронен микроскоп.

На фиг. Фигура 5 показва снимка на невроепител на кохлеята на сив плъх с изразена сензоневрална загуба на слуха, направена чрез конфокална микроскопия след добавяне на имунохистохимичния маркер бромодеоксиуридин.

Фигура 6 показва снимка на невроепител на кохлеята на сив плъх след 5 дни излагане на витронектин-съдържащ агент, направен чрез конфокална микроскопия след добавяне на имунохистохимичния маркер бромодеоксиуридин.

Примери за изпълнение

Витронектин се изолира от серум, получен от размразена говежда кръвна плазма чрез афинитетна хроматография с хепарин-сефараза.

Приготвят се 420 ml воден разтвор на предложеното средство чрез смесване на компонентите в следното съотношение, mg/100 ml разтвор:

Приготвеният разтвор е тестван върху куче (тегло 43 kg, възраст 9 години), страдащо от умерена сензоневрална загуба на слуха.

Три пъти на ден й давали малко парче месо, напоено с 10 ml разтвор на предложеното средство.

Продължителността на курса на лечение е 14 дни.

На фиг. Фигура 1 показва сравнение на компютърни аудиограми, направени с автоматизиран аудиометър AA-02 на слуховата система на кучето преди лечението (крива 1-AD - за дясното ухо, крива 1-AS - за лявото ухо) и 3 дни след края на лечение (крива 2- AD - за дясно ухо, крива 2-AS - за ляво ухо).

Неправилността на кривите 1-AD и 1-AS, както и ниският праг на чуване, който показват, показват тежка сензоневрална загуба на слуха.

Заедно с това кривите 2-AD и 2-AS са почти праволинейни и отразяват нормалния праг на чуване.

Тези данни ни позволяват да заключим, че слухът се възстановява благодарение на лечението на сензорната загуба на слуха.

Ядрено-магнитен резонанс и ултразвук, проведени 1 и 3 месеца след завършване на курса на лечение, не разкриват признаци на ретинобластом, както и други видове рак.

Тъй като експериментът съгласно пример 1 включва само регенерация на космени клетки под действието на предложеното лекарство, за да се изясни също възможността за тяхната пролиферация, беше проведено клинично изпитване върху възрастен човек (тегло 71 kg, възраст 64 години), страдащ от невросензорна глухота.

Пациентът е носил известно време кохлеарен имплант, който предава звукова информация под формата на електрически сигнали директно към слуховия нерв, заобикаляйки увредени/мъртви кохлеарни космени клетки, но това впоследствие води до възпалителни процеси на местата, където е минал имплантът . Тъй като носенето му позволява на пациента да чува, може да се заключи, че невросензорната загуба на слуха е свързана именно със смъртта на клетките на кохлеарните косми, а тяхната смърт от своя страна показва невъзможността за възстановяване на слуха само поради регенерацията на увредените, но не мъртви клетки.

За лечение на заболяването, след изолиране на витронектин от серум, получен от размразена кръвна плазма от говеда, се приготвя прахова смес от компонентите на предложеното средство с фармацевтично приемлив носител чрез афинитетна хроматография с хепарин-сефараза. От прахообразната смес са направени 84 таблетки с тегло 1,5 g всяка.

Една таблетка съдържа, mg:

Пациентът приема една таблетка три пъти на ден. Продължителността на курса на лечение е 28 дни.

На фиг. Фигура 2 показва сравнение на компютърни аудиограми, направени с автоматизиран аудиометър AA-02, слуховата система на пациента преди лечението (крива 3-AD - за дясно ухо, крива 3-AS - за ляво ухо) и 3 дни след края на лечение (крива 4- AD - за дясно ухо, крива 4-AS - за ляво ухо).

Неправилността на кривите 3-AD и 3-AS, както и ниският праг на чуване в звуковия честотен диапазон от 125-4000 Hz и почти пълната глухота в диапазона 4000-8000 Hz показват изразена сензоневрална. глухота при пациента поради увреждане на космените клетки.

Заедно с това кривите 4-AD и 4-AS са почти праволинейни и отразяват нормалния праг на чуване.

Тези данни ни позволяват да заключим, че слухът се възстановява благодарение на лечението на сензоневралната глухота.

