Retikülositlerin hematokritinin belirlenmesi için ek kan analizi yöntemleri. Retikülositler nasıl sayılır? Retikülosit sayısındaki azalmanın nedenleri, tedavisi

… retikülosit sayısının belirlenmesi kemik iliği fonksiyonunun önemli bir göstergesidir.

retikülositler- bunlar, olgunlaşması kemik iliğinden periferik kana girdikten 24-48 saat sonra meydana gelen ve rejeneratif yeteneği yansıtan, çekirdeklerinin (nükleer olmayan, olgunlaşmamış eritrositler) kaybından sonra normoblastlardan oluşan genç eritrosit formlarıdır. kemik iliği (yani eritropoietik kemik iliği aktivitesi).

RETİKÜLOSİTLERİN MORFOLOJİSİ VE KLİNİK ÖNEMİ

Retikülositler genellikle olgun eritrositlerden daha büyüktür. Retikülositlerin sitoplazması, toplanmış bir ribozom ve mitokondri olan küçük taneler, bireysel filamentler, glomerüller vb. Şeklinde bazofilik bir ağ (retikulum) içerir.

Olgunluk derecesine göre 5 tip retikülosit ayırt edilir.:
(1) bir çekirdeğe (eritronormoblastlar) sahip retikülositler ve bunların granülerliği çekirdeğin etrafında yoğun bir taç şeklinde bulunur;
(2) top veya topak şeklinde granüler ağsı bir maddeye sahip olan retikülositler;
(3) yoğun bir ağ şeklinde bir tanecikliğe sahip olan retikülositler;
(4) tek tek iplikler şeklinde granüler ağsı bir maddeye sahip olan retikülositler;
(5) bireysel granüller içeren retikülositler.

Hatırlamak: normalde, G. A. Alekseev'e göre, retikülositlerin neredeyse %80'i IV - V gruplarına aittir.

Normal olarak, periferik kan %0.2 - 1 oranında retikülosit içerir ("%" - toplam eritrosit sayısından retikülosit içeriği). Bu gösterge, retikülositlerin periferik kana girme olasılığını ve bunların halihazırda periferik kanda (birkaç saat içinde) normun bir varyantı olarak olgun eritrositlere (olgunlaşma) dönüşme olasılığını yansıtır. ( ! ) Normal eritropoezde, çoğu kırmızı kan hücresi kemik iliğinde retikülosit aşamasından geçer.

Periferik kandaki retikülositlerinde bir artış (retikülositoz) kaydedilmiştir.:
hemolitik anemi ile (retikülosit sayısı% 60'a veya daha fazlasına ulaşabilir (özellikle hemolitik krizlerde artar);
akut kan kaybı ile (kan kaybından 3-5 gün sonra, bir retikülosit krizi meydana gelir), retikülositlerde bir artış dahil, bu da gizli kanamadan şüphelenmeyi mümkün kılar (örneğin, gastrointestinal sistemin peptik ülseri olan hastalarda, tifo ateşi) ;
sıtma ile;
polisitemi ile;
demir eksikliği anemisinin demir ile tedavisinde (pernisiyöz aneminin antianemik tedavisinin başlamasından birkaç gün sonra (3-10));
akut oksijen eksikliği ile;
kemik iliğine tümör metastazları ile.

Hatırlanmalı eritrositlerin artan yıkımı durumunda, retikülositlerin sayısındaki yapay bir artış nedeniyle retikülositlerin oranı %50'yi geçebilir (daha önce belirtildiği gibi, retikülositlerin oranı tüm eritrositlerin %'si olarak hesaplanır). Bu gibi durumlarda, aneminin ciddiyetini değerlendirmek için, şu formülle hesaplanan "retiküler indeks" kullanılır: (% retikülosit x hematokrit) / 45 x 1,85, burada 45 normal hematokrit, 1,85 gerekli gün sayısıdır yeni retikülositlerin kana girmesi için eğer dizin< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3 sonra kırmızı kan hücrelerinin oluşumunda bir artış olur.

Gerçek retikülositoz: periferik kandaki retikülosit sayısındaki artış ile kemik iliğindeki retikülosit sayısındaki eş zamanlı artış.

Yanlış retikülositoz: periferik kandaki sayılarında bir artışla birlikte kemik iliğinde artan sayıda retikülosit olmaması (bu, retikülositlerin kemik iliğinden periferik kana sızmasında bir artışı gösterir).

Retikülositlerin% içeriğinin değerinde bir artışa yol açan faktör, aşağıdaki ilaçları alıyor olabilir: kortikotropin, antimalarial ilaçlar, antipiretik ilaçlar, furazolidon (küçük çocuklarda), levodopa.

Hatırlamak: kemik iliğinin karşılık gelen bir eritronormoblastik reaksiyonu olmadan retikülositoz, belirli bölümleri kanser metastazları veya enflamatuar odaklar tarafından tahriş edildiğinde gözlenir.

Retikülosit sayısında azalma veya yokluğu (retikülositopeni) gözlenir:
rejeneratif aplastik ve hipoplastik anemiler ile;
demir, B12 vitamini, folik asit eksikliğinden kaynaklanan anemi (mikrositik-hipokromik ve megaloblastik anemi);
talasemi ile;
sideroblastik anemi ile;
kemiğe kanser metastazları ile;
radyasyon hastalığı ve radyasyon tedavisi ile;
sitostatiklerin tedavisinde;
hematopoietik sistemin otoimmün hastalıkları ile;
böbrek hastalığı olan;
alkolizm ile;
Addison-Birmer anemisinin tekrarlaması ile;
miksödem ile.

Retikülositlerin % içeriğine ilişkin bir laboratuvar çalışmasının sonucunu bozan faktörler:
yanlış antikoagülan seçimi veya kanın antikoagülanla yetersiz karıştırılması;
turnike ile elin uzun süre sıkılması;
sülfonamidler almak (hem hafife alınan hem de fazla tahmin edilen sonuçlar mümkündür);
çalışmadan kısa bir süre önce kan transfüzyonu;
bir kan örneğinin hemolizi.

Retikülositler için bir analizin atanması için endikasyonlar:
hemoliz veya kan kaybının eşlik ettiği durumlarda eritropoez aktivitesinin değerlendirilmesi;
sitotoksik tedavi ve kemik iliği transplantasyonundan sonra kemik iliğinin yenilenme yeteneğinin değerlendirilmesi;
böbrek naklinden sonra eritropoietin sentezinin restorasyonunun değerlendirilmesi;
sporcularda doping kontrolü (eritropoietin alarak);
etkisiz hematopoez veya azalmış kırmızı kan hücresi üretiminin teşhisi;
aneminin ayırıcı tanısı;
demir eksikliği, B12, B6 vitaminleri, folat, bakırda bozulmuş kemik iliği rejeneratif kapasitesinin saptanması ve uygun tedavinin izlenmesi;
eritropoietin, eritrosüpresörlerle tedaviye yanıtın değerlendirilmesi.

RETİKÜLOSİT SAYISINI SAYMAK İÇİN YÖNTEMLER

(1) Özel boyalarla boyandıktan sonra smeardaki retikülosit sayısının sayılması.

Bu yöntem basit, oldukça ucuz ve özel pahalı ekipman gerektirmemesi nedeniyle pratikte en çok kullanılan yöntemdir ve bu nedenle herhangi bir klinik tanı laboratuvarında kullanılabilir.

Yöntemin prensibi, alkalin boyalarla supravital boyama sırasında (mutlak alkol / azure I solüsyonu / azure II solüsyonunda doymuş parlak kresil mavisi solüsyonu) retikülositlerin granüler ağ maddesinin kanda daha fazla sayılmasıyla saptanmasına dayanır. lekeleme. Retikülositlerin boyanması ya cam üzerinde ya da bir test tüpünde gerçekleştirilir.

Sayım, bir mikroskop kullanılarak gerçekleştirilir: yukarıdaki yöntemlerden biri ile hazırlanan smearlar, bir daldırma merceği ile mikroskoplanır; bir yaymada, retikülositler ve eritrositler sarımsı-yeşilimsi boyanır, retikülositlerdeki granüler filamanlı madde mavidir (masmavi II ve parlak kresil mavisi ile boyandığında) veya mavimsi-mordur (masmavi I ile boyandığında).

(2) Floresan mikroskobu kullanılarak retikülosit sayısının sayılması.

Bu yöntem basittir ve biraz zaman alır, geleneksel yöntemden daha doğrudur, çünkü flüoresan mikroskopi ağsı-filamentöz maddenin en küçük tanelerini ortaya çıkarır, ancak bu yalnızca bir lüminesan mikroskop ve özel boyalarla mümkündür ve bu nedenle yalnızca kullanılabilir. birkaç laboratuvar.

Floresan mikroskopi kullanarak retikülosit sayısını sayma ilkesi, akridin oranjı ile kan muamelesinden sonra retikülosit maddesinin floresan verme yeteneğinin kullanılmasına dayanır. Kan, bir test tüpünde veya karıştırıcıda akridin portakalı ile 1 kısım kan ve 10 kısım boya oranında karıştırılır (karışım 5 saatten fazla saklanamaz). Karışım 2 dakika karıştırılır, karışımdan bir damla cam bir lam üzerine damlatılır ve bir lamel ile kapatılır. Bu durumda sıvı lamelin ötesine geçmemelidir.

ZhS-17 ışık filtresi kullanılarak mikroskobik olarak. Preparasyonda, eritrositler koyu yeşil bir çerçeveye sahiptir ve flüoresan yapmazlar, oysa retikülositlerde granüler ağsı madde parlak kırmızı renkte parlayarak retikülositlerin sayılmasını kolaylaştırır. Heparin veya sodyum sitrat ile stabilize edilen kanda retikülosit floresansı gözlenmez.

(3) Hematoloji analizörü ile otomatik retikülosit sayımı.

Modern hematolojik analizörlerde, kan hücrelerini sayma teknolojisi, 1947'de H. Wallace ve Joseph R. Culter tarafından önerilen kondüktometrik yönteme dayanmaktadır. hücre, her iki tarafında birbirinden izole edilmiş iki elektrot bulunan küçük çaplı bir delikten (açıklık) geçer. Bir hücrenin açıklıktan her geçişine, bir elektronik sensör tarafından kaydedilen bir elektriksel dürtü görünümü eşlik eder. Hücrelerin kategorilere bölünmesi (eritrositler, lökositler, trombositler, tortu), alınan darbelerin genliğinin analizine dayalı olarak cihaz tarafından gerçekleştirilir.Hücrelerin konsantrasyonunu belirlemek için, belirli bir hacmin geçmesi yeterlidir. kanaldan örnek alın ve üretilen darbe sayısını sayın.

Retikülositlerin klasik parametresine ek olarak - yüksek teknolojili hematolojik yöntemlerin ortaya çıkması nedeniyle laboratuvar teşhis yöntemleri 1 ve 2 kullanılarak belirlenen retikülositlerin bağıl (%) içeriği (% RET, retikülosit yüzdesi) belirtilmelidir. analizörleri (yöntem 3), ek bilgilendirici retikülosit parametreleri elde etmek (örneğin, Sysmex-XT-2000i analizörü için patentli bir floresan boya kullanarak) mümkün hale geldi:
düşük RNA içeriğine sahip retikülositler, en olgun (LFR%, düşük flüoresan retikülosit fraksiyonları, düşük flüoresanslı retikülosit fraksiyonu);
ortalama RNA içeriğine sahip retikülositler(%MFR, orta floresan retikülosit fraksiyonları) - retikülositlerin orta floresans fraksiyonu);
yüksek RNA içeriğine sahip retikülositler(%HFR, yüksek flüoresan retikülosit fraksiyonları) - yüksek flüoresanslı retikülosit fraksiyonu);
retikülositlerin olgunlaşmamış fraksiyonu(%IRF, Olgunlaşmamış Retikülosit Fraksiyonu).

Olgunluk derecesine ve buna bağlı olarak nükleik asitlerin içeriğine bağlı olarak retikülositlerin farklılaşması, kemik iliğinin hematopoietik aktivitesinin bir yansımasıdır.

Yöntem (Sysmex-XT-2000i analizörü). Akış hücresinde, hücreler bir yarı iletken lazerin ışınını geçerken, ışın büyük ve küçük açılarda saçılır ve floresan boya uyarılır. Bu, retikülositlerin çeşitli olgunluk aşamalarını hücrelerdeki RNA içeriği ve lüminesanslarının yoğunluğu ile belirlemeyi mümkün kılar. Otomatik retikülosit sayımı oldukça doğru (30.000'den fazla kırmızı kan hücresi sayılır) ve tekrarlanabilir (varyasyon katsayısı yaklaşık %6'dır). Bu teknoloji, son derece düşük konsantrasyonlarda bile doğru bir retikülosit sayımı sağlar.

