Anticorpii sunt consumul de medicamente. Imunoterapia: mecanismul de acțiune și utilizarea clinică a medicamentelor imunocorectoare. Efectele secundare ale anticorpilor monoclonali

Astăzi au devenit un reactiv necesar în laboratoarele biologice. Vânzările de medicamente care conțin anticorpi monoclonali care vizează tratarea bolilor severe (psoriazis, cancer, artrită, scleroză) au o cifră de afaceri de mai multe miliarde de dolari. Deși în 1975, când a fost publicat un articol despre metoda de producere a hibridoamelor, doar câțiva credeau în aplicarea lor practică.

Ce sunt anticorpii monoclonali

Sunt produse de celulele imune derivate de la același predecesor, aparținând aceleiași clone. Acest fenomen se observă la creșterea limfocitelor B în cultură. Astfel de anticorpi pot fi produși împotriva aproape oricărui antigen natural (de exemplu, pentru a lupta împotriva proteinelor și polizaharidelor străine), pe care se vor lega în mod specific. Ele sunt apoi folosite pentru a detecta această substanță sau pentru a o purifica. Monoclonele sunt utilizate pe scară largă în biochimie, biologie moleculară și medicină. Anticorpii nu sunt ușor de produs, ceea ce le afectează direct costul.

Prepararea anticorpilor monoclonali

Acest proces începe cu imunizarea animalelor, de obicei șoareci. Pentru a face acest lucru, se introduce un antigen specific, care sintetizează anticorpi împotriva acestuia. Splina este apoi îndepărtată de la șoarece și omogenizată pentru a obține o suspensie celulară. Conține celule B care produc anticorpul. Acestea sunt apoi amestecate cu mielomul (plasmocitomul murin), care are o capacitate continuă de a sintetiza propriul fel în cultură (clone tumorale).

Datorită fuziunii, se formează hibrizi de celule tumorale și normale (hibridoame), în continuă creștere și capabili să producă un amestec de anticorpi cu o anumită specificitate. Următorul pas după obținerea unui hibrid este clonarea și selecția. Aproximativ 10 celule fuzionate sunt plasate în fiecare godeu al unei plăci speciale și cultivate, testându-le pentru producerea de imunoglobuline specifice. Hibridoamele din godeuri care conțin anticorpii identici (paraproteine) doriti sunt donate și testate din nou. Acest lucru se face de 1-2 ori.

Ca rezultat, se obțin celule care sunt capabile să-și producă propriile imunoglobuline cu o singură specificitate unică dorită. Clonele pot fi apoi congelate și depozitate. Sau cultivați, acumulați, inoculați la șoareci, unde vor crește și ei. Ulterior, moleculele de imunoglobulină rezultate sunt purificate de impuritățile străine prin diverse metode și utilizate pentru diagnosticare în laboratoare sau pentru uz terapeutic.

Este important de menționat că clona celulară obținută folosind un hibridom este o imunoglobulină murină, care, dacă intră în corpul uman, va provoca o reacție de respingere. O soluție a fost găsită datorită tehnologiilor recombinante. Luând un fragment dintr-un monoclon de șoarece, l-am combinat cu un fragment de imunoglobulină umană. Drept urmare, s-au obținut hibridoame, numite himerice, care erau deja mai apropiate de om, dar totuși provocau reacții imune în organism care diferă de cele cerute.

Următorul pas a fost făcut datorită ingineriei genetice și este asociat cu crearea de așa-numiți anticorpi umanizați, omologi în proporție de 90% imunoglobulinei umane. Din monoclona originală de șoarece hibridom, doar o mică parte rămâne din fuziunea celulelor care sunt responsabile pentru legarea specifică. Sunt utilizate în studiile clinice.

Aplicație

Monoclonele înlocuiesc cu succes serurile imune. Hibridoamele au creat capabilități uimitoare în analiză: sunt folosite ca „microscop” cu o rezoluție neobișnuit de mare. Cu ajutorul lor, este posibil să se detecteze antigene unice caracteristice celulelor canceroase ale unor țesuturi specifice, să se obțină monoclone cu o anumită specificitate pentru acestea și să le folosească pentru diagnosticarea și tipizarea tumorilor. De asemenea, sunt folosite în tratamentul psoriazisului, sclerozei multiple, artritei, bolii Crohn, cancerului de sân și multe altele.

Pentru psoriazis

Pentru tratamentul formelor severe de psoriazis, sunt prescriși glucocorticosteroizi sistemici (hormoni steroizi), care afectează nivelul hormonal uman și suprimă imunitatea locală. Anticorpii monoclonali pentru psoriazis acționează exclusiv asupra celulelor active ale inflamației psoriazice, fără a suprima complet sistemul imunitar. Efectul terapeutic este scăderea activității inflamatorii, normalizarea diviziunii celulare a pielii și dispariția plăcilor de psoriazis.

Pentru artrita reumatoida

Anticorpii monoclonali pentru artrita reumatoida s-au dovedit eficienti in situatiile in care alte medicamente nu au avut efect terapeutic. În țările europene de astăzi, principala direcție terapeutică pentru această boală este astfel de medicamente. Cursul terapeutic este lung, deoarece medicamentele sunt eficiente, dar lente. Din cauza dificultăților de diagnosticare a artritei, trebuie să solicitați ajutor medical cât mai devreme, la primele simptome și suspiciuni.

Pentru tratamentul cancerului

Pentru un număr mare de pacienți cu oncologie, produsele farmaceutice care conțin monoclone au devenit speranța de recuperare și de revenire la viața normală. Mulți oameni cu tumori maligne mari ale corpului, multe celule tumorale și prognostic prost după un curs de terapie au simțit o îmbunătățire a stării lor. Anticorpii monoclonali pentru tratamentul cancerului au avantaje evidente:

1. Prin atașarea la celulele maligne, acestea nu numai că le fac mai vizibile, ci și le slăbesc și le perturbă structura. Este mult mai ușor pentru organismul uman să lupte împotriva lor.
2. După ce și-au găsit ținta, ei ajută la blocarea receptorilor de creștere a tumorii.
3. Anticorpii sunt dezvoltați în condiții de laborator, unde sunt combinați în mod deliberat cu cantități mici de particule radioactive. Prin transportarea acestor particule prin corp, ele le livrează direct în tumoare, unde încep să acționeze.

Principiul tratamentului

Acțiunea monoclonelor este simplă: recunosc anumite antigene și se leagă de ei. Datorită acestui fapt, sistemul imunitar observă rapid problema și o luptă. Ele ajută corpul uman să facă față singur cu antigenele. Un alt avantaj uriaș este că acţionează exclusiv asupra celulelor alterate patologic, fără a dăuna celor sănătoase.

Medicamente cu anticorpi monoclonali

Deși hibrizii de celule normale și tumorale de acest tip au fost inventați nu cu mult timp în urmă, gama de medicamente care le conțin pare deja impresionantă. Noi produse farmaceutice apar în mod regulat. Astfel de medicamente, ca majoritatea medicamentelor, au diferite efecte secundare. Adesea, după utilizarea substanțelor monoclonale, există plângeri de reacții alergice sub formă de mâncărime și erupții cutanate. Ocazional, terapia este însoțită de greață, vărsături sau tulburări intestinale. Citiți mai multe despre medicamentele eficiente mai jos.

Stelara

Folosit în tratamentul formelor severe de psoriazis în plăci. Produsul farmaceutic constă din monoclone umane, ceea ce reduce riscul de efecte secundare la minimum. Forma de eliberare: soluție pentru administrare subcutanată în flacon sau seringă. Doza recomandată este de 45 mg pe zi. A doua injecție se administrează la 4 săptămâni după prima, apoi injecțiile se administrează o dată la 12 săptămâni. Efectul terapeutic al Stelar va apărea în 15-20 de zile. Tratamentul de întreținere asigură durata remisiunii. După 2 injecții, pielea este curățată cu 75%.

Remicade

Este un anticorp himeric bazat pe monoclone umane și de șoarece. Medicamentul reduce inflamația epidermei și reglează diviziunea celulelor pielii. Forma de eliberare: pulbere liofilizata pentru prepararea solutiei parenterale sau in sticle de 20 ml. Compoziția pentru perfuzie se administrează intravenos timp de 2 ore cu o viteză de până la 2 ml pe minut. Doza depinde de severitatea bolii. Se administrează injecții repetate la 2 și 6 săptămâni după prima. Pentru a menține efectul, terapia se repetă la fiecare 1,5-2 luni.

Humira

Monoclonă recombinantă cu o secvență peptidică identică cu cea umană. Medicamentul este eficient în tratamentul formelor complexe de psoriazis, artritei reumatoide active severe și artritei psoriazice. Se utilizează ca injecție subcutanată în abdomen sau suprafața femurală anterioară. Forma de eliberare: soluție pentru administrare subcutanată. Injecțiile de 40 mg se administrează o dată la 2 săptămâni.

Acest capitol discută aspecte legate de manifestările imunogenității nedorite a preparatelor de anticorpi monoclonali (denumite în continuare mAb) destinate utilizării clinice. Acestea includ factori care influențează imunogenitatea mAb, implicațiile clinice ale imunogenității, aspecte analitice, evaluarea anticorpilor neutralizanți la anticorpii monoclonali și problemele unei abordări bazate pe risc pentru analiza imunogenității mAb.