Ако невросензорната глухота се състои в увреждане на космените клетки на кохлеята на пациента, както се вижда от положителния ефект от носенето на кохлеарен имплант от пациента, това също потвърждава тяхното разпространение, тъй като в противен случай е невъзможно да се възстанови слуха след пълна сензорна глухота .

Ядрено-магнитен резонанс и ултразвук, проведени 1 и 3 месеца след завършване на курса на лечение, не разкриват признаци на ретинобластом, както и други видове рак. Състоянието на пациента беше нормално.

Тъй като възстановяващият ефект на витронектин върху космените клетки беше доказан преди това и естеството на аудиограмите на пациентите преди и след лечението, описано в примери 1 и 2, показва точно лечението на сензоневралната загуба на слуха, следва, че предложените лекарства най-вероятно лекуват в слуховата система именно космени клетки. Това се доказва и от положителния ефект от носенето на кохлеарен имплант при пациент, лекуван съгласно пример 2. В допълнение, в повечето случаи сензоневралната загуба на слуха е свързана с увреждане на този конкретен тип клетки. В същото време, за да се провери надеждно това и в същото време да се разбере истинската причина за подобряването на слуха, беше необходимо да се проучат техните морфологични промени.

За целта са изследвани космените клетки на кохлеята на мъртъв сив плъх, който преди това е живял на строителна площадка на места, където шумът от ремонтни дейности е дълъг и често надвишава 120 dB.

Първо беше отворено вътрешното ухо. Съдова лента (капилярна мрежа) се отстранява от кортиевия орган заедно с разположения върху него невроепител и се поставя в хранителна среда.

След отстраняване на текториалната мембрана структурата на колонията от космени клетки е изследвана с помощта на сканиращ електронен микроскоп. На фиг. 3 показва, че повечето от тях са починали или са били в критично състояние, стереоцилиите им са били силно увредени. Етиологията на това заболяване е ясна: продължителният престой на места, където шумът надвишава допустимите норми, много често води до невросензорна загуба на слуха.

За да се тестват клетъчни колонии за пролиферация, към тяхната среда се добавя бромодеоксиуридин до концентрация от 0,00002 g/ml на единица обем от клетъчната среда, след което те се изследват с помощта на Nikon A1+/A1R+ конфокален микроскоп. Не са наблюдавани признаци на пролиферация на космени клетки (ФИГ. 5).

Беше приготвена водна суспензия за лечение на сензоневрална загуба на слуха, съдържаща g/ml:

Тази суспензия се добавя към клетъчната колония в продължение на 5 дни на всеки 12 часа в количество от 0.001-0.0015 g/ml от клетъчната среда.

На фиг. 4 показва, че след този период много клетки се възстановиха, появиха се нови, стереоцилиите им бяха пълни.

След добавяне на 0.00002 g/ml бромодезоксиуридин към клетъчната среда, колонията се изследва с помощта на Nikon A1+/A1R+ конфокален микроскоп. Имунохистохимично оцветяване на отделни участъци от невроепителия, показано на фиг. 6 ясно показва наличието на пролифериращи клетки.

Трябва да се отбележи, че двадесетдневно наблюдение не разкрива признаци на канцерогенеза в невроепителия, както се вижда от липсата на клетъчна атипия и в резултат на това клетъчна дисплазия. Отклонения от нормалната структура на целия тъканен комплекс през посочения период не се наблюдават.

По този начин за първи път беше установено, че витронектинът или неговата смес с един или повече глюкокортикоиди прави възможно активирането на сигналния път на Shh специално в космените клетки на вътрешното ухо и по този начин ги регенерира, по-специално чрез активиране на процеса на тяхната пролиферация , докато поради улеснената си дифузия не само с хирургическа интервенция и директно въздействие върху тях, както в прототипа, но и по други (неоперативни) начини, което значително разширява методите за използване на предлаганите инструменти. Способността на витронектина също така да дифузира протеина Shh и да го доставя до целевите клетки осигурява забележим ефект на възстановяване на клетките на косата, за разлика от употребата на глюкокортикоиди, при които тази способност не е открита. Тези факти ни позволяват да заключим, че предложените изобретения отговарят на условието за патентоспособност „изобретателско ниво“.