Bu çalışmaları yürütmek için aşağıdaki işyeri ekipmanları gereklidir:

1. Konu gözlükleri.
2. Buzlu cam slaytlar.
3. Islak oda.
4. Beyaz ve kırmızı kan hücreleri için karıştırıcılar.
5. Ay ile gözlük.
6. Mikroskop.
7. Parlak kresil mavisi.
8. Mutlak etil alkol.
9. Metil alkol veya bir Nikiforov karışımı (eşit miktarda etil 96 ° alkol ve eter).
10. Guyem reaktifi veya %3 salin solüsyonu.
11. Daldırma yağı.
12. Parmak delme aleti seti.

Granüler ağsı maddenin yapısına bağlı olarak, beş tip retikülosit ayırt edilir: toz benzeri, taç şeklinde, eksik ağ şeklinde, tamamen ağ şeklinde ve top şeklinde (bkz. Şek.).

İçindeki retikülositleri saymak amacıyla kan almak, doktorun belirttiği şekilde gerçekleştirilir. Retikülosit sayısını saymak için boyanırlar. Bu amaçla şunları kullanın:

1. Retikülositlerin intravital (supravital) boyama yöntemi.
2. Alekseev'e göre trombositlerin ve retikülositlerin eş zamanlı supravital boyama yöntemi.

Bu yöntemleri daha ayrıntılı olarak ele alalım.

Retikülositlerin intravital (supravital) boyanması

Bu yöntem aşağıdaki reaktifleri gerektirir:

1. Mutlak etil alkol: Kalsine susuz (beyaz) bakır sülfat, cam tıpalı kuru bir kaba konur ve mutlak alkolün 1/4'ü dökülür. İçindekiler çalkalanır. Mutlak alkol (su içermeyen alkol), alkolün önceden kalsine edilmiş bakır sülfat ile dehidre edilmesiyle elde edilebilir. Bakır sülfat maviye dönmeyi bıraktığında dehidrasyon durdurulur.
2. Mutlak alkolde parlak kresil mavisinin doymuş çözeltisi: 80 ml mutlak alkole 1 g parlak kresil mavisi eklenir.
3. azur ben

Canlı boyama ve retikülosit sayım tekniği

Slaytlar, doymuş bir elmas-kresil mavisi çözeltisi ile önceden kaplanmıştır. Bir kan yaymasının hazırlanmasında olduğu gibi, boya ile bir lam üzerine taze bir damla kan yayılır. Preparat hemen 6-8 dakika nemli bir odaya konur, ardından havada kurutulur ve mikroskop altında tutulur (göz merceği 7X, objektif 90X yükseltilmiş kondansatör ile). Retikülositler, görme alanı sınırlayıcı ile tam olarak aynı şekilde sayılır. Parlak kresil mavisi ile boyanmış retikülositler, mavi veya mavi bir ağ ile soluk yeşildir (bkz. Şekil).

Retikülositleri boyamak için parlak-kresil mavisi yerine, Magina'nın reçetesine göre azure I paint (40 ml mutlak alkol için 1 g azure I; 2 gün oda sıcaklığında bekletilir) kullanılabilir.

Alekseev'e göre trombositlerin ve retikülositlerin eş zamanlı supravital boyaması

Bu yöntem için Alekseev'in boyası kullanılır. 100 ml'lik balona 1 gr azure II boya dökülür ve ayrı bir şişede hazırlanan 5 gr sodyum sitrat, 4 gr sodyum klorür ve 45 ml saf su bileşimindeki reaktif eklenir. Şişenin içeriği, bir kaynama noktasına getirilmeden sürekli karıştırılarak bir asbest ızgara üzerinde yavaşça ısıtılır. Soğutun, süzün. Süzüntü, çalışan bir boya çözeltisi olarak kullanılır.

Eş zamanlı boyama ve trombosit ve retikülosit sayımı tekniği

Alekseev'in boyası, 1.0 işaretine kadar lökositler için karıştırıcıya çekilir, uç boyadan silinir ve masanın üzerine yerleştirilir. Parmağa normalden daha derin bir enjeksiyon yapın. Karıştırıcının genişleyen kısmının hacminin 4/5'ine kadar kan çekilir ve içine hava kabarcığı girmediğinden emin olunur. Kan, karıştırıcının kılcal kısmından bir pamuklu çubuk üzerine hızla üflenir ve içeriğin geri kalanı cam slaydın deliğine üflenir. Kuyudan sıvı tekrar karıştırıcıya çekilir. Bu manipülasyon iki veya üç kez tekrarlanarak kan reaktif ile karıştırılır. Sıvı miksere son kez boşaltıldıktan sonra retikülosit ve trombositlerin boyanması için 15-30 dakika yatay pozisyonda bırakılır. Daha sonra mikser bir dakika çalkalanır ve 1-2 damla salınır. Sonraki damlalardan ince smearler hazırlanır. Müstahzarlar havada kurutulur, metil alkol ile sabitlenir ve 35-45 dakika boyunca 1 ml su başına 1-2 damla seyreltilmiş Romanovsky boyası ile boyanır. Boya su ile yıkanır ve lekeler mikroskobik olarak kurutulur. Alekseev'e göre boyanmış bir yaymada, retikülositler mavi ağlı pembedir (bkz. Şek.), Ve trombositler mavimsi leylaktır.

Retikülositler ve trombositler, "Plateletler" başlığında açıklandığı gibi aynı anda 1000 eritrosit için sayılır. Retikülositler için sonuçlar ppm cinsinden ifade edilir; trombosit sayısı 1 mm3 kan başına hesaplanır (hesaplamada belirli bir hastada sayılan eritrosit sayısı dikkate alınır).

Sağlıklı bireylerin kanında %5-10 oranında retikülosit bulunur.

Bu sitede yayınlanan yorumlar, onları yazan kişilerin kişisel görüşleridir. Kendi kendine ilaç verme!

Retikülositler (klinik önemi ve laboratuvar tanısı)

(1) bir çekirdeğe (eritronormoblastlar) sahip retikülositler ve bunların granülerliği çekirdeğin etrafında yoğun bir taç şeklinde bulunur;

(2) top veya topak şeklinde granüler ağsı bir maddeye sahip olan retikülositler;

(3) yoğun bir ağ şeklinde bir tanecikliğe sahip olan retikülositler;

(4) tek tek iplikler şeklinde granüler ağsı bir maddeye sahip olan retikülositler;

(5) bireysel granüller içeren retikülositler.

Hemolitik anemi ile (retikülosit sayısı% 60'a veya daha fazlasına ulaşabilir (özellikle hemolitik krizlerde artar);

Akut kan kaybı durumunda (kan kaybından 3-5 gün sonra retikülosit krizi meydana gelir), retikülositlerdeki artış da dahil olmak üzere, gizli kanamadan şüphelenmeyi mümkün kılar (örneğin, gastrointestinal sistemin peptik ülseri olan hastalarda, Tifo);

Demir ile demir eksikliği anemisinin tedavisinde (pernisiyöz aneminin antianemik tedavisine başlanmasından birkaç gün sonra (3-10));

Akut oksijen eksikliği ile;

Kemik iliğindeki tümörlerin metastazları ile.

anormal hemoglobin formu;

Rejeneratif aplastik ve hipoplastik anemilerde;

Demir eksikliğinden kaynaklanan anemi, B12 vitamini, folik asit (mikrositik-hipokromik ve megaloblastik anemi);

Sideroblastik anemi ile;

Kemiğe kanser metastazı ile;

Radyasyon hastalığı ve radyasyon tedavisi ile;

Sitostatiklerin tedavisinde;

Hematopoetik sistemin otoimmün hastalıkları ile;

böbrek hastalığı ile;

Addison-Birmer anemisinin tekrarlaması ile;

Yanlış antikoagülan seçimi veya kanın antikoagülanla yetersiz karışımı;

Turnike ile elin uzun süre sıkılması;

Sülfonamidlerin alımı (hem hafife alınmış hem de fazla tahmin edilmiş sonuçlar mümkündür);

Çalışmadan kısa bir süre önce kan transfüzyonu;

Bir kan örneğinin hemolizi.

Hemoliz veya kan kaybının eşlik ettiği durumlarda eritropoez aktivitesinin değerlendirilmesi;

Sitotoksik tedavi ve kemik iliği transplantasyonundan sonra kemik iliğinin yenilenme yeteneğinin değerlendirilmesi;

Böbrek nakli sonrası eritropoietin sentezinin restorasyonunun değerlendirilmesi;

Sporcularda doping kontrolü (eritropoietin alarak);

Etkisiz hematopoez teşhisi veya kırmızı kan hücresi üretiminin azalması;

aneminin ayırıcı tanısı;

Demir eksikliği, B12, B6 vitaminleri, folat, bakır ve uygun tedavinin izlenmesi ile kemik iliğinin rejeneratif kapasitesinin ihlal edildiğinin tespiti;

Eritropoietin, eritrosüpresörlerle tedaviye yanıtın değerlendirilmesi.

Düşük RNA içeriğine sahip retikülositler, en olgun olanı (% LFR, düşük flüoresan retikülosit fraksiyonları, düşük flüoresanslı retikülosit fraksiyonu);

Ortalama bir RNA içeriğine sahip retikülositler (%MFR, orta floresans retikülosit fraksiyonları) - orta floresans ile retikülositlerin bir kısmı);

Yüksek RNA içeriğine sahip retikülositler (%HFR, yüksek floresanslı retikülosit fraksiyonları) - yüksek floresanlı retikülosit fraksiyonu);

Olgunlaşmamış retikülosit fraksiyonu (%IRF, Olgunlaşmamış Retikülosit Fraksiyonu).

Özel boyalarla boyandıktan sonra smearde retikülosit sayımı

Retikülositlerin özel boyalarla boyandıktan sonra yaymada sayılması, pratikte retikülosit sayısını saymak için en çok kullanılan yöntemdir. Bunun nedeni, yöntemin basit, oldukça ucuz olması ve özel pahalı ekipman gerektirmemesi ve bu nedenle herhangi bir klinik teşhis laboratuvarında kullanılabilmesidir.

Yöntem ilkesi

Alkali boyalarla supravital boyama ile retikülositlerin granüler ağ maddesinin tanımlanması ve bunların bir kan yaymasında daha fazla sayılması.

reaktifler

Aşağıdaki boyalardan birini kullanabilirsiniz:

1. Mutlak alkolde parlak kresil mavisinin doymuş çözeltisi (mutlak alkol hazırlamak için, birkaç kalsine bakır sülfat tozu değişiminde %96 etanole dayanmak gerekir). 100 ml saf alkol için 1,2 gr boya alınır.
2. Azure I solüsyonu: Azur I - 1 gr, amonyum oksalat - 0,4 gr, sodyum klorür - 0,8 gr, etil alkol %96 - 10 ml, damıtılmış su - 90 ml. Kapalı bir şişedeki boya solüsyonu 2-3 gün 37°C'deki termostata konur ve periyodik olarak kuvvetlice çalkalanır. Daha sonra oda sıcaklığına soğutulur ve süzgeç kağıdından süzülür. Çözelti koyu cam bir kapta saklanır. Bir çökelti belirirse, boya tekrar filtrelenmelidir.
3. Azure II solüsyonu: Azur II - 1 gr, sodyum sitrat - 5 gr, sodyum klorür - 0,4 gr, damıtılmış su - 45 ml. Çözelti termostatta 37°C'de 2 gün ara sıra karıştırılarak bırakılır. Çözünmeyi hızlandırmak için boya kaynama noktasına getirilmeden 15 ila 20 dakika kısık ateşte ısıtılabilir. Oda sıcaklığına soğutun ve süzün. Koyu cam bir kapta saklayın.

Özel ekipman

tanım ilerleme

Retikülositlerin boyanması ya cam üzerinde ya da bir test tüpü içinde gerçekleştirilir.