1. Introducere

Apariția imunogenității nedorite poate fi o problemă semnificativă atunci când se tratează pacienții cu medicamente biologice. Recomandările pentru evaluarea imunogenității medicamentelor pe bază de proteine ​​obținute prin biotehnologie sunt prezentate în Capitolul 11 ​​din prezentele Reguli, care se aplică și medicamentelor mAb. Deși multe aspecte ale imunogenității mAb-urilor sunt similare cu cele ale altor proteine ​​terapeutice, unele necesită o atenție mai atentă. Nu se așteaptă ca anticorpii monoclonali să inducă anticorpi care reacţionează încrucişat și neutralizează anticorpii endogeni (cum este cazul eritropoietinei), deoarece nu sunt utilizaţi ca terapie de substituţie.

Cel mai adesea, medicamentele mAb sunt utilizate ca agenți terapeutici sau de diagnostic atunci când este disponibilă o alternativă terapeutică sau de diagnostic. Cu toate acestea, unele aspecte specifice ale imunogenității sunt exclusive sau predominante pentru mAb-uri sau noile medicamente pe bază de mAb (de exemplu, fragmente Fab, fragmente Fv cu catenă unică scFv, nanocorpi, minianticorpi) care sunt discutate în acest capitol. MAb reprezintă un subgrup mare și foarte important de medicamente biologice.

Gama de indicații pentru utilizarea mAbs în tratamentul bolilor este foarte largă. Utilizarea multor medicamente mAb este însoțită de manifestări de imunogenitate nedorită, în unele cazuri acest lucru duce la un răspuns clinic incomplet sau la dezvoltarea unor reacții adverse grave rare care necesită intervenție clinică. Gama largă de medicamente mAb dezvoltate și înregistrate pentru diverse indicații împiedică elaborarea unor recomandări specifice aplicabile în toate situațiile.

2. Domeniul de aplicare

Principiile generale se referă la dezvoltarea și efectuarea unei evaluări sistematice a răspunsului imun nedorit la primitori după administrarea unui mAb terapeutic sau diagnostic in vitro. Cerințele se aplică preparatelor mAb, derivaților acestora (de exemplu, fragmente Fab, ScFv, nanoanticorpi, minianticorpi) și produselor care conțin componente mAb (de exemplu, conjugate, proteine ​​de fuziune legate de Fc).

Acest capitol discută aspectele cheie de calitate și clinice care sunt importante pentru a aborda în mod adecvat provocările de identificare și evaluare a riscului unui răspuns imun advers la un anumit produs mAb la pacienții cu o indicație specifică declarată. Prevederile cuprinse în acest capitol se aplică medicamentelor aflate în etapele finale de dezvoltare, în special în etapa de depunere a cererii de înregistrare, dar multe dintre prevederi sunt aplicabile și stadiilor anterioare de dezvoltare a medicamentelor mAb.

3. Dispoziții generale

Acest capitol ar trebui citit împreună cu alte capitole din prezentele Reguli și cu alte acte relevante incluse în dreptul Uniunii.

4. Probleme de screening și studii de confirmare utilizate în evaluarea imunogenității preparatelor de anticorpi monoclonali

4.1. Metode analitice pentru detectarea anticorpilor

Pentru a determina conținutul de anticorpi la medicamentul mAb, poate fi utilizat orice format de metode imunologice de determinare cantitativă. Cu toate acestea, metodele de cuantificare care utilizează metode simple cum ar fi ELISA sau radioimunoprecipitarea nu sunt potrivite pentru mAb-uri decât dacă sunt adaptate pentru a depăși această dificultate. În acest sens, este necesar să se dezvolte alte abordări pentru determinarea mAbs.

O abordare comună este utilizarea unui format de „liant”, cum ar fi ELISA sau electrochimiluminiscența (ECL), care nu necesită reactivi anti-imunoglobulină și, prin urmare, poate fi utilizat direct în studiile mAb. În unele cazuri, această metodă poate fi mai puțin sensibilă decât alte metode imunologice și necesită un efort semnificativ de dezvoltare pentru a crea o metodă de cuantificare adecvată. De asemenea, nu detectează eficient anticorpii IgG4 care se formează în unele cazuri.

O altă abordare este utilizarea metodei rezonanței plasmonilor de suprafață (denumită în continuare SPR). Nu necesită utilizarea de reactivi anti-imunoglobuline pentru a detecta anticorpi la mAb. Această metodă este în timp real, făcând-o rapidă și permițând detectarea anticorpilor cu disociere rapidă care pot fi omise prin alte metode.

Deoarece SPR detectează pur și simplu legarea proteinelor de cipul acoperit, este necesar să se confirme că semnalul provine de la anticorpi. Poate fi mai puțin sensibil decât alte metode de detectare a anticorpilor cu afinitate mare și, în absența unui sistem automat de preparare a probei, poate avea un randament scăzut (randament scăzut). Probele (de obicei ser sau plasmă) pot conține substanțe care pot distorsiona rezultatele testelor, adică pot provoca un efect de matrice, care constă în obținerea de rezultate fals pozitive sau fals negative și/sau evaluarea incorectă a nivelurilor de anticorpi.

4.2. Prezența preparatului de anticorpi monoclonali în probe pentru analiză

Preparatele mAb intacte au perioade de înjumătățire relativ lungă și rămân în fluxul sanguin pentru o perioadă lungă de timp. Chiar și fragmentele lor pot rămâne în sânge câteva zile. Acest lucru poate complica în mod semnificativ detectarea răspunsului imun datorită prezenței medicamentului mAb în probele colectate pentru detectarea anticorpilor. Acest lucru duce, de obicei, la estimări de anticorpi artefactual scăzute în probele potrivite (afectate) și poate fi atât de grav încât să conducă la rezultate fals negative. Au fost propuse mai multe abordări pentru a depăși aceste dificultăți.

Prima abordare este de a întârzia eșantionarea până când nivelul medicamentului mAb a fost redus la niveluri care nu sunt problematice. Această abordare poate rezolva problema unor preparate mAb, dar necesită un studiu atent, deoarece poate duce la imunogenitatea nedetectată datorită reducerii anticorpilor induși la cantități nedetectabile în momentul prelevării probei.

O altă abordare este utilizarea unei metodologii care este cel mai puțin afectată de problema specificată. Se pare că tehnicile bazate pe ECL sunt mult mai puțin afectate de reziduurile de medicamente din probe decât alte tehnici, inclusiv lianții standard ELISA. O tehnică larg descrisă pentru rezolvarea unei probleme este includerea Un document care descrie obiectivele și metodologia experimentală pentru realizarea unui studiu și include orice modificări aduse acestuia. plan de cercetare o etapă preliminară de disociere a complexului antigen-anticorp pentru a distruge toate complexele înainte de detectarea anticorpilor.

Au fost descrise diferite versiuni ale tehnicilor, inclusiv incubarea acidă, în unele cazuri combinată cu separarea prin afinitate a medicamentului, dar rezultatele acestora trebuie analizate cu prudență deoarece pașii suplimentari pot invalida tehnica. Într-o a treia abordare, probele pot fi diluate pentru a obține niveluri reziduale de medicament care nu interferează cu procedura. Această abordare necesită o mare prudență deoarece poate duce la concluzii fals negative despre imunogenitate din cauza lipsei de sensibilitate pentru detectarea anticorpilor în probele diluate folosind această tehnică. În unele cazuri, conținutul rezidual de mAb în probe trebuie cuantificat. În multe cazuri, o combinație a tuturor celor trei abordări este utilizată pentru a reduce părtinirea medicamentului în timpul dezvoltării, validării și testării metodei de detectare a anticorpilor antimonoclonali.

4.3. Teste de confirmare

Metodele de cuantificare confirmatoare sunt supuse acelorași probleme ca și metodele de screening. Trebuie selectată metoda corectă de cuantificare de confirmare, ținând cont de metoda de screening utilizată. Proteina A și Proteina G pot fi utilizate în metode de confirmare pentru a confirma că un rezultat pozitiv se datorează într-adevăr imunoglobulinei, dar pot fi utilizate și alte abordări în acest scop.

4.4. Probele de control

Problema cheie în studiile de imunogenitate mAb este producerea de seruri care vor servi drept control pozitiv. Un ser de control pozitiv selectat sau un anticorp purificat este necesar pentru a monitoriza sensibilitatea și specificitatea testului. Dacă nu se poate obține ser uman (de exemplu, în fazele incipiente ale dezvoltării medicamentului), atunci singura opțiune este utilizarea serului animal.

Alegerea speciilor de animale în aceste scopuri are consecințe importante. Primatele non-umane montează un răspuns puternic anti-CDR și anti-cadru la mAb umani și umanizați, care poate imita îndeaproape răspunsul uman și poate servi ca un control pozitiv adecvat. În timp ce non-primatele produc anticorpi predominant la regiunile constante ale mAb, ceea ce nu este tipic pentru răspunsul imun uman. În unele cazuri, utilizarea unui antiser anti-idiotipic sau mAb poate servi ca un control pozitiv. Este necesar să selectați controalele negative corecte. Pentru a confirma specificitatea metodelor de cuantificare de confirmare, este posibil să se utilizeze probe care conțin mAb irelevante.