Предложените лекарства са първото и понастоящем единственото ефективно лечение на сензоневрална загуба на слуха, свързана с увреждане на космените клетки. Преди тяхното развитие в медицината, фактът, че „клетките на човешкия косъм не могат да бъдат възстановени по никакъв начин“ беше широко известен (статия / C. Lieberman „Латентна загуба на слуха“. В света на науката. 2015 октомври; № 10: страница 59, колона 2, параграф 3 /; статия /Edge AS, Chen ZY (2008), „Регенерация на космените клетки“, Current Opinion in Neurobiology 18 (4): страници 377-382/; , 04/05/2009).

Компонентите за приготвяне на различни варианти на предложените средства са лесно достъпни, а за труднодостъпния витронектин, както беше споменато по-горе, има няколко добре известни и прости метода за получаване.

По-нататъшното развитие на областта на контрола на генната експресия ще отвори нови възможности за възстановяване на организма. В допълнение към гена Rbl има и много други гени, които играят двойна роля: както тяхната експресия, така и тяхното потискане за определени части и функции на тялото играят положителна роля и в същото време за други части и функции - отрицателна един. По аналогия с това как компетентното потискане на гена Rb1 може да допринесе за възстановяването на клетките на косата и в същото време да не провокира образуването на злокачествени тумори, по същия начин всичко останало може да бъде възстановено в жив организъм, включително зрение, чувствителност, движение, храносмилателна система, мозък, зъби. В допълнение, чрез контролиране на активността на гените е възможно дори да се възстановят изгубени крайници и органи, но тази област практически не се изучава. За да се изясни този въпрос, изследването на генофонда на влечуги, птици и риби, в които освен космените клетки на вътрешното ухо могат да бъдат възстановени и крайниците, зъбите и зрението, и следователно има предположение, че тези фактори са осигурили на някои видове динозаври много дълъг живот.

Един от най-важните аспекти на тази област е също задълбочено изследване на всички функции на определен ген и протеините, експресирани от него, тъй като, както беше отбелязано по-горе, активирането или потискането на определен ген, за да се възстанови една функция на тялото може да доведе до необратими и разрушителни последици, свързани с промяна или спиране на други телесни функции.

1. Средство за лечение на сензоневрална загуба на слуха, включващо вещество, което активира сигналния път на Sonic hedgehog клетка, характеризиращо се с това, че допълнително съдържа най-малко един антитуморен агент и субстанцията, която активира Sonic hedgehog клетъчния сигнален път, е витронектин.

2. Средство съгласно претенция 1, характеризиращо се с това, че допълнително съдържа поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам.

3. Средство съгласно претенция 1 или 2, характеризиращо се с това, че съдържа допълнително ламинин.

4. Средство съгласно претенция 1, характеризиращо се с това, че съдържа допълнително палмитинова киселина.

5. Средство за лечение на сензоневрална загуба на слуха, включващо вещество, което активира сигналния път на Sonic hedgehog клетка, характеризиращо се с това, че допълнително съдържа поне едно противотуморно средство, поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам , и вещество, което активира клетъчния сигнален път Sonic hedgehog е смес от витронектин и поне един глюкокортикоид.

6. Средство съгласно претенция 5, характеризиращо се с това, че съдържа допълнително палмитинова киселина.

7. Средство съгласно претенция 5 или 6, характеризиращо се с това, че съдържа допълнително ламинин.

Групата изобретения се отнася до лечението и/или превенцията на вестибуларни разстройства. Предложено е използването на селективен Н4-хистаминов рецепторен антагонист, избран от групата, състояща се от 1-[(5-хлоро-1Н-бензимидазол-2-ил)карбонил]-4-метилпиперазин, 1-[(5-хлоро-1Н -индол-2-ил)карбонил]-4-метилпиперазин, 4-((3R-)-3-аминопиролидин-1-ил)-6,7-дихидро-5Н-бензоциклохептапиримидин-2-иламин или цис-4-( пиперазин-1-ил)-5,6,7а,8,9,10,11,11а-октахидробензофурохиназолин-2-амин за лечение и/или профилактика на вестибуларни разстройства и състав за същата цел, включващ тези съединения.

Изобретението се отнася до медицината, а именно до оториноларингологията, и може да се използва за лечение на ексудативен среден отит. За това се извършва фармакопунктурен ефект върху телесните точки: IG4 (wang-gu), IG17 (tian-rong), VB2 (tin-hui), VB8 (shuai-gu), VB10 (fu-bai), VB11 ( tou-qiao-yin), VB12(wan-gu), T14(da-zhui), T20(bai-hui), T22(xin-hui), GI4(he-gu), E36(zu-san-li) , TR20(jiao -sun), TR21(er-men).