Retikülositlerin cam üzerinde boyanması

Retikülositleri cam üzerinde boyarken, iyi yıkanmış ve yağı alınmış bir cam slayt, bir bek alevi üzerinde ısıtılır. Yukarıda sayılan boyalardan birinden bir cam çubuk ile cama bir damla damlatılır ve buzlu cam ile bir boya lekesi hazırlanır. Camın boya lekesinin uygulandığı tarafını işaretlemek için bir cam grafiği kullanılır. Bu formda, cam ileride kullanılmak üzere hazırlanabilir ve kuru, karanlık bir yerde saklanabilir. Analizden önce nemli bir oda hazırlanır. Genellikle bu amaçla, kenarları boyunca nemlendirilmiş pamuk ruloları veya filtre kağıdı yerleştirilmiş bir Petri kabı kullanırlar. Bir boya lekesine bir damla kan sürülür, ondan ince bir leke hazırlanır ve hemen 3-10 dakika nemli bir odaya konur. Smearlar daha sonra havayla kurutulur.

Retikülositlerin in vitro boyanması

Retikülositlerin in vitro boyanması, farklı boyalar kullanıldığında farklılık gösterir.

Yöntem 1 - parlak kresil mavisi ile retikülositlerin in vitro boyanması.

Kullanmadan önce, bir damla %1 potasyum oksalat çözeltisi ve 4 damla parlak kresil mavisi boya çözeltisine dayanan bir test tüpü içinde parlak kresil mavisinden oluşan bir çalışma çözeltisi hazırlayın. Boyaya 0,04 ml kan eklenir (0,02 işaretine kadar iki pipet). Karışım iyice ama nazikçe karıştırılır ve 30 dakika bekletilir. Sonra tekrar karıştırın ve ince bezeler hazırlayın.

Yöntem 2 - retikülositlerin masmavi II ile in vitro boyanması.

Bir test tüpüne 0,05 ml azure II boya solüsyonu ve 0,2 ml kan koyun. Karışım iyice karıştırılır ve 20 - 30 dakika bekletilir. Tekrar karıştırın ve ince bezeler hazırlayın.

Yöntem 3 - retikülositlerin masmavi I ile in vitro boyanması.

0,3 - 0,5 ml masmavi I paint solüsyonu ve 5 - 6 damla kanı Panchenkov aparatından bir pipetle bir test tüpüne koyun. Test tüpü lastik bir tıpa ile kapatılır, karışım iyice fakat nazikçe karıştırılır ve 1-1,5 saat bekletilir (retikülositler 1,5-3 saat maruz bırakıldığında daha iyi boyanır). Karıştırın ve ince vuruşlar hazırlayın.

Retikülositler için hazır boyalar şu anda ticari olarak temin edilebilir. Retikülositlerin yardımlarıyla boyanması ekteki talimatlara göre gerçekleştirilir.

Retikülosit sayısı.

Yukarıdaki yöntemlerden biri ile hazırlanan smearlar, bir daldırma merceği ile mikroskoplanır. Yaymada, retikülositler ve eritrositler sarımsı-yeşilimsi boyanır, retikülositlerdeki granüler-filamentöz madde mavidir (mavi II ve parlak kresil mavisi ile boyandığında) veya mavimsi-mordur (mavi ile boyandığında).

Retikülosit fotoğrafları:

Eritrositlerin ayrı ayrı bulunduğu görüş alanlarını bulun. Bu görüş alanlarında en az 1000 eritrosit saymak ve aralarında granüler-filamentöz bir madde içeren eritrosit sayısını not etmek gerekir. 2000 - 3000 eritrosit sayımı yapılırken daha fazla doğruluk elde edilir.

Görüş alanında çok sayıda eritrosit bulunması saymayı zorlaştırdığından görüş alanını sınırlamak (küçültmek) gerekir. Bunu yapmak için, görüş alanını gerekli boyuta indirebileceğiniz özel bir mercek kullanabilir veya özel bir "pencere" kullanabilirsiniz (göz merceğinden biraz daha küçük çaplı bir daire kağıttan kesilir, dairenin ortasında küçük bir eşkenar dörtgen kesilir ve ortaya çıkan pencere mercek içine yerleştirilir).

Sayılan retikülosit sayısı, 100 (yüzde olarak) veya 1000 (ppm olarak) eritrosit başına ifade edilir.

Örnek: Bir yaymada 1000 eritrosit sayıldığında, 1000 eritrositten 15'inin bir dereceye kadar granüler ağ maddesine sahip olduğu, yani retikülosit oldukları ortaya çıktı. Bu nedenle, bu durumda retikülosit sayısı% 1,5 veya 15'tir.

Edebiyat:

• Menshikov V.V. tarafından düzenlenen "Klinikte laboratuvar araştırma yöntemleri" el kitabı - Moskova, "Tıp", 1987
• Lyubina A.Ya., Ilyicheva L.P. ve ortak yazarlar - "Klinik laboratuvar çalışmaları" - Moskova, "Tıp", 1984

Floresan mikroskobu kullanılarak retikülosit sayısının sayılması

Floresan mikroskopi kullanarak retikülosit sayısını sayma yöntemi basittir ve çok az zaman gerektirir, geleneksel yöntemden daha doğrudur, çünkü floresan mikroskopi retiküle-filamentöz maddenin en küçük tanelerini ortaya çıkarır.

retikülositler

Retikülositler, normoblastlar tarafından çekirdek kaybından sonra oluşan genç kırmızı kan hücreleridir. Retikülositlerin karakteristik bir özelliği, sitoplazmalarında toplanmış ribozomları ve mitokondriyi temsil eden granüler filamanlı bir maddenin (retikulum) varlığıdır.

Eritrositlerdeki patolojik inklüzyonlar

Jolly'nin cisimleri (Howell-Jolly'nin cisimleri), bir eritrositte 1 (nadiren 2-3) bulunan, µm boyutunda küçük yuvarlak mor-kırmızı kapanımlardır. RES çıkarıldıktan sonra çekirdeğin kalıntılarıdır. Splenektomi sonrası megaloblastik anemi ile yoğun hemoliz ve RES'in "aşırı yüklenmesi" ile tespit edilirler.

Lipitlerin sitokimyasal çalışması

Lipitlerin sitokimyasal çalışması, yağlarda çözünen boyaların kullanımına dayanmaktadır (Sudan III, Sudan IV, kara Sudan, vb.). Nötr yağı tanımlamak için, yağ turuncusunu boyayan Sudan III kullanılır. Lipoidler, Sudan siyahı (siyah boyama) ile daha iyi saptanır.

Nechiporenko'ya göre idrar tahlili

Yerli laboratuvar tanısında Nechiporenko yöntemi, idrarda oluşan elementlerin kantitatif tayini için en yaygın yöntemdir. Bu yöntem en basitidir, herhangi bir laboratuvar tarafından erişilebilir ve ayakta tedavi uygulamasında uygundur ve ayrıca idrar tortusunu incelemek için bilinen diğer kantitatif yöntemlere göre bir dizi avantajı vardır. Nechiporenko yöntemine göre, 1 ml idrarda oluşan elementlerin (eritrositler, lökositler ve silindirler) sayısı belirlenir.

©18 Laboratuvar teşhisi

Retikülosit - kan testinde ne var? Norm göstergeleri ve atama

Bir retikülosit, bir eritrositin öncüsüdür, yani genç formda bir eritrosittir. Sağlıklı bir kişinin kanında içeriği% 0.2-1.2'dir. Bu oran, eritrositlere göre kandaki retikülosit içeriğini yansıtır. 4-5 gün olgunlaşırlar.

Temel konseptler

Genç eritrosit formlarının karakteristik bir özelliği, sitoplazmada toplanmış bir ribozom ve mitokondri olan granüler-filamentöz bir maddenin bulunmasıdır. Bu madde, kan lekelerini boyamak için özel bir yöntem kullanılarak tespit edilebilir. Retikülositlerin bu lekelenmesine supravital denir, yani hücreler önceden sabitlenmeden üretilir.

Retikülosit grupları

Toplamda, uzmanlar beş ana retikülosit grubunu ayırt eder. Retiküler retikulumda farklılık gösterirler. Yoğunluğu ve yaşı ters orantılıdır: ağ ne kadar kalınsa o kadar gençtir. En genç retikülositin ne olduğunu bulalım.

Bu, kalın bir top şeklinde bir ağa sahip bir hücredir. Bu hücreler birinci gruba aittir. Daha olgun bir formun retikülositleri, açıkça ayırt edilebilir bir ağa sahip bir madde olarak görünür. Dördüncü ve beşinci gruplarda bireysel iplikler ve taneler ile temsil edilir. Çoğu zaman, sağlıklı insanların kanı, ikinci grupların retikülositlerini, yani daha olgun olanları içerir. Kural olarak, geri kalanın yaklaşık% 80'ini oluştururlar. Bazı patolojilerin özelliği olan gelişmiş rejenerasyon ile ilk üç grubun retikülosit sayısı artar. Bu patolojiler şunları içerir:

B12 eksikliği anemisine eşlik eden retikülosit krizi.

Retikülositlerin gerçekleştirdiği işlevler

Bir retikülosit aynı zamanda bir eritrosittir. Eritrositler ile aynı fonksiyonla karakterize edilir. Yani hücreler aynı zamanda oksijen moleküllerini farklı doku ve organlara aktarırlar, ancak bu işlemin etkinliği oksijenin olgun eritrositler tarafından aktarıldığı duruma göre çok daha düşüktür. Retikülositler, hemoglobinde bulunan demir moleküllerini adsorbe edebilir. Bu, transferrine duyarlı reseptörler nedeniyle mümkündür. Retikülosit sayımı neden yapılır? Daha sonra bunun hakkında daha fazla bilgi.

Kan örnekleme mekanizması

Bu göstergeyi belirlemek için genel bir analizin parçası olarak bir kan örneği alınır. Retikülosit seviyesinin belirlenmesine ihtiyaç varsa, analizi reçete eden doktor, ek sayım ihtiyacını yönde belirtir.

Bu analiz özel bir hazırlık gerektirmez, ancak geleneksel olarak sabahları aç karnına alınır. Aynı zamanda ihtiyaç halinde günün her saatinde teslim edilebilir. Analiz için kan parmaktan alınmalıdır, çalışması laboratuvarda hematoloji bölümünde yapılır.

Retikülosit sayısının sayılması, supravital lekeli bir yaymada gerçekleştirilir. Mikroskobik yöntem kullanılır, yani sayıları mikroskop altına bir kan örneği yerleştirilerek sayılır. Bugüne kadar, bir donanım sayma yöntemi var. Modern laboratuvarlarda kullanılmaktadır.

Bir kan testinde retikülositlerin tanımı RET'tir.

Analiz yapmak

Böyle bir çalışmayı yürütmenin birkaç yöntemi vardır:

• Cam yıkanır, kurutulur ve özel bir brülör ile ısıtılır. Daha sonra üzerine üç boyadan biri sürülür, ardından bir damla kan eklenir ve ardından ince bir leke yapılır. Cam, bir Petri kabında veya başka bir haznede belirli bir süre bekletilir, ardından temiz havada kurutulur.
• Test tüpü kullanılıyorsa içine renklendirici bir madde konur ve oraya bir damla kan eklenir. Karışım karıştırılmalıdır. Bekleme süresi - 20 dakikadan 3 saate kadar, hangi reaktifin kullanıldığına bağlıdır. Daha sonra test tüpünün içindeki sıvıyı tekrar karıştırın, içinden smearler alınır.

Hangi yöntemin daha doğru sonuçlar verdiğini söylemek zor. Her ikisi de kendi yolunda iyidir, ancak doktor analizi belirli bir şekilde gerçekleştirmeyi gerekli görebilir, o zaman yönü göstermelidir.

göstergeler

Retikülosit seviyesi hesaplanırken, normdaki cinsiyet farklılıkları ancak 12 yıl sonra önemlidir. Bu yaşa kadar her iki cinsiyetteki çocuklarda norm aynıdır. Yaklaşık bir yaşında, kızlar düzenli olan adet görmeye başlar. Aylık kan kaybı sonucunda eritroid hücrelerdeki dalgalanma aralığı genişler.

1. Yenidoğanlarda norm% 0,15 ila% 1,5 arasındadır.

2. İki haftalık çocuklarda - %0,45'ten %2,0'ye.

3. Bir ila iki aylık çocuklarda -% 0,25 ila% 0,95.

4. Altı aylık çocuklarda - %0,2 ila %1,0.

5. İki ila altı yaş arası çocuklarda -% 0,25 ila% 0,75.

6. Altı ila on iki yaş arası çocuklarda -% 0,25'ten% 1,3'e.

7. On iki yaşından büyük erkeklerde - %0,25'ten %1,7'ye.

8. On iki yaşından büyük kadınlarda - %0,12'den %2,1'e.

Retikülositlerin artması durumu ne anlama gelir?