5. Evaluarea capacității de neutralizare a anticorpilor induși de anticorpii monoclonali ai medicamentelor

MAb-urile își exercită efectele printr-o varietate de mecanisme, variind de la simpla legare la antigen, care mediază ea însăși efectul clinic, până la legarea de antigen și medierea a 1 sau mai multe mecanisme imunobiologice care determină împreună răspunsul clinic general. Prin urmare, deși poate părea că legarea simplă este singurul mecanism care determină eficacitatea clinică, pot contribui și alte efecte. În unele cazuri, funcțiile multiple ale mAb acționează aditiv sau sinergic, conducând la un efect clinic combinat cumulativ, care în unele cazuri este dificil de diferențiat experimental pentru a determina modul în care mAb își exercită efectul clinic.

Prin urmare, atunci când se utilizează mAb intacți, trebuie să se exercite prudență atunci când se presupune că efectele imunobiologice mediate de Fc ale medicamentului nu contribuie la eficacitatea clinică, chiar dacă legarea simplă a antigenului este considerată a fi mecanismul principal de acțiune. În acest sens, cuantificarea pe bază de celule este avantajoasă pentru determinarea neutralizării. În astfel de cazuri, folosind metode biologice și imunologice de cuantificare, este necesar să se stabilească cu atenție caracteristicile biologice ale mAbs. Proprietățile mAb trebuie apoi evaluate pentru a determina strategia adecvată de cuantificare a neutralizării. Anticorpii care neutralizează activitatea biologică a medicamentelor biologice pot reduce eficacitatea lor clinică. Este necesar să se determine capacitatea de neutralizare a tuturor anticorpilor produși. Absența unor astfel de date necesită justificare.

Pentru majoritatea medicamentelor biologice, cea mai potrivită metodă de cuantificare a capacității de neutralizare a anticorpilor este o metodă biologică cantitativă, care determină neutralizarea activității biologice a medicamentului de către anticorpi. În același timp, natura modului clinic de acțiune al mAb-urilor sugerează că cea mai pronunțată reducere a eficacității clinice este produsă de anticorpi care blochează legarea mAb-urilor de țintă.

Astfel, metodele de alegere pentru determinarea capacității de neutralizare a mAb-urilor sunt metode competitive de legare a ligandului, mai degrabă decât metodele biologice cantitative clasice. Acest lucru distinge mAb-urile de alte clase de medicamente biologice în ceea ce privește evaluarea imunogenității.

6. Gestionarea riscurilor de imunogenitate a preparatelor de anticorpi monoclonali

6.1. Identificarea riscurilor Imunogenitate

MAb-urile sunt complexe; există o serie de factori greu de înțeles care fac dificilă prezicerea cu acuratețe a unui răspuns imun semnificativ clinic la un anticorp monoclonal terapeutic sau diagnostic. In vitro, s-au dezvoltat abordări preclinice care vizează epitopii celulelor T generați, dar au capacitatea limitată de a prezice imunogenitatea medicamentului la om. Cu toate acestea, astfel de tehnici pot fi utile în selectarea moleculelor candidate pentru dezvoltare ulterioară. După cum se menționează în Capitolul 11 ​​al acestor Reguli, este necesar să se studieze aspectele standard ale imunogenității fiecărui nou mAb pentru uz medical, ținând cont de proprietățile acestuia, de natura utilizării propuse și de indicația de utilizare. Proiectarea studiilor viitoare se bazează pe date preliminare de imunogenitate obținute din studii clinice timpurii, cum ar fi studii de performanță ale tehnicilor bioanalitice, detectarea anticorpilor preexistenți sau alți factori care pot confunda detectarea anticorpilor mAb provocați de utilizarea sa.

Pe baza strategiei de identificare și evaluare a riscurilor descrise mai jos, programul standard de imunogenitate poate fi redus (cu o justificare detaliată) sau poate fi necesar să fie îmbunătățit, în funcție de nivelul riscurilor identificate. În toate cazurile, solicitantul trebuie să efectueze o identificare amănunțită a riscurilor ținând cont de proprietățile produsului și de utilizarea propusă a acestuia. Date preliminare Ar trebui să se țină cont de datele disponibile, sau de lipsa acestora, despre alte mAb similare (de exemplu, cele care se leagă la aceeași clasă de ținte, exprimate prin aceleași sisteme de expresie). Dacă metodologia de detectare a anticorpilor anti-mAb sau de detectare a consecințelor clinice (de exemplu, concentrația reziduală de mAb, parametrii PD și efectul terapiei cu mAb) ale anticorpilor anti-mAb nu este suficient de sensibilă, atunci percepția riscului poate fi umflată.

În astfel de cazuri, este recomandabil să se monitorizeze mai atent dinamica răspunsului anti-mAb, corelând-o cu rezultatele terapeutice. Structura mAbs Anticorpii pot fi produși la diferiți epitopi, care sunt părți diferite ale moleculei mAb, de exemplu, regiuni variabile sau constante.

Recunoașterea anticorpilor heterologi (de exemplu, secvențe de rozătoare sau mAb-uri himerice) ca străini este cauza principală a imunității mediate de anticorpi, iar auto-anticorpi pot fi produși pentru orice parte a acestora. În cazul secvențelor mAb umanizate sau complet umane care au secvențele de aminoacizi numai ale imunoglobulinei umane, răspunsul imun se manifestă prin formarea de anticorpi în principal anti-idiotipici specifici secvenței hipervariabile de regiuni și determinarea complementarității legării la antigen, care, cu un grad ridicat de probabilitate, poate duce la o scădere a eficacității clinice și a răspunsului la terapia mAb. Cu toate acestea, în unele cazuri, anticorpii pot fi produși în regiunea constantă a mAb-urilor umane și umanizate, care pot afecta funcțiile lor efectoare și pot afecta eficacitatea clinică a mAb-urilor.

Experiența clinică cu noile modele bazate pe mAb este limitată, ceea ce poate crește, de asemenea, percepția riscului. O atenție deosebită trebuie acordată următoarei generații de medicamente, de exemplu, mAb-urile bispecifice și fragmentele mAb, precum și capacitatea lor de a expune determinanții antigenici ascunși. Profilurile de glicozilare modificate pot reduce sau crește proprietățile imunogene ale unei molecule (de exemplu, protecția modificată a scheletului proteic). Profilurile de glicozilare atipice, cum ar fi cele întâlnite la începutul utilizării noilor sisteme de expresie, pot prezenta un risc crescut de imunogenitate în comparație cu sistemele de expresie utilizate în mod obișnuit.

Alți factori care afectează imunogenitatea includ impuritățile de fabricație și alți factori de calitate. Prin urmare, pot fi necesare abordări analitice și clinice mai aprofundate pentru a evalua, caracteriza și, eventual, atenua astfel de riscuri potențiale, iar riscurile asociate cu calitatea produsului trebuie identificate în mod corespunzător. De exemplu, un mAb la o țintă pentru care s-a acumulat o experiență semnificativă, dar care este produsă folosind un nou sistem de expresie, poate avea un risc perceput mai mic în ceea ce privește mecanismul său de acțiune, dar un risc crescut în ceea ce privește impactul potențial al impurități din cauza cunoștințelor insuficiente despre siguranța acestuia.

Mecanism de acțiune. Este necesar să se caracterizeze corespunzător și să se studieze în mod cuprinzător mecanismul de acțiune al mAbs (de exemplu, citolitic, apoptotic) și, în special, proprietățile moleculei țintă (de exemplu, suprimarea imună sau stimularea). Anticorpii la mAb care vizează idiotipul mAb tind să reducă eficacitatea. De asemenea, efectul anticorpilor mAb care recunosc alotipul sau alte situsuri ar trebui studiat cu atenție, deoarece formarea complexelor imune poate duce la reacții adverse la primitor. Efectele indirecte ale anticorpilor produși ca răspuns la mAb pot fi, de asemenea, importante, de exemplu, mAb-urile care vizează moleculele implicate în cascadele de semnalizare pot induce anticorpi care se leagă încrucișat cu moleculele țintă, acționând ca un agonist, ceea ce poate duce la o activare crescută a sistemului imunitar. sistem și poate duce la sindroame de eliberare de citokine. Acest lucru este destul de dificil de prezis la nivelul unui pacient individual. Pentru agoniştii mAb şi mAb-urile a căror reticulare poate duce la activarea imună, solicitanţii trebuie să aibă în vedere monitorizarea atentă a pacienţilor în timpul studiilor clinice timpurii pentru astfel de evenimente.