Изобретението се отнася до медицината, а именно до акушерството и гинекологията, и може да се използва като част от предимплантационна подготовка на ендометриума за IVF програма.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, по-специално до метод за увеличаване на периода от време преди рецидив на тумора и може да се използва в медицината. Неурегулинови антагонисти, които са анти-NRG1 антитяло, siRNA или shRNA, насочени към NRG1, или имуноадхезин към NRG1, се приготвят за приложение на пациент, лекуван преди това с терапия за рак, в комбинация с терапевтичен агент, избран от паклитаксел, цисплатин или комбинация от тях за забавяне на времето до рецидив на тумора или предотвратяване на развитието на резистентност на раковите клетки към лечение с терапевтичен агент.

Изобретението се отнася до медицината, а именно до пулмологията, и може да се използва за лечение на пациенти с хронична обструктивна белодробна болест, усложнена от анемия.

Изобретението се отнася до областта на биохимията, биотехнологиите и генното инженерство, по-специално до лекарство за лечение на чернодробна фиброза на базата на смес от два невирусни плазмидни конструкта. Първият невирусен плазмиден конструкт е pC4W-HGFopt и съдържа гена, кодиращ човешки хепатоцитен растежен фактор. Вторият е pVax1-UPAopt и съдържа гена, кодиращ човешката урокиназа. В посоченото лекарство плазмидни конструкции се съдържат в следните концентрации: pC4W-HGFopt - от 0,5 до 0,7 mg/ml; pVax1-UPAopt - от 0,3 до 0,5 mg/ml, с обща концентрация на ДНК 1±0,01 mg/ml. Настоящото изобретение разкрива метод за производство на споменатото лекарство и метод за лечение на чернодробна фиброза, като се използва споменатото лекарство във фармацевтично приемливо количество. Настоящото изобретение осигурява лекарство за лечение на чернодробна фиброза, което има подобрена ефикасност, е безопасно и опростено за получаване. 3 п. и 9 з.п. f-ly, 28 ill., 4 tab., 9 pr.

Група изобретения се отнасят до медицината и могат да бъдат използвани в отоларингологията за лечение на сензоневрална загуба на слуха на различни етапи. За тази цел са предложени възможности за лечение, които включват компонент, който активира сигналния път на Sonic hedgehog клетка. Като такъв компонент в първата версия на агента се използва витронектин. Освен това, той допълнително съдържа поне един антитуморен агент. Във втория вариант на агента като такъв компонент се използва смес от витронектин и поне един глюкокортикоид. За разлика от първия агент, той допълнително съдържа поне едно вещество, избрано от групата: винпоцетин, пентоксифилин и пирацетам. ЕФЕКТ: Осигуряване на регенерация на увредените космени клетки на вътрешното ухо, включително тяхната пролиферация, без риск от рак в тялото, по-специално ретинобластом, както и разширяване на методите за използване на агента за лечение на сензоневрална загуба на слуха. 2 п. и 5 з.п. f-ly, 6 ил., 2 pr.

Вътрешното ухо се състои от костен лабиринти намиращи се в него мембранен лабиринт, в които има рецепторни клетки - космати сетивни епителни клетки на органа на слуха и равновесието. Те се намират в определени области на мембранния лабиринт: слухови рецепторни клетки - в спиралния орган на кохлеята и рецепторни клетки на органа на равновесието - в елиптичните и сферичните торбички и ампулните гребени на полуокръжните канали.

развитие. В човешкия ембрион органът на слуха и равновесието са положени заедно, от ектодермата. От ектодермата се образува удебеляване - слухов плакод, който скоро се превръща в слухова ямкаи след това в слухов мехури се откъсва от ектодермата и се потапя в подлежащия мезенхим. Слуховият мехур е облицован отвътре с многоредов епител и скоро се разделя от стеснение на 2 части - от едната част се образува сферична торбичка - сакулус и се полага кохлеарен мембранен лабиринт (т.е. слухов апарат). , а от другата част - елипсовидна торбичка - утрикулус с полукръгли канали и техните ампули (т.е. органът на равновесието). В стратифицирания епител на мембранозния лабиринт клетките се диференцират в рецепторни сензорни епителни клетки и поддържащи клетки. Епителът на Евстахиевата тръба, свързващ средното ухо с фаринкса, и епителът на средното ухо се развиват от епитела на 1-ви хрилен джоб. Малко по-късно се появяват процесите на осификация и образуването на костния лабиринт на кохлеята и полукръглите канали.