Kandaki retikülosit sayısında artış

Çeşitli etimolojilerin anemisinde retikülosit sayısının belirlenmesi özel bir rol oynar. İçeriği kanda artarsa, bu patolojiye retikülositoz denir. Artışa hemoglobin seviyesindeki bir artış eşlik ediyorsa, bu kemik iliğinin iyi bir rejeneratif yeteneğe sahip olduğunu gösterir. Bu, aşağıdaki faktörler mevcutsa gerçekleşebilir:

Çeşitli etimolojilerin hemolitik anemisi. Kırmızı kan hücrelerinin yok edilmesi ile karakterize edilen bir dizi hastalıktır. Bu fenomene hemoliz denir. Bu durumda kandaki retikülosit içeriği %60'a ulaşabilir. Bir hemolitik kriz meydana gelirse, bu rakam daha da kötüleşebilir.

Hemolize neden olan hemotoksin zehirlenmesi. Hemotoksinler, engerek zehiri ve eritemi tedavisinde kullanılan bazı ilaçları içerir. Sıtma toksinleri ayrıca hemolize neden olabilir.

Parkinson hastalığı için levodopa tedavisi.

Bazı antiinflamatuar ve antipiretik ilaçların uzun süreli kullanımı.

İlaç "Eritropoietin" ile tedavi anemik hastalıklar.

Kemik iliği metastazları.

Radyasyon veya kimyasal tedaviden sonra iyileşme süresi.

Retikülositoz yanlış ve doğru olabilir.

Neden retikülosit testi yaptırmalısınız? Bu soru sıklıkla sorulur.

Yanlış ve gerçek retikülositoz

Gerçek retikülositoz, kandaki genç retikülosit sayısındaki artışla karakterize edilir ve buna kemik iliğindeki sayılarındaki artış eşlik eder.

Yalancı retikülositoz, yalnızca periferik kandaki retikülosit sayısındaki artışla karakterize edilirken, kemik iliğinde seviyeleri normal kalır veya hafifçe azalır.

İndirimli oranlar

Eritropoezisin inhibisyonu ile retikülosit sayısını azaltma süreci gözlenir. Aşağıdaki faktörlerin bir sonucu olarak ortaya çıkar:

Sülfonamidlerin uzun süreli kullanımı.

Kloramfenikol veya Karbamazepin gibi belirli ilaçları almak.

Kronik bulaşıcı hastalıklar.

Eritropoezi etkileyen bazı ciddi böbrek hastalıkları.

Miksödem veya diğer tiroid disfonksiyonu.

Kemik iliğindeki tümörler.

Bir retikülositin ne olduğunu inceledik. Bu, insan kanındaki genç bir kırmızı kan hücresidir.

Retikülositlerdeki artışın nedenleri, hematopoietik sistemin işlevselliği nasıl belirlenir?

Bazen, bir klinik muayene reçete edilirken, genel bir kan testi, retikülositlerin içeriğini gösteren RTC veya RET kısaltmalarını ayrı ayrı gösterebilir. Oluşumları sırasında eritrositlerden (kırmızı kan hücreleri) önce gelen çekirdekli olmayan hücrelerdir. Kan testindeki retikülositler, sayıları ve eritrositlerle oranları, kemik iliğinin yanı sıra tüm hematopoietik sistemin durumunu ve üreme işlevselliğini yansıtır.

sağlık raporu

Retikülositlerin ne olduğunu şöyle ayrıntılı olarak tanımlayabilirsiniz: Bunlar, glikoprotein hormonu eritropoietin'in etkisi altında kemik iliğinde oluşan ve kırmızı kan hücrelerine dönüşen yuvarlak veya yıldız şeklindeki hücrelerdir.

Retikülositlerin rengi genellikle mavi bir tonla pembedir. Daha sonraki formdan ayırt edici özelliği, artık RNA, mitokondri ve granüler ve filamentli oluşumlara benzeyen diğer organellerin yapısında bulunmasıdır ve bunların kaybı olgun bir hücreye dönüşümü gösterir.

Retikülositlerin işlevsel görevleri eritrositlerle örtüşür - oksijen taşımak, ancak içlerindeki düşük hemoglobin içeriği nedeniyle çok daha az verimlilikle. Esas olarak kırmızı kemik iliğinde, yassı ve tübüler kemiklerde yoğunlaşırlar ve sadece olgun kırmızı hücreler kan dolaşımına girer. Ancak periferik kan dolaşımında, eritrosit üretme sürecinin (eritropoez) aktivasyonunu gösteren küçük bir olgunlaşmamış retikülosit fraksiyonuna da izin verilir.

Kan oluşumu süreci

Eritropoez, bir çekirdek içeren ancak hemoglobin içermeyen bir hücre olan eritroblastın pronormblasta dönüşmesiyle başlar. Ayrıca eritroid serisinde, halihazırda hemoglobinizasyon özelliklerine sahip olan bazofilik bir eritroblast oluşur.

Atalara ait eritrositler oksijen tutan maddeyi (hemoglobin) biriktirirken, hücre polikromatofilik ve ardından oksifilik normoblast aşamalarından geçer. Bu süre zarfında, evrimi doğrudan genç bir eritrosit - halihazırda oksijen ve karbondioksiti tutma ve taşıma yeteneğine sahip bir retikülosit - oluşumuna yol açan çekirdek hala korunur.

Genç kırmızı kan hücreleri, oluşum yerlerinde 40 saate kadar kalır, ardından eritropoietinin etkisi altındaki küçük bir kısmı, 1.5 veya 2 gün boyunca serbestçe hareket ettiği kan damarlarına girer. Bu süre zarfında hücre retikulumu (artık ipliksi oluşumlar) kaybeder ve bir eritrosit haline gelir.

Retikülositlerin gelişim aşamaları

Kanda, retikülositler, retikulum içerdiğinden beş olgunlaşma aşamasından geçer:

1. sıfır aşaması - bazofilik madde (ağsı hücre içi madde) bir çekirdek şekline sahip olduğunda, yani tanecik birikimi bir tür korolla gibi görünür;
2. ilk aşama - bazofilik madde (BS), top şeklinde bir ağ yapısı kazanır;
3. ikinci aşama - granül ağ, hücreye eşit olarak dağıtılır;
4. üçüncü aşama - BV ayrı iş parçacıkları gibi görünür;
5. dördüncü aşama - BV, hücre çevresi boyunca küçük taneler şeklinde dağıtılır.

Sağlıklı bir vücutta, kan dolaşımındaki retikülositler yalnızca olgunlaşmanın III ve IV aşamalarında (% 80) ve 0 - II - tek kopyalarda oluşmalıdır. Ancak kırmızı kan hücrelerinin aşırı ölümü veya oksijen açlığı, böbrekler tarafından artan eritropoietin üretimini uyarır, bu da tüm aşamalardaki olgunlaşmamış hücrelerin ve hatta normoblastların damarlara salınmasına yol açar.

Retikülositler için kan testi

Kan yaymasında retikülosit sayımı hematolojik inceleme için zorunlu değildir, ancak genel klinik değerlendirmenin bir parçasıdır. Sadece belirli şüpheler ortaya çıktığında, doktor analizde özel bir atama yapar.

çalışmanın nedenleri

Kandaki RTC miktarının test edilmesinin nedenleri, bu gibi durumlarda kemik iliği ve böbreklerin kan hücreleri ve eritropoietin üretimindeki çalışmalarını kontrol etmektir:

• çeşitli kökenlerden anemi şüphesiyle;
• gerekirse demir eksikliği, vitamin B12 ve folik asit için ilaç tedavisinin kontrolü;
• eritropoietin içeren ilaçlar, eritrosüpresörler alırken izleme için;
• şiddetli dış kanama veya iç kanama şüphesi olan;
• zehirli böceklerin veya yılanların ısırması sonucu toksinleri nötralize eden ilaçlar alma ihtiyacı nedeniyle;
• kemik iliği veya böbrek nakli sırasında kırmızı kan hücrelerinin üretimini kontrol etmek;
• kanserin tanımı için

Son nokta, kan oluşturan organlardaki bazı kanserli tümörlerin metastaz özellikleri ile ilgilidir.

algılama yöntemi

Çekirdek kaybolursa, kan hücrelerine sadece asit boyalar uygulanabilir. Bir kan yaymasında boyanarak eritroid serisinin elemanları belirtilir ve bunlar daha sonra ışık mikroskobu kullanılarak tespit edilir. Retikülositleri toplam eritrosit kütlesinden izole etmek için hücrelerin granüler yapısının rengini değiştiren özel müstahzarların kullanılması gerekir.

Tespit sürecinin kendisi, kan plazmasının parlak kresil mavisi veya akridin turuncu boya ile in vitro (in vitro) veya cam üzerinde şu oranlarda karıştırılmasından oluşur: 1 kısım kana 10 kısım madde.

Cam ve in vitro yöntemler temelde farklıdır. İlk durumda, boya ile karıştırılmış kan yaymaları 10 dakika nemli bir ortama daldırılır, ardından kurutulur ve hücreler mikroskop altında sayılır. İkinci varyantta, test tüpünde karıştırılan bileşim 3 saate kadar bırakılır, ardından yeniden karıştırılır, sürülür ve sayılır.

Retikülositlerin stellat hücreleri görünür hale geldiğinde ve olgunluk dereceleri belirlendiğinde (boyalı BV'nin yapısına göre), kemik iliğinin durumu hakkında bilgi alınabilir.

İzin verilen göstergeler

Normal retikülosit seviyesi, sağlıklı bir vücutta kan oluşumu sürecine karşılık gelir. Verileri düzenlemek için, normal aralıkların bir kişinin yaşına ve cinsiyetine göre derecelendirildiği özel bir tablo kullanılır.

Çocuklarda kandaki retikülosit normu

Çocuklarda retikülosit normu, hematopoietik sistemin belirli oluşum dönemine bağlı olarak değişir. Yani, 14 güne kadar olan yenidoğanlarda, kırmızı kan hücrelerine göre kabul edilebilir oran yüzde 0,15 ila 1,5 arasındadır. İki aya kadar olan bebekler için normal değerler yüzde 0,45 ila 2,1 ve altı aya kadar - yüzde 0,25 - 0,9'dur. Altı aydan bir yıla kadar bir çocukta yüzde 0,2 ila 1 arasındaki değerler sağlıklı kabul edilir ve altı yaşına kadar sabitlenir. Ayrıca, aralık daralır: 7 ila 12 yaş arası, yüzde 0,2 ila 1,3 arasında değişir.

Yetişkinlerde kandaki retikülositler

Kandaki izin verilen diğer retikülosit içeriği, yaştan çok çocuğun cinsiyetine bağlıdır ve yetişkin göstergelerine karşılık gelir. Bunun nedeni, kızlarda aylık kan kaybı anlamına gelen adet döngüsünün başlaması ve buna bağlı olarak bu dönemde kan hücrelerinin üretiminde bir artış olmasıdır. Normatif göstergeler:

• 13 yaşından büyük kadınların ve genç kızların kanındaki kabul edilebilir genç kırmızı kan hücreleri seviyesi yüzde 0,12 ila 2,05 (sırasıyla 1,2 ila 20 ppm) olacaktır;
• erkeklerde retikülosit sayısı normalde toplam eritroid kütlesinin yüzde 0,24 ila 1,7'si arasında değişir.

Bu nedenle, bir yetişkinde, granül ağlı bir madde içeren sabit bir izin verilen genç kan hücresi konsantrasyonu aralığı belirlenir. Aynı zamanda, artan rekülositler veya bir retikülosit krizi, hematopoietik sistemin işleyişindeki belirli bozuklukları gösterir.

Retikülositlerde artış

Yüksek retikülositler (veya başka bir şekilde retikülositoz), süje için hem pozitif hem de negatif olabilir. Aşağıdaki durumlarda artan sayıda olgunlaşmamış kan hücresi oluşur:

• Genellikle bir hafta sonra ortaya çıkan demir içeren müstahzarlar, B12 vitamini ve folik asit ile tedavinin olumlu sonuçları ile.
• Önemli kan kaybından sonra kan hacmini yenilerken.
• Onkolojik hastalıkların antikanser ilaçları veya radyasyon tedavisi ile tedavisinde olumlu sonuçlar ile.

Önemli! Retikülositoz, deniz seviyesinden önemli bir yükseklikte oksijen eksikliği ile gözlenir.