Factori clinici. Factorii clinici au o influență semnificativă asupra imunogenității. Imunogenitatea la mAb poate fi dependentă de vârstă, de exemplu, metabolismul proteinelor diferă între copii și adulți, ceea ce poate duce la diferențe de imunogenitate, de exemplu, anticorpii utilizați pentru artrita juvenilă în comparație cu artrita reumatoidă la doze comparabile. Un istoric de administrare de anticorpi similari sau înrudiți poate afecta, de asemenea, imunogenitatea. Medicamentele MAb utilizate în regimuri de dozare intermitentă (de exemplu, intervale diferite între administrările de medicamente) pot avea o probabilitate mai mare de a fi imunogene decât medicamentele utilizate în regimurile de dozare obișnuite sau ciclice. Prezența efectelor semnificative clinic în anticorpii la mAb este determinată de locul de legare al anticorpului, afinitatea acestuia pentru mAb și titrul său.

Anticorpii la mAb pot fi tranzitori și să dispară în timpul tratamentului sau, dimpotrivă, persistă pe tot parcursul tratamentului și chiar mai mult. Producerea de anticorpi la unele mAb nu duce la nicio consecință clinică semnificativă, în timp ce producerea lor pentru alții poate duce la scăderea eficacității sau la evenimente adverse legate de tratament.

6.2. Evaluare a riscurilor

Mulți factori contribuie la răspunsul imun la mAb și trebuie luați în considerare în timpul evaluării riscului. Factorii care influențează frecvența și severitatea răspunsului imun la mAbs (factori de risc specifici medicamentului, de fabricație și de boală și/sau pacient) pot fi utilizați pentru a caracteriza acești factori de risc în termeni de disponibilitate și fezabilitate. strategii de evaluare (sau identificare) a riscurilor.

Identificarea riscurilor pe baza factorilor discutați mai sus conduce la o evaluare care integrează riscurile clinice individuale și un program de imunogenitate planificat corespunzător ca parte a dezvoltării clinice. Evaluarea riscurilor necesită o abordare multidisciplinară care să ia în considerare toate riscurile identificate, de exemplu, datorită strategiei de control al calității a medicamentului, inclusiv compoziția medicamentului, justificarea limitelor de acceptare pentru variantele înrudite și impuritățile aferente. Acest lucru implică, de asemenea, că, dacă un mAb este modificat în diferite stadii de dezvoltare a medicamentului, ar trebui efectuată o evaluare a riscurilor cumulate cu fiecare studiu de comparabilitate efectuat în timpul dezvoltării.

Astfel, principalul aspect al evaluării riscului este analiza incidenței și consecințelor clinice ale unui răspuns imun nedorit, precum și posibilitatea prevenirii unor astfel de consecințe, determinarea corectă a acestora și (sau) corectarea medicală. În funcție de riscurile identificate și de măsurile de supraveghere și atenuare disponibile pentru astfel de riscuri, programul de studiu al imunogenității poate fi mai mic sau mai mare decât cel descris în Capitolul 11 ​​din prezentele Reguli. Solicitanții trebuie să justifice și să analizeze abordarea adoptată. În funcție de clasa și subclasa de mAbs (cei care afectează funcțiile imunobiologice, cum ar fi legarea receptorului Fc) sau mecanismul de acțiune, consecințele clinice asociate cu răspunsurile imune adverse la mAb-urile individuale pot varia. De exemplu, mAb-urile pot fi neutralizate de anticorpi, rezultând o eficacitate redusă, sau pot provoca evenimente adverse, cum ar fi reacții la perfuzie și/sau formarea complexului imun. Aceste reacții la perfuzie pot fi severe, dar (reacții de hipersensibilitate non-alergică) pot fi reduse prin măsuri clinice adecvate, cum ar fi premedicația. Când eficacitatea este redusă, disponibilitatea altor mAb sau a proteinelor terapeutice înrudite ca tratamente alternative poate fi, de asemenea, un factor important în strategiile de reducere a riscului.

Principiu general: La depunerea unei cereri de înregistrare, trebuie furnizate date suficiente pentru a permite o evaluare a severității, frecvenței de apariție și a posibilității de identificare a riscurilor. Astfel de riscuri pot fi apoi studiate în continuare (dacă este necesar) prin studii și supraveghere după punerea pe piață.

Următorii factori pot fi valoroși ca punct de plecare în evaluarea și atenuarea riscurilor:

• stratificarea riscului bazată pe principiile identificării riscului descrise în secțiunea anterioară, combinate cu factori legați de medicamente, de exemplu, identificarea secvențelor imunogene interne, profilul fizico-chimic, inclusiv agregatele și alte variații înrudite și de fabricație, informații despre formulare, de exemplu, solubilitatea la pH fiziologic, locația a antigenului țintă etc.;
• informații despre caracteristicile funcționale ale metodei de cuantificare descrise în acest capitol, în special măsura în care selectivitatea formatului de cuantificare mAb selectat este redusă din cauza circulației reziduale a medicamentului;
• cu imperfecțiunea inevitabilă a metodei de determinare cantitativă: prezența măsurilor de completare a controlului anticorpilor la mAb, de exemplu, determinarea parametrilor PD sau PK; Disponibilitatea testelor pentru a detecta răspunsul imun timpuriu (de exemplu, detectarea precoce a mAbs de legare, testul IgM pentru a detecta răspunsul imun timpuriu);
• susceptibilitatea populației de pacienți, indicele terapeutic, starea autoimună, utilizarea simultană a imunosupresoarelor etc.;
• Comparativ cu alte domenii clinice, atenuarea în oncologie este mai dificil de detectat deoarece progresia tumorii este dificil de corelat cu producția de anticorpi.

Progresia bolii și scăderea rezultată a răspunsului la terapie în timp se observă în mod obișnuit la aproape toți pacienții, ceea ce poate face dificilă diferența de efectele mediate de imunogenitate. Ca urmare, poate fi necesar un studiu mai intens în timpul studiilor clinice pentru a determina la ce să se aștepte în contextul de după punerea pe piață, în special atunci când sunt disponibile tratamente alternative; administrarea mAbs la domiciliu și în spital: avantajele administrării mAbs într-un spital sunt ameliorarea imediată a reacțiilor de perfuzie și anafilaxia (dacă acestea apar), cu toate acestea, administrarea subcutanată de mAb la domiciliu este mai convenabilă pentru pacient.

Prin urmare, solicitantul trebuie să cântărească riscul unui răspuns imun nedorit și consecințele acestuia față de utilizarea clinică propusă. De exemplu, mAb-urile cu rate crescute de reacții după administrarea subcutanată sunt mai puțin adecvate pentru administrarea la domiciliu; Disponibilitatea unor terapii alternative sau proceduri de diagnosticare în cazul scăderii eficacității sau apariției reacțiilor la perfuzie sau a anafilaxiei.

6.3. Monitorizare și diminuare a riscurilor

În urma acestei abordări de identificare și evaluare a riscurilor, solicitanții trebuie să planifice cu atenție conceptul la începutul dezvoltării medicamentului, apoi să îl revizuiască și să îl actualizeze în mod regulat în timpul procesului de dezvoltare și pe tot parcursul ciclului de viață al medicamentului, pe măsură ce devin disponibile noi date. La începutul dezvoltării clinice, solicitanții, dacă alți factori o cer, sunt liberi, de exemplu, să atribuie un risc crescut unui mAb, chiar dacă mecanismul de acțiune în sine nu implică neapărat un risc crescut. Pe baza rezultatelor studiilor clinice ample, este posibil ca amploarea riscului să fie necesară revizuită. În timpul înregistrării, solicitanții trebuie să justifice și să revizuiască cu atenție designul general și domeniul de aplicare al studiilor de imunogenitate efectuate în timpul programului de dezvoltare. Dacă medicamentele sunt indicate a avea un potențial imunogen favorabil (de exemplu, indicate în caracteristicile generale ale medicamentului), trebuie furnizate date suplimentare pentru a justifica o astfel de indicație.

În funcție de rezultatele evaluării riscului, în unele cazuri pot fi necesare studii mai riguroase și aprofundate în timpul dezvoltării clinice. De exemplu, dacă un mAb conține structuri carbohidrate non-umane, cum ar fi galactoză-α-1,3-galactoză, testarea IgE poate fi necesară în unele cazuri pentru a preveni anafilaxia severă înainte de administrarea medicamentului la pacienți. Un alt exemplu al necesității testării IgE este incidența ridicată a reacțiilor alergice la prima administrare a unui medicament în timpul dezvoltării clinice timpurii a unui medicament. Deși determinarea subclaselor de IgG sau a altor clase de Ig, cum ar fi IgA, nu este în general o cerință standard pentru studiile de imunogenitate mAb, astfel de studii pot fi necesare dacă sunt identificate anumite riscuri (de exemplu, administrarea nazală). Cu toate acestea, pentru a stabili capacitatea de neutralizare și natura tranzitorie (persistentă) a mAbs, de regulă, este necesară eșantionarea multiplă.

În funcție de gradul de risc relativ identificat, frecvența și momentul prelevării și analizei pot varia. În etapele ulterioare de dezvoltare, este posibil să se reducă frecvența de prelevare a mAbs cu risc mai scăzut, cu condiția să nu fi fost observate evenimente adverse sau reducere a eficacității. Cu toate acestea, ar trebui să se prevadă menținerea unei bănci de mostre în mod obișnuit pe tot parcursul programului de dezvoltare.