Структурата на органа на слуха (вътрешното ухо)

Структурата на мембранозния канал на кохлеята и спиралния орган (схема).

1 - мембранен канал на кохлеята; 2 - вестибуларна стълба; 3 - барабанни стълби; 4 - спирална костна плоча; 5 - спирален възел; 6 - спираловиден гребен; 7 - дендрити на нервните клетки; 8 - вестибуларна мембрана; 9 - базиларна мембрана; 10 - спирален лигамент; 11 - епителна обвивка 6 и роб друга стълба; 12 - съдова лента; 13 - кръвоносни съдове; 14 - капак; 15 - външни сетивни епителни клетки; 16 - вътрешни сензорни епителни клетки; 17 - вътрешен поддържащ епителиит; 18 - външен поддържащ епителиит; 19 - стълбови клетки; 20 - тунел.

Структурата на органа на слуха (вътрешното ухо). Вътре се намира рецепторната част на слуховия орган мембранен лабиринт, разположен на свой ред в костния лабиринт, имащ формата на кохлея - костна тръба, спирално усукана на 2,5 оборота. По цялата дължина на костната кохлея минава мембранен лабиринт. На напречен разрез лабиринтът на костната кохлея има заоблена форма, а напречният лабиринт има триъгълна форма. Стените на мембранния лабиринт в напречно сечение се образуват:

супермедиална стена- образован вестибуларна мембрана (8). Представлява тънкофибриларна съединителнотъканна пластинка, покрита с еднослоен плосък епител, обърнат към ендолимфата, и ендотелиум, обърнат към перилимфата.

външна стена- образован съдова лента (12)лежа на спирална връзка (10). Съдовата лента е многоредов епител, който, за разлика от всички епители на тялото, има свои собствени кръвоносни съдове; този епител отделя ендолимфа, която изпълва мембранния лабиринт.

Долна стена, основа на триъгълника - базиларна мембрана (ламина) (9), се състои от отделни опънати струни (фибриларни влакна). Дължината на струните се увеличава в посока от основата на кохлеята към върха. Всяка струна е в състояние да резонира при строго определена честота на вибрация - струните по-близо до основата на кохлеята (по-късите струни) резонират при по-високи честоти на вибрация (до по-високи звуци), струните по-близо до върха на кохлеята - до по-ниски честоти на вибрация (за намаляване на звуците) .

Пространството на костната кохлея над вестибуларната мембрана се нарича вестибуларна стълба (2), под базиларната мембрана - барабанна стълба (3). Вестибуларната и тимпаничната скала са пълни с перилимфа и комуникират една с друга в горната част на кохлеята. В основата на костната кохлея вестибуларната скала завършва с овален отвор, затворен от стремето, а scala tympani завършва с кръгъл отвор, затворен от еластична мембрана.

Спирален орган или орган на Корти - рецепторна част на ухото , разположени върху базиларната мембрана. Състои се от чувствителни поддържащи клетки и покривна мембрана.

1. Сензорни космени епителни клетки - леко удължени клетки със закръглена основа, в апикалния край имат микровили - стереоцилии. Дендритите на 1-ви неврони на слуховия път, чиито тела лежат в дебелината на костния прът - вретеното на костната кохлея в спиралните ганглии, се приближават до основата на сетивните космени клетки и образуват синапси. Сензорните космени епителни клетки се делят на вътрешникрушовидна и на откритопризматичен. Външните космени клетки образуват 3-5 реда, а вътрешните - само 1 ред. Вътрешните космени клетки получават около 90% от цялата инервация. Тунелът на Корти се образува между вътрешните и външните космени клетки. Висящи над микровласинките на сетивните клетки на косата покривна (текториална) мембрана.

2. ПОДДЪРЖАЩИ КЛЕТКИ (ПОДДЪРЖАЩИ КЛЕТКИ)

външни клетъчни стълбове

вътрешни стълбови клетки

външни фалангеални клетки

вътрешни фалангеални клетки

Поддържащи епителни клетки на фалангата- намират се на базиларната мембрана и са опора за космените сетивни клетки, поддържат ги. В тяхната цитоплазма се намират тонофибрили.