Retikülositozun negatif değerleri şunları içerir:

• Tifo ateşi gibi iç kanamaya neden olan hastalıkların sonuçları.
• Kimyasal zehirler veya yabancı maddelerle zehirlenme sırasında retikülositler artar.
• Yanlış retikülositoz, kemik iliğinde yokluğunda kanda olgunlaşmamış hücrelerin varlığını gösterir, bu da organdaki enflamatuar süreçleri veya metastazları gösterir.
• Sıtma, hemolitik anemi veya talasemide retikülositoz görülür.

Kandaki olgunlaşmamış kan hücrelerinin artan içeriği (retikülositoz), daha sonra tromboz, kalp krizi veya felce yol açabilen kalınlaşmasıyla doludur.

Hamilelik sırasında kandaki retikülositler

Gebe kadınlarda plazma nedeniyle toplam kan hacmi artar, bu nedenle seyrelmesi ve kırmızı kan hücrelerinin seviyesinde azalma görülür. Kanda yeterli hemoglobin olmaması nedeniyle eritropoez sürecini aktive eden anemi gelişir. Bu nedenle gebelerde yüksek oranda retikülosit belirlenir. Bu fenomenin kliniği, vücudun bir çocuğu doğurmaya fizyolojik adaptasyonu ile normu karşılar.

Retikülositler azalır

Retikülositopeni (retikülosit seviyesi düştüğünde) sıklıkla böbreklerde ve/veya kemik iliğinde hasar olduğunu gösterir. Genç eritrosit içeriğini azaltan faktörler şunlardır:

• Kırmızı kan hücrelerinin tahrip olmasına yol açan folik asit, B12 vitamini veya demir eksikliğinden kaynaklanan anemi.
• Böbrek hastalıkları, ancak retikülositlerin seviyesini biraz düşürebilirler.
• Renal fonksiyonların inhibisyonu, kemik iliğinin baskılanması ve zehirlenme sonucu hücrelerin doğrudan yıkımı nedeniyle RTC'de azalma gösterecek olan alkol kötüye kullanımı.

Önemli! Kötü huylu tümörler ayrıca kandaki retikülosit seviyesini düşürebilir. Kanserin metastaz yaptığı kemik iliği bölgesine bağlıdır.

Tek başına kandaki retikülosit içeriğinin göstergesi bir tanı değildir. İzin verilen aralıktan önemli bir sapma ile teşhis için genel yönü belirler.

Önceden fiksasyon yapılmadan parlak kresil mavisi ile boyandığında retikülositlerin granüler gözenekli maddesinin saptanması.

reaktifler:

% 1 parlak-kresil mavisi çözeltisi: 50 mg boya, 5 ml salin içinde çözülür ve 20 mg sodyum sitrat eklenir (çözelti koyu cam bir kapta saklanır, birkaç gün iyidir).

Metodoloji:

2 damla %1 parlak kresil mavisi boya solüsyonu ve 1 damla kanı kuyucuklu bir cam lam üzerine koyun. Bir cam çubukla hafifçe karıştırın ve karışım, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca nemli bir odaya (içine kenarlarına hafifçe nemlendirilmiş gazlı bez veya pamuk ruloların yerleştirildiği Petri kabı) yerleştirilir. Daha sonra smear yapılır ve kurutulur.

Retikülosit sayısı:

Yaymalarda eritrositler sarımsı-yeşil boyanır ve retikülositlerdeki granüler ağ maddesi mavi ve mor renktedir.

Smearlar bir daldırma merceği ile mikroskoplanır. Retikülositler 1000 eritrosit başına sayılır (2000-3000 eritrosit sayıldığında daha fazla doğruluk elde edilir).

Aşağıdaki durumlarda retikülosit sayısında bir artış gözlenir:

eritropoezin uyarılması (kan kaybı, hemoliz, B12 eksikliği anemisinin başarılı tedavisi ile retikülosit krizi, akut oksijen eksikliği).

Retikülosit sayısında bir azalma şu durumlarda gözlenir:

eritropoez inhibisyonu (aplastik ve hipoplastik anemi, tedavi edilmemiş B12 eksikliği anemisi, kemikte kanser metastazları),

böbrek hastalıkları, endokrin hastalıkları.

Periferik kandaki retikülositlerinde bir artış (retikülositoz) not edilir: hemolitik anemi ile (retikülosit sayısı% 60'a veya daha fazlasına ulaşabilir (özellikle hemolitik krizlerde artar); akut kan kaybıyla (retikülosit krizi 3- Kan kaybından 5 gün sonra), dahil olmak üzere, retikülositlerdeki artış, gizli kanamadan şüphelenmeyi mümkün kılar (örneğin, gastrointestinal sistemin peptik ülseri, tifo hastalarında); sıtma ile; polisitemi ile; demir tedavisinde demir eksikliği anemisi (pernisiyöz aneminin antianemik tedavisinin başlamasından birkaç gün sonra (3-10)); akut oksijen eksikliği; kemik iliğinde tümör metastazları ile. eritrositler, retikülositlerin sayısındaki yapay bir artış nedeniyle retikülositlerin oranı %50'yi geçebilir (daha önce belirtildiği gibi, retikülositlerin oranı tüm eritrositlerin %'si olarak hesaplanır. Bu gibi durumlarda, aneminin ciddiyetini değerlendirmek için “retiküler İndeks” kullanılır ve şu formülle hesaplanır: (% of retikülosit x hematokrit) / 45 x 1.85, burada 45 normal hematokrittir, 1.85 yeni retikülositlerin kana gelmesi için gereken gün sayısıdır. eğer dizin

RETİKÜLOSİT SAYISINI SAYMAK İÇİN YÖNTEMLER

(1) Özel boyalarla boyandıktan sonra smeardaki retikülosit sayısının sayılması. Bu yöntem basit, oldukça ucuz ve özel pahalı ekipman gerektirmemesi nedeniyle pratikte en çok kullanılan yöntemdir ve bu nedenle herhangi bir klinik tanı laboratuvarında kullanılabilir. Yöntemin prensibi, alkalin boyalarla supravital boyama sırasında (mutlak alkol / azure I solüsyonu / azure II solüsyonunda doymuş parlak kresil mavisi solüsyonu) retikülositlerin granüler ağ maddesinin kanda daha fazla sayılmasıyla saptanmasına dayanır. lekeleme. Retikülositlerin boyanması ya cam üzerinde ya da bir test tüpü içinde gerçekleştirilir. Sayım, bir mikroskop kullanılarak gerçekleştirilir: yukarıdaki yöntemlerden biri ile hazırlanan smearlar, bir daldırma merceği ile mikroskoplanır; bir yaymada, retikülositler ve eritrositler sarımsı-yeşilimsi boyanır, retikülositlerdeki granüler filamanlı madde mavidir (masmavi II ve parlak kresil mavisi ile boyandığında) veya mavimsi-mordur (masmavi I ile boyandığında). (2) Floresan mikroskopi kullanılarak retikülosit sayısının sayılması. Bu yöntem basittir ve biraz zaman alır, geleneksel yöntemden daha doğrudur, çünkü flüoresan mikroskopi ağsı-filamentöz maddenin en küçük tanelerini ortaya çıkarır, ancak bu yalnızca bir lüminesan mikroskop ve özel boyalarla mümkündür ve bu nedenle yalnızca kullanılabilir. birkaç laboratuvar. Floresan mikroskopi kullanarak retikülosit sayısını sayma ilkesi, akridin oranjı ile kan muamelesinden sonra retikülosit maddesinin floresan verme yeteneğinin kullanılmasına dayanır. Kan, bir test tüpünde veya karıştırıcıda akridin portakalı ile 1 kısım kan ve 10 kısım boya oranında karıştırılır (karışım 5 saatten fazla saklanamaz). Karışım 2 dakika karıştırılır, karışımdan bir damla cam bir lam üzerine damlatılır ve bir lamel ile kapatılır. Bu durumda sıvı lamelin ötesine geçmemelidir. ZhS-17 ışık filtresi kullanılarak mikroskobik olarak. Preparasyonda, eritrositler koyu yeşil bir çerçeveye sahiptir ve flüoresan yapmazlar, oysa retikülositlerde granüler ağsı madde parlak kırmızı renkte parlayarak retikülositlerin sayılmasını kolaylaştırır. Heparin veya sodyum sitrat ile stabilize edilen kanda retikülosit floresansı gözlenmez. (3) Hematoloji analizörü ile otomatik retikülosit sayımı. Modern hematolojik analizörlerde, kan hücrelerini sayma teknolojisi, H. Wallace ve Joseph R. Culter, 1947'de. Yöntemin ilkesi, bir hücre her iki tarafında iki elektrot bulunan küçük çaplı bir delikten (açıklık) geçtiğinde meydana gelen impulsların sayısını saymak ve doğasını belirlemektir. birbirinden izole edilmiştir. Bir hücrenin açıklıktan her geçişine, bir elektronik sensör tarafından kaydedilen bir elektriksel dürtü görünümü eşlik eder. Hücrelerin kategorilere bölünmesi (eritrositler, lökositler, trombositler, tortu), alınan darbelerin genliğinin analizine dayalı olarak cihaz tarafından gerçekleştirilir.Hücrelerin konsantrasyonunu belirlemek için, belirli bir hacmin geçmesi yeterlidir. kanaldan örnek alın ve üretilen darbe sayısını sayın. Retikülositlerin klasik parametresine ek olarak - yüksek teknolojili hematolojik yöntemlerin ortaya çıkması nedeniyle laboratuvar teşhis yöntemleri 1 ve 2 kullanılarak belirlenen retikülositlerin bağıl (%) içeriği (% RET, retikülosit yüzdesi) belirtilmelidir. analizörleri (yöntem 3), ek bilgilendirici retikülosit parametreleri elde etmek (örneğin, Sysmex-XT-2000i analizörü için patentli bir floresan boya kullanarak) mümkün hale geldi: düşük RNA içeriğine sahip retikülositler, en olgun (%LFR, düşük floresan retikülosit fraksiyonları) , düşük floresan retikülosit fraksiyonu); ortalama RNA içeriğine sahip retikülositler (%MFR, orta floresans retikülosit fraksiyonları) - orta floresans ile retikülositlerin bir kısmı); yüksek RNA içeriğine sahip retikülositler (%HFR, yüksek flüoresanslı retikülosit fraksiyonları) - yüksek flüoresanslı retikülosit fraksiyonu); olgunlaşmamış retikülosit fraksiyonu (%IRF, Olgunlaşmamış Retikülosit Fraksiyonu). Olgunluk derecesine ve buna bağlı olarak nükleik asitlerin içeriğine bağlı olarak retikülositlerin farklılaşması, kemik iliğinin hematopoietik aktivitesinin bir yansımasıdır. Yöntem (Sysmex-XT-2000i analizörü). Akış hücresinde, hücreler bir yarı iletken lazerin ışınını geçerken, ışın büyük ve küçük açılarda saçılır ve floresan boya uyarılır. Bu, retikülositlerin çeşitli olgunluk aşamalarını hücrelerdeki RNA içeriği ve lüminesanslarının yoğunluğu ile belirlemeyi mümkün kılar. Otomatik retikülosit sayımı oldukça doğru (30.000'den fazla kırmızı kan hücresi sayılır) ve tekrarlanabilir (varyasyon katsayısı yaklaşık %6'dır). Bu teknoloji, son derece düşük konsantrasyonlarda bile doğru bir retikülosit sayımı sağlar.

Retikülositopeni ve retikülositoz, gelişim nedenleri, tespitlerinin tanısal değeri.

studfiles.net

Retikülositler (retikülosit)

Retikülositler, normoblastlar tarafından çekirdek kaybından sonra oluşan genç kırmızı kan hücreleridir.

Retikülositlerin karakteristik bir özelliği, supravital boyama ile ortaya çıkan, yani hücreler önceden sabitlenmeden ortaya çıkan granüler ağlı bir maddenin varlığıdır.

Elektron mikroskobik olarak granüler ağ yapılarının endoplazmik retikulum, ribozomlar ve RNA içeren mitokondri kalıntıları olduğunu gösterdi. Retikülositlerde protein (globin), heme, pürinler, pirimidin nükleotitleri, fosfatidler, lipitler az miktarda sentezlenir, ancak bunlarda RNA sentezlenmez. 2 gün içinde retikülosit kan dolaşımında kalır ve ardından RNA azaldıkça olgun bir eritrosit haline gelir.