Pentru mAb cu risc mai mare, eșantionarea poate fi mai frecventă pe toată perioada studiului clinic. În acest caz, se recomandă analizarea probelor în timp real. În timpul dezvoltării clinice, poate fi necesar să se determine simultan, precum și în timpul perioadei de administrare regulată, conținutul de anticorpi, markerii PK și PD, eficacitatea și siguranța. Acest lucru ne permite să evaluăm semnificația clinică a producției de anticorpi, precum și modificările efectului acestora în timp, care se pot datora unei creșteri a titrului lor și (sau) unei modificări a izotipului/maturației afinității anticorpilor. Anticorpii antimonoclonali neneutralizanți pot afecta indirect eficacitatea prin legarea de medicamentul mAb sau prin modificarea proprietăților farmacocinetice ale acestuia. De aceea determinarea parametrilor PK poate ajuta la planificarea metodelor de determinare a anticorpilor antimonoclonali.

Rezultatele cantitative pot fi utilizate în scopuri de management al riscului. De exemplu, dacă identificarea și evaluarea riscurilor concluzionează că este necesară detectarea precoce a unui răspuns imun și posibilitatea întreruperii terapiei cu mAb este acceptată, producerea de IgM cu afinitate scăzută poate servi ca un indicator al unui răspuns imun timpuriu și determinarea de IgM poate facilita identificarea precoce a pacienților care dezvoltă un răspuns imun. De asemenea, detectarea anticorpilor de legare care nu au capacitatea de neutralizare poate servi ca un predictor timpuriu al formării ulterioare a anticorpilor de neutralizare.

Strategiile de atenuare a riscurilor ar putea include, de exemplu, explorarea modalităților de gestionare a pacienților care au un răspuns imun, cum ar fi creșterea frecvenței administrării medicamentelor fără a compromite siguranța medicamentului.Cu toate acestea, trebuie luată în considerare fezabilitatea unor astfel de acțiuni. Atunci când depun un dosar de înregistrare, solicitanții sunt încurajați să trimită o strategie combinată și cuprinzătoare pentru identificarea, descrierea, monitorizarea, minimizarea și atenuarea riscurilor. Această abordare bazată pe risc ar trebui să ia în considerare, de asemenea, un plan de management al riscului care examinează modul în care riscurile pot fi identificate din datele din programul de dezvoltare și riscurile potențiale și informațiile lipsă care trebuie obținute în timpul fazei post-comercializare.

· Seruri de vindecare.

· Imunoglobuline.

· Gamma globuline.

· Preparate cu plasmă.

Există două surse pentru obținerea unor preparate specifice din zer:

1) hiperimunizarea animalelor (preparate de ser heterologe);

2) vaccinarea donatorilor (medicamente omoloage).

2.1. Preparate de ser heterologe.

Animalele mari, caii, sunt utilizate în principal pentru producerea de preparate de ser heterologe. Caii au reactivitate imunologică ridicată;
Într-o perioadă foarte scurtă de timp, este posibil să se obțină ser care conține anticorpi cu titru ridicat. În plus, introducerea proteinei de cal la om dă cel mai mic număr de reacții adverse. Animalele din alte specii sunt rareori folosite. Potrivit pentru utilizare de la vârsta de 3 ani
iar animalele superioare sunt supuse hiperimunizării, adică. procesul de administrare repetată a dozelor crescânde de antigen pentru a acumula cantitatea maximă de anticorpi în sângele animalelor și a o menține la un nivel suficient cât mai mult timp. În perioada de creștere maximă a titrului de anticorpi specifici din sângele animalelor, se efectuează 2-3 sângerări cu un interval de 2 zile. Sângele este prelevat cu o rată de 1 litru la 50 kg greutate cal din vena jugulară într-o sticlă sterilă care conține un anticoagulant. Sângele obținut din producția de cai este transferat în laborator pentru prelucrare ulterioară. Plasma este separată de elementele formate în separatoare și defibrinată cu o soluție de clorură de calciu. Utilizare
Utilizarea serului întreg heterolog este însoțită de reacții alergice sub formă de boală a serului și anafilaxie. O modalitate de a reduce reacțiile adverse ale medicamentelor din zer, precum și de a crește eficacitatea acestora, este purificarea și concentrarea acestora. Zerul este purificat din albumine și unele globuline, care nu sunt fracțiuni active din punct de vedere imunologic ale proteinelor din zer. Pseudoglobulinele cu mobilitate electroforetică între globuline gamma și beta sunt active din punct de vedere imunologic; acestei fracțiuni aparțin anticorpii antitoxici. De asemenea, fracțiile active imunologic includ gammaglobuline; această fracțiune include anticorpi antibacterieni și antivirali. Purificarea serurilor din proteinele de balast se realizează folosind metoda Diaferm-3. La utilizarea acestei metode, zerul este purificat prin precipitare sub influenta sulfatului de amoniu si prin digestie peptica.Pe langa metoda Diaferm 3, au fost dezvoltate altele (Ultraferm, Alcoholferm, imunosorbtie etc.) cu utilizare limitata.

Conținutul de antitoxine din serurile antitoxice este exprimat în unități internaționale (UI) adoptate de OMS. De exemplu, 1 UI de ser cu toxină tetanica corespunde cantității minime de ser care neutralizează 1000 de doze minime letale (DLm) de toxină tetanica pentru un cobai de 350 g. 1 UI de antitoxină botulină este cea mai mică cantitate de ser care neutralizează 10.000 DLm de toxină botulină pentru un șoarece de 20 g. ser anti-difteric corespunde cantității sale minime neutralizând 100 DLm de toxină difterice pentru un cobai cu greutatea de 250 g.

În preparatele cu imunoglobuline, IgG este componenta principală (până la 97%). LgA, IgM, IgD sunt incluse în medicament în cantități foarte mici. Sunt produse și preparate de imunoglobuline (IgG) îmbogățite cu IgM și IgA. Activitatea medicamentului cu imunoglobuline este exprimată în titrul de anticorpi specifici, determinat de una dintre reacțiile serologice și este indicată în instrucțiunile de utilizare a medicamentului.

Preparatele de ser heterologe sunt utilizate pentru tratamentul și prevenirea bolilor infecțioase cauzate de bacterii, toxinele acestora și viruși. Utilizarea timpurie a serului poate preveni dezvoltarea bolii, perioada de incubație este prelungită, boala în curs de dezvoltare are o evoluție mai blândă și mortalitatea este redusă.

Un dezavantaj semnificativ al utilizării preparatelor heterologe din zer este apariția sensibilizării organismului la o proteină străină. După cum indică cercetătorii, mai mult de 10% din populația Rusiei este sensibilizată la globulinele serice de cal. În acest sens, administrarea repetată a medicamentelor serice heterologe poate fi însoțită de complicații sub formă de diferite reacții alergice, dintre care cea mai periculoasă este șocul anafilactic. Pentru a identifica sensibilitatea pacientului la proteina de cal, se efectuează un test intradermic cu ser de cal diluat 1:100, care este special preparat în acest scop. Înainte de administrarea serului de tratament, se injectează în pacient 0,1 ml de ser de cal diluat intradermic pe suprafața flexoare a antebrațului și se observă reacția timp de 20 de minute.

2.2. Preparate de ser omoloage din sânge de la donator.

Preparatele de ser omoloage sunt obținute din sângele donatorilor special imunizați împotriva unui anumit agent patogen sau a toxinelor acestuia. Când astfel de medicamente sunt introduse în corpul uman, anticorpii circulă în organism puțin mai mult timp, oferind imunitate pasivă sau un efect terapeutic timp de 4-5 săptămâni. În prezent, se folosesc imunoglobuline normale și specifice de la donator și plasma de la donator. Izolarea fracțiilor active din punct de vedere imunologic din serurile donatoare se realizează folosind metoda de precipitare cu alcool.

Imunoglobulinele omoloage sunt practic areactogene, prin urmare reacțiile de tip anafilactic cu administrarea repetată de medicamente serice omoloage apar rar.

2.3 Preparate pentru terapia bacteriană (eubiotice).

Preparatele pentru terapia bacteriană conțin tulpini vii, active antagonice de bacterii - reprezentanți ai microflorei normale. Exemple de astfel de medicamente sunt lactobacterin, bifidumbacterin, colibacterin, bificol, bactisubtil, etc. Microorganismele conținute în astfel de medicamente au proprietăți antagoniste față de diferite microorganisme, în primul rând microbi intestinali patogeni. Astfel de preparate sunt obținute prin creșterea microorganismelor corespunzătoare sau a sporilor acestora în medii nutritive lichide, urmată de uscarea sub vid din starea înghețată. Medicamentele sunt folosite pentru a trata disbioza.

2.4.Preparate de bacteriofagi terapeutici.

Bacteriofagii sunt viruși ai bacteriilor. Ele pătrund în celula bacteriană, se înmulțesc în ea și o lizează. Aceasta este baza pentru utilizarea lor în tratamentul și prevenirea bolilor infecțioase. Acțiunea bacteriofagelor este strict specifică și se manifestă în raport cu anumite specii și tipuri de patogeni.