3. ПОКРИВАЩА МЕМБРАНА (ТЕКТОРИАЛНА МЕМБРАНА) - желатинообразно образуване, състоящо се от колагенови влакна и аморфно вещество на съединителната тъкан, се отклонява от горната част на удебеляването на периоста на спиралния процес, виси над органа на Корти, върховете на стереоцилиите на космените клетки са потопени в него

1, 2 - външни и вътрешни космени клетки, 3, 4 - външни и вътрешни поддържащи (поддържащи) клетки, 5 - нервни влакна, 6 - базиларна мембрана, 7 - отвори на ретикуларната (мрежеста) мембрана, 8 - спирален лигамент, 9 - костна спирална плоча, 10 - текториална (покривна) мембрана

Хистофизиология на спиралния орган. Звукът, подобно на вибрация на въздуха, вибрира тъпанчето, след това вибрацията през чука, наковалнята се предава на стремето; стремето през овалния прозорец предава вибрации към перилимфата на вестибуларната скала, по протежение на вестибуларната скала вибрацията на върха на костната кохлея преминава в релимфата на scala tympani и се спуска спираловидно надолу и се опира в еластичната мембрана на кръглата дупка. Флуктуациите в релимфата на scala tympani причиняват вибрации в струните на базиларната мембрана; когато базиларната мембрана вибрира, космените сензорни клетки осцилират във вертикална посока и докосват текториалната мембрана с косми. Огъването на микровласинките на космените клетки води до възбуждане на тези клетки, т.е. променя се потенциалната разлика между външната и вътрешната повърхност на цитолемата, която се улавя от нервните окончания на базалната повърхност на космените клетки. В нервните окончания се генерират нервни импулси, които се предават по слуховия път до кортикалните центрове.

Както е определено, звуците се диференцират по честота (високи и ниски звуци). Дължината на струните в базиларната мембрана се променя по протежение на мембранния лабиринт, колкото по-близо до върха на кохлеята, толкова по-дълги са струните. Всяка струна е настроена да резонира на определена честота на вибрация. Ако ниските звуци - дългите струни резонират и вибрират по-близо до върха на кохлеята и съответно клетките, които седят върху тях, се възбуждат. Ако високи звуци резонират с къси струни, разположени по-близо до основата на кохлеята, космените клетки, разположени на тези струни, се възбуждат.

ВЕСТИБУЛАРНА ЧАСТ НА МЕМБАНОЗНИЯ ЛАБИРИНТ - има 2 разширения:

1. Торбичката е сферично разширение.

2. Matochka - разширение на елипсовидната форма.

Тези две разширения са свързани помежду си чрез тънка тръба. Три взаимно перпендикулярни полукръгли канала с разширения са свързани с матката - ампули. По-голямата част от вътрешната повърхност на торбичката, матката и полукръглите канали с ампули е покрита с еднослоен плосък епител. В същото време има участъци с удебелен епител в торбичката, матката и ампулите на полуокръжните канали. Тези области с удебелен епител в торбичката и матката се наричат ​​петна или макули, и в ампули - миди или кристи.

Петна от торбички (макули).

В епитела на макулата се разграничават космати сензорни клетки и поддържащи епителни клетки.

Сетивност на косата клетките са 2 вида - крушовидна и колоновидна. На апикалната повърхност на сетивните клетки на косата има до 80 неподвижни косъма ( стереоцилия) и 1 движеща се мигла ( киноцелия). Стереоцилията и киноцелията са потопени в отолитна мембрана- Това е специална желатинова маса с кристали от калциев карбонат, покриваща удебеления епител на макулата. Базалният край на космените сензорни клетки е вплетен в окончанията на дендритите на 1-ви неврон на вестибуларния анализатор, които лежат в спиралния ганглий. Макулните петна възприемат гравитация (гравитация) и линейни ускорения и вибрации. Под действието на тези сили отолитната мембрана размества и огъва власинките на сетивните клетки, предизвиква възбуждане на власинковите клетки и това се улавя от окончанията на дендритите на 1-ви неврон на вестибуларния анализатор.

Поддържащи епителиоцити , разположени между сетивните, се отличават с тъмни овални ядра. Те имат голям брой митохондрии. На върховете им се откриват множество тънки цитоплазмени микровили.