Geleneksel hematolojik yöntemlerle boyanmış yaymalarda grimsi pembe retikülositler polikromatofiliktir, yani farklı boyalarla boyanmıştır.

Şu anda, boyandıktan sonra retikülosit sayısını saymak için birleşik bir yöntem kullanılmaktadır.

• parlak kresil mavisi,
• Azur ben veya
• Azur II doğrudan cam üzerinde veya bir test tüpü içinde.

1. Yöntemin ilkesi

Alkalin boyalarla boyandığında eritrositlerin granüler gözenekli maddesinin tanımlanması ve kan yaymasında daha fazla sayılması.

2. Reaktifler:

a) mutlak alkol içinde parlak kresil mavisinin doymuş bir çözeltisi (mutlak alkol hazırlamak için, birkaç kalsine bakır sülfat tozu değişiminde %96 etanol tutulmalıdır): 100 ml alkol başına 1,2 g boya;

b) azure I solüsyonu: azure I - 1 g, amonyum oksalat - 0,4 g, sodyum klorür - 0,8 g, etil alkol %96 - 10 ml, damıtılmış su - 90 ml. Kapalı bir şişe içindeki boya solüsyonu 2-3 gün süreyle 37°C'deki bir termostata konulur ve periyodik olarak kuvvetlice çalkalanır. Daha sonra oda sıcaklığına soğutulur ve süzgeç kağıdından süzülür. Çözelti koyu cam bir kapta saklanır. Bir çökelti oluşursa, boya tekrar filtrelenmelidir;

c) Azur II çözeltisi: Azur II - 1 g, sodyum sitrat - 5 g, sodyum klorür - 0,4 g, damıtılmış su - 45 ml. Çözelti, ara sıra karıştırarak 2 gün boyunca 37°C'de bir termostatta bırakılır. Çözünmeyi hızlandırmak için boya kaynatılmadan 15-20 dakika kısık ateşte ısıtılabilir. Oda sıcaklığına soğutun ve süzün. Koyu cam bir kapta saklayın.

3. Boyama

Cam üzerine boyama:

• iyi yıkanmış ve yağı alınmış bir cam slayt, bir bek alevi üzerinde ısıtılır. Bir cam çubuk ile cama boyalardan bir damla damlatılır ve cilalı cam ile bir boya lekesi hazırlanır. Camın boyanın sürüldüğü tarafını bir cam kalemle işaretleyin. Bu formda, cam ileride kullanılmak üzere hazırlanabilir ve kuru, karanlık bir yerde saklanabilir;
• bu şekilde hazırlanan bardağa bir damla kan damlatılır, ince bir yayma yapılır ve bardak hemen nemli hazneye yerleştirilir. Bunu yapmak için, kenarları boyunca hafifçe nemlendirilmiş gazlı bez veya pamuklu ruloların yerleştirildiği kapaklı bir Petri kabı kullanın;
• smearler 3-5 dakika nemli bir odada bekletildikten sonra havada kurutulur. Retikülositlerin granüler gözenekli maddesi mor-maviye döner ve eritrositlerin yeşilimsi-mavimsi arka planında açıkça öne çıkar.

İn vitro boyama:

• yöntem 1: kullanmadan önce, bir test tüpünde bir damla %1 potasyum oksalat çözeltisi 4 damla boya çözeltisi 1 içeren bir parlak kresil mavisi çalışma çözeltisi hazırlayın. Boyaya 40 µl kan ekleyin (0,02 işaretine kadar iki pipet). İyice ama nazikçe karıştırın ve 30 dakika bekletin. İnce vuruşları karıştırın ve hazırlayın;
• Yöntem 2: 0,05 ml boya solüsyonu 3 ve 0,2 ml kan bir test tüpüne konur. Karışım iyice karıştırılır ve 20-30 dakika bekletilir. İnce vuruşları karıştırın ve hazırlayın;
• yöntem 3: Panchenkov aparatından bir pipet ile bir test tüpüne 0,3-0,5 ml boya solüsyonu 2 ve 5-6 damla kan koyun. Tüp kauçuk bir tıpa ile kapatılır, karışım iyice ama nazikçe karıştırılır ve 1–1½ saat bırakılır (1½ saat–3 saat maruz kaldığında retikülositler daha iyi boyanır). Karıştırın ve ince vuruşlar hazırlayın.

4. Retikülosit sayısı

Smearlarda, eritrositler sarımsı-yeşilimsi, taneli-filamentöz bir madde - mavi veya mavimsi-mor olarak boyanır.

• Yukarıdaki yöntemlerden biri ile hazırlanan smearlar, bir daldırma merceği ile mikroskoplanır;
• en az 1000 eritrosit saymak ve aralarında granüler lifli bir madde içeren eritrositlerin sayısını not etmek gerekir. Eritrositlerin bir sıra halinde düzenlendiği tek tip ince lekelerle, örneğin 50 eritrosit bulunan böyle bir görüş alanı seçilir ve ardından bu tür 20 görüş alanı hesaplanır;
• pratikte, daha fazla doğruluk için, görüş alanının gerekli boyuta indirilebildiği özel bir oküler kullanılır. Hazır oküler olmadığında ×7 oküler sökülüp içine küçük kare kesilmiş bir kağıt konularak vidalanarak kolayca hazırlanabilir. Sayılan retikülosit sayısı, 1000 veya 100 eritrosit başına ifade edilir.

ORANI: %0,5–1,2 (30–70 × 109/l)

Aşağıdaki durumlarda retikülosit sayısında bir artış gözlenir:

• kan kaybı (özellikle akut);
• özellikle kriz sırasında (% 20-30'a kadar) hemolitik anemi;
• megaloblastik aneminin B12 vitamini ile tedavisinin arka planına karşı (retikülosit krizi - tedavinin 4-8.

Retikülosit sayısındaki azalma aşağıdakiler için tipiktir:

• aplastik ve hipoplastik anemiler;
• tedavi edilmemiş megaloblastik anemi;
• radyasyon hastalığı;
• sitotoksik ilaçlar almak.

Mesih yaşıyor mu? Mesih ölümden dirildi mi? Araştırmacılar gerçekleri inceliyor

teşhis.ru

Retikülositler normal ve sayıları sayılıyor

Normu birçok faktöre bağlı olarak değişen retikülositler, kırmızı kan hücrelerinin şekillenmemiş formlarıdır ve kemik iliğinde ve periferik kanda bulunurlar. Kural olarak, kandaki retikülositler üç ila beş gün içinde olgunlaşır ve daha sonra bu hücreler zaten olgun kırmızı kan hücrelerine dönüşür. Ayrıca yeni doğan bebeklerde şekillenmemiş eritrosit sayısı erişkinlere göre önemli ölçüde fazladır.

Retikülositlerin tespiti:

Normu özel bir tablo kullanılarak belirlenen retikülositleri tanımlarken, olgun eritrositlerden farklılıklarını dikkate almak gerekir. Bu kan hücresi çeşitliliği ya tam bir çekirdek içerir ya da kalıntıları granüler lifli bir maddenin parçası olarak gözlenir. Bu tür hücrelerin sayısını belirlemek için laboratuvarda kan yaymasının rengini incelemek gerekir. Bunun için yağı alınmış ve önceden yıkanmış bir cama uygulanan mavi elmas solüsyonu kullanılır ve ancak o zaman leke yapılır.

Normu farklı olan retikülositler tespit edildiğinde, yaymadan hemen sonra kullanılan cam bir Petri kabına - özel bir nemli oda - yerleştirilmeli, ardından beş dakika bekletilmeli, temiz havada iyice kurutulmalı ve ardından mikroskobik olarak. Ayrıca, retikülosit içindeki granüler filamanlı tipteki madde genellikle mor-mavi bir tonda boyanır ve mavimsi-yeşil bir renk tonu nedeniyle eritrositlerin arka planı öne çıkar.

Gel-Meyer yöntemi kullanılırsa immatür kan hücrelerinin boyanması çok daha iyi görülebilir ancak bunun için Vidal tüp gerekir. Bu kapta, birkaç damla kan parlak bir çözelti ve sodyum klorür ile karıştırılır, ardından tüp bir kapakla kapatılır ve bir saat içinde smear yapılır.

Retikülosit sayısı:

Olgunlaşmamış kan hücrelerinin sayısını hesaplarken, 1000 kırmızı kan hücresini temel almak ve ardından oranı genellikle yetişkin kırmızı kan hücrelerinin sayısının% 0,2 -% 1,2'si düzeyinde değişen retikülositleri dikkate almak gerekir. Ortalama olarak, çoğu insanda, olgunlaşmamış kırmızı kan hücrelerinin sayısı, genellikle tam olarak olgunlaşmış kan hücrelerinin toplam sayısının %0,7'sidir. Retikülosit sayısı, izin verilen maksimum normdan% 10 veya daha fazla ise, bir kişi, düzenli akut kanama ve hemolitik aneminin eşlik ettiği bir hastalık olan retikülositoz geliştirir.

Retikülositleri sayarken (çocuklarda norm genellikle yüksektir), sayılarının yetişkinler için tipik olan sınır değerleri aşmadığına dikkat edilmelidir. Standartlar cinsiyete de bağlıdır, çünkü kadınlarda olgunlaşmamış eritrositlerin %2,07'si hala kabul edilebilir bir parametre olarak kabul edilir ve erkeklerde bu rakam %1,92'yi geçmemelidir.

Retikülosit seviyesinin önemli ölçüde arttığı durumlarda bu, vücutta sıtma ve talasemi, polisitemi ve hipoksi, anemi, her türlü hemolitik sendrom gibi bozuklukların varlığını gösterir, ancak bu tür göstergeler siyanokobalamin tedavisi ile de mümkündür. Olgunlaşmamış eritrositlerin seviyesi düşürülürse, kişi aplastik ve hipoplastik anemi, her türlü böbrek hastalığı ve miksödem ve ayrıca tümör metastazlarının kemiklere yayılması yaşayabilir.

Aneminin ciddiyetini teşhis etmek için, retikülositlerin yüzdesi ile normal hematokrit değerlerinin olgunlaşmamış hücrelerin periferik kana girmesi için gereken gün sayısıyla çarpımı olarak hesaplanan "retikülosit indeksi"nin hesaplanması gerekir. Ortaya çıkan indeks ikiyi geçmezse, gösterge aneminin hipoproliferatif bir bileşenini gösterir ve ikiyi aşarsa, kırmızı kan hücrelerinin artan oluşum olasılığını gösterir.

fb.ru

Kan çalışması. Kan tahlili

Hemoglobin konsantrasyonunun belirlenmesi

Hemoglobini belirleme yöntemleri arasında, kolorimetriye dayalı yöntemler, yani rengin yoğunluğunu belirleme, en yaygın kullanılanlardır.Bir renk standardına (gliserin içinde hidroklorik hematin) sahip kapalı cam tüpler vardır.% 0,1'lik bir hidroklorik asit çözeltisi önce merkezi test tüpüne %2 veya 3 g'a karşılık gelen işarete kadar boşaltılır, ardından hemometreye bağlı özel bir pipet ile parmaktan alınan 0,02 ml kan dikkatlice (tam olarak!) eklenir. Asidin yüzey tabakası bir pipetle yıkanır ve kan ve asit bir cam çubukla karıştırıldıktan sonra 5 dakika hematin hidroklorür oluşması için bırakılır. Daha sonra distile su ilave edilerek ve bir çubuk ile sürekli karıştırılarak orta tüpteki sıvının rengi tamamen standartlara uygun hale gelir. Hemoglobin konsantrasyonu, alt menisküs üzerindeki solüsyon seviyesi işaretine karşılık gelir. Hemoglobin konsantrasyonu, hemoglobinin %g'si veya geleneksel birimler cinsinden ifade edilebilir. 16.67 g hemoglobin 100 birim olarak alınır.

Kadınlarda kandaki hemoglobin konsantrasyonu 11,7 ila 15,8 g ° / o veya 117 ila 158 g / l, erkeklerde -% 13,3 ila 18 g veya 133 ila 180 g / l arasındadır.