Pentru a obține preparate de bacteriofagi, se folosesc tulpini de fagi industriale și culturi bacteriene corespunzătoare. O cultură bacteriană crescută în reactoare cu un mediu nutritiv lichid este infectată cu o suspensie master fagică. În timpul reproducerii, fagii lizează bacteriile și sunt eliberați în mediul nutritiv; această compoziție se numește fagolizat. Mediul nutritiv este trecut prin filtre bacteriene pentru a îndepărta resturile de celule bacteriene (filtrat de fagolizat). Filtratul cu bacteriofagi este conservat și monitorizat pentru sterilitate, inofensivă și activitate. Produsul finit, care este un lichid galben transparent, este ambalat în sticle. Împreună cu fagi comprimați lichizi, uscati, cu un înveliș rezistent la acid și supozitoare cu fagi.

Fagii sunt utilizați în scopuri terapeutice și profilactice. In tara noastra se produc preparate de salmoneloza, dizenterie, coliproteus, stafilococic, piofage etc.. In functie de boala, fagii se folosesc local sub forma de irigare, clatire, lotiuni, tamponare, pentru introducerea in cavitatea plagilor, cavități abdominale, pleurale etc., pe cale orală, precum și pe cale subcutanată, intradermică și intramusculară .

2.5 Preparate cu citokine.

Citokinele sunt substanțe produse de diferite celule ale corpului și au un efect imunostimulator nespecific. Citokinele sunt foarte numeroase și diverse, diferă prin mecanismele lor de acțiune, în timp ce normalizează factorii umorali și celulari de rezistență nespecifică și influențează diferite stadii și componente ale imunității. Citokinele pot fi utilizate ca adjuvanți în vaccinuri și pot fi utilizate ca medicamente de sine stătătoare.

3. Efectele secundare ale vaccinurilor și serurilor și măsurile de prevenire a acestora

Utilizarea medicamentelor imunobiologice medicale și, mai ales, a vaccinurilor și a serurilor, împreună cu dezvoltarea imunității, pot avea efecte nespecifice asupra organismului, care pot fi însoțite de procese patologice, amenințănd uneori viața umană. Procesele patologice care apar după administrarea de medicamente imunobiologice, conform schemei S.G. Dzagurova, sunt împărțite în următoarele grupuri:

1) complicații asociate cu încălcarea tehnicii de administrare a medicamentelor, reguli aseptice în timpul administrării medicamentului, ceea ce duce la dezvoltarea supurației, infiltrate subcutanate și abcese la locul injectării;

2) complicatii alergice la administrarea de medicamente imunobiologice (boala serului, soc anafilactic etc.);

3) complicații datorate reacțiilor individuale, în primul rând din sistemul nervos central.

Rolul principal în geneza complicațiilor post-vaccinare revine proceselor alergice. Cele mai severe complicații post-vaccinare la administrarea medicamentelor imunobiologice includ următoarele:

1) șoc anafilactic. Se dezvoltă cel mai adesea cu administrarea parenterală repetată de seruri și vaccinuri. Se referă la o reacție alergică generală de tip imediat. Severitatea simptomelor de șoc poate varia - de la manifestări ușoare până la forme fatale fulminante. Pentru identificarea sensibilizării la un ser heterogen, înainte de administrarea acestuia este necesar un test cutanat cu ser de cal diluat 1:100. În cazul unei reacții alergice severe și a stării grave a pacientului, este permisă administrarea serului după administrarea intravenoasă cu jet de prednisolon;

2) șoc de endotoxină. Observat după administrarea vaccinurilor bacteriene ucise, ca o manifestare a sensibilității crescute a organismului la endotoxină;

3) boala serului. Este o manifestare a unei reacții alergice a organismului la introducerea unei proteine ​​străine, cel mai adesea proteină de cal. Simptomele bolii serului apar la 7-10 zile de la administrarea medicamentelor serice, dar pot apărea la date mai devreme și ulterioare;

4) reacții alergice ale pielii. Cel mai adesea apar după administrarea DPT, antirabică și alte vaccinuri;

5) complicații neurologice post-vaccinare. Ele se manifestă sub formă de leziuni ale sistemului nervos central și periferic.

În prevenirea tuturor complicațiilor descrise mai sus, se acordă o importanță crucială identificării condițiilor care reprezintă o contraindicație pentru introducerea medicamentelor imunobiologice în organism.

Antibiotice cu activitate imunosupresoare

Medicamente glucocorticoide

Agenți citostatici

Clasificarea medicamentelor imunosupresoare.

Medicamente imunosupresoare.

Agenți imunotropi

A. Medicamente imunosupresoare – medicamente care suprimă răspunsul imun al organismului.

B. Agenţi imunostimulatori– folosit pentru afecțiunile de imunodeficiență ale organismului, infecții cronice lente.

1. Agenți citostatici:

Agenți de alchilare: ciclofosfamidă;

Antimetaboliți: azatioprină

2. Preparate glucocorticoide:

Prednisolon, dexametazonă

3. Antibiotice cu activitate imunosupresoare:

Ciclosporină

4. Preparate cu anticorpi:

Preparate de anticorpi policlonali: imunoglobulină antitimocitară

(Timoglobulina);

Preparate de anticorpi monoclonali: la receptorii inerleukinei-2: daclizumab

Citostaticele au un efect imunosupresor pronunțat asociat cu inhibarea efectului asupra diviziunii limfocitelor.

Compuși de alchilare (ciclofosfamidă) -și-au primit numele datorită capacității lor de a forma legături covalente ale radicalilor lor alchil cu atomii heterociclici de purine și pirimidine și, în special, azotul guanin în poziția 7. Alchilarea moleculelor de ADN, formarea de legături încrucișate și rupere duce la întreruperea lor. matricea funcționează în timpul replicării și transcripției și în cele din urmă, la blocuri mitotice și moartea celulelor tumorale. Toți agenții de alchilare sunt specifici de ciclon, adică capabili să deterioreze celulele tumorale în diferite faze ale ciclului lor de viață. Ele au un efect dăunător deosebit de pronunțat asupra celulelor cu diviziune rapidă.

Antimetaboliți (azatioprină) - substanțe care au asemănări structurale cu produsele metabolice naturale (metaboliți), dar nu sunt identice cu acestea. Mecanismul acțiunii lor poate fi reprezentat astfel: moleculele modificate de purine, pirimidine, acid folic concurează cu metaboliții normali, îi înlocuiesc în reacții biochimice, dar nu își pot îndeplini funcțiile.Procesele de sinteză a ARN și ADN sunt blocate.Spre deosebire de cele alchilante. , acţionează doar în divizarea agenţilor cancerigeni, adică sunt medicamente specifice ciclului.

Ciclosporina este un antibiotic produs de ciuperci, care suprimă producția de interleukină-2, ceea ce duce la inhibarea diferențierii și proliferării limfocitelor T. Medicamentul este indicat pentru a preveni respingerea în timpul transplantului alogen.

Timoglobulina este un preparat de anticorpi de iepure împotriva timocitelor umane. Indicat pentru prevenirea și tratamentul reacțiilor de respingere în timpul transplantului de organe, pentru tratamentul anemiei aplastice.

Daclizumab este un preparat de anticorpi monoclonali la receptorii interleukinei 2. Suprimă proliferarea dependentă de IL-2 a limfocitelor T, inhibă sinteza anticorpilor și răspunsul imun la antigene.

Clasificarea medicamentelor imune (Nesterova I.V. et al., 2002)

A. Factori timici:

1. Factori timici asemănători hormonilor: biologici (tactivină, timalină, timoptin, vilozen, timaktide); sintetice (imunofan, timogen, timomodulină, timostimulină, bestim, timopentin TR-5).

2. Timomimetice sintetice: compuși imidazolici (levamisol, metronidazol, dibazol); inozină: inozină (groprinozină), inosiplex, metilinozin monofosfat, datiocarb (imuthiol), diucifon.

B. Medicamente care restabilesc imunitatea umorală:

1. Imunoglobuline pentru imunoterapie de substituție pasivă: imunoglobuline pentru administrare intravenoasă (sandoglobuline, intraglobină, octagam, endobulin, imunoglobuline G, vigam, bioven, pentaglobin, cytotect, hepatect); imunoglobuline de uz local (preparat complex de imunoglobuline - CIP, chigain); imunoglobuline pentru uz intramuscular.

2. Medicamente care modulează imunitatea umorală: imunoregulator medular de origine biologică – mielopid (MP), inclusiv hexapeptidele sintetice care alcătuiesc MP (-1, -2, -3); medicamente de sinteză cu acțiune polivalentă (polioxidoniu, muramil dipeptide, licopide, romurtide); preparat de ARN de drojdie – nucleinat de sodiu; Preparare ADN – derinat; vaccinuri slab imunogene de origine bacteriană care cresc imunitatea specifică: bronchomunal, IRS-19, solcotrichovac, bronchovaxom, imudon, solcourovac; origine ribozomală - ribomunil.