Ампуларни миди (cristae)

Намира се във всяко ампуларно разширение. Те също така се състоят от космати сензорни и поддържащи клетки. Структурата на тези клетки е подобна на тази в макулата. Миди, покрити отгоре желатинообразен купол(без кристали). Гребените регистрират ъглови ускорения, т.е. въртене на тялото или въртене на главата. Механизмът на задействане е подобен на този на макулите.

Нека сега насочим вниманието си към основната тема на тази тема. Видяхме, че базиларната мембрана осцилира в отговор на звука, влизащ в ухото, докато текториалната мембрана остава относително неподвижна. Стереоцилиите на космените клетки претърпяват механична деформация, като техните реснички са потопени в богата на К+ ендолимфа. Получената деполяризация може да бъде открита с помощта на микроелектродни проводници. Те точно възпроизвеждат честотата на входящия звук. Това е т.нар. микрофонни потенциали. Микрофонните деполяризации (рецепторни потенциали) водят до освобождаване на медиаторни вещества към дендритните окончания на аферентните влакна на кохлеарния нерв.

Така виждаме, че в самата основа на удивително сложното вътрешно ухо на бозайниците има космени клетки; модифицирани, разбира се, но като цяло същите като тези, които за първи път срещнахме в каналите на органа на страничната линия на нашите водни предшественици. По-късно ще видим, че същото може да се каже и за другите сетивни органи. Молекулярните механизми, които са се развили много рано в еволюционната история, продължават да съществуват, но с течение на времето се вграждат в невероятно сложни и сложни органи. Един от еволюционните императиви, които доведоха до развитието на кохлеята на бозайниците, беше необходимостта да се прави разлика между различните честоти на звука. Видяхме, че тази способност присъства в малка степен при рибите, земноводните и влечугите; при птиците и бозайниците претърпява огромно развитие. По-горе споменахме, че честотният диапазон на човешкото ухо е между 20 Hz и 20 kHz (с известно понижаване на горната граница с възрастта). Отбелязахме също, че в обхвата на слуха хората и другите бозайници имат изключително висока способност да различават честотите. Така че следващият въпрос е как се постига? Може да изглежда, че този проблем има просто решение. Защо кохлеарният нерв не би бил фазово синхронен с входящата вълна на звуково налягане? С други думи, защо не сигнализирате 20 Hz тонална честота с 20 Hz нервни импулси и 15 или 20 kHz тонална честота съответно с 15 и 20 kHz? Има две очевидни трудности с такова просто решение. Първо, както отбелязахме в глава МЕМБРАННИ ПОТЕНЦИАЛИ, честотата на импулсите в сетивните нерви обикновено сигнализира интензивността на стимула. Нервната система, разбира се, може да заобиколи тази трудност, но втората трудност е по-непреодолима. Биофизиката на нервните влакна е такава, че всеки импулс е последван от рефрактерен период от около 2 ms. От това следва (както видяхме в глава МЕМБРАННИ ПОТЕНЦИАЛИ), че едно влакно не може да проведе повече от 500 импулса в секунда. Това означава, че за честоти над 500 Hz са необходими други средства за честотна дискриминация. Тук действат два основни механизма. Първо, има доказателства (вижте глава АНАЛИЗ НА ВЕСТИБУЛНАТА И АУДИО ИНФОРМАЦИЯ В МОЗЪКА), че кохлеарните влакна могат да бъдат фазово-синхронни на звукови честоти над 500 Hz, но без да реагират на всеки честотен импулс. Тоест, предполага се, че в долната част на честотния спектър (под 5 kHz), група от кохлеарни нервни влакна се комбинират, за да постигнат импулсна честота, която съответства на тоналната честота в някой слухов център на мозъка. По очевидни причини тази идея се нарича теория за залпа. Вторият, много по-важен механизъм се основава на наблюдението, че ширината на базиларната мембрана се увеличава от кръглия прозорец до хеликотремата (или в случая на птиците, до макулата на охлюва). Ширината на човешката базална мембрана, например, се увеличава от 100 до 500 µm на разстояние 33 mm (фиг. 8.17). Херман фон Хелмхолц предположи още през 19 век, че основната мембрана може да се оприличи на серия от настроени камертони (резонатори). Високочестотните тонове предизвикват максимални смущения в областта на кръглия прозорец, а нискочестотните в хеликотремата. Прецизните изследвания на фон Бекеси и други до голяма степен потвърждават хипотезата на Хелмхолц. Установено е, че вълните със сложна форма се движат по цялата основна мембрана, но мястото, където те достигат максималната си амплитуда, както предполага Хелмхолц, е свързано с тяхната честота. Хипотезата на Хелмхолц по очевидни причини е известна като теория на мястото за честотна дискриминация. За да разграничи честотите, мозъкът трябва само да "погледне" откъде в основната мембрана произхождат влакната, в които активността е максимална.