Oluşan elemanları saymak için kan alınması

Oluşan elementleri saymak için kan, son zamanlarda daha yaygın olarak kullanılan karıştırıcılarda (melanjörler) veya test tüplerinde seyreltilir.Alyuvarları saymak için kan,% 3 sodyum klorür çözeltisi ile 200 kez seyreltilir; hacmi 0,02 ml olan kan almak için bir hemometre pipeti kullanırsak, o zaman 4 ml sodyum klorür çözeltisi almalıyız, lökositleri saymak için kan 20 kez seyreltilir, dolayısıyla 0,02 ml kan ve 0,38 ml %3 kırmızı kan hücrelerinin yok edilmesine neden olmak için gerekli olan renkli bir metilen mavisi asetik asit çözeltisi alınır.Kan örneklemesi büyük bir doğrulukla yapılmalıdır, çünkü bu kadar küçük hacimlerde, bir hava kabarcığı veya kan kalıntısı kanın içine girer. pipetin dışında tespit hatasının artmasına neden olur.Hazneyi doldurmadan önce, yanardöner halkaların görünmesi için haznedeki cilalı camı silmek gerekir.Hazneyi doldurmadan önce, hücreler gibi seyreltilmiş kan iyice karıştırılır. Deney tüpünün veya mikserin ampullerinin duvarlarına çöktürülür, ardından odanın parlatılmış camının altına bir damla kan damlatılır ve hücrelerin çökmesi için 1 dakika bekletilir.

Oluşturulan elemanların sayımı, karanlık bir görüş alanında mikroskobun düşük büyütme oranında (objektif 8X, oküler 15X veya 10X) gerçekleştirilir.

Eritrositler, odanın farklı yerlerinde bulunan 5 büyük karede (16x5 = 80 küçük kareler) sayılır, çapraz olarak yerleştirilmiş kareler alabilirsiniz.Karenin içinde bulunan ve üst ve sol kenarlarında bulunan eritrositler sayılır; alt ve sağ tarafta yatan eritrositler, zaten başka karelere ait oldukları için sayılmaz.

5 büyük karedeki eritrosit sayısını (A) saydıktan sonra, küçük bir kare A / 80'deki aritmetik ortalama eritrosit sayısını, yani 1/4000 μl'de bulurlar. Bu nedenle 1 µl'deki alyuvar sayısını bulmak için bölünmeden elde edilen sayıyı 4000 ve 200 (dilüsyon) ile çarpmamız gerekir.

Böylece, aşağıdaki formülü elde ederiz:

X=A*4000*200/80,

burada X, 1 µl'deki eritrosit sayısı ve A, 5 büyük karedeki eritrosit sayısıdır.5 büyük karedeki eritrositleri sayarsak ve kanı 200 kez seyreltirsek, A sayısı için toplam faktör 10.000 olacaktır.

Kadınların kanındaki kırmızı kan hücrelerinin normal içeriği 4-5 * 106, erkekler - 4.5-5.5 * 106'dır.

Lökositler 100 büyük karede sayılır, küçük karelere bölünmez, bu da 1600 küçük kareye karşılık gelir. Böylece 100 karede bulunan lökosit sayısı 1600'e bölünür, 4000 ile çarpılır ve 20 (seyreltme) yapılır. Bu durumda sonucu elde etmek için sayılan lökosit sayısını 50 ile çarpmak yeterlidir. Kandaki normal lökosit içeriği 1 μl'de 5 * 103 - 8 * 103'tür.

Kanın renk göstergesi. Kanın renk göstergesi, belirli bir kanın bireysel eritrositinin ortalama hemoglobin satürasyonunu, normal kanın bireysel eritrositinin satürasyonuna kıyasla gösteren bir sayıdır.Normal hemoglobin içeriği için 100 birim alınır ve normal sayı eritrosit sayısı 5.000.000 sağlıklı kişilerde renk indeksi değeri 0.9 ile 1.1 arasında değişmektedir periferik yayma çalışması. Kan yaymalarında eritrositlerin morfolojisi incelenir ve lökosit formülü yani farklı lökosit tipleri arasındaki yüzde oranı dikkate alınır.Çalışmanın başarılı olabilmesi için kan yaymalarının hazırlanması, fiksasyonu ve boyanması işlemlerinin gerçekleştirilmesi gerekir. Smear hazırlamak için temiz, yağsız bir camın yüzeyine lam kenarından 0,5 cm uzaklıkta parmaktaki giriş yerinden bir damla kana dokundurulur ve ardından parlatılmış lamel lamla 45° açı yapacak şekilde yerleştirilir ve birincisi kan damlasına getirilerek lamelin arka kenarı boyunca yayılarak akciğerlere hareket ettirilir, keskin bir baskı yapılmadan smear yapılır. Smear cam lam üzerinde bir “salkım” ile bitmelidir. Yayma havada kurutulur, kurutulduğunda iyi, ince bir yayma sarı bir renge sahiptir.

Yaymanın ortasına basit, sivriltilmiş bir kalemle hastanın adı ve çalışma tarihi yazılır, ardından smearler metil alkolde en az 5 dakika sabitlenir ve Romanovsky-Giemsa yöntemine göre boyanır.

Boya, asidik (eozin) ve bazik (Azur II) boyaların karışımından oluşur. Bu boyama yöntemi, hücreleri ayırt etmeyi mümkün kılar. Bir smear ile çalışmanın ilk adımı, kırmızı kan hücrelerinin morfolojisini değerlendirmektir. Bunu yapmak için, madeni para sütunları şeklinde değil, hücrelerin ayrı ayrı yattığı ince bir yer seçin. Normal eritrositler nükleer içermeyen, pembe renkli hücrelerdir, yuvarlak, yaklaşık olarak aynı çap - 7.5 mikron, eritrositler bikonkav disk şeklindedir, bu nedenle yaymada merkezde aydınlanma ve daha yoğun lekeli bir çevre vardır.

(doğrudan modül4)

Kalın bir damla hazırlamak

Plasmodium sıtması için kanı test etmek için kalın bir damla yapılır. Kan her zamanki gibi parmağın hamurundan alınır. Enjeksiyon yerinden çıkan bir damla kana cam lam yüzeyi ile dokunulur. Ayrı ayrı uygulanan 2-3 damla başka bir bardağın köşesine sürülür. Romanovsky'nin boyasıyla 30-40 dakika kuru bir leke (sabitleme olmadan) dökülür, ardından renkli damla suyla dikkatlice durulanır ve müstahzar dik konumda kurutulur.

Örnek analiz verileri

Kandaki eritrosit ve hemoglobin sayısının artması, kırmızı kan hücrelerinin bir hastalığı - eritremi ile olabilir, daha sonra eritrosit sayısı 9-106 veya daha fazlasına ulaşır ve hastalıkların bir sonucu olarak kırmızı kan hücrelerinin sayısı artar. diğer organlar ve sistemler (dekompanse yaygın pnömoskleroz, amfizem, bazı doğuştan kalp kusurları, pulmoner arter sisteminin vasküler sklerozu, sağ kalp kusurları, dolaşım yetmezliği III derece, vb.). Bu belirtiye eritrositoz denir.

Morfolojik olarak değiştirilmiş eritrositler, hiperkromik (megaloblastik) anemide görülür. Aynı zamanda kanda genellikle periferik kanda bulunmayan yüksek hemoglobin içeriğine sahip büyük eritrositler (makrositler), embriyonik eritrositler (megaloblastlar) bulunur. Eritrositlerin morfolojisi de hipokromik anemi ile değişir: şekli değiştirilmiş küçük eritrositler (mikrositler) (poikilositler) ve düşük hemoglobin içeriğine sahip eritrositler (hipokromik eritrositler) ortaya çıkar.

lökosit sayısı

Lökosit formülü hesaplanırken sitoplazma ve hücre çekirdeğinin yapısal özelliklerinin belirlenmesi gerekir. Bir hücrenin belirli bir gruba ait olması, sitoplazma ve çekirdeğin tüm belirtilerinin toplamına göre belirlenir Formülü hesaplarken, camı mikroskop altında hareket ettirmek için aynı yönteme uyulmalıdır. Çoğu zaman, mikroskopi yöntemi yaymanın 4 yerinde kullanılır. Lökositlerin yaymada eşit olmayan bir şekilde dağıldığı bilinmektedir: kenarlarda ortaya göre daha az lenfosit vardır ve yaymanın sonunda başlangıca göre daha fazla monosit vardır. Bu nedenle, lökosit formülü hesaplanırken, karşılaşılan tüm hücreleri sayarak kesikli bir çizgi boyunca hareket etmek en iyisidir. 200 hücre saymak, rutin klinik çalışmalar için pratik bir minimumdur. Periferik kan lökositleri, granülerliğin varlığına veya yokluğuna bağlıdır. sitoplazma, granülositlere (nötrofilik, eozinofilik, bazofilik) ve agranülositlere (monositler ve lenfositler) ayrılır.

nötrofiller. Hücre boyutu 10-12 mikrondur. Hücrelerin sitoplazması, ince, bol, mor tanecikli soluk pembe renktedir. Normalde kanda bıçak (%2-4) ve parçalanmış (%60-65) nötrofiller bulunur.

eozinofiller. Hücreler nötrofillerle aynı boyuttadır, bazen biraz daha büyüktür, sitoplazma büyük sarımsı kırmızı granüllerle doludur, çekirdek genellikle aynı boyutta iki bölüme sahiptir. Eozinofiller normaldir %2-4 Bazofiller. Boyut olarak en küçük granülosittir. Çekirdek düzensizdir, çok lobludur, neredeyse tüm hücreyi kaplar, soluk pembe sitoplazma büyük koyu mor granüller içerir. Bazofil granülleri suda çözünür ve bazen müstahzarın boyanması sırasında yıkanması sonucunda granüllerin yerinde renksiz hücreler kalır. Normalde bazofiller %0.1'dir Lenfositler. Hücre boyutu 7 ila 10 µm arasında değişir. Çekirdek kompakt, yuvarlak veya fasulye şeklindedir. Hücrelerin sitoplazması, çekirdeğin etrafında bir aydınlanma bölgesi (perinükleer) ile soluk mavidir, bazen sitoplazmada kırmızı-mor renkli ayrı azurofilik taneler vardır. Periferik kandaki lenfositlerin %20-35'i normaldir.Monositler. Hücre boyutu 12 ila 20 µm arasında değişmektedir. Çekirdek genellikle at nalı şeklindedir, bazen düzensiz bir şekle sahiptir. Sitoplazma, lenfositlerden daha geniştir, kül mavisi renktedir ve ince, narin, kırmızımsı taneciklidir.Monositler normaldir %6-8.

Kandaki lökosit içeriğinin artmasına lökositoz, azalmasına lökopeni denir.

Retikülosit boyama ve sayma

Retikülositler, ince mavi bir retinaya veya sitoplazmada taneciklere sahip genç kırmızı kan hücreleridir. Bu hücreler kırmızı hematopoez aktivitesini karakterize eder Retikülosit sayısını tespit etmek için supravital (ömür boyu) boyama yöntemi kullanılır. Brillicresyl blue boyası mutlak alkolde cam slaytlar üzerine sürülür ve daha sonra her zamanki gibi vitray üzerine kan yayması yapılır ve 3-5 dakika nemli bir odaya yerleştirilir, ardından kurutulur ve bir mikroskopla mikroskoplanır. daldırma merceği Normalde, 1000 eritrosit başına 8-10 retikülosit bulunur, sayıları genellikle eritrositlere göre yüzde (%0.8-1) veya ppm (%8-10 o) olarak ifade edilir. kemik iliğinde eritrositler.

Periferik kanda hipokromik anemi ("malign anemi"), hemolitik anemi ve diğer hastalıklarda büyük bir oranda görülürler. Hiperkromik aneminin alevlenmesi sırasında retikülosit içeriğinin azaldığı ve bunların periferik kanda tamamen kaybolduğu gözlenir.

Trombositlerin agregasyonunu (yapışmasını) önlemek için, parmağa damlatılan %14'lük magnezyum sülfat çözeltisi damlatılarak deri delinir. Kan magnezya ile karıştırılır ve cam lamlar üzerine ince yaymalar hazırlanır, bunlar daha sonra Romanovsky'ye göre 2 saat sabitlenir ve boyanır, 1000 eritrosit başına düşen trombosit sayısı belirlenir ve 1 μl'deki eritrosit sayısı bilinerek, sayı 1 µl kandaki trombosit sayısı hesaplanır. Normal trombositler 250.000 ila 400.000 içerir.