B. Medicamente care refac sistemul de granulocite neutrofile și monocite-macrofage:

1. Factori recombinanți de stimulare a coloniilor: leucomax, neupogen, granocite.

2. Medicamente sintetice: levamisol, diucifon, licopid, polioxidonium, metiluracil, pentoxil.

3. Interferoni: umani și recombinanți.

4. Cocktail de citokine: leukinferon.

5. Săruri metalice: carbonat de litiu cu folați.

6. Preparate de origine microbiană, drojdie și fungică: microbian – pirogen, prodigiosan, vaccin BCG, picibanil; vaccinuri cu imunogen scăzut - bronchomunal, bronchovaxom, solcotrichovac, solcourovac, imudon, IRS-19, paspat, biostin; vaccinuri ribozomale – ribomunil; drojdie și origine fungică - nucleinat de sodiu, krestin, lentinan, biotorin.

G. interferoni (IFN):

1. Obținut din sânge uman (natural): IFN-alfa – leucocite (wellferon, egiferon, interferon leucocitar uman); IFN-beta – fibroblast (feron, fibroblast uman IFN); IFN-gamma (IFN imun uman, IFN-a).

2. Obținut prin metode de inginerie genetică biotehnologică (recombinant): IFN-alfa (reaferon, realdiron, viferon, roferon, intron A, inrek); IFN-beta (berofor, betaferon); IFN-gamma (gamma-feron).

D. Medicamente sintetice cu efecte polivalente:

1. Derivat de polietilenă piperazină – polioxidoniu.

2. Derivat de muramil dipeptide – licopid.

3. Derivați de imidazol - levamisol, dibazol, metronidazol etc.

E. Preparate de acid nucleic de origine naturală și sintetică:

1. ADN nativ din lapte de sturion - derinat.

2. Originea drojdiei – nucleinat de sodiu.

3. Derivați de pirimidină – pentoxil, metiluracil.

4. Polinucleotide sintetice dublu catenar (ARN sintetizat artificial): acid poliriboadenilic (poli a); acid poliribouridilic (poli y); acid poliribocitidilic (polic); acid poliriboinozinic (poli); Poludan (acid poliriboadenilic, poli a); poliguacil (acid poliribocitidilic, poli c), acid poliriboguanilic (poli g).

G. Citokine:

1. Interleukine recombinante: IL-1 (betaleukina), IL-2 (roncoleukina), IL-8, TNF.

2. Factori de stimulare a coloniilor (CSF): granulocite (G-CSF) – Neupogen, granocite; granulocite-macrofag (GM-CSF) – leucomax.

H. Agenţi de terapie cu anti-citokine:

1. Anticorpi monoclonali împotriva citokinelor și receptorilor acestora (IL-1, IL-2, IL-6, TNF).

2. Farmacocorecția supraproducției de TNF: inhibitori ai transcripției (pentoxifilină); inhibitori de translație (glucocorticoizi); un medicament care scurtează timpul de înjumătățire al TNF (talidamidă); inhibitori ai activatorului factorului de transcripție TNF (antioxidanți); inhibitori ai sintezei TNF (prostanoizi, adenozină); Inhibitori de procesare a TNF (metaloproteaze).

Articol pentru concursul „bio/mol/text”: Unul dintre cele mai importante pericole pentru sănătatea umană este bacteriile. Dar bacteriile au și adversari: virușii bacteriofagi care folosesc celula microbiană ca un hotel all-inclusive, iar când părăsesc adăpostul, deseori ucid gazda. Invenția metodei de afișare a fagilor a făcut posibilă utilizarea proprietăților bacteriofagelor în căutarea de noi anticorpi, care sunt extrem de solicitați pentru îmbunătățirea diagnosticului și terapiei multor boli periculoase.

Notă!

Sponsorul nominalizării „Cel mai bun articol despre mecanismele îmbătrânirii și longevității” este Fundația Science for Life Extension. Premiul publicului a fost sponsorizat de Helicon.

Sponsorii competiției: Laboratorul de Cercetare în Biotehnologie Soluții de bioimprimare 3D și Grafică științifică, Studio de animație și modelare Știință vizuală.

Anticorpii ca medicamente

În farmacologie, sunt utilizate două concepte de bază: medicamentȘi ţintă. O țintă este o structură a corpului asociată cu o funcție specifică, a cărei încălcare duce la boală. În caz de boală, asupra țintei poate fi exercitat un anumit efect, care ar trebui să conducă la un efect terapeutic. Un medicament este o substanță care interacționează în mod specific cu o țintă și afectează starea unei celule, țesuturi sau organism. Ținta poate fi un receptor de pe suprafața membranei celulare, o enzimă sau un canal care transportă diverși compuși în celulă. Totuși, calea către consumator pentru orice medicament este lungă: după confirmarea activității sale funcționale, urmează etapele studiilor preclinice și clinice, timp în care moleculele mici sunt în pericol să nu devină niciodată un medicament. Sub influența sistemelor enzimatice ale pacientului, acestea pot deveni otrăvitoare sau izomerii lor se dovedesc a fi toxici. O substanță cu greutate moleculară mică poate fi excretată prea repede sau, dimpotrivă, se poate acumula în organism, otrăvindu-l. Prin urmare, în ultimii ani, macromoleculele au ocupat o cotă din ce în ce mai mare pe piața medicamentelor, iar printre ele rolul cel mai important îl joacă anticorpi- proteine ​​protectoare ale organismului (Fig. 1).

Figura 1. Structura anticorpului. Anticorpul este format din două grele (HC)și doi plămâni (LC) lanțuri de aminoacizi conectate între ele. Fiecare dintre aceste lanțuri are un domeniu variabil (V H sau V L), care este responsabil pentru legarea antigenului. Varia se numește alb tocmai pentru că aceste zone diferă cel mai puternic în anticorpi diferiți, adică sunt reprezentate de mulți varia ntov. Regiunea care este scindată de enzima papaină se numește fragment Fab.

Atunci când un antigen - o componentă a unei bacterii sau virus - intră în sânge, acesta intră imediat sub atenția a două tipuri principale de celule imunitare: limfocitele T și B. Celulele B, după stimularea de către celulele T sau la contactul direct cu un agent străin, sintetizează anticorpi împotriva acestuia. Unele dintre limfocitele B activate sunt celule plasmatice- se specializează în producerea de anticorpi, iar restul devin celule de memorie, astfel încât atunci când întâlnești același antigen în viitor, să-i dai o respingere rapidă și eficientă. Anticorpul sintetizat de celulele plasmatice se leagă de „străin”, neutralizându-l astfel. Acest lucru se întâmplă în mai multe moduri: anticorpii se leagă în mod specific de zonele toxice ale antigenului, se aglutinează (se lipesc împreună) cu particule mari care poartă antigene pe suprafața lor sau chiar provoacă direct distrugerea celulei bacteriene. În plus, antigenul „acoperit” cu anticorpi devine vulnerabil la alte componente ale sistemului imunitar - de exemplu, macrofagele sau sistemul complementului.

Proprietăți importante, cum ar fi legarea antigenului, puterea acestei legături și stabilitatea moleculei depind de structura anticorpului. Cu toate acestea, natura creării de anticorpi în organism este foarte complexă și nimeni nu poate garanta că se vor forma anticorpi cu aceeași structură ca răspuns chiar și la antigeni identici. Dacă anticorpii la același antigen, dar cu structuri diferite, sunt utilizați pentru a crea un medicament sau un kit de diagnostic, atunci din cauza diferenței de stabilitate și specificitate, standardizarea și reproductibilitatea rezultatelor pot fi uitate. Aceasta înseamnă că astfel de anticorpi nu pot deveni diagnosticați sau medicinali în niciun fel. De aici concluzia: sunt necesari anticorpi cu structura identica.

Anticorpii „clone” sunt obținuți folosind metode de biologie celulară dintr-o singură celulă progenitoare. Astfel de anticorpi se numesc monoclonal. Utilizarea lor ca agenți terapeutici a devenit un pas strategic pentru medicină în schimbarea conceptului de tratament - de la terapie nespecifică la terapie țintită. Astăzi, anticorpii monoclonali sunt utilizați cel mai activ în oncohematologie, tratamentul tumorilor, bolilor autoimune și, mai ales, pe scară largă în diagnosticare.

Obținerea anticorpilor pentru nevoile umane, de regulă, începe cu imunizarea animalelor. Se fac mai multe injecții cu antigen, iar anticorpii specifici se acumulează în serul sanguin. Acești anticorpi, obținuți direct din serul unui animal imunizat, sunt produși de diferite celule plasmatice, adică policlonală. Pentru a obține anticorpi monoclonali complet identici în anii șaptezeci ai secolului trecut, oamenii de știință Georg Köhler și César Milstein au dezvoltat metoda hibridă. Se bazează pe fuziunea limfocitelor plasmatice (produc anticorpi, dar nu trăiesc în cultură) și a celulelor de mielom (acestea sunt celule tumorale care nu produc nimic, dar sunt cultivate excelent), în urma cărora o astfel de celulă hibridă moștenește de la limfocitul B capacitatea de a secreta substanțele necesare anticorpilor cercetătorilor, iar dintr-o tumoră - nemurirea (diviziune aproape nesfârșită).