Всяка космена клеткаима 50-70 малки реснички, наречени стереоцилии, и една голяма реснички, наречена киноцилиум. Киноцилиумът винаги е разположен от едната страна на клетката, а стереоцилиите постепенно се скъсяват към другата страна на клетката. Най-малките нишковидни връзки, почти невидими дори с електронен микроскоп, свързват върха на всеки стереоцилиум със съседния, по-дълъг стереоцилиум и в крайна сметка с киноцилиума. Поради тези връзки, когато стереоцилиумът и киноцилиумът се отклоняват към киноцилиума, нишковидните връзки издърпват стереоцилиите една по една, издърпвайки ги навън от клетъчното тяло.

Това отваря няколкостотин пълни с течност каналив мембраната на нервните клетки около основите на стереоцилиите. В резултат на това голям брой положителни йони могат да преминат през мембраната, които се вливат в клетката от околната ендолимфатична течност, причинявайки деполяризация на рецепторната мембрана. Обратно, отклонението на стереоцилиумния сноп в противоположната посока (от киноцилиума) намалява напрежението на съединителите; това затваря йонните канали, което води до хиперполяризация на рецептора.

В покой, по хода на нерва фибри, идващи от космените клетки, непрекъснато се провеждат импулси с честота приблизително 100 импулса / сек. Когато стереоцилията се отклони към киноцилиума, импулсният поток се увеличава до няколкостотин в секунда; обратно, отклонението на ресничките встрани от киноцилиума намалява потока от импулси, често го изключва напълно. Следователно, когато ориентацията на главата в пространството се промени и тежестта на статоконията отклони ресничките, към мозъка се изпращат подходящи сигнали за регулиране на баланса.

Във всяка макула всяка от космените клеткие ориентирана в определена посока, така че някои от тези клетки се стимулират, когато главата е наклонена напред, други - когато главата е наклонена назад, трети - когато главата е наклонена на една страна и т.н. Следователно за всяка ориентация на главата в гравитационното поле се появява различен „модел“ на възбуждане в нервните влакна, идващи от макулата. Именно тази "рисунка" информира мозъка за ориентацията на главата в пространството.

Полукръгли канали. Трите полукръгли канала във всеки вестибуларен апарат, известни като преден, заден и страничен (хоризонтален) полукръгов канал, са под прав ъгъл един спрямо друг, така че да представляват и трите равнини на пространството. Когато главата е наклонена напред приблизително на 30°, страничните полукръгли канали лежат приблизително хоризонтално спрямо земната повърхност, предните канали във вертикални равнини, които се издават напред и 45° навън, докато задните канали лежат във вертикални равнини, които сочат назад и напред 45° навън.

Всеки полукръгъл каналима разширение в единия си край, което се нарича ампула; както каналите, така и ампулата са пълни с течност, наречена ендолимфа. Токът на тази течност през един от каналите и неговата ампула възбужда сетивния орган на ампулата, както следва. Фигурата показва малка мида, която присъства във всяка ампула, която се нарича ампуларна мида. Отгоре тази мида е покрита с рехава желатинова тъканна маса, наречена купол (купула).

Кога човешка главазапочва да се върти във всяка посока, течността в един или повече полукръгли канали по инерция остава неподвижна, докато самите полукръгли канали се въртят с главата. В този случай течността тече от канала и през ампулата, огъвайки купола в една посока. Завъртането на главата в обратна посока кара купола да се наклони на другата страна.

вътре куполистотици реснички от космени клетки, разположени върху ампулния гребен, са потопени. Киноцилиите на всички космени клетки в купола са ориентирани в една и съща посока и отклонението на купола в тази посока причинява деполяризация на космените клетки, докато отклонението му в обратната посока хиперполяризира клетките. От космените клетки се изпращат подходящи сигнали надолу по вестибуларния нерв, информирайки централната нервна система за промените във въртенето на главата и скоростта на промяна във всяка от трите равнини на пространството.

Върнете се към съдържанието на раздела ""