ESR'nin tanımı

Eritrosit sedimantasyon hızı, sodyum sitrat ile 4: 1 oranında karıştırılan kanda belirlenir Reaksiyon, Panchenkov aparatında ayarlanır. Panchenkov'un kılcal damarı sodyum sitrat ile yıkanır, ardından sitrat, R harfinin (reaktif) bulunduğu işaret 50'ye çekilir ve bir Vidalevsky test tüpüne üflenir. Aynı kılcal damar K işaretine (kan) kadar iki kez kan alıp sitratla karıştırmak için kullanılır. Aynı kılcal damar 0'a kadar sitratla karıştırılmış kanla doldurulur ve dikey olarak bir saat boyunca bir tripoda yerleştirilir. Bir saat sonra, eritrosit sedimantasyon hızının bir ölçüsü olan, yerleşmiş eritrositlerin üzerinde oluşan plazma sütununun değeri milimetre cinsinden not edilir.Normal ESR erkeklerde 10 mm / s, kadınlarda - 14 mm / s'dir.

Enflamatuar, akut ve kronik hastalıklar, malign tümörler ve diğer hastalıklarda eritrosit sedimantasyon hızı artar.

Rh faktörü uyumluluk testi

Alıcının kanından 2-3 ml sitratsız test tüpüne alınır, kan pıhtılaştıktan sonra pıhtı cam çubukla çevrelenir ve kan santrifüj edilir. Bu tüpten iki damla serum bir Petri kabına alınır, içine donör kanından yarım damla eklenir, karıştırılır ve kap su banyosuna (42-45°) yerleştirilir. 10 dakika sonra bardak çıkarılır ve hafif sallanarak ışıkta izlenir. Aglütinasyonun görünümü, bu kan transfüzyonunun kabul edilemez olduğunu gösterecektir.

Retikülosit sayısının belirlenmesi- kemik iliği tarafından üretilen genç kırmızı kan hücrelerinin sayıldığı bir klinik kan testi. Çalışma genel kan testini tamamlar. Retikülosit sayımı, çeşitli anemi türlerinin ayırıcı tanısı, kemik iliği ve dalağın işleyişinin değerlendirilmesi, demir eksikliği, B12 vitamini veya folik asit eksikliği, böbrek yetmezliği ve kanser hastalarının durumlarının izlenmesi için yapılır. Araştırma için kan örneklemesi bir damardan veya kılcal damarlardan yapılır. Retikülosit sayısı, akış sitometrisi yöntemi kullanılarak belirlenir. Erkekler için referans değerler 23-70 bin / μl, kadınlar için - 17-63,8 bin / μl. Analiz süresi 1 iş gününü geçmez.

Retikülositler eritrositlerin öncülleridir. Kök hücrelerin farklılaşması ve bölünmesi sırasında kemik iliği tarafından üretilirler. Retikülositlerin çoğu kemik iliğinde bulunur; zaten olgun eritrositler esas olarak kan dolaşımına girer. Kandaki retikülositlerin oranı yaklaşık %0.5-2'dir. Analiz yapılırken, bu tipteki hücrelerin sayısı ve toplam kırmızı kan hücrelerinin yüzdesi belirlenir. Sonuçlar, bu sürecin aktivite derecesini belirlemek için kemik iliğinde kırmızı kan hücrelerinin üretimini değerlendirmemize izin verir.

Vücut, kandaki sabit bir kırmızı kan hücresi seviyesini korur. Hemoliz, bozulmuş sentez ve kanama sonucu sayılarında azalma ile normal konsantrasyonları geri kazanmak için telafi edici mekanizmalar aktive edilir. Retikülositlerin seviyesini ve yüzdesini değiştirerek, kemik iliğinde kırmızı kan hücrelerinin üretiminde bir artış veya bu sürecin bir inhibisyonu sağlanabilir. Kemik iliği normal çalışıyorsa, kırmızı kan hücrelerinin kaybı, sayılarında ve retikülosit sayısında müteakip bir artışa yol açar. Kırmızı kemik iliği bir tümör, metastaz, radyasyon tedavisi ve kemoterapi tarafından hasar gördüğünde bu hücre tiplerinin seviyesinde bir azalma meydana gelir. Retikülositlerin analizi için biyomateryal kılcal veya venöz kandır. Çalışma, akış sitometrisi ile bir hematolojik analiz cihazı kullanılarak gerçekleştirilir. Sonuçlar genel terapötik uygulamada, hematolojide, pediatride, bulaşıcı hastalıklarda ve cerrahide kullanılır.

Belirteçler

Retikülosit testi, kemik iliği tarafından kırmızı kan hücrelerinin üretimini değerlendirmek için kullanılır. Çalışmanın sonuçları, farklı anemi türlerini ayırt etmemizi sağlar. Retikülositlerin seviyesine göre, hiporejeneratif ve rejeneratif olarak ayrılırlar. İlk durumda, test parametreleri azalır, kırmızı kan hücrelerinin üretimi yetersiz kalır ve kemik iliğinin işlevleri baskılanır. Bu grup, kronik hastalıklarda hemolitik anemi, genel zehirlenme, kaşeksi, protein, demir, vitamin eksikliğini içerir. Rejeneratif anemiye, artan yıkım veya eritrosit kaybının arka planına karşı retikülosit seviyesinde telafi edici bir artış eşlik eder. Bu grup posthemorajik ve bazı hemolitik anemileri içerir. Aneminin ciddiyetini belirlemek için retikülosit analizi kullanılabilir, ardından sonuçları eritrosit, hemoglobin ve eritrosit indeksleri düzeyi göstergeleri ile desteklenir.

Retikülosit seviyesinin belirlenmesi, düşük kırmızı kan hücreleri, hemoglobin seviyesi, sık yorgunluk, baş ağrısı, nefes darlığı, idrarda veya dışkıda kan şikayetleri ile belirtilir. Yerleşik bir anemi teşhisi ile tedavinin etkinliğini değerlendirmek için bir analiz yapılır. Özellikle demir, B12 vitamini veya folik asit eksikliğinden kaynaklanan aneminin yanı sıra böbrek yetmezliği, kronik hastalıkların arka planında gelişen anemiyi izlemek için sıklıkla kullanılır. Kemik iliği fonksiyonunu değerlendirmek için, polisiteminin nedenini belirlemek için yüksek kırmızı kan hücresi sayıları için bir retikülosit testi endikedir.

Teşhis için kan retikülosit testi kullanılmaz. Klinik uygulamadaki temel amacı, ileri teşhis prosedürlerini planlamak ve tedavinin başarısını izlemektir. Kandaki retikülosit sayısı nispeten sabittir, bu nedenle eritrosit ve hematokrit seviyesindeki bir azalma ile analiz göstergeleri yapay olarak yükselir. Bu, retikülosit indeksi - mutlak retikülosit sayısı (retikülosit yüzdesi çarpı hematokrit indeksi) hesaplanarak önlenebilir. Bu çalışmanın bir başka özelliği de, olgunlaşmamış kırmızı kan hücreleri 2 gün boyunca kanda dolaşırken, sonuçların yakın zamandaki kemik iliği aktivitesini göstermesidir.

Analiz için hazırlık ve materyal toplama

Sabahları aç karnına retikülosit analizi için kan alınması önerilir. Yemek ile işlem arasındaki minimum aralık 3-4 saattir. En az bir gün önceden yoğun fiziksel efordan, alkol tüketiminden vazgeçmek, stres faktörlerine maruz kalmaktan kaçınmak gerekir. Bir analiz yazarken, bazı ilaçlar kandaki retikülosit seviyesini etkilediğinden, kullanılan ilaçlar hakkında doktora bilgi vermeye değer. Örnekleme prosedüründen 30 dakika önce sigarayı bırakmanız, fiziksel ve duygusal stresi ortadan kaldırmanız gerekir.

Retikülositlerin seviyesi kılcal veya venöz kanda belirlenir. Buna göre çit yüzük parmağından veya kübital damardan yapılır. Kan, antikoagülanlı bir test tüpüne konur ve laboratuvara gönderilir. Şu anda, hematoloji analizörleri retikülositleri saymak için hemen hemen her yerde kullanılmaktadır. Çalışma, akış sitometrisi ile gerçekleştirilir - sıvı akışındaki hücreler çok dar bir kılcal damardan geçer ve lazer ışıması sırasında dikkate alınır. Analizin performans şartları - 1 gün.

normal değerler

Retikülosit analizinin sonuçları, kanın birim hacmi başına mutlak hücre sayısını ve toplam eritrosit sayısının yüzdesini gösterir. Normalde kadın hastalarda retikülosit seviyesi 17 * 109 ila 63.8 * 109 hücre / l, erkek hastalarda - 23 * 109 ila 70 * 109 hücre / l arasındadır. Bu tip hücrelerin toplam eritrosit sayısı içindeki oranı yaşla birlikte değişir:

• doğumdan 2 haftaya kadar - %0,15'ten %1,5'e;
• 2 haftadan 1 aya kadar - %0,45'ten %1,4'e;
• 2 ila 6 ay - %0,25 ila %0,9;
• 6 aydan 2 yıla kadar - %0,2'den %1'e;
• 2 ila 6 yaş arası - %0,2 ila %0,7;
• 6 ila 12 yaş arası - %0,2 ila %1,3;
• 12 ila 18 yaş arası - kızlar için %0,12'den %2,05'e, erkekler için %0,24'ten %1,7'ye;
• 18 yaşından itibaren - kadınlar için %0,59'dan %2,07'ye, erkekler için %0,67'den %1,92'ye.

Kandaki retikülosit seviyesinde fizyolojik bir artış, çok yükseklere tırmanma veya su altında inme, havalandırılmayan bir odada uzun süre kalma, sigara içme ve alkol almanın neden olduğu oksijen açlığı sırasında meydana gelir. Ek olarak, hamile kadınlarda bazen bu hücrelerin konsantrasyonunda bir artış belirlenir ve normun bir varyantı olarak kabul edilir.

Seviye atlamak

Kandaki retikülosit seviyesindeki artışın nedeni kanama olabilir. Eritrositlerin konsantrasyonu onu eski haline getirmek için azalır, kemik iliği öncüllerinin üretimini arttırır. Akut kanamada retikülosit sayısı 3. veya 4. günde artar, kronik kanamada ise sürekli yüksek kalır. Hemolizin (kırmızı kan hücrelerinin yok edilmesi) eşlik ettiği hastalıklarda, retikülosit sayısı normu önemli ölçüde aşar, bazen sapmalar% 300'e ulaşır. Bu grubun en yaygın patolojileri, eritrositlerdeki kalıtsal kusurlar, bunların otoimmün yıkımı ve sıtmadaki toksik hasardır. Retikülosit seviyesindeki artışın diğer nedenleri polisitemi, enflamatuar süreçler, kemik iliği kanseri veya ona metastazların yayılması, radyasyon ve kemoterapi sonrası kemik iliği fonksiyonunun restorasyonu olabilir. Anemi tedavisinde retikülosit konsantrasyonunun normalleşmesi terapötik önlemlerin başarısını gösterir.

Seviye azaltma

Kandaki retikülosit seviyesinin azalmasının nedeni demir, B12 vitamini veya folik asit eksikliğinden kaynaklanan anemi olabilir. Bu gibi durumlarda, "yapı malzemesi" eksikliğinden dolayı kan hücrelerinin üretimi azalır. Retikülosit seviyesindeki azalmanın bir başka nedeni, kemik iliği lezyonlarının arka planında gelişen veya fonksiyonlarının inhibisyonu olan anemidir. Bu tür değişiklikler, alkol zehirlenmesi, tiroid bezinin aktivitesinde azalma, kronik enfeksiyonlar, otoimmün patolojiler, böbrek hastalıkları, ilaçlar dahil toksik maddelere maruz kalma, radyasyon ile belirlenir.

Normdan sapmaların tedavisi

Klinik uygulamada, bir retikülosit testi çoğunlukla kırmızı kan hücrelerinde ve hemoglobinde azalma ile tam kan sayımından sonra reçete edilir. Retikülosit seviyesi, kemik iliğinin işlevlerini, kırmızı kan hücrelerinin sentezini değerlendirmenize, anemi tipini belirlemenize ve tedavisinin etkinliğini izlemenize olanak tanır. Çalışmanın sonuçları normalden sapıyorsa, doktorunuzdan - pratisyen hekim, çocuk doktoru, hematolog, cerrah - tavsiye almalısınız. Fizyolojik faktörlerin retikülosit sayısı üzerindeki etkisini önlemek için, oksijen açlığına neden olan durumları dışlamak gerekir - yüksekliğe tırmanma veya su altında inme, gazlı veya havasız bir odaya uzun süre maruz kalma, sigara içme, alkol alma.

bir psikiyatrist ile telefon konsültasyonu