Hibridomul a fost o realizare remarcabilă care a deschis oportunități enorme pentru cercetători. Cu toate acestea, anticorpii care pot fi obținuți prin metoda hibridomului sunt încă produși de animale și nu sunt adecvați pentru terapia umană. Prin urmare, cercetătorii s-au confruntat cu sarcina de a obține anticorpi complet umani. Pentru a rezolva această problemă, a fost dezvoltat un grup de metode numite afişa. Ceea ce au în comun toate aceste metode este că implică lucrul cu „legătura” secvențelor de nucleotide și aminoacizi ale fiecărei variante specifice de anticorp. Numele „display” provine din engleză afişa- a etala, a demonstra. O etapă integrală a acestor metode este „expunerea” fragmentelor de anticorpi pe suprafața particulei de fag pentru selecția ulterioară a variantelor dorite de către antigene.

Biblioteca in vitro

Metoda care a fost numită afișaj fagi , se bazează pe capacitatea bacteriofagelor (virusuri care infectează bacteriile) de a prezenta secvențe aleatorii de peptide pe suprafața lor ca parte a proteinelor de suprafață. Un bacteriofag este format din ADN înconjurat de o înveliș proteic - o capsidă - și este capabil să se reproducă numai în interiorul celulei gazdă. Pătrunzând acolo, folosește cu nerușinare sistemele enzimatice ale nefericitei bacterii, furnizându-i ADN-ul său pentru sinteza proteinelor necesare reproducerii sale. O celulă bacteriană infectată cu un fag reproduce ascultător tot ceea ce este codificat în genomul virusului, astfel încât descendenții săi își adună învelișul din blocuri de construcție gata făcute. Dacă un cercetător introduce o secvență de nucleotide care codifică peptida dorită în genomul fagului progenitor, descendenții acestuia vor avea mai multe copii ale unei proteine ​​​​capside hibride constând din propriul lanț polipeptidic și un fragment de anticorp apare pe suprafața particulei virale. Se numește un set de bacteriofagi, pe suprafața cărora sunt prezente fragmente aleatorii de anticorpi biblioteca de fagi(Fig. 2).

Figura 2. Construcția bibliotecilor de anticorpi sintetici și naturali. Biblioteca se bazează pe secvențele de nucleotide ale domeniilor variabile ale anticorpilor (imunoglobuline, Ig), naturali sau sintetici. Apoi sunt combinate aleatoriu și, ca rezultat, se formează multe fragmente de anticorpi, pe baza cărora poate fi creată o bibliotecă de fagi.

În bibliotecile moderne, repertoriul de anticorpi poate ajunge la 10 miliarde de variante unice. Cum putem selecta din această varietate doar câteva molecule specifice unui singur antigen? În cazul unei biblioteci de afișare, particulele virale acționează ca „bibliotecari”, iar celulele bacteriene devin „cititoare”. Dacă căutarea cărților într-o bibliotecă obișnuită ar fi efectuată în același mod ca și căutarea anticorpilor într-o bibliotecă de afișare, ar părea foarte neobișnuit. Să zicem că ne aflăm în fața sarcinii de a selecta toate cărțile despre un subiect care ne interesează dintr-o bibliotecă care conține 10 miliarde de cărți: istorice, ficțiune, basme, romane de dragoste în coperți strălucitoare... Pentru a căuta în biblioteca expozițională, nu trebuie să te încurci în carduri și să completezi o cerere și trebuie doar să aduci acest articol cu ​​tine! Și atunci bibliotecarii (fagii) vor începe imediat să se apropie de el (antigenul) cu cărțile în mână. Cărțile specifice (anticorpii), care sunt scrise doar despre ceea ce am adus cu noi, se vor „lipi” strâns de antigen, iar cele în care subiectul este menționat în treacăt pot fi duse cu ușurință înapoi la raft. După ce cele mai specifice molecule (cărți) au fost găsite folosind antigenul (obiectul), acestea sunt transferate bacteriei „cititoare”. „Cititorii” se dovedesc a fi atât de conștiincioși încât nu numai că percep informațiile, ci și le copiază în mod repetat. Se numește selecția fagilor cu fragmente de anticorpi specifice antigenului selecţie(Fig. 3).

Figura 3. Schema de selecție. Crearea unei biblioteci de fagi dintr-o sursă sintetică sau naturală implică formarea de structuri care combină atât secvențele de nucleotide, cât și secvențele de aminoacizi ale unui fragment de anticorp ( genotip-fenotip-structură). Antigenul (legat de materialul plastic al bibliotecii de afișare) este apoi contactat, care se leagă în mod specific la anumite fragmente de anticorp expuse pe particula de fag.

În mod obișnuit, se efectuează 3-4 runde de selecție, în urma cărora este selectat ADN-ul unui număr relativ mic de fagi și, pe baza acestuia, fragmentele de anticorpi sunt produse în celulele bacteriene pentru analize ulterioare. După sursa de material Bibliotecile de afișare pot fi împărțite în trei grupuri.

Fiecare dintre tipurile de biblioteci enumerate are propriile sale avantaje și dezavantaje. De exemplu, bibliotecile sintetice se bazează pe un număr mic de structuri de domenii variabile de anticorpi, deci este mult mai ușor să lucrezi cu ele decât cu cele naturale, care conțin secvențe care diferă în caracteristicile termodinamice și de expresie. Dar atunci când se folosesc variante din biblioteci naturale, probabilitatea de a dezvolta un răspuns imun este mai mică.

Moleculele obtinute in acest fel pot fi supuse modificarilor, imbunatatindu-le proprietatile. În plus, din același fragment de anticorp pot fi creați o varietate de agenți terapeutici. În funcție de scopul terapiei, aceasta poate fi asociată cu o toxină (de exemplu, pentru a lupta împotriva unei tumori), cu o citokină (pentru livrarea țintită într-un loc dureros) sau cu un alt fragment de ajutor, chiar și cu un radionuclid.

Succesul farmacologiei moderne depinde în mare măsură de dezvoltarea unor domenii ale științei precum biologia moleculară, bioinformatica și ingineria genetică. Datorită acestor discipline, a devenit posibilă sintetizarea secvențelor de ADN dorite, combinarea și modificarea acestora și, de asemenea, obținerea de proteine ​​animale în sistemele bacteriene. Avantajul incontestabil al tehnologiilor moderne este că, cu ajutorul lor, este posibil nu numai obținerea de analogi ai anticorpilor existenți, ci și crearea unora complet noi.

E prea devreme pentru a sărbători victoria!

În ciuda tuturor avantajelor anticorpilor față de moleculele mici, au apărut probleme cu utilizarea lor. În 2004, s-a descoperit că, în mai multe cazuri, administrarea de infliximab (Remicade), un anticorp monoclonal antiinflamator, a fost asociată cu dezvoltarea limfoamelor la pacienți. În mai 2006, în Jurnalul Asociației Medicale Americane ( JAMA) au publicat date că Remicade mărește riscul de a dezvolta cancer de trei ori. În iunie 2008, FDA a raportat că Remicade poate fi asociat cu dezvoltarea limfoamelor și a altor tipuri de tumori la copii și adolescenți.

Un risc crescut de deces la pacienții cu cancer a fost constatat atunci când a luat Avastin (2,5%) - un blocant al factorului de creștere endotelial (VEGF) - comparativ cu utilizarea chimioterapiei în monoterapie (1,7%). Faptul este că Avastin (bevacizumab) în sine nu interacționează cu celulele canceroase. Acesta blochează factorul de creștere endotelial (celulele care căptușesc vasele de sânge), pe care tumora îl secretă pentru a crea mai multe vase de sânge în jurul ei pentru o nutriție intensivă. Tumora secretă același VEGF ca și alte părți sănătoase ale corpului, astfel încât blocarea creșterii unei anumite proporții a vaselor de sânge necesare organismului (de exemplu, vasele de sânge pentru hrănirea inimii) este inevitabilă. Astfel, în cazul utilizării Avastin, creșterea mortalității pacienților este asociată nu cu boala de bază, ci cu insuficiența cardiacă.

Dezvoltarea unor astfel de efecte secundare este previzibilă. Un organism viu este un sistem foarte complex, iar intervenția care vizează o parte a acestuia implică schimbări în altele. Prin urmare, chiar și odată cu apariția unui instrument atât de subtil precum anticorpii terapeutici, nu putem vorbi despre invenția unui „medicament ideal”.

Protocoalele actuale se bazează deja pe o abordare combinată de tratament, inclusiv vaccinuri, chimioterapie și anticorpi monoclonali. Cercetătorii nu au dezvoltat încă medicamente și regimuri de tratament care să ofere eficiență și în siguranță tratamentul pacientilor.

Desene furnizate de compania biofarmaceutică rusă Anterix.

Literatură

1. Drag design: cum sunt create noi medicamente în lumea modernă;. J. Mol. Biol. 376 , 1182–1200;
2. Lee C. V., Liang W. C., Dennis M. S., Eigenbrot C., Sidhu S. S., Fuh G. (2004). Anticorpi umani de înaltă afinitate din biblioteci Fab sintetice afișate pe fagi cu o singură schelă cadru. J. Mol. Biol. 340 , 1073–1093;
3. Lonberg N. (2005). Anticorpi umani de la animale transgenice. Nat. Biotehnologie. 23 , 1117–1125;
4. Ivanov A.A. și Beletsky I.P. (2011). Terapia cu anticorpi monoclonali - panaceu sau paliativ? Remediu. 3 , 12–16..